核糖体展示技术
抗体药物的研究现状和发展趋势
抗体药物的研究现状和发展趋势一、研究现状1．抗体研究发展历程抗体作为药物用于人类疾病的治疗拥有很长历史。
但整个抗体药物的发展却并非一帆风顺，而是在曲折中前进。
第一代抗体药物源于动物多价抗血清，主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动免疫治疗。
虽然具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较强的人体免疫反应限制了这类药物的应用，因而逐渐被抗生素类药物所代替。
第二代抗体药物是利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物。
单克隆抗体由于具有良好的均一性和高度的特异性，因而在实验研究和疾病诊断中得到了广泛应用。
单抗最早被用于疾病治疗是在 1982 年，美国斯坦福医学中心 Levy 等人利用制备的抗独特型单抗治疗 B 细胞淋巴瘤，治疗后患者病情缓解，瘤体消失，这使人们对抗体药物产生了极大的期望。
1986 年，美国 FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗 CD3单抗 OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应。
此时抗体药物的研制和应用达到了顶点。
随着使用单抗进行治疗的病例数的增加，鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显。
同时一些抗肿瘤单抗未显示出理想效果。
人们的热情开始下降。
到 20 世纪 90 年代初，抗内毒素单抗用于治疗脓毒败血症失败使得抗体药物的研究进入低谷。
由于大多数单抗均为鼠源性，在人体内反复应用会引起人抗鼠抗体（HAMA）反应，从而降低疗效，甚至可引起过敏反应。
因此，一方面在给药途径上改进，如使用片段抗体、交联同位素、局部用药等使鼠源性抗体用量减少，也增强了疗效；另一方面，积极发展基因工程抗体和人源抗体。
近年来，随着免疫学和分子生物学技术的发展以及抗体基因结构的阐明， DNA 重组技术开始用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造以消除抗体应用不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备各种形式的重组抗体。
抗体药物的研发进入了第三代，即基因工程抗体时代。
与第二代单抗相比，基因工程抗体具有如下优点：①通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；②基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位；③根据治疗的需要，制备新型抗体；④可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达形式，大量表达抗体分子，大大降低了生产成本。
全人源单克隆抗体体外亲和力成熟的策略
全人源单克隆抗体体外亲和力成熟的策略作者：徐金兵刘煜来源：《医学信息》2014年第20期摘要：单克隆抗体已广泛地应用于临床治疗。
人源化的单克隆抗体是目前已上市的治疗性抗体的主要形式。
不管是来源于杂交瘤细胞还是噬菌体展示库的抗体，其亲和力在治疗应用上可能都需要改善。
抗体体外亲和力成熟是解决这一问题的重要途径。
作者将就全人源单克隆抗体亲和力成熟的策略方面进行综述。
关键词：单克隆抗体；抗体体外亲和力成熟单克隆抗体自问世以来，由于其独有的特征已迅速应用于医学很多领域。
其中人源化的单克隆抗体是目前已上市的治疗性抗体的主要形式。
目前获得全人源单克隆抗体的方法主要是抗体库技术和转基因技术。
但是以上方法获得的抗体治疗效果一般很难达到最佳水平，因此需要在体外进行亲和力成熟以期达到临床应用的要求。
抗体的体外亲和力成熟是基于体内的亲和力成熟突变和选择的原则。
体外亲和力成熟主要包括以下两方面：对低亲和力抗体可变区基因进行突变的引入；有效的筛选方法。
本文综述了基于分子水平的全人源单克隆抗体体外抗体亲和力成熟的研究进展、该领域的研究现状以及今后可能的发展方向。
1突变的引入进行体外亲和力成熟的首要任务就是获得大量突变体。
因此，突变引入策略的选择在体外亲和力成熟中十分关键。
1.1致突变细胞株使用大肠杆菌突变细胞在目的DNA序列上随机引入突变的方法来进行抗体亲和力成熟已经被成功使用过了。
大肠杆菌突变细胞比正常细胞造成的单碱基替换要高105倍，因为该细胞在DNA复制时期缺失校正性外切酶的活性。
但是运用这个方法一般需要反复选择再放大，需要至少4~10轮连续的细菌培养和筛选过程，其周期和工作量非常大。
1.2易错PCR易错PCR(error-prone PCR)经常被用来随机突变产生突变体。
这项技术基于分子生物学建立的标准PCR技术上进行修改来改变和提高聚合酶错误率。
易错PCR的不同在于通过改变反应缓冲液的组成来改变Taq DNA 聚合酶。
mRNA展示技术ppt课件
人们已利用这种新的技术鉴定了许多功能性 多肽，包括 RNA 结合肽、TNF-α 结合因 子等，建立了以 mRNA 体外展示技术筛选 与抗肿瘤药物的重要靶酶———胸苷酸合 成酶mRNA高度亲和多肽的方讨
Structure of mRNA-linker
体积25ul,其中含10xPCR缓冲液2.5 u凝胶载体上，然后加入 400ul
洗涤5~6遍后，加入洗脱液(无酵母 tRNA) 及
mRNA展示技 术
应用：
CAT(Cambridge Antibody Technology) 应用体外展示技术制备单克隆抗体用于疾 病的治疗：
D2E7 ABT-874 CAT-192and GC1008
CAT-5001 (formerly SS1P)
目前应用的组合多肽/蛋白质库技术包括 噬菌体展示技术(phage display) 酵母双杂交 与核糖体展示技术(ribosome display，RD) mRNA体外展示技术( mRNA display)
基本原理：借助一种蛋白质合成 抑制剂嘌呤霉素(puromycin)来 形成mRNA- 蛋白质融合体，从 而实现基因表型 (RNA)与蛋白质 表型(多肽) 的结合. 嘌呤霉素是 一种模拟子的3’端，当 mRNA 翻译完成时，嘌呤霉素进入核糖 体的 A 位点接纳新生肽，抑制蛋 白质翻译，在多肽与嘌呤霉素的 O- 甲基酪氨酸之间形成稳定的 酰胺键，生成肽酰嘌呤霉素复物， 而使mRNA3 ’端和蛋白质的羧基 端通过嘌呤霉素分子共价地联系 在一起。
DNA展示技术
mRNA体外展示又称mRNA- 蛋白质融合体 展示(mRNA-protein fusion display)，是 近年来发展的一种高效多肽选择技术。 它可以由大容量的多肽库中(1013 ~1015 个分子)获得具有特定生物学功能的多肽分子. 与噬菌体和核糖体展示技术相比，mRNA 体 外展示技术具有多肽库容量大、筛选方法简 便等优点，特别适用于获得小分子功能性多 肽
比较三代抗体在制备和应用方面的优缺点
比较三代抗体在制备和应用方面的优缺点摘要：抗体技术的发展主要经历了三个时期，相应产生了三代抗体：多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体。
多克隆抗体技术即免疫血清制备技术较简便，但免疫血清特异性较低。
自从第一个单克隆抗体产生以来，单抗已广泛地应用于疾病的诊治上。
为了克服传统的鼠源性单抗存在的弊端，随着分子生物学和细胞生物学的快速发展，基因工程抗体技术取得了比较大的进展，包括对鼠源性单抗的改造、人源性单抗的研制及对抗体分子结构和功能的改造，尤其是以噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术和转基因小鼠技术为代表的人源性单抗制备技术的研制最为瞩目。
本文就三代抗体在制备及应用方面的优缺点作了简单的比较。
关键词：多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体抗体(antibody)是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。
抗体技术的发展主要分为三个时期，1890年Emil A. V. Behring等发现白喉抗毒素，并用于人工被动免疫，第一代抗体——多克隆抗体(Polyclonal antibody, PcAb)，继而产生。
第二代抗体于1975年，Köhler和Milstein创建杂交瘤技术制备出针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体(Moclonal antibody, McAb)，单克隆抗体是均质的异源抗体。
20世纪80年代采用基因工程的手段研制抗体及其与功能的关系，并对抗体基因进行改造和重组等，而制备出的抗体为基因工程抗体（Genetic engineering antibody, GEAb），即第三代抗体。
[1]一、多克隆抗体(Polyclonal antibody, PcAb)1、免疫血清的制备（1）抗原的制备制备多克隆抗体对抗原纯度要求十分严格。
抗原越纯，获得抗体的特异性越高，要求至少达到电泳纯或色谱纯。
（2）佐剂（Adjuvant）的应用对可溶性抗原而言，为了增强其免疫原性或改变免疫反应的类型、节约抗原等目的，常采用加佐剂的方法以刺激机体产生较强的免疫应答。
单克隆抗体
单克隆抗体生物技术制药之单克隆抗体【摘要】杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体被广泛用于人类疾病的诊断和研究，建立了治疗性抗体的第一个里程碑。
随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明，应用ＤＮＡ重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造，先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体，它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足，使抗体制备技术进入了一个全新的时代。
【关键词】单克隆抗体、分类、制备、纯化、应用【前言】1975年Koehler和Milstein创立了体外杂交瘤技术(Koehler等,1975)，得到了鼠源性单克隆抗体，开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代。
与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有无可比拟的优越性，它具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等优点。
鼠源性单抗应用于人类有较强的免疫原性，但主要缺陷是诱发人抗鼠抗体（human anti－mouse antibody，HAMA）反应，其次是鼠单抗不能有效地激活人体的生物效应功能，因此限制了其临床应用(Dhar等，2004)。
减少或避免HAMA反应并提高疗效的主要途径是鼠源性单抗人源化，随着对各类抗体结构和氨基酸序列及其变异的种属和功能之间关系的深入了解，而能够利用抗体工程技术对抗体结构进行改造。
抗体的应用经历了非人源抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最终到制备全人源单抗的转基因小鼠和噬菌体展示文库等不同的阶段。
1、单克隆抗体定义抗体主要是由B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。
当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞，被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。
如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂制增殖而形成细胞群，即单克隆。
皖西学院生物工程专业大三蛋白质与酶工程复习题及答案
皖西学院生物工程专业大三蛋白质与酶工程复习题及答案蛋白质与酶工程课程复习题一．名词解释：1.蛋白质工程概念:通过基因工程技术或化学修饰技术改造现有蛋白或组建新型蛋白的现代生物技术、2.蛋白质的一级结构；蛋白质多链中氨基酸残基的排列顺序3.蛋白质的二级结构：指肽链主链不同区段通过自身的相互作用，形成氢键，沿某一主轴盘旋折叠而形成的局部空间结构，是蛋白质结构的构象单元5.β－折叠:是蛋白质中的常见的二级结构，是由伸展的多肽链组成的。
6.α－螺旋:是蛋白质分子的一种基本结构7.超二级结构:在蛋白质分子中，特别是球状蛋白质中，由若干相邻的二级结构单元（即α—螺旋、β—折叠片和β—转角等）彼此相互作用组合在一起，，形成有规则、在空间上能辨认的二级结构组合体，充当三级结构的构件单元，称超二级结构。
8.三级结构是指球状蛋白质的多肽键在二级结构的基础上，通过侧链基团的相互作用进一步卷曲折叠，借助次级键维系使β－折叠α－螺旋和无规则卷曲等二级结构相互配置而形成特定的构象。
9四级结构指由相同或不同的称作亚基（ubunit）的亚单位按照一定排布方式缔合而成的蛋白质结构，维持四级结构稳定的作用力是疏水键、离子键、氢键、范得华力。
10蛋白质折叠:蛋白质可凭借相互作用在细胞环境（特定的酸碱度、温度等）下自己组装自己11蛋白质变性:是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，这种现象称为蛋白质变性。
12蛋白质复性:、13回拆:所连接的肽链发生180°的反相弯曲14第二遗传密码：氨基酸顺序与蛋白质三维结构之间存在的对应关系15分子伴侣:是一类相互之间有关系的蛋白，它们的功能是帮助其他含多肽结构的物质在体内进行非共价健的组装和卸装，但不是这些结构在发挥其正常生物学功能的永久组成成分、蛋白质的化学修饰:凡通过活性基团的引入或除去，而使蛋白质一级结构发生改变的过程、19模拟酶:就是利用有机化学的方法合成一些比酶简单的非蛋白质分子，可以模拟酶对底物的络合和催化过程，既可达到酶催化的高效性，又可以克服酶的不稳定性、20生物传感器—将生物体的成份（酶、抗原、抗体、DNA、激素）或生物体本身（细胞、细胞器、组织）固定化在一器件上作为敏感元件的传感器。
分子生物学试题试卷3
一、名词解释1.SD序列（Shine-Dalgarno sequence）：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。
SD序列在细菌mRNA起始密码子AUG上游7-12个核苷酸处，有一段富含嘌呤的碱基序列，能与细菌16SrRNA3’端识别，帮助从起始AUG处开始翻译。
2.E位点：是脱氨酰tRNA(deaminoacyl-tRNA)离开A位点到完全从核糖体释放出来的一个中间停靠点，只是作暂时的停留。
当E位点被占据之后,A位点同氨酰tRNA的亲和力降低,防止了氨酰tRNA的结合,直到核糖体准备就绪,E位点腾空,才会接受下一个氨酰tRNA3.P位点：即肽酰tRNA位点(peptidyl-tRNA site), 又叫供位(donor site), 或肽酰基位点,主要位于大亚基, 是肽基tRNA移交肽链后肽酰tRNA所占据的位置, 即与延伸中的肽酰tRNA结合位点。
4.A位点：即氨酰基位点，是与新掺入的氨酰tRNA(aminoacyl-tRNA )结合的位点，又叫受位(entry site)，主要位于大亚基，是接受氨酰tRNA的部位5.Kozak序列：是位于真核生物mRNA 5’端帽子结构后面的一段核酸序列，通常是ACCACCAUGG，它可以与翻译起始因子结合而介导含有5’帽子结构的mRNA翻译起始。
对应于原核生物的SD序列。
6.内部核糖体进入位点：缩写IRES，是一段核酸序列，它的存在能够使蛋白质翻译起始不依赖于5‘帽结构，从而使直接从信使RNA（mRNA）中间起始翻译成为可能。
通常来讲，真核生物翻译只能从mRNA的5‘端开始，因为翻译起始必须依赖于5’端的帽子结构。
一般来讲，内部核糖体进入位点通常位于RNA病毒基因组的5’非翻译区（UTR），这样病毒蛋白的翻译就可以不依赖于5‘帽子结构。
7.上游可读框：mRNA前导序列中的可读框，可作为顺式调节元件将mRNA的翻译速率与氨基酸水平相偶联8.分子伴侣：是细胞中一大类蛋白质，是由不相关的蛋白质组成的一个家系，它们介导其它蛋白质的正确装配，但自己不成为最后功能结构中的组分9.核定位序列(Nuclear localization sequence)：蛋白质的一个结构域，通常为一短的氨基酸序列，它能与入核载体相互作用，使蛋白能被运进细胞核。
09135蛋白质工程
《蛋白质工程》课程（09135）教学大纲一、课程基本信息课程中文名称：蛋白质工程课程代码：09135学分与学时：2学分38学时课程性质：专业选修授课对象：生物工程专业二、本课程教学目标与任务蛋白质工程是随着生物化学、分子生物学、结构生物学、晶体学和计算机技术等的迅猛发展而诞生的，也与基因组学、蛋白质组学、生物信息学等的发展密切相关，是融合了蛋白质晶体学、蛋白质动力学、蛋白质化学和计算机辅助设计等多学科而发展起来的新兴研究领域。
由于蛋白质工程学科的边缘性，所以本课程在介绍蛋白质基本内容的同时，兼顾学科发展动向，旨在使学生了解现代蛋白质工程理论的新进展并为相关学科提供知识和技术。
通过本课程的学习，使学生掌握蛋白质工程的基本理论、基础知识、主要研究方法和技术以及生物信息学和现代生物技术在蛋白质工程上的应用及典型研究实例，熟悉从事蛋白质工程的重要方法和途径。
努力培养学生具有科学思维方式、启发学生科学思维能力和勇于探索，善于思考、分析问题的能力，激发学生的学习热情，为未来的学习和工作奠定坚实的理论和实践基础。
三、学时安排四、课程教学内容与基本要求第一章绪论教学目的：使学生了解蛋白质工程的基本概况。
基本要求：理解掌握蛋白质工程研究内容和蛋白质工程设计的原理。
重点与难点：蛋白质工程的原理，蛋白质工程的程序和操作方法。
教学方法：课堂讲授为主。
主要内容：一、蛋白质工程的物质基础二、蛋白质工程的原理三、蛋白质工程的程序和操作方法四、蛋白质工程的产生与发展五、蛋白质工程的应用领域第二章蛋白质结构基础教学目的：使学生理解蛋白质的结构与功能及二者之间的关系，理解蛋白质多肽链的折叠方式。
基本要求：要求掌握蛋白质各个结构层次的组成、基本特点和维持结构的作用力、结构与功能的关系。
蛋白质的变性和复性、蛋白质的折叠以及分子伴侣和折叠酶在蛋白质折叠中的作用。
重点与难点：重点：蛋白质的结构与功能，蛋白质结构与功能的关系。
难点：多肽链的折叠。
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2具体方法
1）基因片段的改造 为了使基因片段能有效转录和翻译,5′端应接 上T7启动子序列和SD序列，去掉3′端的终止密 码子,从而成功地使核糖体停留在mRNA3′末端, 将蛋白质和mRNA连接在一起。在对基因片段改 造时,常进行多次延伸PCR： ①分别将需要的基因片段和间隔序列各自扩出来
② 用引物 4 和引物 5 做连接 PCR 将目的基因 和间隔子连接起来，引物5含有SD序列, 引物4含 有3′端茎环结构序列。 ③ PCR产物再进行延伸PCR,引物6含有T7启动 子序列和5′端茎环结构序列,下游产物同前。最 后得到的PCR产物,5′端接上T7启动子和茎环结 构以及SD序列,3′端则融合了间隔序列并含有 3′端的茎环结构(见图2)
4）体外分子定A shuffering)等方法引 入突变和重组技术,增加分子多样性,从而提高获 得高亲和力、良好稳定性或增加酶活性靶标分子 的机率.Plückthumx小组利用核糖体展示技术筛 选到1.1 nmol高亲和力的ScFv,之后通过引入 DNA重排技术,又将其亲和力提高了30倍。
tRNA离开，再去转运新的氨基酸
U U A G A U A U C
以mRNA为模板形成了有一定氨基酸顺序的蛋白质
1、核糖体展示技术原理
核糖体展示技术是一种筛选蛋白质强有力的工具, 通过将基因型和蛋白表型联系在一起理：对体外进行转录与翻译,编码蛋白的DNA进 行特殊的加工与修饰,如:去掉3′末端终止密码子或 者利用了嘌呤霉素将mRNA与多肽以共价键的形式 联系起来,使得核糖体-mRNA-蛋白质三元复合物稳
？
U A C
反密码子
A U G G A U A U C
mRNA
核糖体
亮氨酸
天门冬 酰氨
A A U C U A U U A G A U A U C
tRNA将氨基酸转运到mRNA上的相应位置
缩合
亮氨酸 天门冬 酰氨
A A U C U A U U A G A U A U C
两个氨基酸分子缩合
亮氨酸
天门冬 酰氨
对于含二硫桥的ScFv抗体和其他蛋白质,转录和 翻译应分别进行,因为含有二硫桥的蛋白质要在 氧化条件下才能正确折叠,但转录时,T7 RNA聚合 酶要求具还原性的β-巯基乙醇维持其稳定性。 如果目标蛋白在还原性条件下能正确折叠,则体 外转录/翻译偶联体系效果可能更好.
若分别进行,则需要控制RNase的影响.VRC— 过渡态类似物—作为RNase抑制剂,能有效抑制 核酸酶,提高E.coli核糖体展示效率。翻译结束后 立即冷却反应混合物,所有筛选步骤在冰上进行 降低RNase的影响。另外,3′端和5′端的茎环 结构也可以使mRNA避免核酸外切酶RNaseⅡ和 核酸内切酶RNase E的影响。
特别是如何防止mRNA的降解和形成稳固的蛋白质核糖体-mRNA三聚体无疑是该技术的关键问题；如 何提高大分子蛋白质在核糖体上的展示也是未来研 究需要关注的问题。 c 前景：随着对核糖体展示技术的进一步研究,以 上问题将逐步得到解决,核糖体展示技术作为一种新 兴的克隆展示技术,必将在蛋白质相互作用研究、新 药开发以及蛋白组学等方面显示出更为广泛的应用 空间.
异亮氨酸
C U A U A G U U A G A U A U C
核糖体随着 mRNA滑动. 另一个 tRNA 上的碱基与 mRNA上的 密码子配对.
亮氨酸
天门冬 酰氨
异亮氨酸
U A G C U A U U A G A U A U C
一个个氨基酸分子缩合成链状结构
亮氨酸
天门冬 酰氨
异亮氨酸
U A G U U A G A U A U C
①亲和筛选 分为固相筛选和液相筛选，主要有ELISA和 磁珠法。Hanes等认为,ELISA方法中，抗原包被 在塑料表面上，而塑料表面的疏水作用有可能会 影响吸附蛋白的空间构象，从而导致筛选出的抗 体分子不能识别抗原的天然表位;磁珠法是在抗 原上连接捕获标签，如生物素，然后在形成抗 原-抗体复合物后,采用磁珠-链霉亲和素捕获该标 签,进行亲和筛选。
2）体外转录和翻译
体外表达可以利用来自原核的E.coliS30无细胞 蛋白质合成系统,或真核的兔网织红细胞裂解液 和麦胚提取物的蛋白质合成系统,至于何种系统 更适合,目前尚有争议.体外转录与体外翻译可以 偶联进行,也可以分别进行.目前,已有以DNA 为 模板的体外蛋白翻译系统和以RNA为模板的体外 转录与翻译偶联的商用系统问世。
②mRNA的分离
筛选完后，加入含20 mmol/LEDTA的冰冷缓 冲液洗脱mRNA。洗脱下来的mRNA用DNaseⅠ 处理去除残留的DNA模板，进行RT-PCR反应重 新引入T7启动子，SD序列等核糖体展示必需元 件用于下一轮展示或直接进行Northern杂交，评 价筛选效率。将最后一轮筛选到的靶标基因与质 粒连接,转化到大肠杆菌中，可以得到单个靶标 克隆。进一步采用体外或体内(分泌型或包涵体 型)表达方式表达单链抗体分子,进行活性鉴定。
3）亲和筛选
体外翻译反应结束后,将翻译混合物稀释4倍终 止反应。反应试剂中始终保持5 mmol/L Mg2+ 浓度，稳定mRNA-核糖体-蛋白质三元复合体。 可以直接用于筛选实验，也可以于4℃保存， 核糖体复合物在4℃至少可以稳定10 d，但产 量会逐渐减少。体外筛选时加入1%~2%脱脂 奶粉和0.2%肝素可以降低抗原-抗体的非特异 性反应,肝素还能抑制核酸酶。
定。然后利用ELISA微孔或磁珠筛选出含有目标蛋 白的核糖体三聚体，对筛选得到的复合物进行分解, 释放出的mRNA进行逆转录酶链聚合反应(RT- PCR ),PCR产物进入下一轮循环,经过多次循环,最终使目 标蛋白和其编码的基因序列得到富集和分离(见 图1)。
.
体外核糖体展示肽库构建与筛选原理示意图
3 核糖体展示技术的优势、问题、展 望
a 优势: 核糖体展示技术完全在体外进行,与噬菌
体或酵母菌展示技术相比具有建库简单、库容量 大、分子多样性强、筛选方法简便、无需选择压力, 还可通过引入突变和重组技术来提高的问题:如何进一步地提高该系统的稳定性；
核糖体展示技术
基因控制生物性状
指导 合成
体现者
蛋白质
基因指导蛋白质合成的过程，叫基因的表达。
问题：基因是怎样指导蛋白质的合成呢？
mRNA在细胞核中合成
DNA
细胞核
A A T C A A T A G U U A G U U A U C
mRNA
核孔 细胞质
U U A G U U Aห้องสมุดไป่ตู้U C
mRNA
甲硫氨酸