三种常见型号PCR扩增仪的临床应用评价
四种常见PCR仪的区别及运用-科邦实验室-2020.6.24
四种常见PCR仪的区别及运用PCR扩增仪（俗称PCR仪）PCR：PCR（聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
PCR仪实际就是一个温控设备，能在95℃，55℃，72℃之间很好地进行温度控制。
PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(Polymerase chain reaction，聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备，被广泛运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。
根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR 仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。
1). 普通PCR仪（2万以下，赛默飞、伯乐、大龙，艾本德）一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪称作传统PCR仪，也叫普通PCR仪。
如果要做不同的退火温度需要多次运行。
主要是用于简单的、对目的基因退火温度的扩增。
该仪器主要应用于科学研究、教学、医学临床、检验检疫等机构。
如:启步BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720型2). 梯度PCR仪（2万-8万，赛默飞、伯乐、大龙，艾本德）一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度，通常有12种温度梯度）的PCR仪称作梯度PCR仪。
因为被扩增的不同DNA片段，其最适退火温度是不同的，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR 扩增，就可以筛选出表达量高的最适退火温度，进行有效的扩增。
用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间。
PCR技术在临床检验中的应用
PCR技术在临床检验中的应用聚合酶链反应又叫DNA扩增技术。
进入到21世纪以来，在标本中，分析研究与鉴定检测特定的体外基因扩增技术重要方法就是PCR技術。
近些年以来，这项技术在许多研究领域以及临床的应用中都发挥着重要作用；同时PCR技术在遗传病诊断与传染病病原体鉴定以及癌基因治疗等众多方面均有十分重大的贡献。
本文主要是对PCR技术在临床检验中的应用进行分析和探讨。
标签：PCR技术；临床检验；应用1 PCR技术的概述PCR技术的基本原理是在扩增区域的两端，用两条互补的双链DNA模板引物，利用DNA聚合酶，引物会引发互补的DNA链。
在这个过程中，一条引物所引发的DNA链可以合成另外一条新的DNA链，循环反复多次以后，导致这两条引物之间的DNA大量复制[1]。
PCR技术的循环反应主要是由变性和退火以及延伸这三个基本步骤组成的循环。
PCR技术在基层疾病检测中的应用，是当今社会较为常见的。
对于肝炎病毒、肠道病毒、呼吸道系统感染、性病病原体等检测，PCR技术的敏感度精确度要比传统方法高。
2 PCR 技术在临床检验中的应用2.1PCR技术在传染性疾病检测中的应用目前我国典型的消化系统感染性疾病包括肝炎、胃炎等。
引发肝炎的病原体主要为乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等。
使用PCR法对血清中的乙肝病毒进行检测的优势主要体现在早期诊断，并且在酶标试剂无法检测的情况下，PCR可以检出，大大缩短窗口前，使得患者能够得到早期诊断和治疗[2]。
2.2 PCR技术在肿瘤方面的应用现阶段，肿瘤的发病分子机制还不是完全的清楚。
PCR技术在肿瘤相关基因和肿瘤病毒病因以及肿瘤相关抑癌基因的研究方面，都已经得到了非常好的成果。
根据相关的资料表明，鼻咽癌与Burkitt 淋巴瘤以及EB病毒是有关系的；泌尿道肿瘤与食管肿瘤等以及人乳头瘤病毒是有关系的[3]；原发性肝癌和乙型肝炎病毒是有关联的。
通过癌基因或者基因变化的检测，人体癌的演变时，可以以肿瘤作为标志物直接应用在临床检测。
基因扩增技术在临床诊断中的应用研究
基因扩增技术在临床诊断中的应用研究基因扩增技术是生物分子学中一种重要的技术手段，它可以在短时间内扩增特定的DNA序列，从而使该DNA序列得到快速分析和检测。
基因扩增技术常用的方法有PCR（聚合酶链式反应）和LAMP（环介导等温扩增）。
在临床医学中，基因扩增技术被广泛应用于病原体、肿瘤、遗传性疾病等方面的检测与诊断。
本文将从PCR、LAMP两种技术的原理、优缺点和应用举例等方面对基因扩增技术在临床诊断中的应用研究进行探讨。
一、PCR技术在临床诊断中的应用PCR技术是一种经典的基因扩增技术，具有高灵敏度、高特异性、高复现性等特点。
在临床上，PCR技术被广泛应用于病原体检测、遗传性疾病诊断、肿瘤检测等方面。
1. 病原体检测PCR技术在病原体检测中的应用主要包括病毒、细菌和寄生虫等方面。
例如，针对新冠病毒的PCR检测已经成为COVID-19诊断的主要手段之一。
此外，PCR技术还被广泛应用于肝炎病毒、艾滋病病毒等病原体的检测与诊断。
2. 遗传性疾病诊断PCR技术在遗传性疾病诊断方面的应用主要是基于其对多态性位点的分析。
例如，在亲子鉴定、人类基因组计划的单核苷酸多态性位点的研究中，PCR技术被广泛应用。
同时，PCR技术还可以用于分析与遗传性疾病相关的基因突变。
3. 肿瘤检测PCR技术在肿瘤检测中的应用主要是基于其对特定肿瘤标志物的检测。
例如，用PCR技术扩增和检测甲胎蛋白等肿瘤标志物，可以判断患者是否患有某些肿瘤。
二、LAMP技术在临床诊断中的应用LAMP技术是一种新兴的基因扩增技术，具有等温性、高灵敏度、高特异性等特点。
在临床上，LAMP技术被广泛应用于病原体检测、肿瘤检测、慢性病诊断等方面。
1. 病原体检测LAMP技术在病原体检测方面的应用主要是基于其对核酸序列的扩增和检测。
与PCR技术相比，LAMP技术具有更高的灵敏度和特异性，可以在更短的时间内完成扩增和检测。
例如，在日本脑炎病毒等病原体的检测中，LAMP技术已经被证明具有较高的诊断准确性。
常见荧光定量PCR仪汇总
常见荧光定量PCR仪汇总常见的荧光定量PCR仪（Fluorescence Quantitative PCR Instrument）主要有以下几种：1. Applied Biosystems 7500 Fast System：该系统是ABI公司旗下产品之一，具有优秀的性能和稳定性。
其特点包括快速准确的PCR结果、高通量PCR样品处理能力以及灵活的试剂和探针选择。
该系统可应用于基因表达分析、SNP检测、病毒定量等多个领域。
2. Bio-Rad CFX96 Touch System：这个PCR仪是Bio-Rad公司的产品之一，具有高精度的温控技术和可靠的荧光检测系统。
它支持多种共轭染料和探针，可以同时检测多个靶序列，适用于基因表达分析、蛋白质分析和病毒检测等多个应用领域。
3. Roche LightCycler 480 System：这是一款高通量的PCR仪，可同时处理多达384个孔的样品，适用于高通量基因表达分析和蛋白质研究。
该系统具有高分辨率荧光检测和精确的温度控制能力，可提供更准确和一致的PCR结果。
4. Thermo Fisher QuantStudio 6 Flex Real-Time PCR System：该PCR仪具有灵活多样的探针和染料选择，可以满足不同的研究需求。
它具有宽广的检测动态范围和高灵敏度，适用于基因表达分析、SNP分型和病毒定量等多个应用领域。
5. Qiagen Rotor-Gene Q：这是一款高通量PCR仪，可同时处理多达72个样品。
它具有快速高效的PCR扩增速度和精确的荧光检测能力，适用于基因表达分析、基因突变检测和染色体融合分析等多个研究领域。
6. Stratagene Mx3000P/QPCR System：这是Agilent Technologies旗下的产品，具有高精度和稳定性的特点。
它支持多种探针和染料，可以同时检测多个靶序列，适用于基因表达分析、非编码RNA研究和表观遗传学研究等多个领域。
pcr仪四大国产品牌
pcr仪四大国产品牌PCR（聚合酶链反应）是一种用于扩增DNA片段的技术，被广泛应用于基因组学、医学研究、遗传学等领域。
在PCR实验中，PCR仪是必不可少的实验设备。
PCR仪的质量和性能直接关系到PCR实验结果的准确性和可靠性。
本文将介绍PCR仪领域四大国产品牌的特点和优势。
一、美国品牌 - Thermo Fisher Scientific作为全球领先的生命科学和诊断企业，Thermo Fisher Scientific在PCR仪领域拥有丰富的经验和出色的产品线。
该品牌的PCR仪以高精度、高效性和可靠性著称。
Thermo Fisher Scientific的PCR仪具有以下特点和优势：1. 温度控制精确度高：采用先进的PID温度控制技术，温度控制范围广，可满足不同实验需求。
2. 快速升温和降温速度：独特的热电堆技术和高效散热系统，使PCR反应快速达到所需温度。
3. 多样化的模块化设计：可根据实验需求选择不同的模块，如标配模块、大容量模块等，方便灵活。
4. 应用广泛：适用于标准PCR、实时荧光PCR、定量PCR等多种PCR实验。
二、德国品牌 - EppendorfEppendorf是一家全球领先的实验室仪器和消耗品供应商，其PCR仪产品以出色的品质和性能而闻名。
Eppendorf的PCR仪具有以下特点和优势：1. 优化的温度控制系统：采用高精度PT1000传感器和独立热电堆技术，可实现卓越的温度控制稳定性。
2. 简洁易用的操作界面：智能化的操作界面，用户可以轻松设置PCR反应参数和监控实验进展。
3. 低能耗设计：独特的节能模式和温度控制技术，降低了耗电量，节约实验成本。
4. 高品质材料和加工工艺：严格选材和工艺要求，保证PCR仪的稳定性和耐用性。
三、日本品牌 - Takara BioTakara Bio是一家专注于生物医学研究和医药领域的公司，其PCR仪产品以高品质和创新性能而著称。
Takara Bio的PCR仪具有以下特点和优势：1. 优化的热传导技术：采用特殊的导热材料和散热结构，实现快速均匀的温度变化，提高PCR反应的准确性。
PCR检测的临床应用
[临床应用]检验科基因诊断室近日引进了德国罗氏的全自动荧光定量分析仪（Lighter Cycler）,并在近期内申请国家标准的PCR室。
由于PCR技术具有高灵敏度、高特异性、快速简便及直接检测致病病原体或异常基因等特点，成为基因诊断在临床应用最为广泛的技术之一。
在90年代，PCR技术在我国临床诊断曾得到广泛应用，但由于PCR产品生产产家的良莠不齐，PCR技术本身的特点对于实验条件提出特殊的要求，造成各种假阴性或假阳性结果，反而给临床诊断带来困难和错误。
目前荧光PCR的兴起以及标准试验室的认证为PCR的应用显示出更为光明的前景。
一、早期诊断:免疫学诊断主要是抗原抗体反应，应用于临床通常在体内产生抗体以后，许多病原体的抗体产生存在较长的“窗口期”，不利于对疾病的早期诊断；而PCR方法直接检测病原体的DNA/RNA，能大大缩短“窗口期”。
以HCV为例，免疫学检测的“窗口期”平均长达70天，而荧光PCR可将“窗口期”缩短59天，显然有利于疾病的早期诊断。
二、药物疗效观察：对原体的药物治疗中，免疫学指标的变化通常比较滞后出现，且受个体差异影响较大，从而对临床判断难以及时提供直接证据；而荧光定量PCR检测可直接反映病原体滴度是否受药物治疗发生变化，从而为药物疗效观察提供直接依据，以供治疗方案参考；同时药物治疗中可能引起的基因变异等情况更依赖核酸检测提供直接证据。
三、病情判断和预后评价：评估受侵器官或组织的炎症发生程度以及是否发生病变；长时间机体病毒高水平的患者尤其是慢性病患者往往预后不好。
因此对病原体的定量PCR检测对病情和预后评估均有参考意义。
四、加快疾病的诊断：许多病原体到目前为止仍旧依靠传统的细菌培养作为诊断手段，操作繁琐费时。
以结核杆菌为例，传统培养法需要1-2个月，而荧光PCR可将检测时间缩短至半天，能更及时地为临床提供诊断依据。
五、疾病的发病监控：许多病原体可以感染人体后整合入细胞内成为整合型，而一旦机体免疫力下降等又重新进入活动期并引致发病，临床上希望通过检测病原体基因的数量变化并结合临床表现找出其活动以及是否引起发病的规律，荧光定量PCR可以为此提供直接证据。
PCR仪不同分类的对比
PCR仪不同分类的对比PCR（聚合酶链反应）是一种用于扩增DNA（脱氧核糖核酸）的技术。
PCR仪是 PCR 实验中不可或缺的设备。
PCR 仪种类繁多，根据不同的特点和实验需求，可以将 PCR 仪分为以下几类。
1. 常规 PCR 仪常规PCR 仪是最早的PCR 仪，其主要特点是功率稍小，不适用于大规模扩增。
其定温功能常常采用两步式升温，程控温度区间为4-99°C，最高可达100°C。
常规 PCR 仪最常见的是使用96孔板，但也有少量供应48孔、384孔板的型号。
常规 PCR 仪适用于小规模试验和学术研究，其优点是设备简单，价格便宜，维修方便。
不过，由于功率小，不能满足高通量的扩增。
2. 实时 PCR 仪实时 PCR 仪是常规 PCR 仪的升级版，是目前应用最广泛的 PCR 仪型号。
与常规PCR 仪相比，实时PCR 仪功率大、扩增速度快，精确度高，适用于高通量扩增。
实时 PCR 仪不仅可以监测反应进行，还可以在反应进行中以定量方式测定扩增物的量和浓度。
其工作原理是在反应进行中，通过测量荧光信号来测定扩增产物的量。
在定量PCR（qPCR）实验中，荧光群体的荧光强度与样品中目标分子的浓度成正比，荧光信号可实时在反应过程中收集，并使用软件来分析和研究反应的结果。
实时 PCR 仪可分为相对定量和绝对定量两种：相对定量是以对照样本中的目标分子浓度作为基准，与待检样本中的目标分子浓度比较，用来研究基因在不同组织、不同阶段或不同环境下的表达量差异；绝对定量是基于标准曲线法，利用标准品进行定量，得出目标分子的精确浓度。
3. 数字 PCR 仪数字 PCR 仪是一种新型 PCR 仪，它采用了数字化技术，可以更加准确地定量扩增产物。
数字 PCR 仪工作原理是将反应混合液分散到微型液滴中，每个微滴只有一个扩增产物分子。
之后在 PCR 反应中，每个微滴中的分子会自行扩增成百万甚至亿级别的扩增产物，通过计数液滴个数及所含扩增产物的分子数，就可以得出目标分子在样品中的绝对量。
各款荧光定量PCR仪的性能比较
各款荧光定量PCR仪的性能比较本人从事荧光定量PCR检测试剂的开发工作，用过市场上主流的多款荧光定量PCR仪，如ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJ opticon,MJ opticon2,bio-rad I Cycler,LightCycler1.5，roter-gene3000，Stratagene Mx3000P，line—gene等等。
这种仪器各有各的特点，但都存在不足之处。
ABI公司的荧光定量PCR仪产品比较多，成系列,但目前而言ABI5700和ABI7700不能实时在线地检测荧光，因而已经退出历史舞台，尤其是ABI7700，不但很贵，而且采用苹果机电脑，使用很不方便。
ABI7000目前也已经淘汰,我用的这台仪器老出问题,曲线极不光滑，但同样的反应体系在国产机杭州博日line-gene上曲线非常好，在ABI7500上曲线也很光滑，所以，本人估计是ABI7000设计上有不足之处.而且卤钨灯特别容易坏，在南方,我们实验室平均5个月换一个，配件容易坏,后续使用成本就会高一些。
现在市场上的ABI7300就是ABI7000的简单升级版,硬件设计上几乎没有改变，只是换过几个性能更好的配件，软件有所升级。
另外我个人感觉ABI7900（ABI公司第二代产品）有些华而不实，价格应该是所有荧光定量PCR仪中最贵的,硬件上跟ABI7700差不了太多，但性能指标还不如ABI7500(ABI公司第三代产品），硬件设计上也不如ABI7500合理。
所以这个型号的仪器，谁买了,用的时候会不呼上当.ABI7500是ABI公司最成功的产品，各方面性能都不错，虽然加热模块还是有一些边缘效应,但使用中央的孔位效果可以得到保证,在96孔板使用中间的48个孔位，结果都能得到保证。
总的来说，ABI公司在荧光定量领域上还是做出很多贡献的，其仪器在科研上还是可以用的，但由于硬件设计上的缺陷，需要额外的ROX染料进行校正，并且占用了一个检测通道。
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１２ ． 方 法
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起 重要作 用 ， 病毒 性 肝 炎 发 病 及 肝 纤 维 化 进 展 过 程 是 中的重 要 细胞 因子 ， 为 应 用 白血 胞 介 素 一１ 体 拮 亦 受 抗剂 抑制 病 毒性 肝 炎 肝 纤 维 化 提 供 了理 论 基 础 ， 床 临 中， 我们 通过 检 测 Ｔ Ｆ—ｔ， 以 了解 到患 者 肝 纤 维 化 Ｇ ３可 ，
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１ 仪 器 和方 法
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高点。 目前 ，Ｃ Ｐ Ｒ扩增仪可分为三种基本类型 ， 即水浴 锅式 、 电子 加 热和 压 缩 机 制 冷式 。我 们 对 国产 水 浴 锅 式 、 缩 机 制 冷 式 Ｐ Ｒ扩 增 仪 和 Ｐ 压 Ｃ Ｅ公 司生 产 的 Ｐ 一 Ｅ
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维普资讯
中 国 医师 杂 志
２０ ０ ２年 ８月 第 ４卷 第 ８期
８３ ９
三 种 常 见 型 号 Ｐ Ｒ扩 增 仪 的临 床应 用 评 价 Ｃ
深圳 市 盐 田 区人 民医院检 验 科 （ 东 深圳 广 ５８８ ） １０ １ 蒋 明
珠 海 市 医学遗 传 研 究所 关键 词 Ｐ Ｒ仪 ； 合 酶链 反 应 ； Ｃ 聚 应用 评价
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聚合 酶链 式 反 应 （ Ｃ 是 由美 国 Ｃｔ 公 司 人 类 Ｐ Ｒ） ｅｕ ｓ 遗 传 研究 室 Ｍｕ ｉ Ｂ等 人 于 １８ 首 创 的一 种 体 外 ｌｉ ｌＫ ９５年 模 拟天 然 Ｄ Ａ复 制 过 程 的 核 酸 扩 增 技 术 … 。此 项 技 Ｎ 术发 明 以来 ， 已 广 泛 应 用 于 生 命 科 学 的 各 个 领 域 。 现 它 不 仅用 于 基 因 的分 离 、 隆和 核 酸序 列分 析 ， 克 还可 用