HIEFF TRANSTM脂质体核酸转染试剂说明书
脂质体转染原理及操作步骤
脂质体转染原理及操作步骤脂质体转染是一种常用的基因传递技术，用于将外源的核酸（例如DNA、RNA）转入细胞内。
脂质体是由人工合成的类似于细胞膜的双层脂质膜组成，具有较好的生物相容性和可降解性，因此可以用来包裹并传递外源核酸进入目标细胞内。
本文将详细介绍脂质体转染的原理和操作步骤。
脂质体由两个疏水性脂质尾部和一个亲水性脂质头部组成，形成类似生物细胞膜的双层结构。
这种双层结构使得脂质体可以包裹水溶性的外源核酸，并形成脂质体-核酸复合物。
当复合物与细胞膜接触时，由于脂质体的类似性，这些复合物可以与细胞膜融合，并释放外源核酸进入细胞。
然而，简单地将脂质体-核酸复合物添加到细胞培养基中并不能有效地将外源核酸转入细胞内。
为了提高转染效率，常常需要使用电穿孔或钙磷共沉淀等方法，以增加细胞膜的通透性。
操作步骤：1.准备工作：-完整的脂质体转染试剂盒。
-DNA或RNA溶液。
-靶细胞。
-无菌操作条件下的实验室。
2.重组脂质体的合成：-按照试剂盒说明将脂质体复合物合成。
-使用无菌的工具和试剂。
3.核酸引物的制备：-将外源DNA或RNA与引物混合，使其形成核酸复合物。
4.细胞处理：-将培养皿中的细胞进行冲洗，去除培养基。
-将适量的细胞培养基添加到培养皿中，以保证细胞的正常生长。
5.导入核酸：-将所制备的核酸复合物滴加到细胞培养基中。
-将细胞培养皿置于无菌环境中，以便细胞吸收和利用核酸。
6.细胞培养：-按照细胞类型和所使用的培养基，将细胞置于恰当的培养条件下，并进行培养。
-根据需求添加所需要的生长因子和抗生素。
7.观察和分析：-在一定的培养时间后，观察细胞是否发生了显著的变化。
- 使用适当的实验方法（如PCR、Western blot等）检测外源基因的表达。
-观察并记录实验结果。
以上是脂质体转染的原理和操作步骤。
脂质体转染是目前常用的基因传递技术之一，可以用于研究基因功能、疾病治疗等领域。
随着技术的不断发展，转染效率和特异性将逐渐提高，为研究和治疗带来更多的机会和挑战。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂说明书
Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书产品描述Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。
通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染；运输与保存方法冰袋（wet ice）运输。
产品4ºC保存，一年有效。
不可冷冻！注意事项1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。
但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。
LipoHigh脂质体高效转染试剂
试剂组分
组分 组分 A：LipoHigh 脂质体高效转染试剂 说明书
E607403-0500 0.5 mL 1
E607403-1000 1 mL 1
储存条件
2~8°C 冷藏保存，有效期为 1 年，避免冻存。
操作步骤
1. 准备细胞（24 孔板为例）： a) 转染前 18~24 小时，接种适量细胞于 24 孔板中，并将细胞培养板置于 37°C，5% CO2 培养箱培养，转染前细胞 密度达到 60~90%为理想状态（具体密度视细胞的不同可进行适当调整）。 b) 转染前 PBS 洗涤细胞 2~3 次，并更换新鲜不含有血清的培养液；
24 µg
60 µl
siRNA
5 pmol 20 pmol 40 pmol 100 pmol 200 pmol 600 pmol
0.25 µl 1.0 µl 2.0 µl 5 µl 10 µl 30 µl
注意事项
1. 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、DNA 转染量、转染试剂与 DNA 比例等，应该在具体实践 中优化来确定最佳转染条件。
3. 将上述转染工作液，逐滴滴入对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于 37°C，5% CO2 培养箱中进行培养； 4. 4~8 小时后，更换为含有血清的新鲜培养基； 5. 转染 24~48 小时后，观察或收取细胞。
数据分析
荧光
明场
图 1：pEGFP-N1 质粒转染 Hela 细胞。转染前一天将 Hela 细胞接种于 24 孔板中，105 个细胞/孔；转染前将细胞培养基 换成无血清培养基，按 LipoHigh (µL)：DNA (µg)= 3：1 进行转染；转染 4 小时后更换培养基为含有血清的新鲜培养基， 24 小时后，奥林巴斯 IX73 荧光倒置显微镜 (Olympus)下观察。
转染试剂使用说明书
210102
1ml
1. 2. 3. 4. 5. 6.
适用范围及特点： 适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的基因转染 适用于瞬时转染和稳定转染 适应于贴壁细胞和悬浮细胞转染 转染效率高且稳定，在有无血清存在的细胞培养基中均能获得高效率转染 细胞毒性低 转染程序简单，转染实验可以在半小时内完成
产品储存： GenFectinTM (1.0mg/ml) 在室温下运输，试剂到时请即存放于 4℃，在 4℃可存放
2. 3).
配制转染工作液： （ 6 孔板或 35 mm 平皿， 2 ml 培养液） 取 5~8μ g DNA （起始用量 5μ g） ，加入稀释液中至总体积为 100μ l，轻轻混匀，室 温放置。
4).
先将 GenFectin TM 涡旋振荡混匀。取 GenFectinTM 1~4μ0μl，轻轻混匀，室温放置 5 分钟。
8).
稳定转染时，于转染后 24~48 小时消化细胞分至 3~5 个培养皿中，加适当浓度的 相应抗生素（如 G418）筛选。
建议的起始转染条件 : 培养容器
96 孔板 24 孔板 6 孔板 35mm 培养皿 60mm 培养皿
转染前一天 接种细胞数
1-1.510 个 0.5-1 10 个 2-4 10 个 2-4 10 个 4-6 105 个
3.
GenFectinTM 在转染中不受血清影响，所以 GenFectinTM / DNA 复合物能直接加到 含血清的培养基中，但稀释 GenFectinTM 和 DNA 的缓冲液不能混有血清，因为 GenFectinTM 在制备 GenFectinTM / DNA 复合物之前可能会与血清中的蛋白质反 应，影响转染效率。
-5-
英格恩entranster转染试剂说明书
英格恩entranster转染试剂说明书一、产品概述英格恩 Entanster 转染试剂是一种用于转染外源 DNA/RNA 到细胞内的试剂。
它是经过优化的化学试剂组合，可以将外源 DNA/RNA 高效地传递到各种细胞中，并促进其定向表达。
本试剂适用于体外转染实验和基因工程研究，具有高转染效率、低细胞毒性、简单易用等优点。
二、试剂成分英格恩 Entanster 转染试剂主要成分包括转染缓冲液和转染增强剂。
转染缓冲液中包含有机溶剂、非离子表面活性剂等，用于稳定 DNA/RNA与转染剂的结合。
转染增强剂含有具有阴离子表面活性剂、脂质、蛋白质等物质，可以提高细胞膜通透性和转染效率。
三、使用说明1.储存和稀释：试剂应储存于-20℃的冰箱中，保持干燥和避光。
使用前需要将试剂溶解在适当体积的转染缓冲液中，最佳稀释比例为1：9、溶液需充分混匀，离心并去除任何沉淀物。
2.样品准备：在转染前，将目标DNA/RNA溶解在适当的缓冲液中，浓度通常在0.1-1μg/μL最佳。
确保样品充分溶解并无明显沉淀。
3.转染操作：对于已经培养至适当倍数的细胞，将细胞用预先暖和的转染缓冲液洗涤一次，并去除缓冲液。
将转染缓冲液和溶解好的目标DNA/RNA混合，稍微搅拌均匀。
与此同时，将适量的转染增强剂加入到混合物中，充分混合。
然后将混合物直接滴加到细胞上，并轻轻摇晃培养板以确保混合物均匀分布。
4.培养和检测：将含有转染混合物的培养板放回恒温培养箱中，保持恒定的温度和CO2浓度。
培养时间和温度根据需要进行调整，通常在24-48小时后可以进行下一步实验或观察。
四、注意事项1.试剂需保存在干燥、阴凉、避光的环境中，避免结冰或暴露在高温环境中。
2.操作中需佩戴手套并遵循生物安全实验操作规范。
3.使用前需充分摇匀试剂瓶，确保所有试剂成分充分混合均匀。
4.转染缓冲液中的有机溶剂可能对一些细胞有毒性，因此在选择试剂时应参考相关文献或尝试不同的浓度和时间，以确定最佳条件。
TransLipidHLTran...
TransLipid®HL Transfection Reagent目录号：FT111保存：2-8℃保存一年(避免冷冻)。
产品说明TransLipid® HL Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适用于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，在保证高转染效率的同时具有极低的细胞毒性。
本产品适用细胞类型广，转染时血清和抗生素的存在不影响转染效率，并且转染后无需更换培养基。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。
特点·转染效率高·细胞毒性极低(细胞存活率>90%)·操作简便，转染后无需更换培养基质粒DNA的转染:以24孔板为例，步骤如下细胞接种：每孔接种0.5-2×105个细胞，使转染时细胞达到70-90%汇合度细胞培养12-24小时质粒稀释：将0.8 μg质粒稀释于50 μl Opti-MEM培养基TransLipid® HL稀释：将2 μl TransLipid® HL稀释于50 μlOpti-MEM培养基室温静置5分钟将质粒和TransLipid® HL轻柔混合室温静置20分钟将质粒-TransLipid® HL混合物加入细胞，于37℃ CO2培养箱培养转染4-6小时后更换培养基(可选)，继续培养18-72小时本产品仅供研究，不用于临床诊断。
siRNA 的转染以24孔板为例，转染时细胞汇合度为30-50%，转染所需的siRNA 和TransLipid ® HL 的量分别为20 pmol 和1 μl ，步骤同DNA 转染。
质粒DNA 和siRNA 转染的优化为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳结合，可以对DNA 或siRNA 和 TransLipid ® HL 的比例及转染初始细胞密度进行优化，DNA 转染可以在1: 2-1: 5的范围内优化比例，siRNA 转染可以试用10-50 pmol siRNA 和0.5-1.5 μl TransLipid ® HL 的用量。
HifectinIII 寡聚核苷酸转染试剂
HifectinIII 寡聚核苷酸真核细胞转染试剂C1515描述：对于质粒DNA转染来说，通常是小分子脂质体包裹大分子DNA，形成的复合物表面有一层带正电荷的磷脂层，能以有效进入细胞。
但是，由于短链DNA、反义寡聚核苷酸、或小RNA片断通常明显小于普通的脂质体颗粒，因而难以被脂质体有效包裹，相反甚至是小DNA 或小RNA结合在脂质体表面，因而难以被有效转染。
HifectinIII是一种特殊的阳离子脂质体，专用于短的双链DNA片断、单链(反义)寡聚核苷酸、siRNA片段的真核细胞转染。
这种特殊的脂质体经过特别程序制备处理后，能非常有效地包裹小DNA或小RNA颗粒，形成带正电荷表层的稳定复合物，进而高效转染进入真核细胞。
其转染高效、细胞谱广、低毒、可靠。
规格：0.25 ml 转染10个24孔板，0.5 ml 转染20个24孔板，1 ml 转染40个24孔板储存：4ºC储存12个月。
切勿冻存。
适用：短双链DNA片断、寡聚核苷酸单链、siRNA片段转染，适用多种传代或原代细胞。
细胞准备：转染前一天传0.5-2 ⨯ 105细胞于24孔板内，加1 ml正常培养基培养。
在光镜下观察细胞，当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的85-95%时，为HifectinIII转染的最佳时机。
这通常需要18-24小时，但依细胞类型和量而变。
传代数过多的细胞，或100%长满的细胞转化效率明显降低。
小DNA溶液准备：转染前取出小DNA或小RNA储存液，用灭菌生理盐水或无血清无抗生素培养基，稀释到终浓度为0.1 µg/ml。
切记，此处较低的稀释浓度是必要的，将保证后续步骤的转染混合物具有适宜的体积以及比例，对转染试剂进行必要且适宜的稀释，进而保证形成有效的转染混合物。
建议不可随意改变推荐的终浓度。
制备转染复合物：按照1:10的体积比例，取4µl Hifectin III，加入到40µl 小DNA溶液(浓度0.1 µg/µl)中，注意加样顺序不要反过来将DNA加到转染试剂中。
EndoFectinTM-Max 转染试剂用户手册说明书
EndoFectin TM -Max 转染试剂高效转染核酸到哺乳动物细胞产品编号：EF003 / EF004 / EF003T 包装规格：1 mL / 3 mL / 100 μL储存条件：4℃~8℃密闭保存，可保持稳定至少12个月，常温运输。
产品概述EndoFectin TM -Max 转染试剂是以脂质体转染为原理的转染试剂，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。
EndoFectin TM -Max 转染试剂广泛适用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T 、CHO-K1、Hep G2、Hela 、MCF-7、NIH/3T3和A549等。
即使在有血清存在的情况下，该试剂仍能高效将核酸导入细胞。
GeneCopoeia 公司提供的EndoFectin TM -Max 转染试剂具有如下优点： y 转染效率更优良 y 细胞毒性低y 适用于多种细胞系的转染操作，操作简便y 与含血清的培养基相兼容，转染前不需去除细胞培养液或血清，转染后不需清洗细胞质量控制每批次EndoFectin TM -Max 转染试剂均经过转染测试。
将eGFP 表达质粒（GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-M02）用EndoFectin TM -Max 转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞，转染24小时后，超过95%的细胞表达eGFP 。
注意事项使用高质量的质粒：请务必使用高质量的转染级无内毒素质粒。
可通过260 nm 光吸收测定DNA 浓度，并以260 nm / 280 nm 比值确定DNA 纯度（比值应在1.8~2.0的范围内）。
如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
保证细胞状态：请使用适当保存和经常传代的健康细胞，并确保培养基无细菌、真菌或支原体污染。
如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。
实验材料y EndoFectin TM -Max 转染试剂、含目的基因的DNA 质粒y 无蛋白细胞培养液（如Opti-MEM I TM ，来自Life Technologies . 货号：31985-088） y 培养至70~80%汇合度的目的细胞条件摸索在进行正式转染前，推荐以EndoFectin TM -Max 转染试剂摸索目的细胞的最佳转染条件。
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Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂说明书产品描述
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
转染后不需要除去核酸-Hieff TransTM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff TransTM 以无菌的液体形式提供。
通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做160 次转染；
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
产品4oC保存，一年有效。
不可冷冻！
注意事项
1）Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。
但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。
DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 μg DNA 和1-1.5 μl 转染试剂。
通过调整DNA/Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5。