LCMS谱图的判断及分析方法的选择
LCMS谱图的判断及分析方法的确定
一、LCMS谱图的相关标准及MS棒图判断：
a)LCMS合格谱图的标准：
1、UV谱图主峰的保留时间应大于2T
(进样峰时间)，并小于全部运行时间的4/5；
2、UV谱图的吸收波长以客户指定波长为准（一般为220nm），弱紫外样品（紫外吸
收在220nm是波谷，MS信号相对较强）可用ELSD谱图交货或以客户要求为准；
3、UV谱图主峰吸收一般应高于100mau。
对信噪比良好的样品，可以适当降低峰
高要求到高于50mau， 当所有可见的UV峰都积分后仍合格的，可认为合格；
4、UV谱图中，主峰理论塔板数在10000以上（即峰宽小于0.5分钟），峰对称因
子应在0.9-1.2（即对称性较好）。
5、MS谱图应保证准分子离子峰可见，其它峰是二聚峰，以及合理的碎片或加合峰。
6、MS范围：通常在100-1000之间，对分子量很小或很大的样品，应调整MS范围，
保证最大值超过2M+23， 最小值小于M/2。
7、紫外积分超过2%的杂质，如果杂质的MS和主峰一致，需检查结构是否有异构
体。
如客户确认有异构体并同意可以合并纯度交货，方能判断合格，否则应重
新分离或用其它手段如NMR确定结构。
8、紫外无积分或积分结果小于1%的色谱峰，在TIC中峰高不得超过主峰的1/2。
（特殊情况除外：难电离样品；Agilent LCMS TIC中杂质绝对吸收小于50000）
b)MS棒图的判断（正离子检测）：
1、MS谱图中分子离子峰的值应为：EM+1（Exact Mass）(即[M+H]+)
2、常见的合理的加合离子有：[M+Na]+、[M+K]+、[2M+H]+、[2M+Na]+、[M/2+H]+
3、加有缓冲溶液或溶剂的体系还可引进[M+X]+（X=溶剂或缓冲溶液中的阳离子）
如：用碱性体系方法分析时常见的加合离子有：[M+NH
4
]+（我们的碱性体系用的铵盐缓冲溶液）（用岛津仪器分析时常可见到的加合离子还有：[M+Na+X]+）
4、若有小于分子离子峰的碎片离子，要根据化合物结构来判断是否是其合理的碎
片，碎片M
1所出碎片峰的MS值应为M
1
或M
1
+2（出M
1
还是M
1
+2由断裂机理决定）
5、同位素效应：一般带Cl或Br的样品，棒图中同位素效应比较明显（见附图）；
6、若棒图中有不能解释的碎片或加合离子、且丰度较高，则需要进行NMR验证
c)MS棒图的判断（负离子检测）：
1、MS谱图中分子离子峰的值应为：EM-1（Exact Mass）(即[M-H]-)
2、加有缓冲溶液或溶剂的体系还可引进[M+X]-（X=溶剂或缓冲溶液中的阴离子）
3、其他常见合理加合离子及碎片离子同理正离子检测
二、LCMS分析方法的分类及其适用范围（反相色谱）：
a)从流动相体系划分，可分为：酸性方法和碱性方法
（方法确定的原理：先根据化合物的结构算出其ClogP的值来大致确定其适用的分
析方法，若计算出的方法不合适，再根据其谱图的具体情况进行修改。
）
一般来说：酸性方法适用于大部分化合物；常规样品通常用10-80AB，极性较小的样品可以考虑用30-90AB或50-100AB，极性较大的样品可以选择0-30AB或0-60AB 碱性方法适用的情况为：
1、极性很大，用酸性方法（0-30AB）时出峰仍太靠前；
2、用酸性方法时出峰形状很宽，对称性不好；
3、用酸性方法时目标物在进样峰的位置即被冲出，形成如下图所示的双峰；
4、有些物质在酸性体系易成盐、不稳定，也会形成如上图所示的情况
5、负离子检测一般在碱性体系中进行
b)从质谱（MSD）的检测离子的极性划分，可分为：正离子方法和负离子方法
一般来说：正离子方法适用于大部分化合物；而羧酸、醛以及羧醛等结构的样品一
般在正离子方法中电离不好，则需换用负离子方法来进行分析。
c)从大气压电离质谱（API-MS）电离模式划分，可分为：（气动辅助）电喷雾（API-ES）、
大气压化学电离（APCI）、大气压光致电离（APPI）
一般来说：ESI源适合于大部分有极性的、含杂原子的化合物；如果样品在ESI源
下电离很弱（紫外吸收相对较强），且分子量相对较小、具有一定的挥发性、是热
稳定化合物，可以选择更换APCI源及APPI源来进行分析。
附图：。
LCMS-使用与优化
LC条件的选择
溶解样品的溶剂：用流动相或甲醇、乙腈溶比用含 水多的溶剂LC峰形好。如果常用的流动相不能很好 溶解样品，可用少量特殊溶剂先将样品溶解后再用 流动相稀释。
LC流量在色谱柱和MS允许情况下适当高可以压缩峰 宽，使峰强度提高。
当只有大流量色谱柱，只能大流量时可采用三通分 流，以适应MS的流量要求。
直接用FIA优化其它参数及源位置，或接一个三通,样品仍由注射泵 进入离子源,同时LC保持需要的流量，优化干燥气压力和温度，优 化后通常不用再修改
质量范围不要太宽，涵盖待测离子再增加20-30amu即可
扫描时间适当长些噪声低，当同时检测数十对离子时，MRM采样时 间可以数十毫秒.同时检测数对离子时，可100-200毫秒
LC条件的选择
选细色谱柱，如内径2mm， 进样量可以小，提高相 对浓度，离子化效率，灵敏度。
换长些的色谱柱，对定性分离效果好，但分析时间 延长，如峰形仍不理想，可考虑另选其他型号色谱 柱。
柱后补偿：当不得不用高浓度TFA时，常用异丙醇, 解决信号抑制问题。通过柱后衍生化，增加离子化。
调机准备
无信号诊断步骤
管路有否堵塞
一节一节拆开测试，看通否，喷雾是否均匀，泵压 是否过高，通常不接色谱柱，200ul/min流速，压力 应不超过数十PSI。
喷雾针堵塞
用Syringe推：直线喷出——没有堵塞 若堵，取下用50水/50甲醇超声清洗 超声仍无效,更换喷雾针
无信号诊断步骤
若为APCI,检查流速是否过低（如没接LC，只用注射 泵），放电尖端对正方向没有，放电电流是否加上? Nhomakorabea清洗
清洗进样针，阀等。
用过含酸的流动相后，色谱柱，离子源都要用甲醇/ 水冲，延长仪器寿命。
羧甲基纤维素质谱lcms
羧甲基纤维素（Carboxymethyl Cellulose，简称CMC）是一种重要的纤维素衍生物，其钠盐（羧甲基纤维素钠）被广泛用作食品添加剂、乳化剂、增稠剂等。
质谱（LCMS）是一种分析化学技术，用于分析化合物。
在这里，LCMS被用于分析羧甲基纤维素的结构和性质。
LCMS分析羧甲基纤维素的过程主要包括以下步骤：
1. 样品制备：将羧甲基纤维素样品溶解在适当的溶剂中，通常为水或有机溶剂。
2. 色谱分离：通过液相色谱（LC）对羧甲基纤维素分子进行分离。
色谱柱通常选择合适的凝胶柱，如羟丙基-Sephadex G-75。
3. 质谱分析：通过串联质谱仪（MS）对经过色谱分离后的化合物进行质谱分析。
质谱分析可以帮助确定羧甲基纤维素的分子量、结构以及取代度等性质。
4. 数据处理：将质谱分析得到的数据进行处理，得到羧甲基纤维素的详细结构信息。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)
液相色谱-质谱联用(LC-MS)LCMS分别的含义是：L液相C色谱M质谱S分离（友情赠送：G是气相^_^）LC-MS/MS就是液相色谱质谱/质谱联用MS/MS是质谱-质谱联用（通常我们称为串联质谱，二维质谱法，序贯质谱等）LC-MS/MS与LC-MS比较，M（质谱）分离的步骤是串联的，不是单一的。
色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。
色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。
此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。
然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。
色谱法也由此而得名。
现在的色谱法早已不局限于色素的分离，其方法也早已得到了极大的发展，但其分离的原理仍然是一样的。
我们仍然叫它色谱分析。
一、色谱分离基本原理：由以上方法可知，在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。
色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。
使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。
当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。
与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
二、色谱分类方法：色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。
从两相的状态分类：相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。
液质原理简析
液质联用（LCMS）原理简析1.质谱法质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。
质谱的样品一般要汽化，再离子化。
不纯的样品要用色谱和质谱联用仪，是通过色谱进样。
即色谱分离，质谱是色谱的检测器。
离子在电场和磁场的综合作用下，按照其质量数m和电荷数Z的比值(m/z，质荷比)大小依次排列成谱被记录下来，以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。
2.质谱仪质谱仪由以下几部分组成数据及供电系统┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓进样系统离子源质量分析器检测接收器┗━━━━━╋━━━━━━┛真空系统质谱仪一般由进样系统、离子源、分析器、检测器组成。
还包括真空系统、电气系统和数据处理系统等辅助设备。
（1）离子源：使样品产生离子的装置叫离子源。
液质的离子源有ESI，APCI，APPI，统称大气压电离(API)源，实验室常用液质的离子源为ESI源。
电喷雾（ESI）的特点通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子。
电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）得到化合物的部分结构。
（2）质量分析器： 由它将离子源产生的离子按m/z分开。
离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。
质量分析器有：磁场和电场、四极杆、离子阱、飞行时间质谱、傅立叶变换离子回旋共振等。
实验室目前液质的质量分析器类型：三重四极杆（QqQ）：离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器MS1 MS2Q1 q2 Q3QqQ仪器可以方便的改变离子的动能，因此扫描速度快，体积小，常作为台式进入常规实验室，缺点是质量范围及分辨率有限，不能进行高分辨测定，只能做到单位质量分辨。
LC-MS数据分析方法
质谱数据结果分析方法：
MS数据一般都会有如下几个特征参数：PSM、Peptide、Unique Peptides、Protein，PSM是拿数据库里的多肽和质谱图进行比对，并输出最高分数值的多肽作为一个PSM，PSM值越高，则表明可信度相对越高；Peptide和Unique Peptides则代表了肽段的特异性，一般Unique Peptides和Peptides的数值越接近，则代表肽段的特异性相对越好；而Protein代表了这些Peptides综合分析所归属的蛋白，数值越小则表明Peptides所代表的的蛋白特异性相对越好。
为了得到相对确信可靠的分子进行后续的验证实验，就要综合考虑以上几个参数，同时还要照顾分子本身的定位、功能等。
LCMS知识介绍
1、如何看质谱图(1)确定分子离子，即确定分子量：氮规那么：含偶数个氮原子的分子，其质量数是偶数，含奇数个氮原子的分子，其质量数是奇数。
与高质量碎片离子有合理的质量差，凡质量差在3~8 和 10~13， 21~25 之间均不能能，那么说明是碎片或杂质。
(2) 确定元素组成，即确定分子式或碎片化学式：高分辨质谱能够由分子量直接计算出化合物的元素组成从而推出分子式，低分辨质谱利用元素的同位素丰度。
M-1，M-15，M-18，M-20，M-31......意味着失H，CH3，H2O，HF，OCH3......(3)峰强度与结构的关系，丰度大反响离子结构牢固：在元素周期表中自上而下，从右至左，杂原子外层未成键的电子越易被电离，容纳正电荷能力越强，含支链的地方易断。
2、离子源EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离—硬电离。
CI(Chemical Ionization):化学电离—核心是质子转移。
FD(Field Desorption):场解吸—目前根本被FAB取代。
FAB(Fast Atom Bombardment):快原子轰击—也许铯离子(LSIMS, 液体二次离子质谱 ) 。
ESI(Electrospray Ionization):电喷雾电离是最软的电离方式，采用离子蒸发，平时小分子获得 [M+H]+]+,[M+Na]+或 [M-H]- 单电荷离子；化合物无需拥有挥发性，离子在溶液中已生成；样品流速／ min；适合极性分子的解析，能解析小分子及大分子( 如蛋白质分子多肽等 ) ，生物大分子产生多电荷离子，平时只产生分子离子峰，因此可直接测定混杂物，并可测定热不牢固的极性化合物；经过调治离子源电压控制离子的碎裂〔源内CID〕测定化合物结构。
APCI(Atmospheric Pressure Chemical Ionization):大气压化学电离也是软电离技术，高压放电发生了质子转移而生成[M＋ H]+或 [M-H]- 离子；化合物要拥有挥发性且热牢固，离子在气态条件中生成；样品流速／ min；只产生单电荷峰，适合测定质量数小于2000Da的弱极性的小分子化合物；适应高流量的梯度洗脱/ 上下水溶液变化的流动相；经过调治离子源电压控制离子的碎裂。
lcms检定规程
lcms检定规程LC-MS（液相色谱-质谱联用）的检定规程主要包括以下步骤：1. 环境条件：仪器室内不得有明显的机械振动、电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性气体或试剂。
温度应在15°C〜30°C之间，相对湿度应不大于80%。
电源电压应为(220 + 22)V，频率应为(50±)Hz。
2. 标准物质和校准设备：标准物质应使用国家有证标准物质，校准设备需经计量检定合格。
常用的标准物质包括利血平溶液，其相对扩展不确定度优于5%（k=2）。
此外，还需要移液器或移液管（量程范围100μL或200μL，B级及以上）和容量瓶（10mL或25mL，B级及以上）。
3. 校准项目和校准方法：外观检查：仪器铭牌上应标示仪器的名称、型号、制造厂名、产品序列号、出厂日期等内容。
分辨力：将扫描范围设为m/z=606〜612，直接注入或经色谱柱注入离子源的方式，观察质谱图并记录m/z609质谱峰，计算其50%峰高处的峰宽，得到W1/2，作为分辨力的结果。
信噪比：设定液相色谱条件并优化质谱条件，将检测离子的m/z设为特征离子的m/z，经色谱柱注入相应量的利血平。
观察色谱图并记录其色谱峰峰高作为HS。
同时记录信号峰后1min-3min时间内的基线输出信号的最大值与最小值之差，作为Hn。
根据公式（1）计算信噪比S/N，连续测量6次，以6次测量S/N的平均值作为信噪比的结果。
质量准确性：根据LC-MS质量数应用范围，选用相应的标准物质或试剂，将扫描范围设为特征离子理论值±5的范围。
直接注入相应量的标准物质或试剂。
观察质谱图并记录特征离子的实测质量数（有效数字取小数点后两位）。
根据公式（2）计算ΔM，以ΔM的最大值作为质量准确性的结果。
峰面积重复性与保留时间重复性：将检测离子的m/z设为特征离子的m/z，经色谱柱注入相应量的利血平。
观察色谱图并记录其色谱峰的峰面积和保留时间。
连续测量6次。
lcms质谱仪原理
lcms质谱仪原理
LC-MS质谱仪是一种联合液相色谱（LC）和质谱（MS）技术的仪器，主要用于分析和鉴定复杂样品中的化合物。
LC-MS
质谱仪的基本原理如下：
1. 液相色谱（LC）部分：在LC部分，样品溶液通过进样器
被注入进一个色谱柱中。
在色谱柱内，样品中的化合物会与柱填料上的固定相互作用，并在流动相的作用下，根据其化学性质的不同以不同的速率进行分离。
2. 质谱（MS）部分：在MS部分，离子化源将样品中的化合
物转化为荷电的离子。
这通常通过电离技术（如电喷雾（ESI）或化学电离（APCI））实现。
3. 离子聚焦：离子化后，离子被引入质谱仪中的离子门。
离子门的作用是选择性地传输特定质量/荷比（m/z）的离子。
这样，仪器可以选择性地传递特定的离子种类，以便进一步分析。
4. 分析和检测：离子在进入质谱部分之前可能需要进行解离和/或聚焦。
在质谱仪的分析部分，离子会遭受一系列的分析步骤，如质谱分析器中的离子解离，以及质谱检测器的荧光检测。
这些步骤将离子按照其质量和荷电比分开并检测。
5. 数据分析：最后，仪器会生成一个离子流谱图，其中离子的质量和相对丰度用图形显示。
这个谱图可以用于鉴定和分析样品中的化合物。
这是LC-MS质谱仪的基本原理。
通过结合液相色谱和质谱技术，LC-MS质谱仪可以对复杂样品进行高效、高灵敏度、高选择性的分析。
液质联用(LCMS)原理简析
液质联用（LCMS）原理简析1.质谱法质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。
质谱的样品一般要汽化，再离子化。
不纯的样品要用色谱和质谱联用仪，是通过色谱进样。
即色谱分离，质谱是色谱的检测器。
离子在电场和磁场的综合作用下，按照其质量数m和电荷数Z的比值(m/z，质荷比)大小依次排列成谱被记录下来，以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。
2.质谱仪质谱仪由以下几部分组成数据及供电系统┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓进样系统离子源质量分析器检测接收器┗━━━━━╋━━━━━━┛真空系统质谱仪一般由进样系统、离子源、分析器、检测器组成。
还包括真空系统、电气系统和数据处理系统等辅助设备。
（1）离子源：使样品产生离子的装置叫离子源。
液质的离子源有ESI，APCI，APPI，统称大气压电离(API)源，实验室常用液质的离子源为ESI源。
电喷雾（ESI）的特点通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子。
电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）得到化合物的部分结构。
（2）质量分析器： 由它将离子源产生的离子按m/z分开。
离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。
质量分析器有：磁场和电场、四极杆、离子阱、飞行时间质谱、傅立叶变换离子回旋共振等。
实验室目前液质的质量分析器类型：三重四极杆（QqQ）：离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器MS1 MS2Q1 q2 Q3QqQ仪器可以方便的改变离子的动能，因此扫描速度快，体积小，常作为台式进入常规实验室，缺点是质量范围及分辨率有限，不能进行高分辨测定，只能做到单位质量分辨。
液相色谱-质谱联用(lcms)的原理及应用
【转帖】液相色谱-质谱联用(lc/ms)的原理及应用液相色谱-质谱联用(lc/ms)的原理及应用液相色谱—质谱联用的原理及应用简介色谱质谱的在线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。
而且也简化了样品的前处理过程，使样品分析更简便。
色谱质谱联用包括气相色谱质谱联用(GC-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS)，液质联用与气质联用互为补充，分析不同性质的化合物。
液质联用与气质联用的区别:气质联用仪(GC-MS)是最早商品化的联用仪器，适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物；用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比。
液质联用(LC-MS)主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定；没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。
现代有机和生物质谱进展在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。
在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以下的小分子化合物。
20世纪70年代，出现了场解吸（FD）离子化技术，能够测定分子量高达1500~2000Da 的非挥发性化合物，但重复性差。
20世纪80年代初发明了快原子质谱法（FAB-MS），能够分析分子量达数千的多肽。
随着生命科学的发展，欲分析的样品更加复杂，分子量范围也更大，因此，电喷雾离子化质谱法（ESI-MS）和基质辅助激光解吸离子化质谱法（MALDI-MS）应运而生。
目前的有机质谱和生物质谱仪，除了GC-MS的EI和CI源，离子化方式有大气压电离（API）（包括大气压电喷雾电离ESI、大气压化学电离APCI、大气压光电离APPI）与基质辅助激光解吸电离。
前者常采用四极杆或离子阱质量分析器，统称API-MS。
后者常用飞行时间作为质量分析器，所构成的仪器称为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）。