(医疗药品)天然药物化学实验指导
天然药物化学实验指导
中药化学实验指导药物化学教研室中药化学实验指导一.说明中药化学是一门实验学科,实验教学占重要地位,通过实验要达到以下目的。
1.能检验学生在课堂上所学的理论知识。
使学生对理论知识的理解更加深入,掌握的更加牢固。
2.训练学生的基本操作技能,培养学生分析问题和解决问题的能力,使学生获得从事中药化学科研工作和实际工作的基本训练。
3.使学生养成严谨的科学态度和良好的科学作风。
实验中,重点是加强对学生基本技能的训练。
二.实验须知1.遵守实验室制度,维护实验室安全,不违章操作,严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即采取措施并报告指导老师。
2.实验前做好预习,明确实验内容,了解实验的基本原理和方法。
安排的实验计划,争取准时结束,实验过程中应养成及时记录的习惯,凡是观察到的现象和结果及有关数据,应随时如实地记录。
实验完毕,要认真总结,写好实验报告,实验所得的提纯物要包好,贴上标签,交给老师。
3.实验室内应保持安静,不得大声喧嚷,不许抽烟。
进入实验室必须穿工作服,实验过程中,不许随便离开。
4.实验台前应保持整洁,与实验无关的物品不得放在台前。
实验中废弃的固体物,要丢入废物桶内。
5.爱护仪器,节约药品,仪器损坏后应填写报损单,注明原因,由指导教师按规定处理。
6.实验过程中要节约用水、用电。
7.每次实验结束后,值日生应将实验室打扫干净,倾倒废物桶,关好水、电、门窗,方可离去。
实验一粉防已生物碱的提制和鉴识粉防已是防已科千金藤植物粉防已Stephania tetrandra S.Moore 的根。
又名汉防已、倒地拱、百木香,是一种解热镇痛药。
中医用于风湿止痛、利尿消肿以及毒蛇咬伤等。
粉防已的有效成分是生物碱,其总碱含量为 1.2%左右,主要是粉防已碱(Tetrandrine 和防已诺林碱(Fangchinoline 及轮环藤酚碱(Cyclanoline ,本实验经提取,分离可得到这3个生物碱结晶。
天然药物化学实验指导书
天然药物化学实验指导书前言天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
其目的主要是：1．通过实验检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。
2．通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
3．通过设计性实验，培养学生独立从事科研工作的基本能力。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：（一）提取分离方面1．要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液—固提取法（浸渍、渗漉、煎煮、回流提取）、液—液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法）、重结晶法等。
要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。
２．掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱）、薄层色谱的原理及基本操作。
以后要创造条件，使学生能逐步地学到气相色谱、高效薄层及高压液相的基本操作。
（二）鉴定方面１．化学方法①掌握一般定性反应在结构鉴定中的应用。
②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及其在结构鉴定中的应用。
（芦丁的酸水解）２．光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然产物结构鉴定中的应用。
目前要求学生能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱，蒽醌的IR、NMR谱特征。
通过设计性实验逐步培养学生独立进行实验的能力。
对某些实验内容，要求学生有一定的设计能力，为今后从事科研工作打下必要的基础。
本实验指导书主要是供理科基地班天然药物化学实验的参考书。
天然药物化学实验须知在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，实验操作又经常在加温、加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
但只要加强责任心和防患意识，提高警惕、消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。
天然药物化学实验
天然药物化学实验 The following text is amended on 12 November 2020.实验一天然产物化学成分系统预试验天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。
这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。
或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。
一、实验目的与要求掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。
二、基本原理利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。
由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。
三、实验内容：利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。
1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。
试管进行，△在滤纸或硅胶CMC-Na薄层板上进行，下同。
糖鉴定（1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。
①溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。
溶液II：硫酸。
取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。
（2）斐林试剂检查还原糖。
溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。
溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。
取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。
如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。
天然药物化学实验教程
天然药物化学实验教程天然药物化学实验是研究和分析天然药物化学成分和活性的关键领域之一。
下面是一些关于天然药物化学实验的参考内容：1. 实验目的：天然药物化学实验的目的通常是研究和分析天然药物的化学成分、药效和药理活性，探索其潜在的药物作用机制，为药物研发和临床应用提供理论依据。
2. 实验步骤：天然药物化学实验的一般步骤包括药材采集、样品制备、化学成分分离和鉴定、活性测试等。
具体步骤根据研究对象和实验目的的不同而有所差异。
3. 药材采集和样品制备：药材的采集应根据其生长季节和部位选择合适的时间和地点。
采集后要进行鉴定和干燥处理，以保证样品的纯度和质量。
4. 化学成分分离和鉴定：常用的化学成分分离方法有溶剂萃取、柱色谱、薄层色谱等。
分离得到的化合物可以通过质谱、核磁共振等方法进行结构鉴定，以确定其化学成分和结构特征。
5. 活性测试：常用的活性测试方法包括抗氧化活性、抗炎能力、抗菌活性、抗肿瘤活性等。
这些测试可以通过体外实验、细胞实验和动物实验等手段进行。
6. 分子模拟和药效预测：结合计算机辅助药物设计技术，可以进行分子模拟和药效预测，探究天然药物的可能结合靶点和作用机制，以指导后续的药物研发工作。
7. 质量控制和质量标准：天然药物化学实验还需要考虑质量控制和质量标准的建立，包括原料药的质量评价、指纹图谱的建立、有效成分的含量测定等，以保证药材的质量和药物的稳定性。
8. 毒理学评价和安全性研究：天然药物的安全性评价是非常重要的一步，包括毒理学评价、长期毒性实验、代谢动力学研究等。
实验过程中需要遵循伦理和安全的要求，确保实验结果的准确性和可靠性。
9. 文献研究和结果分析：天然药物化学实验还包括对相关文献的研究和结果的分析，以对已有研究成果进行总结和归纳，为进一步的研究提供参考依据。
10. 结论和展望：实验结果的结论和展望是天然药物化学实验中的重要部分，通过对实验结果的分析和解释，得出实验结论，并对未来的研究方向和应用前景进行展望。
(医疗药品管理)天然药物化学实验指导书实验一一叶秋碱的提取分离与.
（医疗药品管理）天然药物化学实验指导书实验一一叶秋碱的提取分离与NATURAL MEDICINAL CHEMISTRY（天然药物化学）EXPERIMENTAL GUIDENCE（实验指导书）Edited byRongmin Yu(于荣敏)Chunyan Yan(严春艳)Yin Yin(殷茵)College of Pharmacy, Jinan UniversityDecember 2006PREFACE天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
主要目的为：1通过实验，了解学生在课堂上所学的基本理论知识的理解和掌握情况，并进一步加深学生对理性知识的理解和掌握。
2通过实验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
3天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：3.1提取分离方面：3.1.1掌握常用提取分离方法的原理及操作：包括液－固提取法（渗渍、渗漉、回流提取）、液－液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分布法）、重结晶法等。
要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。
3.1.2掌握纸层析、薄层层析、柱层析（包括吸附柱离子交换层析）的原理及基本操作。
了解气相层析、高效薄层及高效液相层析的基本操作。
3.2鉴定方面3.2.1化学方法A 掌握一般定性反应鉴定中的应用B 掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物、生物碱盐等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
C 了解重要降解反应的原理及应用。
如碱降解、霍夫曼降解、臭氧氧化等。
3.2.2 光谱方法了解UV,IR,NMR,MS在天然产物结构测定中的应用。
目前，要求学生能了解黄酮类化合物的UV,NMR波谱，蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱特征。
3.2.3天然产物的结构修饰要求学生了解天然产物结构改造的意义，并能进行某些简单的结构修饰工作，如由小檗胺制备檗肌松。
通过实验逐步培养学生独立进行实验的能力。
天然药化实验指导书
《天然药物化学实验》课程课程编号：实验指导书主撰人解军波审核人天津商业大学生物技术与食品科学学院二零零九年十月前言1．实验总体目标天然药物是人类防病治病药物的一个重要来源。
提取、分离天然药物中具有生理活性的化学成分，是天然药物化学研究的一个重要课题。
天然药物化学实验主要是学习天然药物有效成分的提取、分离、纯化、鉴定的方法。
通过实验，加深学生对理论知识的深入理解，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，为将来从事相关研究打下坚实的实践基础。
⒉适用专业年级制药工程专业三年级（第五学期）⒊先修课程分析化学、有机化学⒋实验课时分配⒌实验环境实验室的标准温度为20℃,实验室内的相对湿度一般应保持在50－70％。
实验室的噪音、防震、防尘、防腐蚀等方面的环境条件应符合在室内开展的检定项目之检定规程。
⒍实验总体要求提取、分离、纯化、鉴定是贯穿于天然药物化学实验的全过程的基本操作单元。
正确掌握和灵活处理各个环节的操作技能是训练学生严格认真的科学态度与良好工作习惯，促进理论与实践结合的一个重要环节。
通过本实验让学生掌握、熟悉天然药物化学提取、分离、鉴识技术的基本原理与基本方法，能够进行日常的天然药物研究工作。
⒎本实验的重点、难点及教学方法建议为了保证实验的正常进行和培养学生良好的实验作风及保证实验质量，学生必须遵守下列要求：1、实验前必须充分预习实验讲义，明确实验目的、要求，防止实验盲目性，讲求实验质量。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。
要善于思考，学会运用所学理论知识解释实验现象，研究实验中的问题。
3、重视安全操作，遵守实验室安全守则，使用易燃、易爆、有毒物品时要小心谨慎，避免事故发生。
4、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。
目录实验一、芦丁的提取、分离与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 实验二、汉防己生物碱的提取、分离、鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 实验三、甘草酸的制备与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6实验一芦丁的提取、分离与鉴定一、实验目的1了解黄酮类化合物的一般性质。
天然药物化学实验指导
实验须知 (1)第一章天然药物化学实验技术 (5)第一节经典的提取和分离方法 (5)第二节结晶和重结晶 (9)第三节层析分离方法 (11)第二章实验部分 (18)实验一中草药化学成分的鉴别法 (18)实验二薄层板的制备、活度测定及应用 (25)实验三秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别 (28)实验四虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别 (31)实验五芦丁的提取分离和鉴别 (36)实验六黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别 (40)实验七挥发油成分的提取和鉴别 (44)实验八穿心莲内酯的提取分离鉴别与亚硫酸氢钠加成物的制备 (48)实验九女贞子中齐墩果酸的提取分离和鉴别 (54)实验十薯蓣皂苷元的提取分离和鉴别 (57)实验十一粉防己生物碱的提取分离和鉴别 (60)实验十二绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别(设计性实验) (65)附录一中草药化学成分检出试剂配制法 (67)附录二常用有机溶媒的性质 (74)实验须知一、天然药物化学实验的特点1．实验周期长。
本实验指导中一般一个提取分离和鉴别实验需要用去8学时，时间长。
因此，在实验过程中，应该注意仪器、试剂尤其是提取物的妥善保管或者保存。
2．所用试剂和溶剂品种较多，用量较大，许多试剂易燃、有毒或有腐蚀性，在一定条件下可能会和空气会形成爆炸混合物。
许多实验需用电炉加热或进行减压操作，学生用到的热源和电器较多，因此应切实注意实验安全，严防产生触电、中毒、烫伤等意外发生，谨防发生火灾、爆炸等重大事故，并保证实验室通风良好。
二、实验规则天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和鉴定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严谨的科学态度和良好的工作作风是必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验注意事项：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生，若发生事故应立即报告指导教师，进行适当处理。
天然药物化学实验指导书
药用植物学实验指导适用专业：（本科）药学、药物制剂（专科）药物制剂技术郑州华信学院医学院药学系药学教研室目录实验一显微镜的构造、使用和保护以及植物细胞的构造 (2)实验二植物细胞后含物——淀粉粒、草酸钙结晶体 (6)实验三保护组织和分泌组织 (9)实验四机械组织和输导组织 (12)实验五根的显微构造 (15)实验六单子叶植物地上茎和地下茎观察 (18)实验七双子叶植物茎的初生构造和次生构造 (20)实验八大黄、甘草、人参的鉴定 (22)实验一显微镜的构造、使用和保护以及植物细胞的构造一、实验目的：1.了解显微镜的基本构造并掌握显微镜的正确使用方法和保养。
2.掌握撕取表皮的制片方法。
3.掌握植物细胞的基本构造。
二、实验仪器与材料1.仪器：生物显微镜。
2.用具：镊子、刀片、解剖针、载玻片、盖玻片、玻璃皿、吸水纸、擦镜纸、棉布块。
3.材料：洋葱鳞茎的磷叶或大葱磷叶。
4.试液：蒸馏水、稀碘液、10%硝酸钾溶液。
三、实验内容：（一）显微镜的构造1.机械部分次部分是显微镜的骨架，是安装光学部分的基座。
包括：镜座、镜柱、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调焦装置等。
（1）基座是显微镜的底座，支持整个镜体，使显微镜放置平稳。
（2）基柱镜座上面直立的短柱，支持镜体上部的各部分。
（3）镜臂弯曲如臂，下连镜柱，上连镜筒，为取放镜体时手握的部分。
直筒显微镜的镜臂下端与镜柱连接处有一活动关节，可使镜体在一定范围内后倾，便于观察。
（4）镜筒上端置目镜，下端与物镜转化器相连。
（5）物镜转换器连接于镜筒下端的圆盘，可自由转动，盘子有3－4个安装物镜的螺旋孔。
当旋转转换器时，物镜即可固定在使用的位置上，保证物镜与目镜的光线合轴。
（6）载物台放置玻片标本的平台，中央有一通光孔，两侧有压片夹或机械移动器，既可固定玻片标本，也可以前后左右各方向移动。
（7）调焦装置调节物镜和标本之间的距离，得到清晰的物像。
在镜臂两侧有粗细调焦螺旋各1对，旋转时可使镜筒上升或下降，大的一对为粗调焦螺旋，旋转一圈可使镜筒移动2mm左右。
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天然药物化学实验指导（供药学药剂专业用）河北医科大学药学院天然药物化学教研室2006年3月前言天然药物化学是运用现代科学理论与技术研究天然药物中化学成分的一门学科，是药学、药剂、药分、中药学等专业及相关专业本科学生必修的专业课，是国家职业药师(中药学)资格考试必考课程。
本课程在有机化学、分析化学、有机化合物波谱学、中药学、生药学等课程的基础上，重点讲授天然药物中化学成分的化学结构、理化性质、提取分离方法、结构鉴定、生理活性、天然药物新药开发等方面的基本原理和实验技能，培养学生具有从事天然药物方面的研究、开发和生产的能力，为我国药学事业的发展输送人才。
天然药物化学实验是天然药物化学课的重要的、必不可少的组成部分。
学习的主要目的是通过实验检验在课堂上所学的理论知识，使学生对理论知识的理解更加深入，掌握得更加牢固；通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练；使学生养成严谨的科学态度和良好的科学作风。
实验教学的重点是加强学生基本操作技能的训练，要求学生掌握以下技能：（一）提取分离方面1.要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液-固提取法（浸渍、渗漉、回流提取等）、液-液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、逆流分布法）、重结晶法等。
2.掌握纸色谱、薄层色谱、柱色谱的原理和基本操作。
（二）结构鉴定方面1.化学方法①掌握各类化学成分的一般定性反应在鉴定中的应用；②掌握重要衍生物的制备方法及其在结构鉴定中的应用；③了解重要降解反应的原理及应用。
2.光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然药物化学成分结构测定中的应用。
目录实验须知1实验技能操作规范2实验一大黄中蒽醌苷元的提取、分离和检识8实验二芦丁的提取、水解；黄酮类化合物与糖类的鉴别10实验三苦参生物碱的提取、分离、鉴别和生物碱的检识15实验四利用纸色谱先导设计法从洋金花中提取分离生物碱19实验五一叶萩碱的分离和鉴定23实验六青蒿素的提取、分离和检识25实验七穿心莲内酯的提取、分离、鉴定及亚硫酸氢钠加成物的制备26实验八设计性实验29附录31实验须知学生要求1、第一次实验前要清点所有仪器，若有缺损则向教师报告并填单补充。
以后做实验时如有损坏要立即向教师报告，填单补充并按学校规定比例赔偿。
最后一次实验课结束后在教师监督下清点所有仪器。
2、每次实验前要求提前预习实验内容，了解实验的原理和操作过程。
实验中随时做好记录，在检查仪器装置正确后方可进行实验。
实验完毕后认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，交给老师。
3、实验中不准做与实验无关的事情，严禁吸烟、饮食、大声喧哗，未经允许不得擅自离开，并应随时注意观察实验异常情况。
4、实验结束时，应将实验室清扫干净，门、窗、水、电关好，经老师检查许可后方可离去。
实验室须知天然药物化学实验中所用的药品多数是易燃、有毒、腐蚀性、挥发性、刺激性及易爆的药品，实验操作有时在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其它仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
所以应加强安全的责任心，提高警惕，消除隐患，遵守实验规则，避免事故。
1．仪器药品都是国家财产，须节约爱护使用；公用物品用完后立即放回原处。
2．使用易燃、易挥发及有毒的有机溶剂时，在回流、蒸馏、减压蒸馏等操作过程中，不能明火直接加热，要放沸石；若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。
减压系统应装有安全瓶。
加液或移液时应停火或远离火源。
起封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避开瓶口，慢慢启开，以防气体冲向脸部。
3．接触有毒及强腐蚀药品应小心操作，操作后要立即洗手。
4．实验中，若涉及有毒或腐蚀性气体产生应在通风橱中进行操作。
必要时可戴好防护用具进行工作。
在进行易燃性有机溶剂实验时，一定要按照操作规程进行。
不可将易挥发、易燃性有机溶剂倒入水槽中，应按老师要求处理，有机废液应倒入废液瓶内。
5．实验台上不得放无用的药品仪器。
在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地上清洁整齐。
6．万一不慎着火，要沉着冷静积极抢救，立即切断室内电源和火源，用石棉布将着火部位盖严，使其断绝空气而熄灭；或视火势情况选用适当灭火器材进行灭火。
在实验室宜使用二氧化碳灭火器。
消防器材，沙箱、石棉布、灭火器等应放在方便固定的地点，不能随意移动，均应处于备用状态。
以下为实验室中常发生的事故，应予以特别注意且避免：1．蒸馏或回流加热时，发现未放沸石、未等溶液冷却就补加沸石，结果溶液冲出瓶外而引起火灾。
2．蒸馏或回流易燃物或有毒物时，忘记开冷凝水，大量蒸气逸出亦易引起火灾或造成人员中毒。
3．蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。
4．用三角烧瓶作减压装置的接收器容易炸裂。
5．使用真空干燥器时，用完就直接开干燥器的放气阀，结果使泵内的机油被吸到干燥器中，样品被污染。
6．实验室水槽被杂物堵塞。
第一部分天然药化实验中常用实验技能操作规程一、圆形（径向）纸色谱技术（一）操作技术及程序1.准备仪器及试剂培养皿、色谱滤纸、毛细管、相关试剂等。
2．准备色谱滤纸取直径12.5cm的普通圆形滤纸，将滤纸划分出数个区间（根据所点样品的数目划分区间，滤纸不得折叠），在此色谱滤纸中心处用铅笔轻轻画直径约为1.5～2.0cm的圆，做为点样的起始线。
在此圆的中心打一小孔，将一个长方形的滤纸条搓成一个滤纸芯，插在色谱滤纸的小孔中，纸芯与色谱滤纸成直角，纸芯的高度要比培养皿上下合盖后的内部高度稍低。
3．点样用毛细管将样品及对照品溶液点在色谱滤纸上所画的圆形起始线上，晾（吹）干。
做好标记。
4．选择及配制展开剂。
5．展开将展开剂适量倒入培养皿中，上下盖好，平衡放置，保持5分钟左右，使其内部达液～气饱和。
然后将色谱滤纸小心“扣盖”在培养皿的下皿中，色谱纸保持水平，纸芯保持直立并插入展开剂中，扣好培养皿上盖。
展开剂将沿小纸芯向上浸湿，到达色谱滤纸后以一个圆形的湿斑慢慢向四周扩展。
在展开剂浸湿色谱纸一定距离（一般接近培养皿边沿）时即可结束展开。
将色谱滤纸取出，做好展开剂到达前沿标记，自然晾干或吹干。
6．显色根据所测样品性质选择合适的显色方法，观察色斑的位置。
7．观察实验结果确定出化合物斑点的位置后，用尺子测量距离，计算比移值（R f）或与标准品对照。
（二）注意事项1．色谱纸小心取放，不要折叠、污染。
2．展开剂一定要选择合适，否则样品展开效果差。
3．点样量要合适，浓度小则展开后观察不清楚，浓度太大则有拖尾现象。
径向纸色谱示意图二、硅胶薄层色谱检识技术（一）操作技术及程序1．准备仪器及试剂色谱缸、TLC专用玻璃板（5cm×20cm）、研钵、薄层用硅胶G、0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液、其它相关试剂等。
2．制板①硅胶G-CMC板称取2.5～3g硅胶G放入研钵中，加入约7～9ml的0.5%CMC水溶液（硅胶：粘合剂CMC约1：2~3），混合成均匀的粘稠状溶液，再将其倒在TLC玻璃板上并涂布均匀，然后轻轻颠荡，使硅胶均匀地分布在玻璃板上，形成均匀厚度的硅胶层。
水平放置，自然晾干。
②荧光薄板称取硅胶GF2542.5～3g，同硅胶G－CMC板法制备。
③AgNO3-硅胶板方法一：将AgNO3加入少量水溶解，再加甲醇稀释成10％溶液，把预先制好的硅胶薄层浸入该溶液内约一分钟，取出避光阴干。
方法二：在硅胶G中加入一定量10％硝酸银水溶液（代替水）调成糊状铺板，避光阴干。
3．活化将自然晾干的硅胶板放于烤箱中，在105~110℃中活化0.5～1.0小时。
4．点样在距硅胶玻璃板下端1.5～2cm处用铅笔点样轻轻划一直线，注意不破坏硅胶平面，作为点样起始线。
分别用毛细管将样品及对照品溶液点在硅胶板的起始线上，晾(吹)干，做好标记。
样品点的直径应在2～3mm，样品点之间的间隔应不少于1cm。
5．选择及配制展开剂。
6．展开将展开剂适量倒入色谱缸中，将薄板放于色谱缸中（不得浸入展开剂中），盖好上盖，保持15~30分钟左右，使其内部达液-气饱和。
然后将硅胶板下端小心慢慢地插入到展开剂中，不要使展开剂浸没点样起始线，上端用玻璃物体支起，盖好上盖。
此时将会观察到展开剂沿硅胶板逐渐地向上浸湿（即展开），展开的距离一般为15cm以上。
将硅胶板取出，在前沿处作出标记，自然晾干或吹干。
7．显色根据样品性质选择合适的显色方法进行样品的显色观察。
8．计算比移值R f及与标准品对照。
（二）注意事项1．硅胶板小心取放，硅胶板不要受污染、刮蹭。
2．样品的点样量要合适，如果浓度小则展开后观察不清楚；如果浓度太大或点样的点直径过大可能有拖尾现象。
如果样品溶液的浓度较低，可用毛细管反复在点样处多点几次。
3．展开剂一定要选择合适，否则样品展开分离效果差。
.4．荧光硅胶（硅胶-GF254）与硅胶-G的使用方法相同，但不用显色剂，可在紫外灯（254nm）下观察样品展开情况。
三、硅胶柱色谱分离技术（一）操作技术及程序1．准备仪器及试剂玻璃色谱柱、铁架台、接收瓶、相关试剂等。
2．装柱【湿法】取100～200目的柱色谱用硅胶适量，置于烧杯中，加入适量的有机溶剂，搅拌使硅胶完全湿润并无气泡，然后将硅胶加入到色谱柱中。
注意加硅胶时要打开活塞，让硅胶自然下沉，液面保持在硅胶之上，硅胶柱中不得有气泡。
加样前，液面高度要保持在5~10mm。
【干法】取100～200目的柱色谱用硅胶适量，加入到色谱柱中，（主意要打开活塞）加时不断轻轻敲打色谱柱壁，使硅胶紧密均实。
3．加样方法一：一般将样品溶液溶于少量开始的洗脱剂中，制成样品溶液，轻轻注入已准备好的硅胶柱上面，勿使柱面受到扰动，否则影响色谱效果。
方法二：如样品不溶于开始的洗脱剂，则将样品溶于挥发性的溶剂（如乙醇、甲醇）中，然后取少量吸附剂与其拌匀，除尽溶剂，再将含有样品的吸附剂均匀地加入到色谱柱的顶端，再覆盖上少量硅胶或脱脂棉、小玻璃球将其压住，以防洗脱时冲乱顶部的拌样硅胶。
4．选择及配制洗脱剂。
5．洗脱及接收选择好洗脱剂后，放在分液漏斗中，打开活塞慢慢连续不断地滴加在吸附柱上。
同时打开色谱柱下端活塞，等份收集洗脱液，流速保持1～2滴/秒，一般先选用洗脱能力弱的溶剂，逐步增加洗脱能力。
6．同时配合TLC或其它方法检查接收液。
（二）注意事项1．硅胶吸附拌样的比例约为：样品：硅胶=1:1或1:2。
2．吸附剂硅胶的使用量比例约为样品：硅胶=1:30~60或1:100(难分离物)。
3．洗脱剂的极性选择要合适，否则得不到很好的分离。
4．洗脱的速度要合适，一般保持在2~15ml/min。
色谱柱分离过程示意图四、离子交换柱色谱分离技术（一）操作技术及程序1．准备仪器及试剂色谱柱、铁架台、接收瓶、相关试剂等。
2．预处理（活化）树脂（以强酸型阳离子交换树脂为例）按交换样品的性质选择树脂，根据树脂的交换容量及样品的量，称取适量树脂。