培养基概述及细胞培养
细胞培养方法
细胞培养方法
细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，它可以提供大量的细胞用于实验研究。
正确的细胞培养方法对于细胞的生长、增殖和实验结果的准确性都至关重要。
下面将介绍一些常用的细胞培养方法及注意事项。
首先，准备培养基。
培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长因子的混合物。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据不同细胞类型的要求选择适当的培养基。
在制备培养基时，需要注意无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
其次，处理细胞。
从细胞库中取出细胞后，需要进行细胞的处理和传代。
处理细胞时，要注意细胞的密度和活性，避免细胞凝集和死亡。
传代时，要根据细胞的生长状态和密度进行适当的稀释，以保证细胞的健康生长。
接着，进行细胞的接种和培养。
将处理好的细胞按照一定的比例接种到预先涂有培养基的培养皿中，然后将培养皿放入培养箱中进行培养。
在培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态，及时更换培养基，避免细胞过度生长或死亡。
最后，进行实验。
当细胞达到所需的数量和状态后，就可以进行相关的实验。
在实验过程中，需要注意培养皿的无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
同时，要注意细胞的处理和操作方法，避免对细胞造成损伤。
总之，正确的细胞培养方法对于细胞的生长和实验结果至关重要。
只有严格遵守操作规程，做好无菌操作，才能得到可靠的实验结果。
希望本文介绍的细胞培养方法能够对大家有所帮助。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
《培养基的种类》课件
常用类型
单倍液体培养基
含有单倍营养物质，适用于快速生长 的微生物。
倍比液体培养基
天然液体培养基
以天然原料为基础，添加适量营养物 质和生长因子，适用于特定微生物的 培养。
含有倍比营养物质，适用于生长较慢 的微生物。
应用领域
工业发酵
用于生产各种酶、抗生素、氨基 酸和有机酸等生物制品。
医学研究
用于病毒、细菌和寄生虫的培养 、分离和鉴定。
环境监测领域
用于检测水体、土壤和空气中的微 生物污染情况，评估环境质量。
03
液体培养基
定义与特点
定义
液体培养基是一种不包含固体成分的培养基，完全呈液态。
特点
液体培养基可以提供微生物生长所需的水分、营养物质和生长因子，促进微生 物快速生长和繁殖。同时，液体培养基也便于搅拌和混合，有利于微生物的均 匀分布和氧气供应。
食品工业
在食品工业中，选择性培养基 用于检测食品中的微生物，如 大肠杆菌、沙门氏菌等。
医学领域
在医学领域，选择性培养基用 于临床诊断和治疗中，如结核 病的诊断和病原菌的分离培养 。
环境监测
在环境监测中，选择性培养基 用于检测水体和土壤中的特定
微生物，如总大肠菌群等。
05
其他培养基
高盐培养基
总结词
根据成分分类
根据培养基的成分，可分 为天然培养基、合成培养 基和半合成培养基。
根据物理状态分类
根据培养基的物理状态， 可分为液体培养基和固体 培养基。
02固体培养基源自定义与特点定义固体培养基是一种在微生物培养 中使用的凝固剂，使培养基保持 一定的形状和硬度。
特点
固体培养基具有较好的稳定性， 能够为微生物提供适宜的生长环 境，使微生物在生长过程中形成 可见的菌落。
微生物的培养基
将病毒接种于鸡胚内，利用鸡胚提供的营养物质和生长环 境进行病毒培养。
组织培养物
利用离体组织或器官进行病毒培养，如人胚肾细胞、人胚 肺细胞等。
特殊微生物培养基
厌氧培养基
用于培养厌氧微生物，如破伤 风梭菌、产气荚膜梭菌等，需
要在无氧环境下生长。
嗜热微生物培养基
用于培养在高温下生长的微生 物，如嗜热脂肪芽孢杆菌等， 需要在高温条件下进行培养。
真菌培养基
01
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
广泛用于培养各种真菌，以马铃薯为主要成分，提供丰富的碳源和氮源
。
02
查氏培养基
适用于培养青霉、曲霉等丝状真菌，成分简单，以蔗糖为主要碳源。
03
麦芽汁培养基
用于培养酵母菌等单细胞真菌，以麦芽汁为主要成分，提供丰富的营养
物质。
病毒培养基
动物细胞培养基
病毒需要在活细胞内才能复制，因此常用动物细胞（如 Vero细胞、HeLa细胞等）作为病毒培养基。
无机盐与微量元素
无机盐
维持微生物正常生理功能所需的矿物质元素，如磷酸盐、硫酸盐 、氯化物等。
微量元素
对微生物生长有重要影响的痕量元素，如铁、锰、锌、铜等。
无机盐与微量元素的作用
参与微生物的代谢过程，维持细胞渗透压和酸碱平衡，促进酶活性 等。
水与pH值调节
1 2
水
微生物生长的基本条件之一，需保持适当的含水 量以满足微生物的生长需求。
合成高分子材料
探索合成高分子材料如聚乳酸、聚羟基脂肪酸酯等在培养基制备中 的应用，以改善微生物的生长环境和产物特性。
复合培养基材料
将不同类型的培养基材料进行复合，以发挥各自的优势，提高微生 物的培养效果。
培养基概述及细胞培养
培养基概述及细胞培养培养基是一种用于细胞培养的基础营养物质，提供了细胞所需的生物学和化学环境。
细胞培养是一项重要的实验技术，可用于研究生物学、生物医学以及药物研发等领域。
为了成功进行细胞培养，了解培养基的概述及其组成是非常重要的。
培养基是细胞培养的基础，它提供了细胞所需的营养物质、生长因子以及适当的环境条件。
一般来说，培养基由三个基本部分组成：营养物质、生长因子以及缓冲剂。
营养物质包括碳水化合物、氨基酸、维生素和无机盐等，它们提供细胞进行代谢所需的能量和原料。
生长因子是一种促进细胞生长和增殖的物质，可以是蛋白质因子、激素、细胞因子等。
缓冲剂则是用于调节培养基的pH值，使其维持在适当的范围内，确保细胞的正常生长。
根据细胞培养的需要，培养基可以分为不同的类型。
最常见的培养基类型包括无血清培养基、血清培养基以及特殊培养基。
无血清培养基主要通过去除胎牛血清或其他的动物血清来降低培养基的非特异性成分。
血清培养基则是在培养基中添加10-20%的胎牛血清，以提供细胞所需的营养物质和生长因子。
特殊培养基则是为特定类型的细胞而设计的，例如神经细胞培养基、肌肉细胞培养基等。
除了基本的营养物质和生长因子外，培养基中还可以添加其他的成分。
例如，抗生素可以用于防止细菌或真菌污染；肌动蛋白酶抑制剂可以用于防止细胞的黏附，从而保持细胞的单质性；胶原酶可以用于细胞的分离等。
此外，培养基还可以根据需要进一步调整，例如，添加激素来诱导细胞分化，或者添加药物来研究其对细胞的影响等。
细胞培养的成功需要合适的培养基和培养条件，以及合适的培养技术。
细胞培养的技术包括细胞种植、传代、维持和检测等。
细胞种植是将细胞接种到培养基上并使其附着生长的过程。
传代是指细胞的分裂和扩增过程，以维持细胞的生长。
细胞维持是指在培养基中维持细胞的生长状态，保持其形态和功能。
细胞检测则是通过细胞培养上清液中的物质浓度变化、形态学变化以及免疫组织化学染色等来评估细胞的生长状态和功能。
生物-微生物的基本培养技术
微生物的基本培养技术[高中生物] 1.概述培养基的成分和配制方法。
2.区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。
3.概述微生物纯培养的基本操作要求。
一、培养基的配制1．培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2．作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
3．培养基种类Error!特别提醒 (1)固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
(2)病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能利用人工培养基来培养。
4．培养基的营养构成(1)主要营养物质：水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。
(2)某种常见的细菌培养基——牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成组分含量提供的主要营养牛肉膏 5 g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10 g氮源和维生素等NaCl 5 g无机盐H2O定容至1 000 mL水(3)还需满足微生物对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
例如：在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。
判断正误(1)用于发酵的微生物主要指细菌和真菌( )(2)培养基中加入琼脂的目的是提供碳源( )(3)所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源( )(4)培养不同微生物的培养基成分完全一样( )答案 (1)√ (2)× (3)× (4)×探讨点 概述培养基的种类和营养构成资料一：配制培养酵母菌的培养基：称取去皮的马铃薯200 g，切成小块，加水1 000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。
向滤液中加入20 g葡萄糖(也可用蔗糖代替)、15～20 g琼脂，用蒸馏水定容至1 000 mL。
资料二：100 g马铃薯中含有80 g水、2 g蛋白质、16 g碳水化合物，还有维生素、无机盐等。
细胞培养基种类及用途
细胞培养基种类及用途1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：DMEM 是最常用的无血清培养基之一，是以鹰的鸟胚为基础改进而来的，含有大量氨基酸、糖类、维生素和一些重要的生长因子。
适用于大多数哺乳动物细胞的培养，具有优良的细胞增殖和生长效果。
2.RPMI1640：RPMI1640是一种由罗斯韦尔公立医院制备的细胞培养基，主要用于淋巴细胞、淋巴瘤和骨髓细胞的培养。
它具有高浓度的氨基酸和维生素，适合长期的培养以及体外细胞繁殖实验。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：MEM 是一种最简单的细胞培养基，含有大量的必需氨基酸、维生素和果糖。
它广泛用于原代细胞和肿瘤细胞的培养，具有适应性强、成本低的优势。
4. FBS（Fetal Bovine Serum）：FBS 不是一种细胞培养基，而是培养基中添加的血清。
FBS 富含细胞生长因子、激素和营养物质，可提供所需的细胞补体和血浆蛋白。
它被广泛用于细胞培养中，可以促进细胞的增殖和生长。
5. StemPro MSC SFM：StemPro MSC SFM 是一种专门设计用于人类间充质干细胞（MSC）培养的无血清培养基。
它富含生长因子和维生素，可以维持 MSC 的干性状态，有利于其增殖和多向分化。
6. Neurobasal medium：Neurobasal 是一种特殊的神经元细胞培养基，用于神经元细胞的培养。
它含有许多神经营养因子和激素，能够促进神经细胞的生长和分化。
7.DMEM/F12：DMEM/F12是一种混合型细胞培养基，是DMEM和HAMF12培养基的混合产物。
它具有增强细胞的生存能力和增殖速度的优势，适用于许多类型的肿瘤细胞和原代细胞的培养。
细胞培养基的选择要根据具体实验目的和细胞类型来确定。
不同种类的细胞培养基在细胞生长、增殖和分化方面有不同的影响，因此合理的选择细胞培养基可以提高实验效果和数据可靠性。
细胞培养基大全
细胞培养基⼤全⼀、细胞培养基的概念和原理细胞培养基是⼈⼯模拟细胞在体内⽣长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞⽣长增殖的物质基础。
培养液或培养基的含义⼏乎相同，英⽂都是medium。
当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，⽽将粉剂配成液体后，多称为培养液。
培养液中常常补加⾎清、抗⽣素等成分。
培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和⽆⾎清细胞培养基等。
天然细胞培养基是⼈们早期采⽤的细胞培养基，直接取⾃于动物组织提取液或体液，如⾎浆凝块、⾎清、淋巴液、胚胎浸出液等。
营养价值⾼，但成分复杂，差异⼤、不稳定，来源也受到限制。
⽔解乳蛋⽩和胶原是两种较好的天然培养基，富含氨基酸。
⾎清是天然培养基中最有效和最常⽤的培养基，但其组成成分复杂，其中⼀些成分与功能不明确。
⾎清的来源有胎⽜⾎清、⼩⽜或成⽜⾎清、马⾎清、鸡⾎清、⽺⾎清及⼈⾎清，最⼴泛应⽤的为胎⽜⾎清和⼩⽜⾎清。
合成细胞培养基是⽤化学成分明确的试剂配制的培养基，组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维⽣素、⽆机盐类等。
⾃1950 年199 细胞培养基问世以来，合成细胞培养基发展⾄今已有⼏⼗种，除了沿⽤半个世纪的基础合成细胞培养基之外，近年来还出现了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常⽤基础细胞培养基有6～7 种，如BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640、199 等。
由于天然培养基的⼀些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替，因此⼀般需在合成细胞培养基中添加5％～10％的⼩⽜⾎清。
⼩⽜⾎清的加⼊对细胞培养⾮常有效，但⼩⽜⾎清的成分复杂，这对培养产物的分离纯化和检测会带来⼀定的不便，为减少⼩⽜⾎清的影响，开发了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基，可以将⼩⽜⾎清的使⽤量降低到1～3％。
⽆⾎清细胞培养基（serum free medium， SFM）是指在使⽤中⽆需添加⾎清的细胞培养基，且其组成成分不含有任何动物组分。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
培养基概述及细胞培养
体外培养包括：组织培养、细胞培养、器官培养。
顾名思义，就是将活体结构成分从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。
广义组织培养与体外培养同义。
体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。
直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。
现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。
细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。
培养过程中细胞不再形成组织。
细胞培养目的与用途
科学研究
(1)药物研究开发，如新药筛选，疫苗、基因工程药物、细胞工程药物
研究与开发、单克隆抗体制备等。
(2)基础研究，如药物作用机理、基因功能、疾病发生机理等研究。
生物制药
(1)疫苗生产：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)，多肽疫苗(肿瘤疫苗)等。
(2)基因工程药物生产：如EPO等。
(3)抗体药物、基因治疗药物生产。
(4)细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等。
(5)利用细胞法体外测定生物活性物质的活性;并预测其在体内的药效和替代体内法检测其成品的生物活性。
细胞培养基
人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质,它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
1.天然培养基
来自动物体液或利用组织分离提取的一些培养基，如动物血浆、胚胎浸出液、血清和人血清，水解乳蛋白等。
2.合成培养基
人工设计、配制的培养基。
动物细胞培养技术
动物细胞大规模培养已成为生物制药领域最重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。
蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。
蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过全世界的生产能力。
动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时间，加快工业化进程。
当前已获FDA批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺中，占有主流优势的是搅拌式生物反应器悬浮培养，工艺设计是流加或灌注培养。
其大规模细胞培养生产所面临的挑战是获得最大生产力的同时注重维持产品的质量;去除所有培养环境中外源因子的污染;更为精确有效的工艺控制手段;规模化培养中氧气的限定与溶解CO2浓度累积的控制等。
动物细胞大规模培养技术集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应容器三个方面，构成生物制品生产的必要条件。
其中细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞质量直接影响蛋白的表达量或病毒的滴度，故筛选、驯化优质细胞是关键。
而只有好的细胞培养基才可能筛选、驯化出优质的细胞。
细胞生物反应容器也在不断发展，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合高密度培养、微载体培养、悬浮培养技术，均需要相适应的细胞培养基以充分发挥作用,获得高表达、高产量，降低生产成本。
清大天一公司致力于动物细胞培养技术的开发和服务，跟随生物技术的发展，针对各种生物制品特点不断开发针对性培养基新产品，建立多种细胞体系的疫苗、抗体药物生产细胞培养技术平台，以提高相应细胞培养水平和生物制品表达水平，促进生物制药发展。
细胞培养技术对生物制品成本的影响
表达量提高
通过细胞培养技术的不断改进可以充分利用现有设备，大幅度提高生物制品表达量，降低生物制品的单位制造成本;同时，由于产量提高并不新增固定资产投资，也带来生物制品的单位固定成本的降低。
因此提高表达量可以有效降低生物制品的单位成本，既降低变动成本，也降低固定成本，使得制品利润率提高，市场竞争能力增强。
培养液成本降低
在很多使用牛血清的细胞培养液中，为牛血清支付的成本远远高于培养液中的细胞培养基等其它成分，因此通过采用低血清细胞培养基，降低牛血清用量，可以降低细胞培养液总成本。
纯化成本低，制品安全性提高
牛血清的使用量不仅增加了细胞培养液的成本，更严重的是带来动物来源成分、杂蛋白，以及不安全因素，这些成分越多，纯化的成本越高、生物制品原液损失越大，生物制品的成本越大。
因此采用低血清、无血清培养细胞可以有效降低纯化成本何损失，提高生物制品成品率和利润率。
综合成本降低
动物细胞培养技术是生物制品产业化的核心技术之一，在生产中，应该系统、全面的研究细胞培养技术对生物制品成本的综合影响，不断追求最佳的细胞培养技术，提高生产效率，有效降低生物制品成本，提高利润率，增强产品市场竞争力。
细胞生存条件
1.基本营养物质
(1) 糖
六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。
(2) 氨基酸
维持生存需12种氨基酸(精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬)。
谷氨酰胺需量最大,缺乏时细胞生长不良。
单细胞培养或细胞量少时,所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。
(3) 维生素
细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。
2.促生长因子、激素类物质
3.其它物质
基本元素、微量元素、促细胞贴附物质(纤粘连蛋白、层粘连蛋白laminin、IV型胶原、氨基多糖类)
4.水
主要成分和生存环境,要求高纯度水。
5.温度
哺乳动物及人源细胞最适培养温度为35℃—37℃,对低温耐受力比高温强。
39℃以上受损→死亡;不低于0℃时(0℃-34℃)，细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。
6.气体环境和pH
需O2、CO2 ，通氧量过大对细胞有毒害。
CO2主要与维持pH有关，细胞培养最佳pH 为7.2—7.4，通过缓冲系统和调节CO2含量，维持正常pH。
开放培养要求5%CO2环境、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml可防止pH变化。
含Earle’s缓冲系统的培养基适合于5%CO2的培养条件，Hanks’缓冲系统的培养基仅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5%CO2的环境，若放入CO2培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。
7.湿度和光
开放培养相对湿度控制在95%。
细胞培养需避光，紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。
8.影响细胞生长的其它因素
接触橡胶用品、收集细胞时离心速度过大、细胞接种浓度过低等。
细胞培养基的基本要求
营养成分
氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。
促生长因子及激素
渗透压
pH
无毒、无污染。