RNA提取自我总结
植物rna提取实验报告
植物rna提取实验报告植物RNA提取实验报告植物RNA提取是生物学研究中常用的实验技术之一。
通过提取植物细胞中的RNA分子，可以进一步研究植物基因的表达和调控机制。
本实验旨在探究RNA提取的方法和步骤，并对提取得到的RNA进行分析。
一、实验材料和方法1. 实验材料：- 植物样本：可以选择自然生长的植物或实验室培养的植物。
- RNA提取试剂盒：常用的试剂盒有Trizol、RNAiso Plus等。
- 高速离心机：用于离心植物组织和提取液。
- 1.5 mL离心管和离心管架：用于混合试剂和样本。
- 离心管摇床：用于混合试剂和样本。
- 离心管架：用于离心植物组织和提取液。
2. 实验方法：- 准备植物样本：选择新鲜的植物叶片或其他组织，尽量避免使用老化或受损的植物材料。
- 细胞破碎：将植物样本放入1.5 mL离心管中，加入适量的RNA提取试剂。
使用离心管摇床将样本和试剂充分混合，破碎细胞壁释放RNA。
- 提取RNA：离心混合物，将上清液转移到新的离心管中。
加入适量的异丙醇，使RNA沉淀。
再次离心，将上清液倒掉，留下RNA沉淀。
- 洗涤RNA：加入75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心后将乙醇倒掉。
重复洗涤步骤，以去除污染物。
- 干燥RNA：将离心管开盖，放置在通风处晾干RNA沉淀。
- 溶解RNA：加入适量的RNase-free水或稀释缓冲液，使RNA溶解。
二、实验结果和分析通过上述步骤，我们成功地提取到了植物样本中的RNA。
为了验证RNA的纯度和完整性，我们使用紫外-可见光分光光度计检测了提取得到的RNA溶液的吸光度。
结果显示，RNA溶液的吸光度比例A260/A280在1.8-2.0之间，符合纯RNA的标准。
这表明我们成功地去除了蛋白质和其他污染物，得到了纯净的RNA样本。
为了进一步确认RNA的完整性，我们进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
将提取得到的RNA样本与RNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，经过电泳后，用紫外灯照射，可以观察到RNA分子的带状图谱。
采核酸个人工作总结
采核酸个人工作总结在过去的一段时间，我全身心投入到了采核酸工作中，积极参与各项任务的完成，收获颇丰。
以下是我对这段工作经历的个人总结：一、责任心与使命感在采核酸工作中，我始终怀着强烈的责任心和使命感，不盲从于表面工作的繁琐，而是真正关心和发挥自己在工作中的作用。
我时刻牢记自己要服务社会大众，把每一份工作都做到尽善尽美，确保采核酸工作的准确性和有效性。
二、团队协作与沟通能力在团队工作中，我主动与同事进行沟通合作，及时解决工作中的问题。
我深知，只有团结一心，才能将工作做得更好，所以我会积极倾听他人的意见建议，与团队成员保持良好的沟通，充分发挥团队协作的优势。
三、工作执行力和细心耐心在采核酸工作中，我经常需要细心严谨，耐心细致地进行操作。
我注重细节，不轻易放过任何一个操作环节，保证每一个操作流程都得到严格执行，确保采样准确无误。
四、自我修正与激励在工作中，我会对自己经验进行反思，并不断修正和提高自己的工作方法和流程，以达到更好的工作效果。
同时，我会不断激励自己，保持良好的工作状态，提高自己的专业水平和工作效率。
五、感恩与收获通过采核酸工作，我更加深刻地理解了感恩与收获之间的关系。
在工作中，我深刻感悟到只有感恩他人的帮助和支持，才能更好地收获成功和成长。
总的来说，采核酸工作给予了我非常宝贵的工作经验和人生感悟，让我更加深刻地认识到了自己的不足和需要提高的地方。
在未来的工作中，我会继续努力提高自己的工作能力和水平，为更好地为社会服务而不懈努力。
由于当前新冠疫情的影响，采核酸工作成为了抗击疫情的关键一环。
在这样的大背景下，我参与了采核酸工作，对自己的工作进行了整理和总结。
在这段时间的工作中，我不仅学会了如何准确采集样本，还了解了核酸检测的具体流程和操作要点。
通过自己的努力，我不断提高了采样和检测的准确性和专业性。
我学会了关于核酸检测的相关知识和技能，包括样本采集、保存、运输、处理等环节，让我对采核酸工作有了更全面的了解。
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇An experimental report on RNA extraction from eukary otic cells真核细胞rna提取的实验报告范文3篇小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。
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本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1：真核细胞RNA的提取文档2、篇章2：真核细胞RNA的提取文档3、篇章3：真核细胞rna提取文档篇章1:真核细胞RNA的提取文档一．原理本方法利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，采用有机溶剂抽提去除蛋白质。
通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。
二．方法⑴组织样品处理：取新鲜的组织样品称重后，剪碎成约1cm2的组织块直接加入匀浆液中进行RNA提取，或液氮中速冻-70℃保存。
⑵贴壁培养细胞处理：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存；或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞，然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶悬浮培养细胞处理：离心收集细胞，用PHS悬浮漂洗再田心收集，若不立即提取RNA，则可经液氮速冻后转至一70℃贮存备用。
2．加l倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中，高速匀浆1min。
3．匀浆液5000g，室温离心10min。
4．将上清移至一个干净离心管中，加入0.1体积的3mol ／L乙酸钠（PH5.2），混匀，再加5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。
5．5000g 0℃离心10分钟沉淀核酸，弃上清液，室温干燥。
6、每个提取RNA的组织或细胞样品中，加入l0～15min盐酸胍匀浆液Ⅱ，搅拌溶解。
7．加入2.5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃至少放置2小时。
提取RNA及用DEPC去除RNase的个人总结 [精华]
![提取RNA及用DEPC去除RNase的个人总结 [精华]](https://img.taocdn.com/s3/m/3ca9c4dcad51f01dc281f1d0.png)
快速的操作，低温环境，少量取上清主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。
分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37 度2小时),然后灭菌水淋快速的操作，低温环境，少量取上清主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。
分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度 2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用170度考4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温,线路老化会发生危险吧提取RNA所用的枪头，EP管。
直接高压烘干即可。
如果用0.1％DEPC处理，要在DEPC配置后振摇1小时后再浸泡枪头，EP管方有效。
我做的都是将枪头泡在配制好的depc中，摇振过夜，然后倒掉depc注意要到干净，再高压，为了防止仍残留液体可120度干烤一会A.对于提取RNA来说,我认为关键的一点在于实验器材的准备.包括从最初的标本的制备,保存,以及之后的试剂的准备,匀浆器,镊子,tip头的去除RNase处理,尤其是去除RNase的DEPC 处理步骤B. 您在处死大鼠前,先准备好干净的冻存管(用1.5ml的Ep管也可以,就是后面您在从液氮中取出的时候容易爆,您的注意安全),然后将去除的骨骼肌立即用干净的剪刀分成半颗到一颗黄豆大小,装入冻存管后立即投入液氮保存.个人认为在这里使用装标本的管子没必要用DEPC处理C.在提取RNA之前,将试剂(TRIzol)和器械(tip头,镊子,匀浆器)都准备好D.从液氮取出标本后,立即转移进入事先加入TRIzol的匀浆器内(最好置冰上操作),立即匀浆,一直到标本完全碾磨碎,这个时候TRIzol液体成浑浊状,而且匀浆器的壁上没有太多的黏附组织,然后将TRIzol转出,继续后续的步骤.1 Rnase是一种蛋白酶，能够降解RNA。
本人在做RNA抽提实验中总结了一些需要注意的事项
本人在做RNA抽提实验中总结了一些需要注意的事项，以及一些抽提各种RNA的常用方法及步骤。
希望与大家共同分享：高质量的真核生物mＲＮＡ的提取，必须使用ＲＮＡ酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活ＲＮＡ酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的ＲＮＡ酶的活性。
同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量ＲＮＡ酶也很重要。
下面列举避免ＲＮＡ酶法染问题的一些注意事项。
大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。
（一）实验程序如不谨慎操作，外源性ＲＮＡ酶可以通过下述途径污染ＲＮＡ制品：（１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无ＲＮＡ酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存ＲＮＡ。
实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有ＲＮＡ酶法染，使用前必须于180 ℃干烤８小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。
另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）的水溶液浸泡用于制备ＲＮＡ的烧杯，试管和其他用品。
ＤＥＰＣ是ＲＮＡ酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Ｆedorcsak和Ehrenberg,1966）。
灌满ＤＥＰＣ的玻璃或塑料器皿在37℃放置２小时，然后用灭菌水淋洗数次，并于100℃干烤15分钟（Ｋumar和Ｌindberg,1972)。
在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。
上述处理可以除去器甲上痕量的ＤＥＰＣ，以防ＤＥＰＣ通过羧甲基化作用对ＲＮＡ的嘌呤碱基进行修饰。
羧甲基化的ＲＮＡ在无细胞体系中翻译效率很低，然而，除非其中大部分嘌呤碱基均被修饰，否则其形成ＤＮＡ：ＲＮＡ或ＲＮＡ：ＲＮＡ杂交体的能力并不明显降低。
用于ＲＮＡ电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满３％的Ｈ２Ｏ２溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％ＤＥＰＣ处理水彻底冲洗电泳槽。
最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为ＲＮＡ实验专用。
总RNA的提取（Trizol法自我总结）
总RNA的提取（Trizol法自我总结）Trizol法提取总RNA（改进的一步法）1.先取1.5ml RNA专用离心管加入1ml Trizol后编号称重；2.研钵清洗干净后用燃烧法燃烧15min左右，然后-20度预冷，在加入植物材料前先加入液氮再次冷冻研钵（同时将药匙预冷），将植物材料50-100mg置于研钵中，加入液氮充分研磨成面粉状，用预冷的药匙小头部位转至1.5ml RNA专用EP管中，立即震荡混匀，裂解5分钟,裂解过程中称重。
注：样品量一定要少于100mg，用药匙的小头加入4次就差不多了；研磨时尽量多加几次液氮，多研磨几次，保证样品研磨得足够细（呈面粉状），不能吸水变潮；研磨加入EP管中后，必须立即摇匀，不能等到样品变潮；用药匙转移样品时，每次少加点，不能将样品粘到管口，加完一个样品后立即用纸擦干净，加下一个样品时药匙必须重新用液氮冷冻。
总之，整个过程中必须保证样品和与样品接触物品的温度足够低，直到样品与Trizol接触为止，以免RNase将RNA降解。
3.离心（4℃，12000×g）10分钟，取上清至一新的EP管中。
4.分相：①加0.2ml的氯仿，用手剧烈摇晃15秒钟，15-30℃静置3分钟；②离心（4℃，12000×g，勿超过12000×g）15分钟。
5.沉淀，并去除多糖：①用200ul的枪取无色相（大约300ul）至一新的EP管中，切勿吸到中间层；②加入等体积异丙醇颠倒混匀（动作缓和），15-30℃静置10min；③离心（4℃，12000×g，勿超过12000×g）10分钟，倾去上清。
6.清洗（2次）：①用200ul的枪吸除多余上清，加1ml冰预冷的75%乙醇，旋涡震荡；②离心（4℃，7500×g）5分钟。
7.用真空泵吸除乙醇，37℃干燥10分钟。
切勿干燥彻底，否则极难溶解。
8.加适量的DEPC?H2O（一般40ul），枪打数次，使沉淀溶解。
提取RNA及逆转录(自己总结)
迅速匀浆，转至1.5mlEP管中，静置10min
↓加200ul氯仿
在振荡器上剧烈震荡1min,静置10min←
↓
离心（12000rpm，4°C，15min）
↓
吸取上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）
↓加等体积异丙醇
混匀2min,静置10min
↓
离心（12000rpm，4°C，15min）
准备工作：
冰盒2个（装冰用于RNA提取过程中的低温保存及试剂冷却）
置物篮
预冷氯仿、异丙醇
记号笔
计时器
离心管架
EP管（1.5ml、0.5ml、0.2ml）
Tip头（大0.5ml、中200ul、小20ul）
移液枪（1ml、200ul、10ul、2ul）
刀片、镊子、酒精灯、打火机、托盘（切标本时用）
纱布（洗匀浆机时擦机头等）
将
5*Reaction Buffer 4ul
RNase Inhibitor 1ul
DNTP Mix 2ul
M-MuLV逆转录酶1ul
依次加入以上的反应液中，混合，→42°C,1h→70°C,5min→已合成的cDNA在-20°C保存
4、其余RNA保存于-80°C冰箱中
RNA提取步骤：
取100mg组织（5ml圆底离心管）
需加入的试剂用DEPC水的量=（C-1）*V【C为测得的浓度，V为RNA体积】
2、取2ul用跑胶，观察RNA的完整性
3、取3ul用于逆转录，（根据不同的试剂盒而定，以下为我们所用的逆转录试剂盒）
Total RNA 3ul
Oligo(dT)18 primer 1ul（混匀65°C，5min）→冰浴
Water,nuclease-free 8ul
RNA的提取总结
一、总的RNA的提取基础知识：(1)DEPC：中文名为焦碳酸二乙酯。
分子式为C6H10O5，分子量为162.14。
是一种强烈的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC水一般是指千分之一浓度的DEPC,在搅拌器上搅拌至完全溶解，即看不到“油珠”为止，DEPC气味芳香浓烈，强挥发性，有毒，需在通风橱中操作。
(2)RNA分子：哺乳动物细胞有3种rRNA：28S、18S和5S。
一个典型的哺乳动物细胞含有10-5μg RNA，其中80～85％为rRNA，其余15～20％主要由各种类型的低分子量RNA组成(tRNA、核内小分子RNA等)，这些高丰度的RNA分子具有确定的大小和核苷酸序列、并能用电泳、密度梯度离心、阴离子交换或高效液相层析等技术分离纯化。
mRNA与上述RNA不同，其含量为细胞总RNA的1～5％，大小和核苷酸序列各不相同，从数百至数千碱基不等。
..多数真核细胞mRNA在其3端均有一poly(A）尾，使得mRNA可以通过挂有oligo(dT)-纤维素的亲和层析柱分离纯化，获得的异源性分子集群的总体，可编码细胞内所有的多肽。
RNA酶变性剂RNA酶：水解RNA。
•含有链内二硫键，使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂。
另外，变性后可迅速折叠，目前，尚无RNA酶失活的简易办法。
•该酶不需要二价阳离子激活，难以被金属离子鳌和剂（EDTA）失活。
——只好避免污染！用强烈变性剂，如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏而从核酸上解离下来。
..RNA酶可耐受多种处理(例如煮沸)而不失活，但却会被4 mo1/L硫氰酸胍和β-疏基乙醇等还原剂所灭活。
因此可联用上述试剂，从组织中提取完整无损的RNA实验准备工作：器具和试剂的消毒..（1）尽可能使用无菌、一次性塑料制品，已标明RNase-Free且未开封过的塑料制品，不必再进行其他处理，对于国产塑料制品，应按下列方法进行处理：在一玻璃烧杯中注入含终浓度为0.1%DEPC的去离子水，将要处理的塑料制品浸泡其中12小时以上，弃DEPC水溶液，适温烘烤干燥已处理过的塑料制品，再经103.4kPa，121℃高压灭菌15分钟，70-80℃烘烤干燥即可使用..（2）所用的玻璃器皿，置于干燥烘箱中200℃烘烤2小时以上。
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TRIZOL提取RNA步骤（革兰式阳性细菌和阴性菌通用）
一.细胞前处理
1.取菌液100ul（原则上每107个细胞加入1ML TRIZOL，不能超过108细胞），8000g，4℃，
离心2 min，去掉上清液体。
（仔细将上清液吸取干净，不要触及EP管底部的细菌。
）2.加入250 ul，20mg/ml 的lysozyme（使用无Rnase free 的TE溶解）吹打混匀，放入
37℃的水浴锅或者培养箱中孵育10 Min。
二.总RNA提取
3.将孵育完毕的裂解液加入1 ML trizol 裂解液吹打混匀，再使用振荡器震荡3-5次（每次
1-2 S）,放置在常温下6-10 min。
（此步一定要室温静置，静置完毕后可以直接放入-80℃冰箱保存）
4.往已经备好的裂解液中加入氯仿（Rnaiso plus 1/5的体积量，一般200 ul左右，最多300
ul）盖紧离心管盖，剧烈震荡，直到将混合液乳化成乳白色状态。
5.室温静置5 Min。
6.12000g，4℃离心，15 Min，从离心机中小心取出离心管（尽量不要触及管子和盖子的
交界处，以免引起污染），此时匀浆液分为3层，上层是无色上清液（含RNA），中层是蛋白层（含有大部分DNA以及蛋白），下层是红色的有机相。
7.将上层无色液体转移至一管新的离心管中（上层液体吸取时尽量使用200 ul的枪头，尽
量不要吸取到中间蛋白层，一般取600 ul足矣，不要贪多。
）
8.向吸取的上清液中加入0.5-1倍体积的Rnaiso plus 体积的异丙醇（最多750 ul，并且异
丙醇要置入-20℃冰箱中提前预冷），上下颠倒混匀后，4 ℃静置10 min。
9.12000 g，4 ℃离心10 Min。
10.小心去掉上清液（先倾倒出液体，再使用200 ul的枪头将剩余的异丙醇吸掉，在吸取异
丙醇的时候一定不要触及底部的RNA沉淀，宁可剩余一点异丙醇在EP管内，一般10-20 ul异丙醇是可以接受的），加入75%的乙醇约1.5 ml，（乙醇一定要在-20℃预冷，使用DEPC处理水配制），尽量吹打3-5次，然后再振荡器再使用振荡器震荡3-5次（每次1-2 S，动作不能太剧烈，再轻弹管壁使得RNA悬浮起来。
）
11.7500 g,4℃，5 Min。
三RNA的清洗
12.去掉上清液，切勿触及沉淀。
最后的乙醇可以使用10 ul的枪头，将其吸干净。
四RNA的溶解
12. 打开离心管盖，室温干燥5-10 Min（打开操作台上的风扇吹，切不可太干。
），干燥完毕后，每个加入适量的Rnase free 水或者DEPC处理水溶解（一般取35-55 ul，反复吹打溶解，清洗EP管底部的位置30-50次左右。
）
注意事项：
1.电泳使用的溶胶的瓶子一定要使用0.1%的DEPC水侵泡一个晚上，再灭菌。
一般每个
瓶子使用不超过3次。
2.使用之前的TAE电泳液，一定要新换，每次新换的TAE电泳液最多使用2次。
并且在
使用电泳槽之前一定要用清水冲洗电泳槽3-5次。
电泳的电压一般为200 V。
3.电泳使用的制胶板以及梳子等需要在使用前用酒精喷洗，并用干净的棉布搽拭干净，同
理超净工作台以及移液枪。
尽量不使用枪头上的退头器，并且将退头器卸下来，把枪使用酒精搽拭干净。
4.第12步如果出现不溶解的沉淀，则需要55℃-60℃水浴5-10 Min，再置于冰上静置数小
时。