竹叶多糖提取工艺及体外抗氧化性研究
竹叶多糖提取分离及体外抗氧化自由基的研究
第49卷第6期2021年3月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.49No.6Mar.2021竹叶多糖提取分离及体外抗氧化自由基的研究周先泰陈蓉1,齐娜▽(1桂林医学院药学院，广西桂林541000；2南方医科大学中西医结合医院，广东广州510315)摘要:探讨竹叶多糖含量及体外抗氧化能力。
水提醇沉法得到竹叶粗多糖。
Sevag法脱蛋白和D101大孔树脂分离纯化, DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯脐)法和邻苯三酚法对粗多糖抗氧化性进行研究。
研究发现粗多糖收率0.525%,蛋白含量占粗多糖37.71%。
0.66mg/mL对DPPH自由基清除效果最大，清除率55.23%。
多糖浓度0.107-0.301mg/mL范围，对超氧自由基的清除效果逐渐提升。
结果表明水提醇沉法提取竹叶粗多糖产率较好，具有较好的体外抗氧化活性。
关键词：竹叶多糖；水提醇沉法；抗氧化；DPPH法；邻苯三酚法中图分类号：R285.5文献标志码：B文章编号：1001-9677(2021)06-0080-05Extraction and Separation of Polysaccharides from Bamboo andStudy on Antioxidant Free Radicals in Vitro*ZHOU Xian-tai1,CHEN Rong1,QI Na12(1College of Pharmacy,Guilin Medical University,Guangxi Guilin541000；2Integrated Hospital ofTraditional Chinese Medicine,Southern Medical University,Guangdong Guangzhou510315,China)Abstract:The content of polysaccharide and antioxidant capacity in vitro were studied.The crude polysaccharide of bamboo was obtained by water extraction and alcohol precipitation.Sevag method was used to take off the protein and D101 macroporous resin to purification,the antioxidant activity of crude polysaccharides was studied by DPPH(1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine)and o-phenylene three phenol method.The yield of bamboo polysaccharide by water extraction and alcohol precipitation was0.525%,and protein content accounted for37.71%of crude polysaccharide.When the solubility of crude polysaccharide was0.66mg/mL,the scavenging effect of DPPH radical was the highest,which was55.23%. When the solubility of crude polysaccharide was in the range of0.107~0.301mg/mL,the scavenging effect on superoxide radical was gradually improved.The results showed that the yield of crude polysaccharide from bamboo leaves was better by water extraction and alcohol precipitation,and crude polysaccharides had good antioxidant activity in vitro.Key words：Lophatherum Gracile Brongn polysaccharide;water extraction and alcohol precipitation；antioxidant; DPPH method；0-phenylene three phenol method竹子为禾本科(Gramineae)植物B,广泛分布于亚非大陆、南北美洲及太平诸岛地区，我国竹林资源占世界竹林资源的3%⑵。
淡竹叶多糖的提取及体外抗氧化性研究(1)
℃预热的邻笨三酚溶液，迅速混匀，在５ ｍｉｎ内，每隔３０ ｓ在
４２０ ｎｍ处测定溶液的吸光度。计算吸光度随时间的变化
率，并与空白液比较，便可得出被测物抑制超氧阴离子积累
作用的能力。
清除率计算式：清除率，＝口ｆ字Ｆｌ、×１００％
、
ｒ０
／
式中：Ｆ０和Ｆ，分别表示空白溶液和被测溶液的吸光度
随时间的变化率。
验研究［Ｊ］．中国老年学杂志，２００１，２１（６）：４５４－４５５． ［３］李巧云，居红芳，翟春．五味子粗多糖提取工艺的研究［Ｊ］．
食品科学，２００４，２５（５）：１０５－１０９．
［４］ Ｍａｒｋｌｕｎｄ Ｓ，Ｍａｒｌｄｕｎｄ Ｇ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ａｎｉｏｎ Ｒａｄｉ—
２００８年３月 第３０卷第３期
中成药
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｍａｒｃｈ ２００８ Ｖ０１．３０ Ｎｏ．３
由表可以看出，３种溶剂法所得五味子多糖对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、肺炎白氏克雷 菌、枯草杆菌等几种菌种的生长均有不同程度的抑制作用， 其中对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、肺炎白氏克雷菌的抑制 作用较强，且３种溶剂法所得五味子多糖对不同菌种的抑制 作用没有显著性差异。其中阴性对照实验可知溶剂蒸馏水 对几种菌种均无任何抑制作用，阳性对照实验显示０．０８ ｍｇ／ ｍＬ的多糖对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、 肺炎白氏克雷菌、枯草杆菌均优于２０００ Ｕ／ｍＬ。１的青霉素 钠，而对大肠杆菌的抑制作用却是２０００ Ｕ／ｍＬ。的青霉素钠 优于０．０８ ｍｇ／ｍＬ的多糖。 ３结论
Ｍａｒｃｈ ２００８ Ｖ０１．３０ Ｎｏ．３
氧化钠，考马斯亮蓝Ｇ抛，牛血清蛋白（上海生化试剂厂），以 上试剂均为分析纯。
竹叶黄酮的提取、检测、分离、抗氧化活性及构-效关系的研究
摘要
竹叶黄酮是我国新开发的一种植物类黄酮制剂，由于其具有优良的抗自由基、 抗氧化、抗衰老、及保护心血管等方面的生物学功效，目前已受到国内外市场的 广泛关注。为了全面考察竹叶黄酮的性质，本论文采用天然的刚竹属毛竹叶为原 料，对竹叶黄酮的提取、含量检测、分离纯化、抗氧化活性及构-效关系等方面作 了较系统的研究，主要研究内容和实验结果如下：
II
英文摘要
the antioxidant activity-structure relationship of flavonoids. From the above series experiments, it was proved that the bamboo leaves
flavonoids was a excellent flavonoids prepration. The research provided important theoretical and pratical guidances for exploiting and using of bamboo resource. Key words: bamboo leaves flavonoids, extraction, enrichment, antioxidant,
近年来，自由基生命科学的进展，使具有强抗氧化和清除自由基作用的类黄 酮受到空前的重视。二十世纪 80 年代以来，有研究报导[4-5]从竹叶中提取食品防腐 剂、杀菌剂和叶绿素等；90 年代以来，人们开始关注竹叶中黄酮类化合物的存在 及其生物学活性[6-9]。1998 年，我国研究人员在借鉴国内外植物黄酮提取方面的各 种专利技术的基础上，结合竹叶中黄酮类化合物存在的特点，创造了经济、适用、 独特的提取工艺，获得了国家发明专利，并率先在浙江实现了产业化生产，至此， 竹叶黄酮提取物正式面世。同年，(淡)竹叶被卫生部正式批准列入了“药食两用的 天然植物名单”[10]。1999 年竹叶黄酮获国家级新产品证书，其衍生产品---竹康宁 胶囊获卫生部保健食品批文，竹叶啤酒和竹叶饮料等也纷纷上市[11]。
竹叶多糖提取、分离检测技术の研究
原液１２３４５６圈多糖■蛋白质１２３４５６次数＋多糖＋蛋白质图４．３竹叶多糖脱蛋白试验结果Ｔａｂ．４．３ＲｅｓｕｌｔｏｆｄｅｐｒｏｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎｏｎＢＰＳ３．２竹叶多糖乙醇分级沉淀结果竹叶多糖经不同浓度的乙醇沉淀分别得到初步分级产物ＢＰＳ３０、ＢＰＳ５０、ＢＰＳ７０，其得率分别为５．０％、３７．６％、２０．６％。
３．３竹叶多糖ＤＥＡＥ洗脱结果由图４．４洗脱曲线可知，竹叶多糖经Ｈ２０、０．０５Ｍ、０．１Ｍ、Ｏ．３Ｍ、０．５Ｍ的ＮａＣｌ溶液梯度洗脱后得到４个级份，即ＢＰＳｌ（Ｈ２０）、ＢＰＳ２（Ｏ．１ＭＮａＣｌ）、ＢＰＳ３（Ｏ．３ＭＮａＣｌ）、ＢＰＳ４（Ｏ．５ＭＮａＣｌ），各级份经减压浓缩，透析袋透析，冷冻干燥后，得率分别为４６．４５％、４．３１％、１．６２％、０．５３％，其中ＢＰＳ２、ＢＰＳ３、ＢＰＳ４得率太低，且随着ＮａＣｌ浓度的增加，各级份的颜色逐步加深，所以本文仅对ＢＰＳｌ做进一步的研究。
对ＢＰＳｌ进行ＤＥＡＥ．纤维素柱层析（中２．６×２０ｅｍ），用Ｈ２０、０．１ＭｎａＣｌ溶液为洗脱剂进行洗脱，每份收集５ｍｌ，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ．。
用苯酚．硫酸法测定各洗脱液的吸光度，以管号为横坐标，吸光值为纵坐标作图，结果见图４．５。
由图４．５洗脱曲线可看出，竹叶多糖ＢＰＳｌ经Ｈ２０、Ｏ．１ＭＮａＣｌ溶液梯度洗脱后得到２个级份，即ＢＰＳｌｌ（Ｈ２０）、ＢＰＳｌ２（Ｏ．１ＭＮａＣｌ），将ＵｚＯ洗脱的高峰部分合并，减压浓缩，冷冻干燥，得到白色粉末状竹叶多糖ＢＰＳｌｌ。
４２２８６４２ｌ２札ｍ０ｍｍｎｍＯ展开剂：乙酸乙酯：甲醇：冰醋酸：Ｌｋ（１２：３：３：２）。
显色剂为苯胺一二苯胺８５％磷酸液，喷洒后于１１０℃加热烘烤１０ｍｉｎ显色。
由图５．１可初步判断ＢＳＰｌｌｌ中含有Ｄ一甘露糖、Ｄ一半乳糖、葡萄糖、Ｌ（＋）一阿拉伯糖等。
图５．１竹叶多糖水解液薄层色谱图Ｆｉｇ５．１ＴＬＣｇｒａｐｈｏｆＢＰＳ’ｓｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎ从左到右依次为：Ｄ．甘露糖、Ｄ．术糖、Ｄ．半乳糖、样１、样２、葡萄糖、Ｌ（＋）．阿拉伯糖２．２．２ＧＣ色谱分析取多糖水解样１５ｍｇ和标准单糖各ｌＯｍｇ，依次加入盐酸羟胺１０ｍｇ，吡啶０．５ｍＬ，９０℃水浴反应３０ｍｉｎ并振荡，取出后冷却至室温，加入醋酸酐０．６ｍＬ９０℃水浴继续反应３０ｒａｉｎ进行乙酰化，生成具有挥发性的糖腈乙酸酯衍生物，将反应产物直接进行气相色谱分析，并根据气相色谱各峰的面积比计算出单糖重量百分比。
竹叶多糖的提取及抗氧化作用研究
竹叶多糖的提取及抗氧化作用研究马森【摘要】[目的]研究竹叶多糖的抗氧化作用.[方法]从提取竹叶黄酮后的残渣中提取竹叶多糖.用抑制Fenton反应产生·OH使溴甲酚紫褪色法测定竹叶多糖清除·OH 的作用,以硫脲为对照.用清除DPPH法测定竹叶多糖清除自由基的作用,以Vc为对照.[结果]竹叶多糖的提取率为1.15％；纯度达到83.33％.竹叶多糖的剂量从0.01 mg增加到0.08 mg,对·OH清除率从16.97±0.87(％)增加到63.89±0.66(％)；剂量再增加到0.09 mg,清除率不再增加.硫脲的剂量从0.01 mg增加到0.08 mg,对·OH清除率从13.89±4.17(％)增加到91.62±6.30(％)；剂量增加到0.09 mg时,清除率也不再增加.剂量从0.02 mg到0.09 mg,硫脲对·OH的清除作用均显著高于同剂量竹叶多糖.竹叶多糖的剂量从0.01 mg增加到0.75 mg,对DPPH的清除率从11.56±1.13(％)增加到73.66±0.28(％),剂量增加到1.0 mg时,清除率不再增加；Vc的剂量从0.01 mg增加到0.5 mg,对DPPH的清除率从18.19±0.40(％)增加到89.52±0.28(％),剂量增加到0.75 mg时,清除率也不再增加；Vc的作用均显著高于同剂量的竹叶多糖.[结论]竹叶多糖对清除·OH和DPPH有较好的作用.%Abstract [Objective] To study the antioxidant functions of polysaccharide from bamboo leaf. [Method] After flavonoids were extracted, the polysaccharide was extracted from bamboo leaf. Function of removing · OH by polysaccharide from bamboo leaf was determined with Fenton method producing · OH and bromcresol purple was faded with thiourea as the control. Function of removing free radicals was determined with method of removing DPPH, the control was Vc. [Result] The extraction rate of polysaccharide was 1, 15% , purity of polysaccharide was 83.33%.The dose of polysaccharide increased from 0.01 mgto0.08mg, the clearance to · OH increased from 16.97 ±0. 87(% )to 63.89± 0.66 (% ), but dose increased to 0.09mg, the clearance will not increase. Dose of thiourea increased from 0.01 mg to 0.08 mg, the clearance to · OH increased from 13. 89 ±4.17(% )to 91.62 ±6. 30(% ). When dose increased to 0.09 mg,the clearance will not increase,and dose of thiourea increased from 0.02 mg to 0.09 mg, its function was marked higher than the same polysaccharide. The dose of polysaccharide increased from 0.01 mg to 0.75 mg,clearance to DPPH increased from 11.56 ±1. 13(% ) to 73.66 ±0. 28(%) ,but dose increased to 1.0 mg,clearance will not increase. Dose of Vc increased from 0.01 mg to 0. 5 mg,clearance to DPPH increased from 18. 19 ±0. 40(% ) to 89.52 ±0.28(% ) , when dose increased to 0.75 mg,the clearance will not increase,and its function was higher than the same polysaccharide markedly. [Conclusion] The polysaccharides from bamboo leaf have remarkable function of removing · OH and DPPH in vitro.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)029【总页数】3页(P14304-14306)【关键词】竹叶多糖;抗氧化;·OH;硫脲;DPPH;Vc【作者】马森【作者单位】武夷学院,茶学与生物系,福建省高校绿色化工技术重点实验室,福建武夷山354300【正文语种】中文【中图分类】S795;R285.5竹叶在我国有着悠久的食用和药用历史，其性淡、微涩、寒、味甘，具有清热利尿、明目解毒、止血、免疫调节、抗氧化、抗爱滋病和抑制肿瘤等功效，且无毒无害，可作为绿色食品进行开发。
淡竹叶多酚的提取纯化工艺优化、组分分析及体外抗氧化活性研究
淡竹叶多酚的提取纯化工艺优化、组分分析及体外抗氧化活性研究周文月;文语佳;周森林;杨明龙;时政【期刊名称】《食品安全质量检测学报》【年(卷),期】2024(15)1【摘要】目的确定淡竹叶多酚提取纯化工艺,分析主要成分及体外抗氧化活性。
方法采用超声辅助提取淡竹叶多酚,通过响应面实验确定最佳提取条件。
选取适合淡竹叶多酚纯化的大孔树脂,对纯化工艺参数进行优化。
通过高效液相色谱-质谱法(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)鉴定淡竹叶多酚的主要成分,并评价其体外抗氧化活性。
结果淡竹叶多酚的最佳提取工艺参数为:乙醇体积分数60%、超声功率500 W、料液比1:25(g/mL)、超声时间24 min及超声温度59℃,该条件下淡竹叶多酚提取量为8.01 mg/g。
淡竹叶多酚纯化工艺参数为:上样质量浓度6 mg/mL、pH 4、流速2 mL/min、解吸液为70%乙醇、解吸体积90 mL,纯化后的淡竹叶多酚纯度由12.86%提高到76.18%。
通过HPLC-MS鉴定出16种酚类成分,且纯化后多酚有较高的抗氧化活性。
结论本研究得到了淡竹叶多酚提取纯化工艺,得到的多酚纯化物有明显的抗氧化活性。
【总页数】10页(P254-263)【作者】周文月;文语佳;周森林;杨明龙;时政【作者单位】成都大学临床医学院/附属医院;川北医学院临床医学院【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.两种技术联用优化刺玫果多酚提取工艺及体外抗氧化活性研究2.莲衣粉多酚提取工艺优化及体外抗氧化活性研究3.小米糠多酚提取工艺优化与组分分析及抗氧化活性研究4.油橄榄果渣总多酚提取工艺优化及不同极性多酚的体外抗氧化活性研究5.荔枝壳多酚超声辅助双水相提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙竹竹叶多糖的提取及体外抗氧化研究
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提ENCE AND TECHNOLOGY 2013年 第 38卷 第 2期
漂洗蒸煮后可做笋丝，色泽金黄，深受欢迎。目 前云南所产的笋丝有很大一部分来自龙竹，且畅 销国内外[2]。 多糖又称多聚糖(Polysaccharide)，是由单糖缩 合成的多聚物，广泛分布于自然界中，是一类重 要的活性物质。20世纪50年代研究发现真菌多糖 具有抗癌效果，对多糖的化学、物理、生物学系 列的研究逐渐增多。目前已有报道的天然多糖化 合物约有300多种，广泛存在于植物、动物和微生 物组织中[3]。竹叶多糖是竹叶中含量极其丰富的营 养物质，对人体具有独特的保健功效，是一种具 有多种生理功能和开发价值的植物活性多糖。近 年来中国学者研究表明，竹叶多糖对S-180肿瘤具 有明显的抑制作用，从而证明其具有抗肿瘤以及 提高免疫力的作用[4]。 云南作为竹类资源大省，以丛生竹类为主的 竹叶资源极为丰富，研究和开发此项资源意义重 大。本研究利用响应面分析法对PDL的提取工艺 进行优化，并得出最佳的工艺条件，为PDL的开 发利用提供试验基础和数据。另外，通过对提取 液进行纯化得到精制PDL，来研究PDL体外抗氧化 作用，寻求其作为功能性抗氧化剂的可能，为龙 竹竹叶的综合开发应用提供理论基础。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 龙竹竹叶：西南林业大学校园内；葡萄糖、 浓硫酸、蒽酮、石油醚、氯仿、正丁醇、氢氧化 钠、盐酸：分析纯；AB-8大孔树脂；DPPH、硫 代巴比妥酸、亚油酸：阿法埃莎天津化学有限公 司；抗超氧阴离子自由基及产生超氧阴离子自由 基试剂盒、羟自由基测定试剂盒：南京建成生物 工程研究所。 1.2 仪器与设备 超微粉碎机：弘荃机械企业有限公司； LabTechUV1000/1100紫外分光光度计：北京博泰 科仪器有限公司；RE-52A旋转蒸发仪：上海亚荣 生化公司；BCD-196E/B海尔冰箱：海尔青岛股份 有限公司；HH-2型数显恒温水浴锅：国华电器有 限公司；SIGMA 3K15离心机：上海创萌生物科技 有限公司；DHG-9140电热恒温鼓风干燥箱：上海 一恒科学仪器有限公司；BT224S电子天平：北京 赛多利斯仪器系统有限公司。 1.3 方法
竹叶多糖的提取工艺
第27卷 第1期 吉首大学学报(自然科学版)V ol.27 N o.1 2006年1月Journal of Jishou University(Natural Science Edition)Jan.2006 文章编号:1007-2985(2006)01-0118-04竹叶多糖的提取工艺Ξ李胜华,郁建平(贵州大学生化营养研究所,贵州贵阳 550025)摘 要:目的:筛选竹叶多糖提取优化的最佳工艺.方法:以竹叶多糖为工艺筛选指标,采用正交实验设计方法筛选最佳提取工艺及其条件.结果:竹叶多糖最佳提取工艺为石油醚回流2h,滤渣用95%乙醇回流2h,再用30倍量的水回流3次浸提多糖.用Sevage法除蛋白,加入乙醇使含醇量为80%,于冰箱静置12h,得多糖沉淀.采用优化后的工艺提取竹叶多糖粗品的得率约0.51%.结论:采用该提取工艺,竹叶多糖的提取率较高.关键词:竹叶;多糖;提取工艺中图分类号:Q53 文献标识码:B据文献记载,竹叶性淡,微涩、寒,味甘、苦,具有清热利尿、明目解毒和止血的功效.《本经逢原》载:“竹叶兼行肌表,故能疗疮杀虫.竹茹专清胃腑,故能止呕除烦”.[1]竹叶之所以对人体具有医疗和保健作用,是由于其中功能性成分的存在,除了黄酮类化合物,竹叶多糖是其中一种重要的生理活性成分.1 仪器、试剂与材料仪器:uv-1900紫外可见分光光度计(北京谱析通用)、真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)、电子天平(梅特勒-托利多有限公司).试剂:葡萄糖(购于中国药品生物制品检定所);石油醚、乙醇、乙醚、丙酮、苯酚均为分析纯.实验材料:南竹(属于禾本科竹亚科),采于湖南省株州市攸县.2 方法与结果2.1改良苯酚-硫酸法测定竹叶多糖的得率2.1.1标准曲线的绘制 精密称取葡萄糖0.0106g,用蒸馏水配制成100m L.分别吸取0.1,0.2,0.4,0.6, 0.8,1.0m L置25m L容量瓶中,稀释至刻度,再精吸2.0m L于试管中,另取2.0m L蒸馏水作空白对照.各管加入苯酚[2]试液1.0m L,摇匀,迅速滴加浓硫酸各5.0m L,摇匀后放置5min,置沸水中加热15min,冷至室温后,于490nm处测定吸光度.以质量浓度量为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程A =0.0516c+0.056(相关系数r=0.9992),葡萄糖在1.06～10.60mg・L-1之间线性关系良好.2.1.2提取物中多糖得率测定 精密称取提取物约10mg,加蒸馏水定容至100m L,取出0.5m L置于10 m L具塞试管中,按2.1.1节的操作,测得样品吸光度值,根据标准曲线求多糖的得率.公式为:粗多糖得率(%)=沉淀质量×多糖质量浓渡÷称样量×100%.2.2提取工艺的研究多糖的提取工艺一般都经以下过程:石油醚回流脱脂;乙醇回流脱色和除去小分子的糖;酸性、碱性或Ξ收稿日期:2005-10-21作者简介:李胜华(1978-),男,湖南省株州市人,硕士研究生,主要从事生物活性成分的检测与分离研究;郁建平(1956-),男,贵州省铜仁人,贵州大学生化营养研究所教授,博士生导师,主要从事生物活性成分的检测和分离及农药学研究.中性水浸提;Sevage 法除去浓缩液中的蛋白质;乙醇沉淀得多糖[3].由此,筛选和优化实验过程如下.2.2.1单因素实验 以水为溶剂,以固液比、时间和提取次数为考察因素进行单因素实验.(1)固液比对提取率的影响.准确称量竹叶2g ,选取4种固液比,在温度为80℃的条件下提取3h ,测定多糖的得率如表1所示.表1 固液比对多糖得率的影响固液比Π(g ・m L -1)1∶101∶201∶301∶40多糖得率Π%0.350.420.480.49由表1可见,随着固液比的增大,多糖的得率也逐渐增大,但当固液比为1∶40时,多糖的得率不明显,所以该实验中确定的正交实验水平为1∶20,1∶30,1∶40.(2)提取时间对提取率的影响.其他条件不变,选取固液比为1∶30,在4个时间段下进行提取,测定多糖的得率如表2所示.表2 提取时间对多糖得率的影响提取时间Πh 4567多糖得率Π%0.350.430.490.50由表2可见,随着提取时间的增大,多糖的得率也逐渐增大,但当提取时间达到6h 时,多糖得率趋于相对稳定.(3)提取次数对提取率的影响.所有条件都选择实验的结果,分别进行多频率的提取方法,提取4次,测定多糖的得率如表3所示.表3 提取次数对多糖得率的影响提取次数1234多糖得率Π%0.470.510.530.53由表3可见,当提取次数超过3次时,多糖的得率几乎没有变化.2.2.2提取工艺的正交实验 正交设计考察提取过程中提取次数、提取用水的体积、提取时间和提取温度.称取竹叶18g ,共9份,按照正交设计分别进行水提取,以下操作与2.1.1节相同并对竹叶中多糖按2.1.2节方法进行测定.正交设计见表4,正交实验结果见表5.表4 提取工艺因数水平提取次数(A )液固比(B )Π(m L ・g -1)提取时间(C )Πh112052230633407表5 L 9(33)提取工艺条件正交实验结果实验号A B C 多糖得率Π%11110.3021220.3731330.4442110.4552230.5362320.4473130.4783220.5093310.52911第1期 李胜华,等:竹叶多糖的提取工艺021吉首大学学报(自然科学版)第27卷续表实验号A B C多糖得率Π%M1 1.11 1.22 1.27M2 1.42 1.40 1.31M3 1.49 1.40 1.44m10.370.410.42m20.470.470.44m30.500.470.48R′0.110.060.09 对以上数据进行方差分析,结果见表6.表6 提取工艺中竹叶多糖方差分析误差来源SS f S FA0.02720.0140.113B0.00720.0040.325C0.00520.0030.397误差0.00320.0022.2.3沉淀过程的正交实验 正交设计考察沉淀过程中的提取液浓缩后体积、醇沉的浓度和沉淀的时间.按正交实验醇沉法得粗多糖得率,并按2.1.2节方法进行多糖得率测定.正交设计见表7,正交实验结果见表8.表7 醇沉因数水平水平浓缩后的体积(A)Πm L醇沉浓度(B)Π%醇沉时间(C)Πh1207062408093609012表8 L9(33)醇沉条件正交实验结果实验号A B C多糖得率Π%11110.3921220.4531330.4142110.4952230.5662320.5573130.5383220.4293310.47M1 1.25 1.41 1.35M2 1.60 1.43 1.42M3 1.42 1.43 1.50m10.420.470.45m20.530.480.47m30.470.480.50R0.110.010.05 对以上数据进行方差分析,结果见表9.表9 醇沉中竹叶多糖方差分析误差来源SSfSFA 0.020422 2.936100.25406B 0.0000920.012780.98738C0.0037620.539940.64938误差0.0069620.003483 验证试验试验中得出竹叶多糖的最佳提取工艺为:石油醚回流2h ;滤渣用95%乙醇回流2h ,再用30倍量的水提取3次,每次7h ,提取液浓缩至体积为原来的1Π2,加入乙醇后使含醇量约为80%,静置12h 后抽滤、真空干燥,即得粗多糖.为考察该提取工艺的稳定性,提取3批产品,分别测定总多糖的得率.计算得多糖的平均得率为(0.48±0.05)%.3次的结果差异较小,说明该工艺方案稳定可行.4 讨论对于竹亚科的植物来说,一般其含有的多糖为分子量不大的水溶性多糖.酸浸提法和碱浸提法很容易使部分多糖发生水解,从而破坏多糖的活性结构,所以竹叶多糖用水反复浸提比较合适.水提取的多糖中很大部分是水溶性的蛋白质,因此糖的提取工艺中脱除蛋白是一个重要的环节.一般沉淀蛋白使用Sevage 法,用该法反复2次可以有效去除蛋白.粗多糖的沉淀接触空气易氧化变黄色,在实验中分别用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水后消除了这种变化,置真空干燥箱内干燥即可得灰白色的粗多糖.参考文献:[1] 江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科技出版社,1985.[2] 董 群,郑丽伊,方积年.改良苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖的含量[J ].中国药学杂志,1996,31(9):550-553.[3] 唐莉莉.竹叶多糖的分离提取及活性研究[J ].食品研究与开发,2000,21(1):8-10.Extraction Process of Polysaccharides in B amboo LeavesLI Sheng 2hua ,Y U Jian 2ping(Institute of Biochemistry and Nutrient ,G uizhou University ,G uiyang 550025,China )Abstract :Objective :T o optimize the best extraction process of polysaccharides in bamboo leaves.Methods :With po 2lysaccharides of bamboo leaves being an examinable target com ponent ,the optimized extraction techniques and condition were chosen by orthog onal test method.Results :The best extraction process of polysaccharides of bamboo leaves was that the crude drugs were extracted with petroleum ether for refluxed 2h ,the sediments extracted with 95%ethanol for 2h first ,then filtrable residue from previous steps were extracted three times with 30times am ount of water.The pro 2teins were rem oved by Sevage ’s method ,adding ethanol and making its concentration to 80%,the extracts were stored in the refrigerator for 12h.The acquired am ount of bamboo leaves polysaccharides was about 0.51%from the best ex 2traction process.C onclusion :The extractive rate of bamboo leaves polysaccharides was higher in the optimized extraction process and the process was proved to be reas onable and feasible.K ey w ords :bamboo leaves ;polysaccharides ;extraction process(责任编辑 易必武)121第1期 李胜华,等:竹叶多糖的提取工艺。
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摘 要： 采用单因子分析和正交试验 ， 以孝顺竹 叶提取物 中含量 为指标 ， 对酶法提取中影响多糖提取效果 的主要 因 素进行研 究 ， 并研究 了其对 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ 自由基的 清除 作用 。结 果表 明 ： 酶法 提取 优化 工艺 条件 纤维 素酶 添加 量 为 ０ ． ２ ｇ ， 酶解时间为 ５ ５ ｍ ｉ ｎ ， 酶解温度为 ４ ５ ℃。在此 条件 下 ， 得到 的多糖提取物含量为 Ｉ １ ． ７ ％。其具有较 好的清除 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ 自由基效果。酶法提取条件温和 、 污染小 、 效率高 ， 优选 的工艺稳定可行 ， 可为工业生产提供有益的参考 。 关 键 词： 孝顺竹 ； 竹叶 多糖； 酶 法； 抗氧化性
ｓ ｃ ａ ｖ ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｇ ｃ ａ ｐ ａ ｂｉ ｌ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｏｒ ｆ ＤＰ ＰＨ．Ｅｎ ｚ ｙ ｍｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ｂｙ ｍｉ ｌ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ— ｄｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｆｏ ｒ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ．Ｙｅ ｔ ｌ ｉ ｔ ｔ ｌ ｅ ｐ ｏ ｌ ｌ ｕｔ ｉ ｏ ｎ．Ｔｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｉ ｓ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｆ ｅ ａ ｓ ｉ ｂ ｌ ｅ
Ｖ０ １ ． ３３． Ｎｏ ． ５ ０ｃ ｔ ．２ Ｏｌ ５
文章编号 ： １ ０ ０ ４ －５ ５ ７ ０ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ５— ０ ０ ９ ２— ０ ４
竹 叶多糖 提 取 工 艺 及 体 外 抗 氧 化 性研 究
赵 秀玲 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 陶文 东
（ 黄 山学院 生命与环境科学学院 ， 安徽 黄 山 ２ ４ ５ ０ ２ １ ）
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第３ ３卷 第 ５期
２ ０ １ ５年 １ Ｏ月
贵州 师 范 大学 学报 （ 自然 科 学 版 ）
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