疟原虫检验技术
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疟原虫检验技术
原理
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断和流行病学调查。
优点
恶性疟原虫免疫荧光染色法
优点
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断、药物治疗监测和流行病学调查等。
原理
以疟原虫特异性DNA片段作为引物，通过聚合酶链反应扩增特异性DNA片段，然后将扩增产物进行电泳分析，以检测疟原虫的存在。
局限性
不同种疟原虫的DNA序列存在差异，因此需要针对不同种疟原虫设计不同的引物。
聚合酶链反应（PCR）
对疟原虫的基因序列进行分析，可了解疟原虫的种群结构、遗传变异和抗药性。
核酸序列分析
分子生物学检验
体外培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊细胞或其它传代细胞系中，进行体外培养，用于分离和鉴定疟原虫。
体内培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊体内，进行体内培养，用于分离和鉴定疟原虫。
流行病学调查
通过对疟疾疫源地进行分析，找出传染源和传播途径，有助于制定针对性的防控措施，控制疫情扩散。
疫源地分析
流行病学调查与疫源地分析
结论与展望
06
疟原虫检验技术的重要性和意义
疟原虫检验技术是疟疾诊断、治疗和防控的关键手段，对于减少疟疾传播、保护人民健康具有重要意义。
疟原虫检验技术的发展和应用，有助于提高疟疾防治效果，降低疟疾发病率和死亡率，为国家和人民节省了大量医疗资源和社会成本。
xx年xx月xx日
疟原虫检验技术
目录
contents
疟原虫检验概述疟原虫检验技术分类各种疟原虫检验技术介绍疟原虫检验技术的应用范围与局限性疟原虫检验的实际应用案例结论与展望
疟原虫检验概述
01
疟原虫检验是指通过实验室手段对患者的血液、组织、排泄物等进行检查，以确诊疟疾感染和评估病情严重程度。
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断和流行病学调查。
优点
恶性疟原虫免疫荧光染色法
优点
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断、药物治疗监测和流行病学调查等。
原理
以疟原虫特异性DNA片段作为引物，通过聚合酶链反应扩增特异性DNA片段，然后将扩增产物进行电泳分析，以检测疟原虫的存在。
局限性
不同种疟原虫的DNA序列存在差异，因此需要针对不同种疟原虫设计不同的引物。
聚合酶链反应（PCR）
对疟原虫的基因序列进行分析，可了解疟原虫的种群结构、遗传变异和抗药性。
核酸序列分析
分子生物学检验
体外培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊细胞或其它传代细胞系中，进行体外培养，用于分离和鉴定疟原虫。
体内培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊体内，进行体内培养，用于分离和鉴定疟原虫。
流行病学调查
通过对疟疾疫源地进行分析，找出传染源和传播途径，有助于制定针对性的防控措施，控制疫情扩散。
疫源地分析
流行病学调查与疫源地分析
结论与展望
06
疟原虫检验技术的重要性和意义
疟原虫检验技术是疟疾诊断、治疗和防控的关键手段，对于减少疟疾传播、保护人民健康具有重要意义。
疟原虫检验技术的发展和应用，有助于提高疟疾防治效果，降低疟疾发病率和死亡率，为国家和人民节省了大量医疗资源和社会成本。
xx年xx月xx日
疟原虫检验技术
目录
contents
疟原虫检验概述疟原虫检验技术分类各种疟原虫检验技术介绍疟原虫检验技术的应用范围与局限性疟原虫检验的实际应用案例结论与展望
疟原虫检验概述
01
疟原虫检验是指通过实验室手段对患者的血液、组织、排泄物等进行检查，以确诊疟疾感染和评估病情严重程度。
疟原虫的镜检技术.
熟练工作者的推片姿势
厚血膜的制作
• 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约 4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋 转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到 5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于 玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签 的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观： 圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄 达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC 为宜。
我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效 果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色 时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊 量大的门诊实验室使用。
染液的种类及染色原理
注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液 的pH值7.0-7.2较好。
染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使 红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞 浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细 胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。
★ 快速诊断试纸条可与镜检 疟原虫相互补充。
疟原虫抗原检测
• （一）原理
• 快速检测试剂是通过在硝酸纤维素膜（NC）试纸条上产 生可见的条带来检测抗原的一种“免疫-层析”试剂。染 色标记抗体与疟原虫抗原结合，复合物由试剂条检测线上 的抗体捕获后，形成一条可见的条带（检测线）。 • 检测的第一步是将溶血剂与血液混合，破坏血红细胞释放 疟原虫蛋白，便于与标记抗体靶蛋白结合；然后将血液与 标记抗体的混合液置于硝酸纤维试纸条上，并通过毛细管 作用和缓冲液/清洗剂推力，使混合液在试纸条上移动并 通过检测线与对照线。
血膜的制作（取血操作）
在采集标本、制作血片前，首先要核 对患者的姓名、年龄和住址。 • 采血部位和方法：采血部位一般人为耳 垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。
疟原虫检验技术
薄血膜 厚血膜
制片过程图示
标签
标准的疟疾厚薄血膜片
●厚血膜血量不宜过多或过少 ●薄血膜平整,无皱折和空泡.显微镜下红细胞单层排列
标签
血片的制作
×
×
×
×
×
√
血片制作影响因素
➢ 载玻片必须清洁无油污，理想的薄血膜是一层血细胞均匀 分布不重叠、无裂缝、无皱折和空泡，血膜末端呈舌状；
➢ 厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜；
碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞）
红细胞
红细胞是双面凹 的圆饼状
边缘较厚，而中 间较薄
血小板
5 12
3 4 6
各种血细胞模式图
1.红细胞 2.嗜酸性粒细胞 3.嗜碱性粒细胞 4.中性粒细胞
7 5.淋巴细胞
6.单核细胞 7.血小板
疟原虫的基本形态特征
➢ 疟原虫基本构造为细胞质(胞浆)、核和疟色素；
如：Pv R+T++S5G少
这种方法简便，缺点是计数的疟原虫数受血膜厚薄 影响，只能定性，不宜作定量分析。
如何确定疟原虫血片为阴性
● 检查全部厚血膜视野未查见疟原虫 ● 最少检查100个厚血膜视野未查见
疟原虫（临床病人）
疟原虫镜检
人体四种疟原虫的分布
感染人的疟原虫有四种:
恶性疟原虫 P. falciparum 间日疟原虫 P. vivax 三日疟原虫 P. malariae 卵形疟原虫 P. ovale
➢ 原虫：经吉氏或瑞氏染色：核呈红色，胞质呈 兰色，疟色素为本色；
➢ 细胞浆：蓝色或深蓝色，随着虫体发育长 大，细胞浆逐渐增多；
➢ 核：呈鲜红色，呈圆形或椭圆形。核的结
构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，
疟疾实验室检查方法
疟疾实验室检查方法疟疾是一种由疟原虫引起的传染病，该病在全球范围内广泛分布，并造成了大量的疾病和死亡。
为了及时准确地诊断和治疗疟疾，实验室检查方法起着至关重要的作用。
本文将介绍疟疾实验室检查的常见方法。
1. 血涂片检查血涂片检查是最常用的疟疾实验室检查方法之一。
该方法通过在玻片上涂抹患者的血液样本，并使用特殊的染色剂染色，然后在显微镜下观察。
疟原虫在血液中的形态特征使其能够与其他细胞区分开来，从而能够准确地诊断疟疾。
血涂片检查的优点是简单易行，结果迅速可靠。
然而，该方法需要经过专业人员的训练和经验，以确保结果的准确性。
2. 快速诊断试纸检测快速诊断试纸检测是一种简便快速的疟疾实验室检查方法。
该方法基于抗原-抗体反应原理，通过在试纸上加入患者血液样本，检测疟原虫抗原或抗体的存在与否。
试纸通常具有几个测试线，每个测试线代表一种疟原虫类型。
根据试纸上测试线的出现情况，可以快速诊断疟疾的类型。
快速诊断试纸检测的优点是操作简单，结果迅速，适用于一线医疗机构和偏远地区的疟疾筛查。
3. 分子生物学检测分子生物学检测是一种高灵敏度和高特异性的疟疾实验室检查方法。
该方法通过提取患者血液中的疟原虫DNA或RNA，然后使用特定的引物和荧光探针进行PCR扩增和实时荧光检测。
分子生物学检测能够检测到非常低浓度的疟原虫，具有高度的准确性和敏感性。
然而，该方法需要复杂的实验室设备和专业人员的操作技术，限制了其在资源匮乏地区的应用。
4. 免疫荧光检测免疫荧光检测是一种基于抗原-抗体反应的疟疾实验室检查方法。
该方法通过在患者血液样本中加入特定的荧光标记抗体，与疟原虫抗原结合形成复合物，然后在荧光显微镜下观察。
免疫荧光检测可以同时检测多种疟原虫类型，并具有高度的特异性和敏感性。
然而，该方法需要昂贵的设备和专业人员的操作技术，限制了其在一线医疗机构和偏远地区的广泛应用。
总结起来，疟疾实验室检查方法包括血涂片检查、快速诊断试纸检测、分子生物学检测和免疫荧光检测。
疟原虫的镜检技术-制片染色
免疫染色技术
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
疟原虫检验专业技术标准
质量好的染色 : 显微镜下核呈红色,胞浆呈蓝色 如果血片偏红,说明染液偏酸性 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性
外观吉氏染色血片
偏酸 标准 偏碱
染色过程
血片干燥后, 用甲醇固定薄血膜 血片平置于染色板上 用吸管吸取已稀释的吉氏液约2ml于厚薄血 膜上，染色10 min 清水细缓轻轻冲去染液 置玻片于插板上，自然晾干然会影响血片制作和镜检结 果．
● 用甲醇固定薄血膜时，甲醇不要接触到厚血膜 ● 血片充分干燥后染色，清水细缓冲洗。防止厚血膜脱落. ● 配置吉氏母液必须过滤除去杂质颗粒，有助于提高镜检
质量．
疟原虫密度计算
计算疟原虫密度的三种方法：
● 白细胞原虫密度计数法 (厚血膜 WHO) ● 半定量计数法 (厚血膜) ● 红细胞感染密度计算法 (薄血膜)
薄血膜再取一小滴血.将血置于第一张玻片离厚血膜适 当远的地方.将采血玻片(推片)的边缘紧贴载玻片使 血液沿边缘散开(如图示).
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 ●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
取血部位和血量
取血方法 采血部位：耳 垂或无名指，通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球 消毒取血部位，待酒精干 后，用左手拇指和食指紧 捏耳垂上方或无名指指尖， 右手持消毒针迅速刺入皮 肤，不宜过深或过浅。然 后用右手中指轻轻挤压出 血。厚血膜血量约一粒米 大小。
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量 （相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片 接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成 直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。
疟原虫检验技术
整个染色液配制时间不能少于5个小时
稀释吉氏原液
●原液需经pH7.0盐酸缓冲液（PBS）或 净水稀释后，方可用于厚薄血片染色。 ●吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀 物泛起影响染色效果.
吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或净水，直接滴 加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血 膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干镜检。 操作2 (慢染) 在染色量筒内量2ml蒸馏水或净水， 再 滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上，染 色30~40min。清水细缓冲洗，晾干镜检。
疟原虫检验技术
实验室技术
●分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是 确诊疟疾的“金标准” 仍然是血液显微 镜检查 ●显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方 法 ●厚薄血涂片的检查仍被认为是不可替代 的疟疾诊断的金标准
血片制作
厚薄血膜的制作
在制作血片前，首先要核对患者的姓名、 年龄和住址
取血部位和血量
采血部位和取血方法：耳垂 或无名指，通常在耳垂取 血，先用75%酒精棉球消毒 取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒米大小。
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升 血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的 载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4 圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。 薄血膜再取一小滴血.将血置于第一张玻片离厚血 膜适当远的地方.将采血玻片(推片)的边缘紧贴 载玻片使 血液沿边缘散开(如图示).
4. 如果能见到疟原虫，但是记数5000～10000个红细胞 时却没有感染红细胞，那么设定感染率为＜１％
稀释吉氏原液
●原液需经pH7.0盐酸缓冲液（PBS）或 净水稀释后，方可用于厚薄血片染色。 ●吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀 物泛起影响染色效果.
吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或净水，直接滴 加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血 膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干镜检。 操作2 (慢染) 在染色量筒内量2ml蒸馏水或净水， 再 滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上，染 色30~40min。清水细缓冲洗，晾干镜检。
疟原虫检验技术
实验室技术
●分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是 确诊疟疾的“金标准” 仍然是血液显微 镜检查 ●显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方 法 ●厚薄血涂片的检查仍被认为是不可替代 的疟疾诊断的金标准
血片制作
厚薄血膜的制作
在制作血片前，首先要核对患者的姓名、 年龄和住址
取血部位和血量
采血部位和取血方法：耳垂 或无名指，通常在耳垂取 血，先用75%酒精棉球消毒 取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒米大小。
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升 血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的 载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4 圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。 薄血膜再取一小滴血.将血置于第一张玻片离厚血 膜适当远的地方.将采血玻片(推片)的边缘紧贴 载玻片使 血液沿边缘散开(如图示).
4. 如果能见到疟原虫，但是记数5000～10000个红细胞 时却没有感染红细胞，那么设定感染率为＜１％
疟原虫检验技术
疟原虫检验技术一、疟原虫的生物学特征疟原虫是一类单细胞真核生物，寄生在人类和其他脊椎动物的红细胞内。
常见的疟原虫种类包括恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。
疟原虫的生活史包括在人体内的无性生殖和在蚊体内的有性生殖两个阶段。
在人体内，疟原虫经历了肝细胞内的红外期和红细胞内的红内期发育过程。
了解疟原虫的生物学特征对于选择合适的检验方法具有重要意义。
二、疟原虫检验技术的分类1、显微镜检查法这是疟原虫检验的经典方法，包括薄血膜涂片和厚血膜涂片检查。
薄血膜涂片用于疟原虫形态学观察，可鉴定疟原虫的种类；厚血膜涂片则提高了疟原虫的检出率。
在显微镜下，观察疟原虫的形态、大小、细胞核和细胞质的特点，以及疟色素的分布等，从而确定是否感染疟原虫以及感染的种类。
2、免疫学检测法（1）抗原检测利用免疫层析技术检测患者血液中的疟原虫抗原。
这种方法操作简便、快速，适用于现场检测和大规模筛查。
（2）抗体检测检测患者血清中的特异性抗体。
但由于抗体在感染后一段时间才会产生，且抗体检测不能区分现症感染和既往感染，因此在疟疾诊断中的应用相对有限。
3、分子生物学检测法（1）PCR 技术通过扩增疟原虫特定的基因片段来检测疟原虫。
具有高度的敏感性和特异性，能够检测到极低浓度的疟原虫核酸。
（2）核酸杂交技术利用标记的核酸探针与疟原虫核酸进行杂交，从而检测疟原虫。
4、其他检测方法（1）血常规检查疟疾患者可能会出现贫血、白细胞减少等血常规异常。
（2）血生化检查部分疟疾患者可能会有肝肾功能损害，通过血生化检查可以了解相关情况。
三、显微镜检查法的操作步骤1、采血通常采集患者的末梢血或静脉血。
2、制作血涂片薄血膜涂片：将一滴血液滴在载玻片的一端，用推片以 30°－45°角均匀地推成薄而均匀的血膜。
厚血膜涂片：取较多的血液滴在载玻片上，用推片制成较厚的血膜。
3、固定和染色薄血膜涂片自然干燥后，用甲醇固定，然后用吉姆萨染液或瑞氏染液染色。
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疟原虫检验技术
疟原虫检验技术
血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别 的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重 要部分，血涂片制作和染色的好坏足以影 响检查的结果，必须把握好“三关”。
疟原虫检验技术
一、玻片清洁
玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕， 无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落， 薄血膜涂布不均匀。在用手指持玻片时，只 能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表 面，以避免手指上的油污染玻片。
• 6.6 37
63
900
• 6.8 49
51
900
• 7.0 63
37
900
• 7.2 73
27
900
• 7.4 81
19
900
• 在无条件的地方，此时也可用当地的饮用水煮沸过
滤后试染，试染结果如淋巴细胞的胞浆呈兰色红血
球染色不很兰就可使用。
疟原虫检验技术
3.染色步骤：
①固定：用吉氏染液染色须先将薄血膜用甲醇或无水酒精固 定。滴于薄血膜上，也可用玻棒沾取甲醇涂在薄血膜上， 避免甲醇流至厚血膜，误将其固定，可用蜡笔划一条线， 或者是斜放玻片，玻片上的甲醇蒸发干后即可染色。
中。 • 中：薄血膜中，厚血膜好或中。 • 差：薄血膜差，或厚薄血膜均差。
疟原虫检验技术
• 2.血片制作和染色合格率要求：分别以血片 制作、染色和清洁度的好、中、差合并计 算合格率。
• (1)血片制作合格率应在85%以上。 • (2)染色合格率应在85%以上。 • (3)清洁度合格率应在80%以上。
稍冷后，将洁干毛巾擦净后待用。
疟原虫检验技术
②清洁液浸泡法：
清洁液配制如下： • 重铬酸钾 80g • 浓硫酸 100ml • 水(清净水)1000ml
疟原虫检验技术
配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢 加温到全部溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸， 待溶液冷却后倒入有盖的大口玻璃缸内。清洁 玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中浸泡一 两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。 浸泡前最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变 为墨绿色后即失去清洁作用，不能再用。
液，使其达到我们需要的酸碱度。
疟原虫检验技术
缓冲液配制：
磷酸氢二钠（无水） 蒸馏水
9.5g 1000ml
磷酸二氢钾
9.07g
蒸馏水
1000ml
术
稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为最适宜，现用
现配，可按下表配制：缓冲蒸馏水的配制（ml）
ph 磷酸二氢钠液 磷酸二氢钾液 蒸馏水
耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤）， 使一小滴血在玻片上。血量1-1.5mm3 .1/4火柴 头大小。
疟原虫检验技术
(4)将推片置于血溶之前与血液相接触，待血液沿推 片边缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力 均匀迅速将推片由右向左推出而制成薄血膜。涂制 得较好的薄血膜只有一层血球，血球的分布排列比 较均匀，血膜的末端突出如舌状。
了疟原虫。 厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或 灰尘落在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄 血膜的边缘上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。
疟原虫检验技术
血片制作和染色质量规范
项目 血 膜
好
中
差
• 血片制作 厚 血量 4.0～5.0mm3 略多或略少 过多或过少
位置 玻片右1/3
稍偏右
偏右过多
磨，再加甘油研磨，直至25ml甘油加完为止。将充
分研磨的吉氏甘油液倒入无水，干净的棕色玻塞瓶
中，然后分次加甲醇于乳钵洗出染剂倒入瓶中，直
至25甲醇将乳钵洗净并全部倒入瓶中，塞紧，充分
摇匀，放置室内一星期，每天摇动数次，以后即可
使用.
疟原虫检验技术
2.缓冲液的配制;
为了保证染色良好，使疟原虫的红核和兰胞浆分明， 感染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂原液时， 所用的蒸馏水必须加缓冲液（缓冲蒸馏水）。新鲜蒸馏 水可能接近中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空 气中的二氧化碳而变为酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲
若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚；若推 时用力不均匀，则易成梯田状.
若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污， 则血膜成多孔状。
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2.厚血膜涂制
薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴头大一血滴， 将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片的一角 由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血膜， 旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖
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(一)新的载玻片的洗涤
新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水 冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。
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(二)使用过的载玻片的清洁方法有两种：
①5%的肥皂水煮沸法： 将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥 皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂 水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水
染色
外观 镜下
兰紫色白细胞 疟原虫浆呈 兰色，核深 红
深兰色 胞浆淡兰或深 兰，核红色
红色或灰白色 胞浆不易见，核淡红或兰色
清洁度
外观 光洁无油灰 镜下 无沉渣
稍有油污 稍有沉渣
油灰粘连 沉渣多或有杂菌
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• 血片制作和染色质量判定标准 • 1.血片制作质量判定标准： • 好：厚薄血膜均好，或薄血膜好，厚血膜
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三、染色
• 常用的染色方法有姬姆萨氏和瑞氏两种 • (一)吉氏染色法：
吉氏染剂是最可靠的血膜染剂，其优点是易 于掌握很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢.
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1.吉氏染剂的配制：
•吉氏染剂粉 0.5g
•甘油（中性）25ml
•甲醇（纯，分析纯）25ml
•将吉氏染剂粉0.5置于乳钵中，加少许甘油充分研
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二、制片
1.薄血膜涂制 2.厚血膜涂制 • 薄血膜 厚血膜
标记处
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1.薄血膜涂制：
1.薄血膜涂制 (1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采
血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。 (2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方
向将耳垂轻轻挤压出血。 (3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触
直径 8～1.0cm
0.7～0.8或1.0 ＜0.7或＞1.2cm
外观 圆形厚膜均匀
～1.2cm 厚薄不匀影响着色
，边缘整齐 圆形稍不均不
整齐
薄 血量 位置 长宽 外观
1.5～2.0 mm3 玻片1/2～1/3处 1.5×2.0cm 舌状厚薄均匀
略多或略少 稍偏右或偏左 稍大或稍小 舌状稍不匀
过多或过少 偏右或偏左过多 过大或过小 厚薄不匀呈波浪型
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血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别 的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重 要部分，血涂片制作和染色的好坏足以影 响检查的结果，必须把握好“三关”。
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一、玻片清洁
玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕， 无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落， 薄血膜涂布不均匀。在用手指持玻片时，只 能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表 面，以避免手指上的油污染玻片。
• 6.6 37
63
900
• 6.8 49
51
900
• 7.0 63
37
900
• 7.2 73
27
900
• 7.4 81
19
900
• 在无条件的地方，此时也可用当地的饮用水煮沸过
滤后试染，试染结果如淋巴细胞的胞浆呈兰色红血
球染色不很兰就可使用。
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3.染色步骤：
①固定：用吉氏染液染色须先将薄血膜用甲醇或无水酒精固 定。滴于薄血膜上，也可用玻棒沾取甲醇涂在薄血膜上， 避免甲醇流至厚血膜，误将其固定，可用蜡笔划一条线， 或者是斜放玻片，玻片上的甲醇蒸发干后即可染色。
中。 • 中：薄血膜中，厚血膜好或中。 • 差：薄血膜差，或厚薄血膜均差。
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• 2.血片制作和染色合格率要求：分别以血片 制作、染色和清洁度的好、中、差合并计 算合格率。
• (1)血片制作合格率应在85%以上。 • (2)染色合格率应在85%以上。 • (3)清洁度合格率应在80%以上。
稍冷后，将洁干毛巾擦净后待用。
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②清洁液浸泡法：
清洁液配制如下： • 重铬酸钾 80g • 浓硫酸 100ml • 水(清净水)1000ml
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配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢 加温到全部溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸， 待溶液冷却后倒入有盖的大口玻璃缸内。清洁 玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中浸泡一 两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。 浸泡前最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变 为墨绿色后即失去清洁作用，不能再用。
液，使其达到我们需要的酸碱度。
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缓冲液配制：
磷酸氢二钠（无水） 蒸馏水
9.5g 1000ml
磷酸二氢钾
9.07g
蒸馏水
1000ml
术
稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为最适宜，现用
现配，可按下表配制：缓冲蒸馏水的配制（ml）
ph 磷酸二氢钠液 磷酸二氢钾液 蒸馏水
耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤）， 使一小滴血在玻片上。血量1-1.5mm3 .1/4火柴 头大小。
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(4)将推片置于血溶之前与血液相接触，待血液沿推 片边缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力 均匀迅速将推片由右向左推出而制成薄血膜。涂制 得较好的薄血膜只有一层血球，血球的分布排列比 较均匀，血膜的末端突出如舌状。
了疟原虫。 厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或 灰尘落在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄 血膜的边缘上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。
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血片制作和染色质量规范
项目 血 膜
好
中
差
• 血片制作 厚 血量 4.0～5.0mm3 略多或略少 过多或过少
位置 玻片右1/3
稍偏右
偏右过多
磨，再加甘油研磨，直至25ml甘油加完为止。将充
分研磨的吉氏甘油液倒入无水，干净的棕色玻塞瓶
中，然后分次加甲醇于乳钵洗出染剂倒入瓶中，直
至25甲醇将乳钵洗净并全部倒入瓶中，塞紧，充分
摇匀，放置室内一星期，每天摇动数次，以后即可
使用.
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2.缓冲液的配制;
为了保证染色良好，使疟原虫的红核和兰胞浆分明， 感染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂原液时， 所用的蒸馏水必须加缓冲液（缓冲蒸馏水）。新鲜蒸馏 水可能接近中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空 气中的二氧化碳而变为酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲
若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚；若推 时用力不均匀，则易成梯田状.
若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污， 则血膜成多孔状。
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2.厚血膜涂制
薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴头大一血滴， 将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片的一角 由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血膜， 旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖
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(一)新的载玻片的洗涤
新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水 冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。
疟原虫检验技术
(二)使用过的载玻片的清洁方法有两种：
①5%的肥皂水煮沸法： 将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥 皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂 水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水
染色
外观 镜下
兰紫色白细胞 疟原虫浆呈 兰色，核深 红
深兰色 胞浆淡兰或深 兰，核红色
红色或灰白色 胞浆不易见，核淡红或兰色
清洁度
外观 光洁无油灰 镜下 无沉渣
稍有油污 稍有沉渣
油灰粘连 沉渣多或有杂菌
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• 血片制作和染色质量判定标准 • 1.血片制作质量判定标准： • 好：厚薄血膜均好，或薄血膜好，厚血膜
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三、染色
• 常用的染色方法有姬姆萨氏和瑞氏两种 • (一)吉氏染色法：
吉氏染剂是最可靠的血膜染剂，其优点是易 于掌握很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢.
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1.吉氏染剂的配制：
•吉氏染剂粉 0.5g
•甘油（中性）25ml
•甲醇（纯，分析纯）25ml
•将吉氏染剂粉0.5置于乳钵中，加少许甘油充分研
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二、制片
1.薄血膜涂制 2.厚血膜涂制 • 薄血膜 厚血膜
标记处
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1.薄血膜涂制：
1.薄血膜涂制 (1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采
血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。 (2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方
向将耳垂轻轻挤压出血。 (3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触
直径 8～1.0cm
0.7～0.8或1.0 ＜0.7或＞1.2cm
外观 圆形厚膜均匀
～1.2cm 厚薄不匀影响着色
，边缘整齐 圆形稍不均不
整齐
薄 血量 位置 长宽 外观
1.5～2.0 mm3 玻片1/2～1/3处 1.5×2.0cm 舌状厚薄均匀
略多或略少 稍偏右或偏左 稍大或稍小 舌状稍不匀
过多或过少 偏右或偏左过多 过大或过小 厚薄不匀呈波浪型