DNA提取制备
提取dna方法
提取dna方法
DNA提取的方法主要有以下几种：
1. 物理法：包括机械粉碎、超声波处理和玻璃片研磨等。
这些方法可以破坏细胞结构，释放出DNA。
2. 化学法：包括碱变性法和尿素变性法等。
这些方法通过改变DNA的理化性质使其解链，从而易于被提取出来。
3. 生物酶法：包括蛋白酶K法和纤维素酶法等。
这些方法利用特定的酶来降解蛋白质和纤维素等物质，从而释放出DNA。
4. 基因工程法：通过构建表达载体并导入宿主细胞中，使目的基因在宿主细胞内得到表达，从而产生可溶性或不可溶性的DNA片段。
5. 其他方法：包括电泳分离法和超速离心法等。
这些方法可以通过分离和纯化DNA片段来实现对DNA的提取。
需要注意的是，不同的方法和材料可能存在不同的风险和注意事项，因此在提取DNA时应该遵循正确的操作规程，确保安全和有效。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
dna的提取方法与步骤
dna的提取方法与步骤DNA的提取方法与步骤DNA提取是分子生物学中的重要实验步骤，它可以从细胞中分离出DNA，为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA的提取方法与步骤。
一、材料准备1. 细胞样本：可以是动物组织、植物组织或微生物培养物等。
2. 细胞裂解缓冲液：常用的裂解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液和EDTA缓冲液。
3. 蛋白酶K：用于降解蛋白质。
4. 盐溶液：如NaCl溶液，用于沉淀DNA。
5. 异丙醇：用于沉淀DNA。
6. 酚-氯仿混合液：用于分离DNA。
二、DNA提取步骤1. 细胞裂解：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，使用均质器或超声波仪器对细胞进行裂解，使细胞壁破裂释放出细胞内的DNA。
2. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，将蛋白质降解，使DNA从蛋白质中解离出来。
3. 盐沉淀：加入盐溶液，通过离心将DNA沉淀下来。
盐溶液中的离子会中和DNA分子上的电荷，使其变得不溶于水，从而沉淀下来。
4. DNA纯化：将DNA沉淀物用异丙醇洗涤，去除杂质。
然后使用乙酸溶解DNA沉淀物，使其变为可溶于水的形式。
5. DNA分离：将DNA溶液与酚-氯仿混合液混合，酚层中的蛋白质和DNA杂质会与酚结合，而DNA会在水相中。
通过离心分离酚相和水相，得到纯净的DNA溶液。
6. DNA沉淀：将DNA溶液加入异丙醇中，通过离心使DNA沉淀下来。
7. DNA溶解：将DNA沉淀物用适量的缓冲液溶解，获得最终的DNA溶液。
三、实验注意事项1. 实验操作要严格遵守无菌技术，避免DNA的污染。
2. 实验过程中要注意温度的控制，避免DNA的降解。
3. 实验器材要干净，以免杂质对DNA提取的影响。
4. 实验过程中要轻柔操作，避免DNA的断裂。
四、常见问题及解决方案1. DNA溶解不完全：可以加热溶解，或者使用酶切酶处理。
2. DNA沉淀量低：可以增加盐溶液的浓度，或者加入载体DNA增加DNA的沉淀量。
3. DNA质量差：可以使用纯化试剂盒进行纯化处理，或者使用Phenol-Chloroform-Isoamyl Alcohol（PCI）进行提取。
DNA的提取方法
DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本，以供后续实验和分析使用。
这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.高盐法：高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。
首先，待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。
接下来，加入裂解缓冲液，通常含有高浓度的盐并对抗离子泵，从而使细胞膜破裂并释放DNA。
裂解后，使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。
最后，通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。
2.CTAB法：CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为一种阴离子表面活性剂，可以结合在DNA和脂质上，并形成沉淀，从而使DNA分离出来。
首先，样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中，含有CTAB、盐和EDTA等。
接下来，DNA与其他细胞组分一起沉淀，通过聚乙二醇进行沉淀，并通过离心分离。
然后，洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。
3.柱式纯化法：柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。
该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。
首先，细胞或组织样品经过裂解后，溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。
然后，将样品通过柱子，DNA与硅胶膜相互作用，并形成强烈的结合，同时其他细胞组分被清除。
接着，使用洗涤缓冲液去除杂质，最后使用低盐缓冲液来释放DNA。
这种方法可以提供高纯度的DNA样本，适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。
4.磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。
该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。
首先，待提取的细胞或组织样本被裂解，并加入磁珠和DNA结合缓冲液。
接下来，通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来，并洗涤去除杂质。
最后，通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程，包括酶切、基因工程等。
DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1、核酸沉淀法：核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法，它的原理是通过pH调节使DNA沉淀，然后将DNA从溶液中收集。
步骤如下：首先，将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化；其次，加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl，调节pH至5.5；然后，加入乙醇，溶解DNA并沉淀；最后，在0℃-4℃维持1小时，收集沉淀的DNA。
2、缓冲溶液法：缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法，它利用DNA的结合能力和电性作用力，将DNA结合到某种特定的溶剂上，然后从溶剂中提取出来。
步骤如下：首先，将样品加入缓冲溶液，消化；其次，加入非离子表面活性剂，使DNA脱水；然后，加入离子表面活性剂，将DNA与其他组分分离；最后，用低温冷藏保存，以便收集DNA。
3、植物提取法：植物提取法是通过一系列物理和化学步骤，从植物细胞中提取DNA的一种方法。
步骤如下：首先，将植物细胞磨碎，用盐水悬浮；其次，加入碱性溶液，使细胞膜脱落；然后，加入非离子表面活性剂，溶解脱落的细胞膜，将DNA沉淀；最后，加入乙醇，将DNA沉淀，冷却保存，然后收集DNA。
4、实验室提取法：实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法，它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。
步骤如下：首先，将细菌细胞加入特定的溶剂液中，使细胞膜脱落；其次，加入特定的酶和蛋白酶，将细胞内的DNA 溶解；然后，加入非离子表面活性剂，将溶解的DNA沉淀；最后，用乙醇沉淀DNA，将沉淀的DNA精细收集。
以上就是提取DNA的方法，主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法，它们都具有不同的优点和缺点，因此，在实际应用中，应该根据样品的不同，选择适当的提取方法。
各种DNA提取方法
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA 溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。
DNA提取原理和方法
DNA提取原理和方法1.细胞破裂：细胞膜是由脂质双层构成的，通过物理方法（如振荡、搅拌、超声波等）或化学方法（如洗涤缓冲液、去溶液等）可以破坏细胞膜，使得细胞中的DNA能够被提取出来。
2.核膜的溶解：核膜是由核孔复合体构成的，核孔复合体可以选择性地允许一些小分子进入或离开细胞核。
通过添加一些化学物质，如柠檬酸、盐酸或洗涤缓冲液，可以使核膜溶解，从而使DNA能够被提取出来。
3.蛋白质去除：细胞核中存在许多蛋白质，如组蛋白、核酸酶等，这些蛋白质会干扰DNA的提取和后续实验。
通过加入试剂，如蛋白酶K、SDS溶液等，可以将蛋白质去除，从而得到纯净的DNA。
1.苏亮溶液法：将待提取的细胞悬浮于苏亮溶液中，通过加热、浸泡、振摇等方法破裂细胞膜，然后加入蛋白酶K和洗涤缓冲液进行蛋白质去除，最后经过酚/氯仿提取和乙醇沉淀，得到纯净的DNA。
2.酚/氯仿法：将细胞破裂后的混合物加入等体积的酚/氯仿溶液中，通过离心将混合物分为上层DNA和下层蛋白质/核酸碎片的两个相。
然后将上层DNA转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇沉淀DNA，再经过洗涤和离心，得到纯净的DNA。
3.膜柱法：将细胞破裂后的混合物加入DNA结合柱中，经过多次洗涤去除杂质，然后通过加入洗脱缓冲液使DNA从膜柱中洗脱，最后经过乙醇沉淀和洗涤，得到纯净的DNA。
这种方法可以自动化操作，更方便快捷。
1.使用无菌技术和无菌试剂，避免污染DNA样品。
2.细胞溶解和处理的时间应尽可能缩短，以减少DNA的降解。
3.加入酶类试剂时，应在适当的温度和时间范围内进行，以保证酶的最佳活性。
4.完成DNA提取后，应使用紫外线分光光度计检测DNA的浓度和纯度，以确保提取的DNA质量符合实验要求。
综上所述，DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础步骤，通过破裂细胞膜、溶解核膜和去除蛋白质，可以从细胞中提取出纯净的DNA。
常用的DNA提取方法包括苏亮溶液法、酚/氯仿法和膜柱法。
DNA提取实验方案
DNA提取实验方案
材料与试剂：
1.细胞样本（如血液、组织等）
2.细胞裂解缓冲液（含有蛋白酶K）
3.蛋白酶K
4.乙醇
5.蛋白质沉淀液
6.正丁醇
7.氯仿
8.等离子水
9.TE缓冲液
10.离心管
11.磁珠
12.磁珠悬浊液
13.热拌器
14.离心机
实验步骤：
1.细胞破裂：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，加入适量蛋白酶K，放入热拌器中破裂细胞，使DNA溶解在缓冲液中。
2.蛋白质沉淀：加入等体积的蛋白质沉淀液，轻轻混匀，离心使蛋白
质沉淀。
3.DNA沉淀：将上清液转移至新的离心管中，加入适量的乙醇，轻轻
混匀，使DNA沉淀。
4.DNA纯化：将DNA沉淀用等离子水悬浊，加入等体积的正丁醇和氯仿，混匀后离心，取上清液，加入等量的等离子水和TE缓冲液。
5.纯化DNA：将上清液转移至带有磁珠的离心管中，加入磁珠悬浊液，混匀后在离心机中进行离心，使DNA和磁珠结合。
6.洗涤DNA：将离心管中的上清液丢弃，加入70%乙醇洗涤DNA，多
次洗涤后去除乙醇，干燥磁珠。
7.溶解DNA：最后用等离子水或TE缓冲液溶解DNA，即可用于后续的
实验。
通过上述步骤，可以从细胞样本中提取出纯净的DNA，用于后续的分
子生物学实验。
DNA提取是一项基础而重要的技术，在分子生物学和遗传
学研究中具有广泛的应用价值。
希望以上方案可以帮助您顺利进行DNA提
取实验。
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高盐一低pH法 DNase Ⅰ法
核酸提取的一般过程：
I.材料准备
裂解细胞
II.破碎细胞或包膜－内容物释放 III.核酸分离、纯化 IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质
核酸分离提取
纯化
V.核酸溶解在适量缓冲液或水中
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一.破碎和裂解细胞：
①物理方法：研磨法、匀浆法、超声波处理法；
②化学法：SDS处理细胞法、CTAB裂解细胞法； ③生物法： 蛋白酶K法 、溶菌酶处理法。
◆ （5）将上清转移到新1.5ml 离心管中，向上清中加入1 倍体积异丙醇（可加入
1/10 体积3 mo l/ L NaAc（p H5. 2）），充分颠倒混匀，使 DNA从溶液中析出， 形成絮状沉淀（可室温或- 20℃放置1- 2h促进DNA沉淀）；4℃离心，12000rpm， 20min ； (6）弃上清，加入500μ l 4℃预冷的70℅乙醇，颠倒混匀，静置5-10min至沉淀 悬起；（洗3次-即7,8步骤） (7）4℃，12,000rpm 离心5 min，倒上清；再用500μ l 70％乙醇洗涤一次； (8）4℃，12,000rpm 离心5 min，倒上清。 （9）倒置于吸水纸上晾干，弃酒精，将剩余的液体尽量吸净并干燥，超净台真空 干燥。 （10）加入适量TE缓冲液或ddH2 O 充分溶解DNA；如果DNA溶解困难，可以37℃温 育30min ； （11）DNA溶解后，可按样品体积加入1/10 体积的浓度为10 mg/ ml 的RNase A 并在37℃处理10 min，除去RNA；取1ul进行N a noDrop 检测浓度和纯度， 另取3~5ul于0.8%琼脂糖凝胶电泳检测； （12）置-20℃保存备用。
DNA提取的常见方法：
基因组DNA的提取
SDS裂解法——动物组织和酵母染色体DNA;
CTAB法——植物组织和真菌组织，对产生大 量多糖的生物体的核酸提纯非常有效的； 其他
非基因组DNA的提取 质粒DNA的提取
• 碱裂解法 • 煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取
• 蔗糖梯度差速离心结合SDS裂解法
试剂盒提取法
一次提取的量相对较少，为几 十到几百微升； 步骤简单，方便，纯度高； 提取时间较短，大约1h;
试剂盒是有针对性的，通常只对 某些规定实验材料有效。并且通 常大部分厂家的试剂盒成分组成 不公布，导致无法从具体原理和 过程引起结果的分析；
试剂盒相对昂贵，对于需制备大 量DNA的实验不合算。
三.核酸沉淀、溶解
a) 转移上清至new EP中，用预冷的无水乙醇或异丙醇沉淀。沉淀时加入 1/10体积的NaAc（pH5.2，3M），有利于充分沉淀。
b) 沉淀后应用70％的乙醇洗涤，以除去盐离子等。（重复洗涤3次）
c)
d)
晾干DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥）。
若长期储存建议使用TE缓冲液溶解，如果溶解困难，可以37℃温育 30min。
酚作，为一种弱酸，是微溶于水的有机物，所以为除去酚，需加氯仿作 为萃取剂，使酚进入氯仿有机相，从而与DNA水溶液分离成互不相容的 两相。异戊醇可以降低表面张力，减少抽提产生的泡沫，并能使离心后 水相、变性蛋白质和有机相维持分层稳定。
II.DNA提取试剂盒
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两种方法比较：
传统酚氯仿抽提法
一次提取的DNA量可较大，可 供研究员多次使用； 步骤相对繁杂，需要配制较多 的溶剂，且酚氯仿为有毒挥发 物质，对人体有害。 提取时间较长，至少4h. 提取的模板质量较好，保存时 间也长，DNA纯度有保证，技 术比较成熟可靠
针对不同材料，选择适当的裂解预处理方式：
• 植物材料－－液氮研磨 • 动物组织－－匀浆或液氮研磨 • 组培细胞－－蛋白酶K • 细菌－－溶菌酶破壁 • 酵母－－破壁酶或玻璃珠
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二.核酸分离纯化：
由于DNA抽提物中往往含有大量的RNA、蛋白质、多糖、 酚类物质、盐离子、裂解化合物等杂质，因此需要进一步的 分离。 一般采取方法： I.有机相抽提法（加等量酚／氯仿／异戊醇）——去除蛋白 质。其原理：加入苯酚，可使细胞裂解后的上清液中蛋白质变性，但
用分子生物学技术研究复杂的基因组， 首先必须制备纯净的高分子质量DNA。按制备 对象的不同，一般分为3种：动物组织基因组 DNA提取、植物组织基因组DNA提取、细菌基 因组DNA提取。
但是不同的研究目的对DNA的纯度和量的要求不 尽相同。从某种程度上讲，分子生物学的所有方法都需 要分离核酸。色谱技术常用于质粒与基因组的分离，以 及从细胞裂解液分离基因组DNA。凝胶电泳技术因其更 高的分离度，成为一般情况下首选的分离方法。凝胶电 泳技术既可以用于分析，又可用于制备，其分离的核酸 片段的分子质量范围从小于10³Da到大于108Da。另外还 有脉冲电场凝胶电泳、DNA毛细管电泳、Southern杂交 技术等。
问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。
1.
DNA中含有蛋白、 多糖、多酚类杂质 DNA在溶解前，有 乙醇残留，乙醇抑 制后续酶解反应 DNA中残留有金属 离子
1.重新纯化DNA，加入酚后
2.
要剧烈震荡，从而去除蛋 白、多糖、多酚等杂质 （具体方法见前）
对 策 2.重新沉淀DNA，让乙醇挥
问题三：DNA提取量少。
1.尽量选用新鲜（幼嫩）的材料
1.实验材料不佳或量少 2.破壁或裂解不充分 3.沉淀不完全 4.洗涤时DNA丢失
2.动植物要匀浆研磨充分；G＋
对 策
菌、酵母裂解前先用生物酶或 机械方式破壁 3.高温裂解时，时间适当延长 （对于动物细胞、细菌可增加 PK的用量） 4.低温沉淀，延长沉淀时间 5.加辅助物，如NaAc促进沉淀 6.洗涤时，最好用枪头将洗涤液 吸出，勿倾倒
DNA的制备和分析
为什么需要制备DNA? 解决了什么问题？
◆ 20世纪50年代以后，随着分子遗传学的发展，尤其是沃森和克里克提出 双螺旋结构以后，人们才真正认识了基因的本质，即基因是具有遗传效 应的DNA片断。 ◆ 随着“人类基因组计划”测序的完成，人们不再满足于对基因结构的认 知，逐渐转向对功能基因组学、蛋白质组学的研究上。DNA作为遗传的 基本单位，发挥着重要作用。 ◆ 基于不同的研究目的，大部分的分子实验都需要制备高质量的DNA，用 于各种各样的后续实验。例如：通过引物PCR获得目的基因、酶切、克 隆、连接转化和转染和研究DNA-蛋白质的相互作用等。因此核酸的提 取是分子生物学实验技术中最重要、最图、进化分析、模式生物体进行基 因的剔除或转基因的研究。在分子医学领域，制备DNA的基因检测可以 用于法医鉴定﹑亲子鉴定﹑遗传病早期检测﹑感染疾病检测﹑肿瘤的诊 断和预测 ﹑产前诊断和新生儿筛查 等。
◆ ◆ ◆ ◆
◆
◆ ◆ ◆ ◆
常规纯度和定量检测方法：
DNA含量测定，测A260/A280值，其A260/A280 比值在 1.80左右，说明DNA纯度很高。若大于2.0，说明存在 RNA污染；若小于1.8，说明存在蛋白质或酚等杂质。 琼脂糖凝胶电泳检测。 PCR扩增特异性条带。
DNA提取常见问题
3.
发完全，不能有残留
3.增加70％乙醇洗涤的次
数（2-3次）
问题二：DNA降解。
1.材料不新鲜或反复
1.尽量取新鲜材料，低温保存材料避免
冻融 2.未很好抑制内源核 酸酶的活性 3.提取过程操作过于 剧烈，DNA被机械打 断 4.外源核酸酶污染 5.反复吹打DNA水溶液 6.反复冻融
对 策
反复冻融 2.液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前 加入裂解缓冲液 3.在提取内源核酸酶含量丰富的材料的 DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量 4.细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 5.所有试剂用无菌水配制，耗材经高温 灭菌，避免空气中的核酸酶、DNA、RNA 带入，防止造成DNA的污染。 6.不能反复吹打，特别是线性长链染色 体DNA，易在剪切力下被切断。 7.将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复 冻融
TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制Dnase； pH值为8.0，可防止DNA发生酸解； 为了除去RNA，DNA溶解后可加入RNase A 处理。
• • •
e) 臵-20 ℃保存备用。
具体实验步骤：（以CTAB法提取植物组织为例）
应提前将研钵及研杵清洗干净，锡纸包裹，烘箱内200℃，2h后待冷却；提前检查 试剂是否有效充分；提前将组织在塑料袋内用液氮完全冷冻，放置于- 80℃冷冻保存； ◆(1）提前清理实验台，铺双层保鲜袋，准备防冻手套等，称取一定质量的样品，将样品 置于研钵中，倒入液氮，充分研磨至粉末状。提前称量50 ml离心管重，将样品粉末小心 倒入50 ml离心管中，室温放置1- 2min；再称量50 ml离心管重，计算样品质量； ◆（2）按照1g样品加入5 ml 2℅ CTAB 的比例加入65℃预热的2℅CTAB；充分混匀，置 65℃水浴1h，期间可适当摇匀，期间每隔5- 10 min 混匀一次，取出后，放至室温； 注： 先将除巯基乙醇之外的药品配好, 高压蒸汽灭菌之后加入巯基乙醇 （ 100ml加入 0.2ml巯基乙醇）。 ◆(3）加入等体积的酚/氯仿/异戊醇25:24:1（通风橱操作，先加苯酚，再加氯仿/异戊醇， 各1/2 体积，苯酚易氧化变色），充分颠倒混合至少15min，将提取液中含有的蛋白质杂 质变性，分装至1.5ml离心管内，室温下4℃，12,000rpm 离心10 min； ◆(4）将all上清转移到新1.5ml 离心管中，注意不要吸到中间的蛋白质层，加入等体积 氯仿/异戊醇（通风橱操作，可为吸取充分，将吸到的蛋白质层再离心），充分颠倒混合， 抽提提取液中含有的蛋白质，并萃取出其中的酚；室温下12,000 rpm 离心10 min ；