Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂说明书
脂质体介导转染方法
脂质介导的短暂表达
实验材料
哺乳动物细胞
试剂、试剂
质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM
盒
仪器、耗材
培养皿培养箱聚苯乙烯管
实验步骤
1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中
培养过夜，直至细胞80%汇片。
（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%
汇片，将所有数量扩大8倍）
2. 在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下：稀释质粒DNA至1 ml DMEM-SF中，
在旋涡混合器上振荡1 s 然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。
在室温下温育5~ 10 min，
使DNA与阳离子脂质体结合。
3. 吸去DMEM-SF培养液，用1 ml 的完全DMEM-SF洗1次，吸去DMEM-SF。
对毎
个35 mm 孔中，直接在细胞上加1 ml DNA/脂质体复合物。
在37℃培养箱中温育3~5 h。
4. 往每孔细抱中加入1 ml 的DMEM-20完全培养液，在37℃培养箱中继续温育24~48
h。
5. 吸去完全DMEM/DNA/脂质体复合物，毎孔加入2 ml 新的DMEM-10完全培养液，
继续搵育24~48 h。
6. 收集细胞：用细胞刮于刮下细胞，或胰蛋白酶消化或冻融裂解细胞。
进行适当的表
达分析。
脂质体进行稳定表达。
脂质体转染原理及操作步骤
脂质体转染原理及操作步骤脂质体转染是一种常用的基因传递技术，用于将外源的核酸（例如DNA、RNA）转入细胞内。
脂质体是由人工合成的类似于细胞膜的双层脂质膜组成，具有较好的生物相容性和可降解性，因此可以用来包裹并传递外源核酸进入目标细胞内。
本文将详细介绍脂质体转染的原理和操作步骤。
脂质体由两个疏水性脂质尾部和一个亲水性脂质头部组成，形成类似生物细胞膜的双层结构。
这种双层结构使得脂质体可以包裹水溶性的外源核酸，并形成脂质体-核酸复合物。
当复合物与细胞膜接触时，由于脂质体的类似性，这些复合物可以与细胞膜融合，并释放外源核酸进入细胞。
然而，简单地将脂质体-核酸复合物添加到细胞培养基中并不能有效地将外源核酸转入细胞内。
为了提高转染效率，常常需要使用电穿孔或钙磷共沉淀等方法，以增加细胞膜的通透性。
操作步骤：1.准备工作：-完整的脂质体转染试剂盒。
-DNA或RNA溶液。
-靶细胞。
-无菌操作条件下的实验室。
2.重组脂质体的合成：-按照试剂盒说明将脂质体复合物合成。
-使用无菌的工具和试剂。
3.核酸引物的制备：-将外源DNA或RNA与引物混合，使其形成核酸复合物。
4.细胞处理：-将培养皿中的细胞进行冲洗，去除培养基。
-将适量的细胞培养基添加到培养皿中，以保证细胞的正常生长。
5.导入核酸：-将所制备的核酸复合物滴加到细胞培养基中。
-将细胞培养皿置于无菌环境中，以便细胞吸收和利用核酸。
6.细胞培养：-按照细胞类型和所使用的培养基，将细胞置于恰当的培养条件下，并进行培养。
-根据需求添加所需要的生长因子和抗生素。
7.观察和分析：-在一定的培养时间后，观察细胞是否发生了显著的变化。
- 使用适当的实验方法（如PCR、Western blot等）检测外源基因的表达。
-观察并记录实验结果。
以上是脂质体转染的原理和操作步骤。
脂质体转染是目前常用的基因传递技术之一，可以用于研究基因功能、疾病治疗等领域。
随着技术的不断发展，转染效率和特异性将逐渐提高，为研究和治疗带来更多的机会和挑战。
转染试剂使用说明书
210102
1ml
1. 2. 3. 4. 5. 6.
适用范围及特点： 适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的基因转染 适用于瞬时转染和稳定转染 适应于贴壁细胞和悬浮细胞转染 转染效率高且稳定，在有无血清存在的细胞培养基中均能获得高效率转染 细胞毒性低 转染程序简单，转染实验可以在半小时内完成
产品储存： GenFectinTM (1.0mg/ml) 在室温下运输，试剂到时请即存放于 4℃，在 4℃可存放
2. 3).
配制转染工作液： （ 6 孔板或 35 mm 平皿， 2 ml 培养液） 取 5~8μ g DNA （起始用量 5μ g） ，加入稀释液中至总体积为 100μ l，轻轻混匀，室 温放置。
4).
先将 GenFectin TM 涡旋振荡混匀。取 GenFectinTM 1~4μ0μl，轻轻混匀，室温放置 5 分钟。
8).
稳定转染时，于转染后 24~48 小时消化细胞分至 3~5 个培养皿中，加适当浓度的 相应抗生素（如 G418）筛选。
建议的起始转染条件 : 培养容器
96 孔板 24 孔板 6 孔板 35mm 培养皿 60mm 培养皿
转染前一天 接种细胞数
1-1.510 个 0.5-1 10 个 2-4 10 个 2-4 10 个 4-6 105 个
3.
GenFectinTM 在转染中不受血清影响，所以 GenFectinTM / DNA 复合物能直接加到 含血清的培养基中，但稀释 GenFectinTM 和 DNA 的缓冲液不能混有血清，因为 GenFectinTM 在制备 GenFectinTM / DNA 复合物之前可能会与血清中的蛋白质反 应，影响转染效率。
-5-
英格恩entranster转染试剂说明书
英格恩entranster转染试剂说明书一、产品概述英格恩 Entanster 转染试剂是一种用于转染外源 DNA/RNA 到细胞内的试剂。
它是经过优化的化学试剂组合，可以将外源 DNA/RNA 高效地传递到各种细胞中，并促进其定向表达。
本试剂适用于体外转染实验和基因工程研究，具有高转染效率、低细胞毒性、简单易用等优点。
二、试剂成分英格恩 Entanster 转染试剂主要成分包括转染缓冲液和转染增强剂。
转染缓冲液中包含有机溶剂、非离子表面活性剂等，用于稳定 DNA/RNA与转染剂的结合。
转染增强剂含有具有阴离子表面活性剂、脂质、蛋白质等物质，可以提高细胞膜通透性和转染效率。
三、使用说明1.储存和稀释：试剂应储存于-20℃的冰箱中，保持干燥和避光。
使用前需要将试剂溶解在适当体积的转染缓冲液中，最佳稀释比例为1：9、溶液需充分混匀，离心并去除任何沉淀物。
2.样品准备：在转染前，将目标DNA/RNA溶解在适当的缓冲液中，浓度通常在0.1-1μg/μL最佳。
确保样品充分溶解并无明显沉淀。
3.转染操作：对于已经培养至适当倍数的细胞，将细胞用预先暖和的转染缓冲液洗涤一次，并去除缓冲液。
将转染缓冲液和溶解好的目标DNA/RNA混合，稍微搅拌均匀。
与此同时，将适量的转染增强剂加入到混合物中，充分混合。
然后将混合物直接滴加到细胞上，并轻轻摇晃培养板以确保混合物均匀分布。
4.培养和检测：将含有转染混合物的培养板放回恒温培养箱中，保持恒定的温度和CO2浓度。
培养时间和温度根据需要进行调整，通常在24-48小时后可以进行下一步实验或观察。
四、注意事项1.试剂需保存在干燥、阴凉、避光的环境中，避免结冰或暴露在高温环境中。
2.操作中需佩戴手套并遵循生物安全实验操作规范。
3.使用前需充分摇匀试剂瓶，确保所有试剂成分充分混合均匀。
4.转染缓冲液中的有机溶剂可能对一些细胞有毒性，因此在选择试剂时应参考相关文献或尝试不同的浓度和时间，以确定最佳条件。
TransLipidHLTran...
TransLipid®HL Transfection Reagent目录号：FT111保存：2-8℃保存一年(避免冷冻)。
产品说明TransLipid® HL Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适用于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，在保证高转染效率的同时具有极低的细胞毒性。
本产品适用细胞类型广，转染时血清和抗生素的存在不影响转染效率，并且转染后无需更换培养基。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。
特点·转染效率高·细胞毒性极低(细胞存活率>90%)·操作简便，转染后无需更换培养基质粒DNA的转染:以24孔板为例，步骤如下细胞接种：每孔接种0.5-2×105个细胞，使转染时细胞达到70-90%汇合度细胞培养12-24小时质粒稀释：将0.8 μg质粒稀释于50 μl Opti-MEM培养基TransLipid® HL稀释：将2 μl TransLipid® HL稀释于50 μlOpti-MEM培养基室温静置5分钟将质粒和TransLipid® HL轻柔混合室温静置20分钟将质粒-TransLipid® HL混合物加入细胞，于37℃ CO2培养箱培养转染4-6小时后更换培养基(可选)，继续培养18-72小时本产品仅供研究，不用于临床诊断。
siRNA 的转染以24孔板为例，转染时细胞汇合度为30-50%，转染所需的siRNA 和TransLipid ® HL 的量分别为20 pmol 和1 μl ，步骤同DNA 转染。
质粒DNA 和siRNA 转染的优化为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳结合，可以对DNA 或siRNA 和 TransLipid ® HL 的比例及转染初始细胞密度进行优化，DNA 转染可以在1: 2-1: 5的范围内优化比例，siRNA 转染可以试用10-50 pmol siRNA 和0.5-1.5 μl TransLipid ® HL 的用量。
脂质体转染实验步骤脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE
脂质体转染实验步骤脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE脂质体转染实验步骤脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。
它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。
转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。
用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做。
先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1-5ug和孵育时间6h，开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间。
因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24h为宜。
细胞种类：COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。
1、操作步骤（方法一）：（1）：取6孔培养板，向每孔中加入2ml含（1-2）x 10^5个细胞的培养基，37℃、18% CO2培养基40%-60%汇合时。
（2）转染液制备：在聚苯乙烯管中制备以下两液（为转染1个空细胞所用的量）。
A液：用不含血清培养基稀释DNA使浓度为1-10ug，终量100ul。
B液：用不含血清培养基稀释LR，使终浓度为2-50ug，终量100ul。
轻轻混合A液、B液，室温中置10-15min，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。
（3）转染准备：用2ml不含血清培养基漂洗2次，再加入1ml 不含血清培养基。
（4）转染：把A/B复合物缓缓加入培养基中，摇匀，置37℃温箱中6-24h，吸除无血清转染液，换入正常培养基继续培养。
（5）其余处理：如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。
（6）注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。
2、快速脂质体转染法操作步骤（方法二）：● 将细胞以5 x 10^5个/孔接种于6孔板中培养24h，使其达到50%-60%板底面积。
HighGene plus Transfection reagent 说明书
HighGene plus Transfection reagent说明书货号：RM09014P规格：1mL，10mL◆产品描述HighGene plus Transfection reagent细胞转染试剂是一种新型的混合型高分子聚合物转染试剂。
它可以与核酸（包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内，适用于大部分真核细胞的细胞转染。
◆产品特点1、适用于多种细胞类型和培养板。
2、高转染效率、批次稳定重复性好、操作简单。
3、转染过程不受血清和抗生素的影响。
◆保存条件-20℃保存，24个月有效。
◆操作说明1、贴壁细胞转染（以293T细胞为例）（1）第一天，将293T细胞接种到6孔板中，细胞密度控制在70%-90%为宜；注：根据实验需求，可以选择不同的细胞培养装置，细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1（2）第二天，先取4μg质粒加入到200μL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入8μL HighGene plus转染试剂，吹打混合；注：MEM、1640、F12等基础培养基均可用于HighGene plus转染试剂的溶剂，不同的细胞培养装置所需质粒的量和HighGene plus转染试剂剂量详见附表2（3）将200μL质粒/HighGene plus转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中，轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布；注：6孔板中为完全培养基，轻轻晃动细胞培养板即可，切勿剧烈摇动细胞培养板，以免细胞脱落漂浮！（4）细胞转染4-6h后，半量更换新鲜完全培养基；注：半量换液时，吸弃一半原有完全培养基，补加一半新鲜完全培养基（5）细胞转染24-48h后，即可使用适当方式进行检测，如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等，或加入相应筛选药物（G418或Puromycin）可获得稳定细胞株。
2、悬浮细胞转染（以HEK293F细胞为例）（1）第一天，在125mL摇瓶中接种30mL密度为1×106个/mL HEK293F悬浮细胞；（2）第二天，先取30μg质粒加入到3mL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入60μL HighGene plus转染试剂，吹打混合均匀；（3）将3mL质粒/HighGene plus转染试剂复合物均匀滴加到30mL体积HEK293F悬浮细胞的125mL摇瓶中，轻轻摇动摇瓶使其混合均匀；（4）细胞转染3-5天后，根据蛋白表达的情况（胞内表达或分泌表达），收集细胞或细胞培养上清，进行后续蛋白纯化操作。
脂质体转染试剂 生产
脂质体转染试剂生产脂质体转染试剂是一种常用的生物技术试剂，广泛应用于基因转染和基因治疗研究中。
本文将介绍脂质体转染试剂的生产过程和其在基因转染中的应用。
脂质体转染试剂的生产主要包括脂质体的制备和试剂的包装两个步骤。
首先，制备脂质体需要选择适当的脂质体组分，常见的有磷脂、胆固醇和表面活性剂等。
这些组分能够在适当的条件下形成脂质体结构，提供载体功能。
其次，将脂质体组分按照一定比例混合，并在适当的温度和pH值下进行混悬和超声处理，最终得到脂质体悬浮液。
制备好的脂质体悬浮液需要经过一系列的质量控制检测，确保其质量符合要求。
脂质体转染试剂的包装主要是将制备好的脂质体悬浮液进行浓缩和冻干处理。
首先，利用超滤膜或离心浓缩等方法将脂质体悬浮液进行浓缩，以提高试剂的浓度。
然后，将浓缩后的脂质体悬浮液进行冻干处理，即将其在低温下进行干燥，使其转变为固态。
冻干后的脂质体转染试剂具有较长的保存期限和良好的稳定性，方便运输和使用。
脂质体转染试剂在基因转染中起着重要的作用。
基因转染是将外源基因导入到细胞中的过程，脂质体转染试剂作为一种常用的基因转染载体，可以有效地将外源基因转染到靶细胞中。
脂质体转染试剂通过与外源基因形成复合体，利用脂质体的包裹功能将其导入细胞内。
这种方法具有操作简单、转染效率高和适用于多种细胞类型等优点。
脂质体转染试剂在基因治疗研究中也有重要应用。
基因治疗是指通过导入外源基因来修复或治疗遗传性疾病的方法。
脂质体转染试剂可以作为基因载体，将治疗基因转染到患者的细胞中，以实现基因治疗的目的。
脂质体转染试剂具有较好的生物相容性和生物安全性，可以保护基因免受降解和免疫系统的攻击，提高基因转染效率和基因治疗的疗效。
总结来说，脂质体转染试剂是一种常用的生物技术试剂，能够有效地将外源基因转染到细胞中，并在基因转染和基因治疗研究中发挥重要作用。
脂质体转染试剂的生产过程包括脂质体的制备和试剂的包装，通过严格的质量控制确保试剂的质量符合要求。
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Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书
产品描述
Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。
通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染；
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
产品4ºC保存，一年有效。
不可冷冻！
注意事项
1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。
但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。
DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 µg DNA 和1-1.5 µl 转染试剂。
通过调整DNA/Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff Trans TM（μl）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板为例，其他培养板加样体积请参考表一）
【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
悬浮细胞：转染当天，配制DNA复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500µl生长培养基（不含抗生素）中加入4-8×105 cells。
1. 按照以下体系配制DNA-Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂复合物：
1）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.5μg DNA。
混匀。
2）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.6-2.5 μl Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂。
Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂稀释后室温孵育5min（在30min内同稀释的DNA 混合，保温时间过长会降低活性）。
【注意】：即使脂质体核酸转染试剂使用OPTI-MEM稀释，细胞也可以使用DMEM 培养。
如果DMEM 作为脂质体核酸转染试剂的稀释液，必须在5min内同稀释的DNA混合。
2. 混合稀释的DNA和稀释的脂质体核酸转染试剂（总体积100µl），轻轻混匀，并在室温（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂质体复合物形成。
此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5h。
3. 直接将100µl DNA-Hieff Trans TM复合物加入到细胞培养板每个孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
【注意】：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。
在加入复合物前移去生长培养基，替换为500µl无血清培养基。
4. 37℃，5% CO2培养箱培养24-48h，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。
然而，可能有必要在4-6h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
稳转细胞株：转染24h后，按照1：10或更高比例在细胞中加入新鲜生长培养基，转染48h 后加入筛选培养基。
悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Hieff Trans TM复合物后，如果需要可以4h后加入PMA
和/或PHA。
对于Jurkat细胞，PHA和PMA的终浓度分别为1µg/ml和50ng/ml，可以提高CMV启动子活性和基因表达。
对于K562细胞，只加入PMA足以提高启动子活性。
转染体系的调整
对于不同的细胞培养板，Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同，具体请参考下表（表一）。
对于96 孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。
这种改进步骤已经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。
快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得脂质体核酸转染试剂非常适用于96 孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。
1 不同厂商提供的细胞培养板表面积可能有所不同；
2 稀释DNA或RNAi所用的培养基体积。
【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。
使用时DNA（μg）: Hieff Trans TM（μl）比值保持在1:0.5-1:5。