第二章动物组织和细胞培养(1)
高中生物选择性必修三 学习笔记 第2章 第2节 第1课时 动物细胞培养
第2节动物细胞工程第1课时动物细胞培养[学习目标] 1.阐明动物细胞培养的条件和过程。
2.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
一、动物细胞培养的条件和过程1．动物细胞工程(1)常用技术：动物细胞培养、________________和________________等。
(2)基础：________________。
2．动物细胞培养(1)概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成________，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞__________和__________的技术。
(2)培养条件①营养a．合成培养基：将细胞所需的________(糖类、氨基酸、无机盐、维生素等)按________和_____ ________严格配制而成的培养基。
b．天然成分：使用合成培养基时，通常需要加入________等一些天然成分，原因是__________ _________________________。
c．培养动物细胞一般使用______________，也称为________。
②无菌、无毒的环境a．对培养液和所有培养用具进行________处理。
b．在________环境下进行操作。
c．培养液需定期________，以便清除________，防止细胞代谢物________对细胞自身造成危害。
③温度、pH和渗透压a．温度：以36.5 ℃±0.5 ℃为宜。
b．pH：以pH为________为宜。
c．适宜的渗透压。
④气体环境a．组成：动物细胞培养所需气体主要有________和________。
b．不同气体的作用O2：________________________。
CO2：________________________。
c．培养容器：通常采用________或________。
d．培养仪器：含有________________的混合气体的____________。
(3)培养过程①②过程(4)相关概念①细胞贴壁：悬液中分散的细胞往往______在培养瓶的瓶壁上。
高二生物2.2动物细胞工程(第1课时)学案
第2章细胞工程第2节动物细胞工程（第1课时）【学习目标】1.认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养，由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。
2.尝试建构动物细胞培养基本流程。
3.认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
4.简述干细胞的应用；通过探讨干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险，理性看待生物技术的应用，增强社会责任感。
【重点难点】1.动物细胞培养的过程及条件。
2.干细胞在生物医学工程中的应用。
【学习新知】学习任务一动物细胞培养阅读教材43-45页，完成以下内容：活动1：通过“人造皮肤”事例，概述动物细胞培养的概念。
活动2：认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养，由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。
（1）分析机体给体内的细胞提供了哪些适宜的条件使其能够维持正常的生命活动？（2）动细胞培养实际上是在体外模拟体内的生理条件进行的培养，你认为体外培养动物细胞需要满足哪些条件？活动3：尝试建构动物细胞培养基本流程。
（1）依据动物细胞培养的概念，初步建构动物细胞培养的流程。
（2）根据教材中“动物细胞培养的过程”的内容，并结合图2-12，思考、回答下列问题：①培养前为什么要将组织分散成单个细胞？②怎样将组织分散成单个细胞细胞？③培养一段时间分裂会受阻,这是为什么？怎样解决这一问题？④什么是细胞贴壁、接触抑制、原代培养、传代培养？（3）在分析、回答问题的基础上完善动物细胞培养的基本流程。
活动4：比较动物细胞培养与植物组织培养有什么相同和不同之处？活动5:完成[自学检测1][自学检测1]1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。
(1)培养环境中需要O2，不需要CO2。
（）(2)动物细胞培养要经过脱分化形成愈伤组织。
（）(3)培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清。
（）(4)培养瓶中的细胞均需要定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖。
（）(5)培养过程除需要无菌、无毒的环境外，还要定期更换培养液。
高中生物第2章细胞工程2.1动物细胞培养课件新人教版选择性
4．如图是某动物细胞培养时，培养液中活细胞和死亡细胞密度的 统计结果。相关叙述错误的是 ( )
A．实验中要控制胰蛋白酶溶液的浓度和处理时间，以免损伤细 胞
B．培养液中应适当加入青霉素、链霉素，以避免杂菌污染 C．曲线 bc 段产生的主要原因是培养液中营养物质不足及有害代 谢产物的积累等 D．培养至第 6 天时，新产生的细胞数等于死亡细胞数
4．依据下面动物细胞培养过程探究以下问题。
(1)以上过程依据的原理为__细__胞__增__殖 ________。 (2)培养材料：一般取自__幼__龄__动__物__的__器__官__或__组__织__________， 因为这些组织或器官的生命力旺盛，分裂能力强。
(3)将动物细胞分散成单个细胞培养的原因。 ①保证细胞所需要的___营__养___供应。 ②保证细胞内有害___代__谢__物_____的及时排出。 (4)动物细胞培养时，用胰蛋白酶把细胞分散成单个细胞， 用胃蛋白酶行吗？胰蛋白酶对细胞有伤害吗？怎么解决这个问
在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康 皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有 限，使用他人皮肤来源又不足，而且还会产生免疫排斥反应。那 么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤？能不能用自体皮肤的单 个细胞培养出可供移植的皮肤？
探究点一 动物细胞培养 【师问导学】
1．动物细胞培养过程中有接触抑制现象，这一现象说明了 细胞膜具有什么功能？细胞膜接受信息后，细胞停止分裂又说明 了什么？
解析：动物细胞培养所用的培养基与植物组织培养所用的培 养基的成分不同，如培养动物细胞的培养基需加入血清，而植物 组织培养所用的培养基则不需加入血清；动物细胞培养与植物组 织培养都需要在无菌、人工控制的条件下进行；动物细胞培养与 植物组织培养过程中都可发生遗传物质的改变；植物组织培养最 终能够形成完整的植物体，能体现植物细胞的全能性，动物细胞 最终不能被培养成新的动物，不能体现动物细胞的全能性。
动物细胞工程
动物细胞工程第一章动物细胞工程概论一、动物细胞工程的概念1.动物细胞工程的定义动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的技术方法对动物细胞进行各种操作并使其在体外生长、增殖、分化以生产有用产品或引向成体化（产生新型生物个体）的技术体系，是生物技术（生物工程）的重要组成部分。
狭义细胞工程指对细胞个体进行的各种操作，广义的细胞工程包括对细胞、组织、器官所进行的各种操作。
2.动物细胞工程研究的主要内容以狭义细胞工程为主，兼顾组织、器官工程等内容的研究。
(1)狭义细胞工程：研究体外分离、培养、增殖、分化动物细胞的条件以及保存、操作及利用动物细胞的工艺技术体系。
(2)组织工程：研究体外培养、增殖动物组织的条件以及保存、操作及利用动物组织的工艺技术体系。
(3)器官工程：研究体外培养、增殖器官的条件以及保存、操作及利用动物器官的工艺技术体系。
(4)动物胚胎工程：研究动物胚胎生产、保存、操作及移植的工艺技术体系。
3.动物细胞工程研究的意义(1)是动物繁殖的重要技术手段加快动物繁殖速度：A.体外受精生产胚胎 B.胚胎移植生产动物(2)是人类辅助生殖技术的重要组成部分体外受精—胚胎移植技术，可以克服雄性不育和雌性不孕；(3)是动物遗传育种的重要技术手段对精子或卵子进行遗传操作，或利用细胞融合、胚胎嵌合技术可以使若干个动物性状进行有机组合，产生新的生物个体；(4)生产药物直接培养细胞或组织，从细胞或组织代谢物中直接获得药物;对细胞进行遗传操作，生产转基因动物，利用转基因动物生产药物（生物反应器）；(5)保存珍惜动物资源由于动物克隆技术的成功，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生命个体，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生物种群(6)提供人类器官移植的材料人类器官移植发展很快，目前可以进行心脏、肝、肾脏移植，可以进行皮肤、角膜、骨髓细胞移植。
三、动物细胞工程讲授的主要内容1.动物细胞、组织培养2.动物细胞融合3.动物细胞重组4.向细胞内引入高分子物质5.动物细胞冷冻保存6.动物胚胎工程四、动物细胞工程实验（实习）内容1.实验仪器设备的识别与使用2.动物细胞培养用液的制备3.动物胎儿成纤维细胞分离与培养4.动物细胞常规检查和生物学检测5.培养细胞的冻存与复苏五、动物细胞工程研究取得的重要进展1.精液采集、精液冷冻与人工授精技术的成熟和发展，为充分发挥利用雄性动物生殖潜力奠定了基础；2.雌性动物卵母细胞体外成熟培养技术的成功，使人们在体外完成动物生殖过程成为可能；3.体外受精与胚胎移植技术的成功，产生了试管婴儿，试管牛，试管猪，试管山羊，试管兔；4.细胞核移植技术的成功，使人们克隆高等哺乳动物的梦想得以实现体细胞核移植、胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植技术的成功，为克隆动物和转基因动物生产提供了技术支撑；5.胚胎干细胞与组织干细胞成功分离、体外扩增与诱导分化研究的成功，为人类医学发展提供了宝贵的材料；胚胎干细胞，胰腺干细胞，神经干细胞，骨髓干细胞，皮肤干细胞，角膜干细胞6.转基因细胞（细胞转染基因）技术的成功，为转基因动物的生产创造了条件；7.胚胎嵌合技术一种或两种动物胚胎共同生长发育形成一个生物个体的技术，即在一个生物体内，含有来源于两个不同胚胎的细胞和组织；8.细胞融合技术将两种或两种以上的细胞融合，形成一个具有新性状的细胞，这种技术称为细胞融合技术。
动物细胞与组织培养
体内外细胞的差异 1. 与体内主要不同 相对孤立、相对单一，
缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响 2. 主要表现
抗原决定簇---抗原分子上可以诱导出抗体的部位或片段
多克隆抗体----一种抗原通常具有多个不同的抗原决定簇，因此能刺激多个 B 淋巴细胞产生 相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原决定簇的单克隆抗体混合物，称为多 克隆抗体
杂交瘤细胞---将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的
人抗鼠抗体（HAMA）反应----鼠来源的单抗在人体内是外源物质，很可能会产生人体免疫系 统对它的排斥反应：产生抗鼠的抗体
血清的缺点 对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，可能改变某种细胞在体内的
正常状态 血清含一些对细胞产生毒性的物质 动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。 取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠 性。 血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产 中分离纯化工作很难完成。 大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部 分之一
体外培养细胞生存所需基本物质 （一）糖 （二）氨基酸 （三）维生素 （四）促生长因子 （五）其它物质
细胞培养的常用液体 水 平衡盐溶液---由无机盐、葡萄糖组成，维持细胞渗透压平衡，保持 pH 稳定及提供简单的营 养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。 消化液---进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴 壁细胞从瓶壁上消化下来。胰酶溶液和 EDTA 溶液，胶原酶溶液 消化酶抑制剂----血清，大豆胰蛋白酶抑制剂 pH 调整液----NaHCO3 溶液，HEPES 溶液 抗生素液---青霉素，链霉素 谷氨酰胺补充液----（1）频繁打开盖子，增加了破坏无菌状态的可能性；
第二章细胞工程第2节动物细胞工程 教学课件人教版高中生物选择性必修3
旁栏边角想一想 动物细胞培养时,除了添加糖类、氨基酸等必要的营养成分外,往往还需添 加血清等一些天然成分,原因是什么? 提示 人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚,血清等一些天然成分 的营养成分比较齐全,可以弥补人工培养基的不足。
结论语句辨一辨
1.在25 ℃的实验条件下可顺利完成人神经细胞的培养。( × )
结论语句辨一辨 1.胚胎干细胞可以来源于早期胚胎,也可以来源于成熟个体。( × ) 2.成体干细胞没有组织特异性,可以分化成特定的细胞或组织,不具有发育 成完整个体的能力。( × ) 3.由iPS细胞产生的特定细胞,可以在新药的测试中发挥重要作用。( √ ) 4.体外培养胚胎干细胞可以不断增殖而不发生分化。( √ )
第2章细胞工程
第2节 动物细胞工程
第1课时 动物细胞培养 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体 P34 第3课时 动物体细胞核移植技术和克隆动物 P63
课程标准
1.认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养, 分析动物细胞培养需要的基本条件。 2.尝试构建动物细胞培养的基本流程,比较动物细胞培养和植 物组织培养的异同。 3.概述干细胞的分类,探讨干细胞在临床上的应用及面临的风 险,理性看待生物技术。
(2)培养条件 ①营养条件:将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养 基,称为合__成__培__养__基__,在使用时,通常需要加入___血__清____等一些天然成分。 ②无菌、无毒的环境:在体外培养细胞时,需要对培养液和所有培养用具进 行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。培养液还需要定期更换,以便 清__除__代__谢__物__,防止其积累对细胞自身造成危害。 ③适宜的温度、pH和渗透压:维持细胞生存必须有适宜的温度。哺乳动物 细胞培养的温度多以_3_6_._5_±__0_.5__ ℃为宜。多数动物细胞生存的适宜pH为 __7_._2_~_7_.4___。 ④适宜的气体环境:通常采用培养皿或_松_盖__培__养__瓶__,并将它们置于含有95% 空气和5%CO2的混合气体的_C_O_2_培__养__箱__中进行培养。O2是细胞代谢所必 需的,CO2的主要作用是__维__持__培__养__液__的__p_H___。
2.2动物细胞工程课件-高二下学期生物人教版(2019)选择性必修3
iPS诱导方法？ 细胞发 1、转录因子转化法
生转化
干细胞中有一些特殊的转录因 子，对于有重要作用 转录因子基因导入动物体细胞
iPS细胞
2.化学诱导法 分化 通过特定的化学小分子组合的
作用，诱导动物体细胞转化为 干细胞
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.传统方法？缺陷？ 2.若要得到大量的单一抗体，我们该如何去做？
②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种 培育等的重要手段。 ③利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制 造单克隆抗体开辟了新途径。
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 2.单克隆抗体制备过程
获得能产生特定抗
体的B淋巴细胞
多种
选择性培养基 第一次筛选
一个B淋巴细胞
克隆化 培养
B淋巴细胞群
产生
单克隆抗体
存在什么问题？ 浆细胞不能增殖
单克隆抗体（纯度高、特异性强、可大量制备）
1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学 家科勒设计实验获得了单克隆抗体。 1984年获得诺贝尔生理学或医学奖。
要实现这一方案，需要解决哪些困难？
细胞融合、筛选、大规模培养
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 1.动物细胞融合技术
个体的能力
官甚至_个___体__
分化成心肌细胞、神经元和 造血干细胞等
造血干细胞用于治疗白 血病；神经干细胞用于 治疗帕金森病、阿尔茨 海默病；精原干细胞
治疗小鼠的镰状细胞 贫血、阿尔茨海默病、 心血管疾病等
转入相关因子
取成纤维细胞等
病 人
移植
神经元 胰岛细胞
血细胞
肝细胞
肠上皮细胞 心肌细胞
iPS细胞用于治疗人类疾病示意图
种类
2.2 动物细胞工程
第2章细胞工程第2节动物细胞工程一、动物细胞培养1.概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
2.原理：细胞增殖3.地位：动物细胞工程的基础4.关键操作：原代培养和传代培养。
（一）动物细胞培养的条件1.营养（1）成分①已知成分将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
①未知成分使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。
（2）培养基的物理性质培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。
2.无菌、无毒的环境①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；①在无菌环境下进行操作；①还需要定期更换培养液。
3.温度、pH和渗透压（1）适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5①为宜。
（2）适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。
（3）适宜的渗透压：维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。
4.气体环境（1）组成：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
（2）气体作用：①O2：O2是细胞代谢所必需的；①CO2：CO2的主要作用维持培养液的pH。
（二）动物细胞培养的过程①原代培养：将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。
①传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养；①细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁；①接触抑制：当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
1.取动物组织（1）取材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
（2）取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。
2.制成细胞悬液（1）制成细胞悬液的步骤：①将组织分散成单个细胞；①用培养液将细胞制成细胞悬液。
（2）将组织分散成单个细胞的原因：①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；①能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
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3 传递窗:
该装置是一种洁净室 的辅助设备，主要用于 洁净区与洁净区，洁净 区与非洁净区之间小件 物品的传递，以减少洁 净室的开门次数，把对 洁净区的污染降低到最 低程度。
4 高效过滤器:
●高效过滤器是用超细玻璃纤维 纸作滤料，胶板纸作分隔板，可 与铝合金框、木框及镀锌钢板框 组合而成。 ●特点：具有低阻高效、轻质、 容尘量大等特点， ●适用于常温常压常湿条件下环 境空气的净化.
洁净度级 别
尘粒最大允许数/立方米
尘粒最大允许数
≥0.5um
≥5um 浮游菌/立方 沉降菌/皿
100
3,500
0
5
1
10,000
350,000
2,000
100
3
100,000 3,500,000
20,000
500
10
300,000 10,500,000
60,000
NA
15
2 风淋室:
●风淋室是生物洁净室 的理想配套设备，用于 吹除进入洁净厂房的人、 物表面附着的尘埃 ●是进行人身、物料净 化和防止室外空气侵入 洁净区的有效设备 ●风淋室可以配合加热 器，冬天可以加热，温 度可调，一般控制温度 在30-35℃较为适宜。
细胞保存条件：液氮罐 实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全
(一) 无菌条件
• 净化工作室，风淋室，传递窗，高效过 滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净 工作台，紫外灯，电热干燥箱，高压灭 菌器，抗生素.
1 净化工作室
------ 我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准 -------
第一节 细胞培养的基础知识
一 动物细胞培养的基本条件
无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器， 洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外 灯，电热干燥箱，高压灭菌器，抗生素
细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， CO2培养箱，培养基，血清
细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器，高 速离心机，移液器
CO2培养箱主要由箱体结构 件、温度控制系统和CO2浓度 控制系统三部分组成。
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。
再现活体环境对于温度、PH值 CO2浓度、氧分压（O2浓度）、相 对湿度等细胞生长关键的因素，
6 移液器
(三) 细胞检测条件：
• 倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器， 高速离心机，移液器
5 洁净层流罩:
层流罩是可提供局部高洁净 环境的空气净化设备。洁净 层流罩是将空气经风机以一 定的风压通过高效空气过滤
器后，使洁净空气呈垂直气 流送入工作区，从而保证了
工作区内达到工艺所需的高 洁净度。
6 超净工作台
超净工作台的工作 原理是利用鼓风机 驱动空气通过高效 滤器除去空气中的 尘埃颗粒，使空气 得到净化。净化空 气徐徐通过工作台 面，使工作台内构 成无菌环境。
滤器
大容量高压灭菌器
(二) 细胞生长条件
• 纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， CO2培养箱，培养基，血清
1自动双重纯水蒸馏器
2 纯水仪
精滤、活性碳吸附 反渗透
3 标准型细胞培养板 （Tissue Culture Plates）
6孔，12孔，24孔，48孔，96孔
4 培养瓶
5 C全防护实验室
实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于 对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学 的普通微生物实验室等。
二级生物安全防护实验室 实验室结构和设施、安全操作规程、 安全设备适用于对人或环境具有中等 潜在危害的微生物。
二级生物安全防护实验室
1 可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作均应在生物安全柜(Ⅱ级生物 安全柜为宜)或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。
7 生物安全柜:
一种既能使操作造成无菌、 无尘的局部空气环境，保证检 验、检测不受污染，又能保证 被研究的对象（如病菌、细菌 等）不外溢，保护周围环境及 操作人员的安全隔离设备。
该设备可广泛应用于低、 中等危险度的临床细菌学，病 毒学、微生物学、组织培养、 生物学及生命科学的研究，加 工、检验部门。
4 在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时，防护服必须脱 下并留在实验室内。不得穿着外出，更不能携带回家。用过的工作服应先在实验 室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。
5 当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染 性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束 后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。
2 处理高浓度或大容量感染性材料均必须在生物安全柜(Ⅱ级生物安全柜为宜) 或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。 上述材料的离心操作如果使用密封的离心机转子或安全离心杯，且它们只在生物 安全柜中开闭和装载感染性材料，则可在实验室中进行。
3 当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行而必须采取外部操作时，为防 止感染性材料溅出或雾化危害，必须使用面部保护装置(护目镜、面罩、个体呼吸 保护用品或其他防溅出保护设备)。
• 液氮罐
-196 ℃
(五) 实验室安全：
• 生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全
实验室安全
层流净化细胞培养室管理规则 一级生物安全防护实验室 二级生物安全防护实验室 三级生物安全防护实验室 四级生物安全防护实验室
层流净化细胞培养室管理规则
局部小环境空气 达到洁净度等级
层流净化细胞培养室的总体要 求：经济、有序、高效、安全。 初步制定相关制度如下：
8 紫外灯 ：紫外线消毒。主要用于培养室空气、 操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 。
9 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃 器皿消毒 。
10蔡氏（ Zeiss）滤器：过滤除菌，滤器中的滤膜 一般用0.2～0.3μm孔径的微 孔滤膜。凡在高温或 射线下易发生变性或失去功能的物质，如人工合 成培养液、血清、消化 用胰酶等都须用滤器过滤 除菌。
15
用于微生物、细胞、细菌、组织 培养、悬浮体、沉淀物等 的观察，并可将此过程中的任一形态拍摄下来。
2 酶标仪
3 微孔板震荡器
通过自动酶标仪计数来检测活细胞 数量。
主要用于酶标板、细胞培 养板(如6孔板、12孔板、 24孔板、48孔、96 孔板 等)等溶液的混匀或细胞 的混匀。
(四) 细胞保存条件：