微生物实验设计-醋酸菌
醋酸菌分离及鉴定
醋酸菌分离及鉴定一、培养基1、分离培养基（溴甲酚紫显色平板）:葡萄糖1%、酵母膏1%、无水乙醇3%（体积分数）、0.04%溴甲酚紫5%（体积分数）、琼脂1.8%、水100 mL，0.1 Mpa 灭菌20 min，无水乙醇在灭菌后培养基温度降到75 ℃左右时加入。
2 、保藏培养基: 葡萄糖1%、酵母膏0.5%、琼脂2%、丙三醇2.5%（体积分数）、水100 mL，121℃灭菌20 min 备用。
3、液体培养基:葡萄糖1%、酵母膏0.5%、丙三醇2.5%（体积分数）、水100 mL，调节pH 至6.30，121 ℃灭菌20 min 备用。
二、醋酸菌分离纯化流程样品→醋酸菌发酵液中富集培养→稀释分离→纯化→斜面试管保藏→产醋酸定性测试。
三、步骤1 、菌株分离取1g 醋醅样品置入无菌试管，装入9 mL 无菌水，振荡均匀后得到10-1 的稀释液，之后10 倍梯度稀释直到10-6 稀释度。
取10-2至10-6 稀释度的样品稀释液分别涂布溴甲酚紫显色平板，每个稀释度涂布2 个平板，每个平板涂布0.2 mL 的样品稀释液，涂布完成后30 ℃倒置培养48 h左右。
选取菌落数在30~50 个左右的平板，挑取该平板上的所有单菌落转入斜面保藏培养基中，30 ℃培养24 h 左右后保存于4 ℃冰箱。
2 、菌株纯化将试管斜面中的菌株平板划线分离后再转接试管斜面，4℃冰箱保存。
3、菌株归类以上述各菌株划线分离的平板为基准，将形成菌落极其相似的菌株归为一大类。
4 、菌悬液的制备用接种环挑取新鲜培养的斜面菌株半环，溶于装有200 μL 无菌超纯水的Eppendorf 管中，于试管振荡器上混匀后得到菌悬液。
四、鉴定1、菌株形态特征:镜下细胞呈短杆状,革兰阴性,无芽胞,单个或成对、成链排列,个体大小为（0.5～0. 7)μm ×(1. 0～1. 5)μm。
2、培养特征:在葡萄糖、酵母膏、乙醇、CaCO3平板培养基上生长旺盛,菌落圆形、油脂状,表面光滑、凸起,边缘整齐,培养2 d能产酸,使CaCO3 溶解形成透明圈,继续培养将乙酸氧化分解产生CO2 和水,菌落周围出现白色透明圈。
醋酸菌
葡萄酒与醋酸菌梁曼发酵工程2011050783摘要：葡萄酒是一种成分复杂的胶体溶液，从葡萄汁酿成葡萄酒以后，不管是在酒厂的贮藏阶段，还是装瓶以后，它总是在一刻不停地变化着。
由于各种微生物在葡萄酒中的生长繁殖，使得葡萄酒失去了原有的风味，这种现象称为葡萄酒的病害。
在酿酒学领域，醋酸菌几乎不受关注，可能是因为醋酸菌是严格好氧菌，因此人们认为该类菌在葡萄酒中不能生存，除了葡萄酒表面能够永久的与空气接触。
醋酸菌是葡萄酒酿造中的大敌。
凡是有酒花生长之处，就有醋酸菌在一起繁殖；一旦条件具备，会迅速把酒精氧化变成醋酸，使葡萄酒产生醋酸气味，有刺舌感，严重破坏酒质。
在发酵过程中，可通过合理措施来防治醋酸菌的污染。
关键词：醋酸菌；醋酸菌污染；防治措施1葡萄和葡萄酒相关的醋酸菌1.1醋酸菌的分类醋酸菌是能够将酒精氧化成醋酸的一类微生物的总称。
醋酸菌是多种形态，细胞椭圆到杆状，0.5-0.8×0.9-4.2微米。
单个，成对或成链，不形成孢子。
革兰氏染色阴性。
醋酸菌是专性好氧菌。
有的醋酸菌不会运动，也有具极生或周生鞭毛的运动型。
醋酸菌被分为醋杆菌属（Acetobacter）、酸单胞菌属(Acidomonas)、葡糖醋杆菌（Gluconobacter）、葡糖酸醋酸杆菌（Gluconacetobacter）( Ruiz et al., 2000)。
其中关于各属醋酸菌间的不同（表1），主要区别是葡糖杆菌不能将乙醇最终氧化生成CO2和H2O，而其他属均可。
1.2与葡萄和葡萄酒相关的醋酸菌与葡萄和葡萄酒相关的醋酸菌一般有下列几种：氧化葡糖杆菌、纹膜醋杆菌、巴士醋杆菌、Gluconacetobacter liquefaciens（原来一直被认作是液化醋杆菌）、Gluconacetobacter hansenii（以前一直被认作汉生醋杆菌）。
在未损坏葡萄上发现的醋酸菌主要是氧化葡糖杆菌，菌体数量一般为102-105cells/mL( Du Toit and Lambrechts, 2002)。
醋酸菌发酵条件-概述说明以及解释
醋酸菌发酵条件-概述说明以及解释1.引言1.1 概述醋酸菌是一种常见的微生物菌种，其发酵过程可以产生醋酸和其他有益物质。
醋酸菌发酵条件是指在培养醋酸菌的过程中所需的环境条件，包括温度、湿度、氧气、pH值等因素。
了解和控制这些条件对于提高醋酸菌发酵效率和产量至关重要。
本文将深入探讨醋酸菌发酵条件的关键要点，希望可以为相关领域的研究和应用提供参考和指导。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括文章的组织结构和主要内容安排。
在这篇关于醋酸菌发酵条件的文章中，文章结构可以按照以下方式展开:文章结构部分:本文将分为三个主要部分，分别是引言、正文和结论。
1. 引言部分将介绍醋酸菌发酵条件的背景和重要性，以及文章的目的和结构安排。
2. 正文部分将详细探讨醋酸菌发酵条件的相关要点，包括影响发酵的环境因素、最佳发酵条件的探讨和相关研究成果等内容。
3. 结论部分将对文章进行总结，并展望未来关于醋酸菌发酵条件研究的发展方向。
通过以上结构的安排，读者能够清晰地了解整篇文章的内容和思路，帮助他们更好地理解醋酸菌发酵条件的相关知识。
1.3 目的：本文旨在探讨醋酸菌发酵的关键条件，为了提高醋酸菌发酵的效率和产量，我们将深入研究不同条件对醋酸菌发酵过程的影响，并探讨如何优化这些条件。
通过本文的研究，我们希望可以为醋酸菌发酵工艺的改进提供一定的参考，同时也为相关领域的研究提供新的思路和启示。
通过对醋酸菌发酵条件的深入研究，我们可以更好地理解醋酸菌发酵的机制和规律，为相关行业的发展和应用提供更为可靠的科学依据。
2.正文2.1 醋酸菌发酵条件要点1在醋酸菌的发酵过程中，有几个重要的条件需要被满足，以确保醋酸菌能够充分发挥其作用，产生高质量的醋酸。
以下是一些关键的发酵条件要点：1. 温度：醋酸菌的最适生长温度一般在25-30摄氏度之间。
在这个温度范围内，醋酸菌能够更好地进行代谢活动，加快醋的发酵速度。
2. pH值：醋酸菌对环境的pH值要求比较苛刻，一般在3.6- 3.8之间。
醋酸菌菌落形态
醋酸菌菌落形态1. 引言醋酸菌（Acetobacter）是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们具有氧化乙醇为醋酸的能力，因此常被用于制作食醋。
醋酸菌能够形成特殊的菌落，其形态特征对于研究和鉴定该菌种具有重要意义。
本文将详细介绍醋酸菌菌落形态的特点以及相关研究方法和应用。
2. 醋酸菌菌落形态的特点2.1 外观醋酸菌的菌落通常呈圆形或不规则形状，直径在1-5毫米之间。
初生菌落呈白色或淡黄色，随着培养时间的延长，颜色逐渐变为深黄色或橙红色。
2.2 质地初生的醋酸菌菌落质地较软，表面较光滑。
随着培养时间的延长，质地逐渐变硬，并出现凹凸不平的表面。
2.3 边缘醋酸菌菌落的边缘通常呈不规则形状，有时呈波浪状或分叶状。
边缘清晰，有时会出现突起或凹陷。
2.4 触感醋酸菌菌落的触感通常较光滑，质地较硬，不易被压碎。
2.5 气味醋酸菌菌落具有特殊的醋香气味，这是由于其代谢产物中含有乙酸。
3. 醋酸菌菌落形态的研究方法3.1 培养基选择对于醋酸菌的菌落形态研究，选择适宜的培养基非常重要。
常用的培养基包括山梨酸培养基、乳清葡萄糖培养基等。
这些培养基能够提供适合醋酸菌生长和代谢的条件。
3.2 培养条件控制在进行醋酸菌菌落形态研究时，需要控制培养条件以获得准确的结果。
通常，培养温度控制在25-30摄氏度，pH值控制在4.5-6.0之间。
还需要控制好培养时间，以观察菌落的生长和变化。
3.3 菌落观察方法观察醋酸菌菌落形态通常使用肉眼观察或显微镜观察的方法。
肉眼观察可以直接看到菌落的外观、颜色、质地等特征。
显微镜观察可以进一步观察菌落的微观结构和细胞形态。
4. 醋酸菌菌落形态的应用4.1 食醋生产醋酸菌是食醋生产中不可或缺的微生物。
通过研究和控制醋酸菌菌落形态，可以提高食醋的质量和产量。
4.2 食品安全检测醋酸菌是一类常见的食品污染源，通过研究其菌落形态特征，可以进行食品安全检测，及时发现和控制食品中的醋酸菌污染。
4.3 微生物学研究醋酸菌菌落形态的研究对于了解其生长、代谢和适应环境的能力具有重要意义，可以为微生物学研究提供重要的参考。
微生物应用实验3 果酒(葡萄醋)的制作
微生物应用实验3 果酒（葡萄醋）的制作苹果醋饮料电子显微镜下的醋酸菌原理醋酸菌是一种好养细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。
在因为没有封存好而变酸的酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面上大量繁殖而形成的。
实验表明，醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
当氧气、糖类都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将酒精变成乙醛，再将乙醛变为醋酸。
反应式如下：醋酸菌糖类+ 氧气→醋酸+ 水醋酸菌酒精+ 氧气→醋酸+ 水材料（同葡萄酒制作）新鲜葡萄1000克（2斤）白砂糖500克（1斤）用具（同葡萄酒制作）家用榨汁机1台大矿泉水瓶1个医用纱布1包方法步骤（第一二步，同葡萄酒制作）第一步：依次清洗、去梗枝、榨汁、过滤提示：选择新鲜未伤的葡萄，先用自来水冲洗，再去掉梗枝。
第二步：酒精发酵提示：1、葡萄汁装入发酵瓶（矿泉水瓶或其它）时，要留大约1/3的空间，然后盖紧盖子。
因为发酵过程中会不断产生二氧化碳气体，瓶内压力会不断增大。
在发酵过程中，每隔12小时左右将瓶盖拧松一次排气（注意，不是打开瓶盖），此后再将瓶盖拧紧。
2．在制葡萄酒发酵的过程中，要将温度严格控制在18~25摄氏度，时间控制在10~12天左右。
第三步：醋酸发酵提示：1、当发酵产生酒精后，将葡萄酒倒入一个洁净的大碗中，充分搅拌1分钟，盖上一层纱布。
（目的：醋酸菌是好养细菌，醋酸发酵过程需要通入含有氧气的空气。
）2、在醋酸发酵过程中，要将温度严格控制在30~35摄氏度，实践控制在7~8天左右。
并注意通过充气口通入空气。
延伸阅读：1、同样的原理，可以用其它的水果作出相应味道的其它果醋，如苹果醋。
2、醋的原料和制作方法有4类：（1）中国传统的酿醋原料，长江以南以糯米和大米（粳米）为主，长江以北以高粱和小米为主。
现多以碎米、玉米、甘薯、甘薯干、马铃薯、马铃薯干等代用。
原料先经蒸煮、糊化、液化及糖化，使淀粉转变为糖，再用酵母使发酵生成酒精，然后在醋酸菌的作用下使醋酸发酵，将酒精氧化生成醋酸。
醋酸菌培养基
醋酸菌培养基Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT培养醋酸菌用1.醋酸菌斜面培养基：葡萄糖1克，酵母膏1克，碳酸钙1克，琼脂克，水100毫升。
2.斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好（碳酸钙先不加入），分装试管，灭菌备用。
碳酸钙按比例分装、灭菌。
摆斜面前将培养基和碳酸钙混合，用手搓均匀，然后摆斜面，备用。
()Glucose(葡萄糖)100gYeasstextract(酵母膏)10gCaCO320gAgar(琼脂)15gDistilledwater(蒸馏水)1000mlAdjust(调)适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水，分装试管。
灭菌20min。
95％酒精(食用级)40mL。
摆斜面，葡萄糖10g酵母粉水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)灭菌20min。
醋酸菌种的制备扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL 三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。
3.3.1安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，对光观察摇动时有云雾状金属光泽。
每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。
三角瓶三级扩培，三角瓶中培养基的装量为50％，每级按种量在10％左右，在转换振荡器上恒温培养，培养温度均为30℃，时间依次缩短为36、36、24h，3.3.4种子罐培养基同前配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min，冷却后，先加入4％食用酒精，无菌操作接入菌种。
接种量为10％~12％，温度保持在30℃±1℃，通无菌空气，菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定每次接种前，先将菌种进行外观观察。
醋酸菌菌种分离筛选方法
醋酸菌菌种分离筛选方法醋酸菌是一类常见于自然界中的微生物，主要分布于果酱、蜂蜜、果汁等酸性环境中。
醋酸菌能够利用酒精和氧气生成乙酸作为能量源，在食品加工、饮料发酵以及环境保护中具有重要的应用价值。
为了获得高效的醋酸菌菌种，需要进行菌种的分离筛选。
以下是醋酸菌菌种分离筛选方法的一般步骤：1.样品的收集与处理：从酸性环境中收集样品，如水果糖浆、果酱、蜂蜜等。
样品应保持新鲜，并避免污染。
如果样品是固体的，可以通过混合样品和生理盐水来制备悬浮液。
2.菌落计数：将悬浮液经过适当稀释，并均匀分布在含有固体培养基的琼脂平板上。
用细菌计数板或细胞计数器对菌落进行计数。
选取外形典型的菌落进行进一步的分离。
3.菌种分离：根据菌落形态、色素沉积、生理特性等进行分离。
选取外形典型的菌落，利用无菌环针在无菌琼脂平板上进行涂布。
4.筛选培养基的选择：醋酸菌是革兰氏阴性菌，最适生长温度一般在30-35°C范围内。
常用的筛选培养基包括葡萄糖琼脂葡萄糖琼脂（GAC）和醋酸葡萄糖琼脂（GAA）。
也可以根据菌种特性选择适宜的培养基进行筛选。
5.培养条件控制：将分离出的菌种接种在含有适宜营养物质的筛选培养基上，并控制培养条件。
包括温度、pH值、搅拌速度等。
优化培养条件可以提高菌种的产量和质量。
6.菌种纯化：逐步单菌分离并培养，目的是获得纯种菌株，确保菌株的纯度和稳定性。
7.菌种特性分析：对分离出的菌种进行鉴定和特性分析，包括形态学观察、生理特性鉴定、生化指标检测和分子生物学方法确定其种属和亲缘关系等。
总结：醋酸菌菌种的分离筛选是一个多步骤的过程，需要进行样品收集、菌落计数、菌种分离、筛选培养基的选择、培养条件控制、菌种纯化以及菌种的特性分析。
通过这些步骤的实施，可以获得高效的醋酸菌菌种，为醋酸菌的应用提供有力的支持。
醋酸菌筛选与利用技术
醋酸菌筛选与利用技术醋酸菌是一种广泛存在于自然界中的微生物，它可以利用氧化有机物来产生酸性物质，这种酸性物质就是我们常说的醋酸。
醋酸有着广泛的应用场景，包括食品加工、制药、石油化工等。
因此，醋酸菌的筛选和利用技术就显得尤为重要。
一、醋酸菌的种类和筛选方法目前已知的醋酸菌有很多种，常见的有杆菌属、乳杆菌属、念珠菌属等。
对于醋酸菌的筛选，主要有两种方法：传统的分离筛选法和基因工程筛选法。
传统的分离筛选法是将样品中的醋酸菌分离出来，再通过对其生长特性、代谢物产生能力以及形态学特征的观察和分析来鉴定其种类。
这种方法相对简单，但是时间和效率都比较低。
基因工程筛选法则是将醋酸菌的筛选过程转移到基因水平，通过基因组学、代谢组学等新技术，可以筛选出生长速度较快、产醋酸能力较强、抗逆性较好的醋酸菌。
这种方法具有高效、精准、可定制化等优点，因此在近年来的应用中越来越受到广泛关注。
二、醋酸菌的利用技术醋酸是醋酸菌代谢产物中最重要的一种物质，也是醋酸菌最重要的应用来源。
醋酸的主要用途有以下几个方面：1. 食品加工醋酸可以用作酸味剂和调味料，例如，生菜等蔬菜中加入适量的醋酸可以提高味道，增加食欲。
此外，面包、蛋糕等食品的腌制和发酵过程也需要加入适量的醋酸以达到更好的质量和口感。
2. 制药醋酸可以用于制药工业中，例如，醋酸钠可以用作药物的溶剂，醋酸氢钠可以用作制药中间体，醋酸乙酯可以用作药物的保留剂等。
3. 衣物染色在古代，醋酸被广泛用于衣物染色，以改变衣物的颜色或者增加衣物的韧性，如今，醋酸还被用于加速染色过程，提高染色质量。
4. 石油化工醋酸可以作为某些酸化剂、溶剂以及塑料助剂，用来促进石油的加工和化学反应。
三、醋酸菌的发酵工艺醋酸菌的发酵工艺主要有两种，即生产型发酵和回收型发酵。
生产型发酵是将醋酸菌种植到发酵罐中，添加营养物质和氧气，在适宜的条件下进行发酵。
这种方式生产的醋酸纯度高，味道好，但是产量较低，成本较高。
回收型发酵是将醋酸硬脆粉添加到大葱水中，与醋酸菌进行回收型发酵。
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实验设计：醋酸菌的分离与纯化
——生物科学2班秦琬莹辛吉瑀张博文一、实验目的
学习醋酸菌的分离纯化、鉴定的原理。
掌握平板表面涂布法、平板划线法的分离技术。
二.实验原理
1.菌种的分离纯化
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。
2.接种操作方法
涂布平板法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
3. 结晶紫
结晶紫是一种碱性染料，也一种极佳的精密酸指示剂，pH 0.5(绿)～2.0(蓝)~弱酸（蓝紫）~中性（紫色）~碱性（赭红色）；所以在醋酸菌分离纯化平板培养基中加入少量的结晶紫溶液，既不会影响醋酸菌的生长，又可根据变色圈的大小很快把产酸高的醋酸菌株分离出来。
二、材料、用品
1.样品：食醋
2.培养基：
（1）分离纯化平板培养基
葡萄糖1 g，酵母膏1 g，碳酸钙2 g，琼脂2g，水100mL，121℃灭菌20min，冷却至70℃加入4mL无水乙醇和0.5mL 0.02％结晶紫冰醋酸溶液。
（2）液态发酵培养基
葡萄糖l g，酵母膏1.5 g，磷酸二氢钾0.05 g，硫酸镁0.05 g，水100 mL，pH6.5，灭菌后冷却至60 ℃以下加入无水乙醇3.5mL。
3.器材：接种环、冰箱、试管、培养皿、无菌玻璃涂棒、移液管、恒温培养箱、无菌操作台、高压灭菌锅等。
三、醋酸菌分离纯化流程
样品——醋酸菌发酵液中富集培养——稀释分离——纯化——保藏平板培养基保藏
四、实验步骤方法
1.富集培养
取家用食醋以10％的量接入醋酸菌液态发酵培养基富集培养24h。
2.醋酸菌的分离纯化
分别取接种过菌种的富集培养液1mL，用无菌水稀释10、100、1000倍。
分别吸取3个稀释度的稀释液0.2mL于醋酸菌分离纯化平板培养基上，立即用无菌涂布棒涂布平板，倒置于30℃恒温培养箱内，培养24h左右。
若三个平板均未出现单菌落，则重复上述操作，直至有平板出现单菌落。
挑取变色透明圈直径大，菌落丰厚，且占生长优势的单菌落进行纯化。
此时大致可判断产生变色透明圈的单菌落即为醋酸菌。
五、实验记录及数据处理
六、实验结果分析及问题讨论。