微矩阵法

合集下载

新浪微博营销6种模式

新浪微博营销6种模式

新品发布
微博6种营销模式
微公关
微应用
微签到
高级营销模式
Байду номын сангаас
微直播
中级营销模式
微矩阵
微同步
基础营销模式
微博营销之微矩阵,即有规划性地建立企业的微博账号群,以实现交叉覆盖
案例1-微软中国微博矩阵
案例2-adidas微博矩阵
IT服务
技术交流
技术研究
沟通应用
还包括企业领导者与员工微博
根据不同产品线和地域建立
洞察企业微博营销
企业微博营销误区
1
微博只做活动和话题
2 单独使用微博一个平台
3 企业微博缺乏规划和管理
微博营销是企业营销的核心
电视
报纸
媒体
事件的发起者和组织者 整合媒体资源
网络 杂志
促销 危机公关
CRM 事件营销
官博
所有营销、用户的落脚点 开展各种营销活动
机场
电台
精确营销
车站
口碑营销
整合媒体资源,通过各种营销活动,不断累积粉丝数

6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 8月19 日星期 三上午2 时39分 15秒02 :39:152 0.8.19

7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 20年8 月上午2 时39分 20.8.19 02:39A ugust 19, 2020

8、业余生活要有意义,不要越轨。20 20年8 月19日 星期三2 时39分 15秒02 :39:151 9 August 2020
微博营销之微公关,即通过新浪微博,结合事件进行品牌形象公关或危机公关
案例1-东航事件公关

生物计量复习资料

生物计量复习资料

1、SI基本单位:质量(千克)、长度(米)、时间(秒)、电流(安培)、光度(坎德拉)、温度(开尔文)、物质的量(摩尔)2、生物测量溯源量传体系的动力机制国际测量基准国家测量基准国家测量标准法制计量、法定计量机构鉴定工程计量、校准实验室校准(量传,政府推动)(溯源,市场推动)计量用户(各类检测实验室或其他)3、生物计量:是实现生物测量单位统一、量值准确可靠的活动,是以生物测量理论、测量标准、计量标准生物测量技术为主体,实现生物测量特性量值在国家和国际范围内的准确一致,保证测量结果最终可溯源到国际SI单位、法定计量单位或国际公认单位。

4、生物测量:通过实验手段获得并可合理赋予有关生物特性量值(一个或多个)的操作及过程。

5、比对:在规定条件下,对相同准确度等级或指定不确定度范围的同种计量器具复现的量值之间的比较。

6、量值:量的值的简称。

用数和参照对象(如测量单位)一起表示的量的大小。

7、计量可比性:即测量结果的计量可比性,是对于计量溯源到同一参照对象的某类量的测量结果间可比较的特性。

8、基准方法:是一种具有最高计量学品质的方法,它的整个操作过程能够被描述和理解,它的不确定度能够被完全的评价并以SI单位表示。

9、溯源性:通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链,使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准,通常是与国家测量标准或国际测量标准联系起来的特性。

10、RM标准物质:具有一种或多种足够均匀和很好了的特性值,用以校准测量装置、评价测量方法或给材料赋值的材料或物质。

是具有准确量值的测量标准。

11、CRM:附有证书的标准物质,其一种或多种特性值用建立了溯源性的程序确定,使之可溯源到准确复现的表示该特性值的测量单位,证书上给出的每个特性值都附有给定置信水平的不确定度。

12、生物标准物质BRMS:基体为生物组织的标准物质或具有一种或多种足够均匀并很好确定了的含量、序列、活性、结构或分型等生物测量特性量值,用以校准设备,评价测量方法或给材料赋值的材料或物质。

微振动力学系统模型构造微分方程系数矩阵方法

微振动力学系统模型构造微分方程系数矩阵方法

"
从上式可以看出,(!2 、 (%2 和 (&2 分别是广义速 度、 广义坐标和广义速度的二次齐次函数。 这样, 我们 通过上式就可求出广义质量矩阵、 广义刚度矩阵和广 义阻尼矩阵。 式 (!&) 就是构造微分方程系数矩阵的原 理。 公式中有偏导, 故本文称为能量偏导法。 只要确定
. 广义坐标 - $ ( ) ! , …, , 写出动能、 势能和耗 )", )’ ) 散函数, 就能很方便地求出微分方程 (!) 的系数矩阵。
一是原理和步骤简单只要建立广义坐标写出动能势能和耗散函数然后这三个函数分别对广义速度广义坐标广义速度求二次偏导就可得到系统微分方程的一般形式不需要对时间求导也没有化简整理方程的过程
振 第 !" 卷第 # 期



击 ,56 7 !" (57 # !""#
$%&’()* %+ ,-.’)/-%( )(0 12%34
! 李中付#,
华宏星#
石银明#
陈之炎#
9:#""!)
(# 上海交通大学 振动、 冲击、 噪声国家重点实验室, 上海
(! 中国人民解放军桂林陆军学院, 科技教研室, 桂林 !"""8")


对于多自由度定常约束微振力学系统的数学建模有许多方法, 但这些方法不是受到使用条件限制就是计
算繁琐, 并且不适合于计算机建模。根据系统的动能、 势能、 耗散能量与运动方程决定的动能、 势能、 耗散能量分别相等的
$ 4 # #, 4% 2 , 3
$4045$5 ]# $ 5 # #, 5% 2 , 3
# ( 023 + 032 ) !

矩阵微积分基础知识

矩阵微积分基础知识

矩阵微积分基础知识矩阵微积分是数学中重要的分支之一,它将矩阵理论与微积分方法相结合,为解决实际问题提供了强大的工具。

本文将介绍矩阵微积分的基础知识,包括矩阵的定义、矩阵的运算、矩阵的微分和积分等内容,帮助读者更好地理解和应用矩阵微积分。

一、矩阵的定义矩阵是一个按照长方阵列排列的数,是数的一个矩形排列。

一般形式为m×n的矩阵,其中m表示矩阵的行数,n表示矩阵的列数。

矩阵通常用大写字母表示,如A、B、C等。

矩阵中的每一个元素都可以用下标表示,如Aij表示矩阵A中第i行第j列的元素。

二、矩阵的运算1. 矩阵的加法:对应位置的元素相加,要求两个矩阵的行数和列数相等。

例如,设矩阵A = [1 2 3; 4 5 6],矩阵B = [7 8 9; 10 11 12],则A + B = [8 10 12; 14 16 18]。

2. 矩阵的数乘:矩阵中的每个元素乘以一个数。

例如,设矩阵A = [1 2; 3 4],数k = 2,则kA = [2 4; 6 8]。

3. 矩阵的乘法:矩阵乘法不满足交换律,要求左边矩阵的列数等于右边矩阵的行数。

例如,设矩阵A = [1 2; 3 4],矩阵B = [5 6; 7 8],则AB =[19 22; 43 50]。

三、矩阵的微分矩阵的微分是矩阵微积分中的重要内容,它可以帮助我们求解矩阵函数的导数。

设矩阵函数F(X) = [f1(X), f2(X), ..., fn(X)],其中X是一个矩阵变量,fi(X)表示矩阵X的第i个元素函数。

则矩阵函数F(X)的微分定义为:dF(X) = [df1(X), df2(X), ..., dfn(X)]其中dfi(X)表示fi(X)对X的微分。

矩阵函数的微分满足线性性质和Leibniz法则。

四、矩阵的积分矩阵的积分是矩阵微积分中的另一个重要内容,它可以帮助我们求解矩阵函数的不定积分和定积分。

设矩阵函数F(X) = [f1(X),f2(X), ..., fn(X)],则矩阵函数F(X)的不定积分定义为:∫F(X)dX = [∫f1(X)dX, ∫f2(X)dX, ..., ∫fn(X)dX]其中∫fi(X)dX表示fi(X)对X的不定积分。

风险矩阵法(LS)判断准则

风险矩阵法(LS)判断准则
显著危险
高度危险
极其危险
3
稍有危险
轻度危险
显著危险
显著危险
高度危险
2
稍有危险
轻度危险
轻度危险
轻度危险
显著危险
1
稍有危险
稍有危险
稍有危险
轻度危险
轻度危险
1
2
3
4
5
(附录D和附录E中人员伤亡、直接经济损失情况仅供参考,不具有确定性,可根据各企业风险可接受程度进行相应调整。)
4
危害的发生不容易被发现,现场没有检测系统,也未发生过任何监测,或在现场有控制措施,但未有效执行或控制措施不当,或危害发生或预期情况下发生
3
没有保护措施(如没有保护装置、没有个人防护用品等),或未严格按操作程序执行,或危害的发生容易被发现(现场有监测系统),或曾经作过监测,或过去曾经发生类似事故或事件。
2
危害一旦发生能及时发现,并定期进行监测,或现场有防范控制措施,并能有效执行,或过去偶尔发生事故或事件。
1
有充分、有效的防范、控制、监测、保护措施,或员工安全卫生意识相当高,严格执行操作规程。极不可能发生事故或事件。
事件后果严重性(S)判别准则
等级
法律、法规
及其他要求
人员
直接经济损失
停工
企业形象
5
违反法律、法规和标准
死亡
100万元以上
部分装置(>2套)或设备
重大国际影响
4
潜在违反法规和标准
丧失劳动能力
50万元以上
2套装置停工、或设备停工
行业内、省内影响
3
不符合上级公司或行业的安全方针、制度、规定等
截肢、骨折、听力丧失、慢性病

线性微分方程组的解法和矩阵法

线性微分方程组的解法和矩阵法

线性微分方程组的解法和矩阵法线性微分方程组和矩阵法是高等数学课程中非常重要的主题,也是应用数学研究中的基础。

本篇文章就线性微分方程组的解法和矩阵法进行探讨。

1. 线性微分方程组的基本概念线性微分方程组是由一系列的线性微分方程组成的方程组,可以用矩阵的形式表示。

例如:$$x^{'}=Ax$$其中,$x=(x_1,x_2,\cdots,x_n)$ 是一个 $n$ 元向量,$A=(a_{ij})_{n\times n}$ 是一个 $n\times n$ 的矩阵,$x^{'}=(x_1^{'},x_2^{'},\cdots,x_n^{'})$ 是 $x$ 的导数。

2. 线性微分方程组的解法对于线性微分方程组,其解法可以分为两种:一种是齐次线性微分方程组,即 $Ax=\textbf{0}$ 的解法,另一种是非齐次线性微分方程组,即 $Ax=b$ 的解法。

2.1 齐次线性微分方程组的解法对于齐次线性微分方程组 $Ax=\textbf{0}$,我们可以先求出其通解 $x=c_1x_1+c_2x_2+\cdots+c_nx_n$。

其中,$x_1,x_2,\cdots,x_n$ 是该方程的基础解系,$c_1,c_2,\cdots,c_n$ 是任意常数。

求基础解系 $x_1,x_2,\cdots,x_n$ 的方法可以分为两种:一种是代数法,使用高斯消元法将矩阵 $A$ 化为最简形,然后就可以求出基础解系;另一种是矩阵法,使用矩阵的特征根和特征向量来求解基础解系。

2.2 非齐次线性微分方程组的解法对于非齐次线性微分方程组 $Ax=b$,其解法可以分为两步:第一步是求出其通解 $x_h=c_1x_1+c_2x_2+\cdots+c_nx_n$,其中$x_1,x_2,\cdots,x_n$ 是 $Ax=\textbf{0}$ 的基础解系,$c_1,c_2,\cdots,c_n$ 是任意常数;第二步是求出特解 $x_p$,将特解和通解相加即可得到非齐次线性微分方程组的一般解。

矩阵微分(变分)法

矩阵微分(变分)法

a12 (t) M
L a1n (t) OM
ù ú ú
=
éëai j (t)ùûnm
an2 (t) L ann (t)úû
定义它对 t 的导数为
dA(t)
é ê ê
da11 (t dt
)
dt
@ê M
ê ê
dan1
(t
)
êë dt
da12 (t) dt
L
da1n (t) dt
ùT ú ú
M O Mú
dan2 (t) dt
( ) X = AT AAT -1 b
7
( ) 再由
d dX T
é dF ( X
ê ë
dX

ú û
=
d dX T
2 X + AT l
= 2I > 0
可知所得的解是最小范数解。
=
éêa1T ê
(t )b1 (t ) M
L O
a1T
(t
)bl M
(t
)
ù ú ú
=
éëaiT
(t) × bj (t)ùûnl
êëanT (t)b1(t) L anT (t)bl (t)úû
从而根据矩阵导数定义 2,有
d dt
[
A(t) ×
B(t)]
=
d dt
éëaiT
(t) × bj
(t ) ùû n l
(t M
)
ù ú ú
êëan1(t) an2 (t) L anm (t)úû
êëanT (t)úû
B(t) = éêêb11M(t)
b12 (t) M
L O
b1l (t) M

蛋白质与脂质相互作用的研究技术

蛋白质与脂质相互作用的研究技术
脂质亲和法蛋白质与脂质相互作用也可以通过脂质亲和法进行分离分析该法类似于蛋白质蛋白质相互作用研究中的牵出pulldown技术首先将脂558知识介绍生命的化学2006年26卷chemistryoflife2006266质与分离介质比如琼脂糖偶联构建含特定脂质的亲和柱亲和介质然后将待分析的蛋白质溶液和偶联有特定脂质的亲和介质保温用缓冲液洗去未与脂质结合的蛋白质最后用sdspage上样缓冲液将结合蛋白洗脱进行sdspage检测也可以进行银染或转移至纤维素薄膜上结合免疫学方法或氨基酸序列测定对洗脱蛋白质进行确定
· 556 · 文章编号: 1000- 1336(2006)06- 0556- 04
《生命的化学》2006 年 26 卷 6 期 CHEMISTRY OF LIFE 2006, 26(6)
●Te chnique s a nd Me thods
蛋白质与脂质相互作用的研究技术
王丽丽 肖 虹 石亚伟
( 教 育 部 化 学 生 物 学 重 点 实 验 室 、 山 西 大 学 生 物 技 术 研 究 所 , 太 原 030006 )
目前蛋白质和脂质的相互作用研究方法主要 有 : 蛋 白 质- 脂 质 覆 盖 法 (protein lipid overlay as- say, PLO)、 脂 质 微 矩 阵 法 (lipid microarray)、 脂 质- 蛋 白 质 共 沉 降 法(lipid- protein co- sedimentation assay)、 电 泳 迁 移 分 析 法 (electrophoretic migration shift assay)、 等 温 滴 定 量 热 法 (isothermal titration calorimetry, ITC)、 凝 胶 过 滤 法(gel filtration- based approach)、表面等离子共振法(surface plasmon res- onance, SPR) 和 脂 质 亲 和 法(lipid affinity column) 等[1, 3, 4]。 1. 蛋白质- 脂质覆盖法(PLO)
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

微矩阵上的分子相互作用Edwin Southern, Kalim Mir & Mikhail Shchepinov 章承芝译固体支持物上的核苷酸探针的结构特征以及它们与溶液中目标分子相互作用的分子基础都可以用杂交过程来解释。

我们讨论寡核苷酸矩阵是如何成为大规模研究这些相互作用的强大工具的,因为运用传统的分析手段进行这种研究是不可能的。

DNA微矩阵是一系列利用DNA双螺旋优势特征--双链互补--的技术中最新的一个。

这种拥有高度复杂结构的分子最显著的特征在于两条链分开后可以精确的重新结合。

早期对于变性和复性的研究表明,DNA 溶液的Tm值取决于G+C的含量和盐浓度,复性的速率依赖于序列的复杂性。

固体支持物的引入大大扩大了这个方法应用的范围,开创了基于矩阵的方法。

这个方法源于发现单链DNA能够与硝酸纤维膜牢固结合,从而防止DNA链与链之间的结合,但允许与互补的RNA杂交。

这个简单的方法使研究者获得了大量基础性的数据。

比如,它被用于测量诸如真核生物中核糖体RNA和tRNA等重复基因的拷贝数,检测在放大等过程中多个拷贝中的变化。

另外,在获得DNA克隆之前,进行密度梯度离心时有助于核糖体RNA基因的纯化。

克隆获得后,还可帮助研究者找到包含特定序列的克隆。

这是"印迹"方法的直接起源。

第一个"印迹"方法就是用滤膜杂交并结合限制性切割后的凝胶电泳的。

与微矩阵更相关的方法是"斑点印迹法"。

斑点印迹法的自动化和小型化显示了如何大规模应用分子杂交开发从基因组项目中获得的数据。

斑点印迹法和DNA微矩阵的主要区别在于是否应用无渗透、刚性的支持物例如玻璃就是其中之一。

这类支持物比多孔膜和凝胶具有很多实际的优势。

因为液体不能渗透支持物的表面,目标核苷酸就不会扩散到孔里,而可以立刻与探针结合,这大大提高了杂交的速率。

尽管就算用不渗透的支持物,混合对于达到杂交的最大速率也很重要。

杂交后清洗的步骤同样不受扩散的影响,因而加速了进程,提高了重复使用性。

玻璃支持物的平滑、坚硬和透明有助于图像的获得和处理,因为探针的位置可以比在小的柔软的膜上更容易确定。

高精度图像对微型化很关键,而微矩阵能做到。

物理刚性使流动的细胞能够结合,从而实现高通量分析所必须的自动化处理。

这些实际的优越性被应用于每一种矩阵,包括克隆的DNA、PCR产物以及合成的寡核苷酸。

用不渗透的支持物制造的矩阵从理论上更能被接受:因为此时,由于溶剂和溶质扩散出或入孔以及目标进入孔时发生的多重相互作用,再不会使分子相互作用的动力学复杂化。

另外,能够很好的确定短探针的依附处。

基于以上原因,我们将不详细讨论探针和支持物非共价结合的矩阵以及用多孔支持物制造的矩阵,尽管它们也有许多用途。

我们集中研究寡核苷酸一端与非渗透性支持物共价结合的矩阵。

目前,微矩阵主要的大规模应用是相对表达分析。

另一个应用是在基因组规模上分析DNA的变异,其前景正在日益呈现。

这两个应用有许多相同的要求,但在一些重要的方面不同。

对DNA变异分析来说,最重要的是通过探针和目标的相互反应能够区别出仅仅一个错配的碱基对。

只有短探针才能达到如此高的分辨率。

而对检测表达水平来说,序列的分辨就不是非常重要了,这时在广泛的动力学范围内,定量测量就很重要。

其它的应用还包括分子相互作用的描述和有效反义试剂的发现。

矩阵制作矩阵制备有两种方法:(1)原位合成,(2)预先合成寡聚核甘酸后附着。

二者相比,前者有如下优点:产量高,在支持物表面也比较稳定。

这提供了组合的策略:制造大的寡核苷酸矩阵可以用很少的耦合步骤。

对于原位合成,有三种方法可用于将寡核苷酸直接合成到矩阵支持物的确定位置上。

光化学去保护方法由Robert Lipshutz和同事在文中阐释。

用喷墨法将核苷酸前体传递到支持物表面的方法已经被一些公司开发了,但还没有商业化的产品。

这两种方法可以制造"随意"的芯片,就是说,寡核苷酸可以在任何位置组成任何序列。

合成也可以通过物理性的限制使其定位。

比如,用掩蔽物或物理的屏障。

通过这种方法,包含许多不同的、相关的序列的复杂矩阵可以通过组合方法用耦合步骤制备。

通过垂直的交叉的通道覆盖前体,以制备所有序列长度确定的芯片:圆形的或钻石形的反应腔通过将前体置于支持物表面一系列覆盖的区域,用以制作"扫描"或"砖瓦途径"的矩阵。

这些矩阵对研究杂交行为很有帮助。

评价在表面的寡核苷酸的质量很困难。

材料的量--最密集的堆积为约10pmol每平方毫米--非常小。

用可剪切的接头分析寡核苷酸显示其质量很高。

借鉴材料科学的方法,非破坏的测量方法可以用椭圆计或干涉计进行。

这些技术可以用于常规质量控制,但是还不能用于大多数生物实验室。

另一方面,预先合成的寡核苷酸可以在它们连接到表面上之前测定,但是从经济方面考虑目前这个方法还不适于制作大的矩阵。

当需要大量相同探针的矩阵的时候,沉淀的方法可能比原位合成的方法经济。

沉淀的方法同样适用于可以通过PCR产物提供的长的序列。

制作定点矩阵的技术比原位合成更容易实现。

支持物对于杂交效率的影响寡核苷酸无法直接与硅化玻璃表面的硅烷基团或大多数塑料耦合,因此用能启动寡核苷酸链生长的基团使支持物表面功能化是很必要的。

寡乙烯乙二醇被用于玻璃,聚丙烯在对等离子体放电中易被胺基化。

将寡核苷酸的一端系于表面被认为对与溶液中目标形成双链有影响。

那些离表面近的碱基比远端的碱基难于接近。

在玻璃或聚丙烯表面原位合成的寡核苷酸高度密集,以至于引起了空间位阻。

意外的,用于对碱基去保护的氨从玻璃表面上充分溶解而避免了空间位阻,留下了发出杂交信号足够的空间。

氨没有从聚丙烯上去掉寡核苷酸。

这个例子说明空间位阻影响底物和探针的反应。

通过在表面和寡核苷酸之间引入间隔物,杂交效率放大了两个数量级。

间隔物的长度有显著的影响,但是超过一个最佳长度,杂交效率就会下降。

可能是因为寡核苷酸溶解于连接物而与目标不易接近。

显然的,对于制造矩阵的材料应进一步研究,特别是对于"接触化学"的深入研究。

碱基组成和顺序的影响在通常用于杂交的溶剂中,碱基组成对杂交的效率有很大的影响。

这个影响毫无疑问归因于与G:C的相对含量。

短的寡核苷酸可能在组成上非常不同,同样长度的寡核苷酸的Tm值会相应的有很大的不同。

大致的规则如下:增加一个A:T碱基对Tm值上升2℃,较之G:C对增加4℃。

矩阵充分提供了分析大量序列相互作用的机会。

对一个包含所有256个八嘌呤序列的矩阵和一个包含组成为A(C,T)8A的十寡核苷酸的目标进行研究,发现高TMACl浓度对杂交效率有很大的影响。

在1M NaCl 下,只有在G8提供好的杂交效率的情况下,A8的杂交才仅仅可测。

但在3-4M TMACl,所有杂交的效率提高,对A8的影响最大。

在这种溶剂中,效率最大可相差5倍。

研究还显示末端的G:C对对效率促进最大:在相同的八寡核苷酸组成中,GN6G>GN6A>AN6G>AN6A。

这个研究表明:同样组成但顺序不同的序列效率不同。

顺序的影响已被预料到,被认为是由于碱基堆积的相互作用,这种作用依赖于最近相邻的碱基。

碱基堆积对配对的稳定性影响很大。

更微妙的,在目标比探针寡核苷酸长的情况下,堆积在双链末端的非配对碱基对效率有很大的影响。

目标双链的形成和折叠双链的形成是可逆的。

即使是相对短的双链,10-mer或更长,再适于矩阵的杂交条件下(比如30℃以下,1M NaCl或3M TMACl),链分开的速率非常低。

这样,效率的不同并不是因为双链整体稳定性的不同。

而是正反向反应速率的不同。

目标序列的不同区域在杂交效率上有巨大差别。

为了找到其根本原因,我们必须研究双链形成的机制。

双链所有的碱基对不可能都是自动形成的:更有可能的是进程开始于一个由少数碱基对形成的核子复合物。

双链随之象拉链一样,一个又一个碱基对相继形成。

在任何时候,反应都可能朝两个方向进行--配对或分开。

如果碱基是互补的,而且可以自由配对,双链的形成很有可能进行下去;如果碱基是不互补的,或空间结构阻碍了碱基对的形成,拉链作用被阻碍,可能会导致核子复合物分开。

双链的形成以及效率,由核子复合物和拉链过程中双链不可能分开处的中间物的稳定性决定。

有证据表明一些因素对这些早期反应有影响,但还没有进行系统研究。

在很多情况下,如果矩阵上的探针很短,而目标很长。

启动必定在长链内部的位点开始。

目标上核子作用的位点由二级结构决定。

因为分子内部的碱基配对在用于寡核苷酸杂交的非苛刻情况下是稳定的。

这个观点与已知二级结构的tRNA的杂交行为是一致的。

只有四个区域对双链的形成开放,每个茎的边才会与探针杂交。

更重要的是,在所有四个茎的末端,都有未配对的碱基堆积。

双链形成机制在这个实验中显示:核子作用开始于非配对碱基,通过链的取代延伸如茎部。

这个重要的结构特征看上去为:结合入杂交双链的碱基已经在自然的tRNA中形成螺旋的构象。

杂交双链形成与对已存在的结构干扰最小有关。

目标结构的影响一般与和定点克隆或PCR产物的杂交无关,因为这些在更苛刻的条件下进行的反应将熔解大多数二级结构。

无论如何,这些对于机制的理论思考对寡核苷酸矩阵杂交的实际应用很有意义。

目标二级结构的最小化大多数的分析是针对复杂目标的,如人的基因组DNA。

一般来说最好能降低序列的复杂性,以在一个合理的杂交时间里产生一个好的杂交信号。

因此,通过PCR放大成了目标制备一个标准的步骤。

大多数人所倾向的用PCR方法制备目标单链的过程,是在一个引物中包含一个针对RNA聚合酶的启动子,这样RNA可以被转录。

正如我们所见,RNA 有稳定的二级结构会影响杂交,必须设法降低这种影响,如将RNA降解为片段,最好与矩阵上的寡核苷酸长度相近,而对于DNA目标来说这不是问题。

另外,如果引物由于树枝状帽子等基团,而结合受阻,PCR产物可以通过外切酶单链化。

聚合酶和连接酶的延伸DNA聚合酶和连接酶提高并补充了双链杂交的鉴别能力。

众所周知,寡核苷酸靠近中心的错配对双链稳定性有很强的的影响,而在两端的错配则影响较小,因此用杂交鉴别的难度较大。

与之相比,聚合酶和连接酶受到末端错配的影响大于中间的错配。

在底物是ddNTP时,聚合酶用已杂交的寡核苷酸作为引物进行延伸反应,酶只结合延伸与目标下一个的碱基配对的一个碱基。

这次过程被认为是微型测序,或遗传点分析。

利用连接酶的相关方法已经被开发并用于矩阵。

热稳定酶可以克服反应只能在低温下进行,而低温会造成目标分子内部折叠的问题。

热稳定聚合酶和连接酶可以在高温下行使功能,而此时寡核苷酸双链寿命很短。

显然的,酶稳定过渡双链或在双链短暂寿命中能足够快的形成产物。

相关文档
最新文档