HPLC法测定维生素B2片的含量及有关物质

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HPLC法测定维生素B族片中3种组分的含量

HPLC法测定维生素B族片中3种组分的含量摘要：目的获取维生素B片中B1、B2、B6的含量，测量方法是运用高效液相色谱法对三种成分同时进行测量。

方法运用C18柱，流动相以1.0ml/min流动，流质为0.005mol/L的庚烷磺酸钠溶液（0.05%三乙胺0.5%冰醋酸）-甲醇。

紫外检测波长为280nm。

结果本实验中维生素B1,B2,B6线性范围分别为2.964～74.1 mg·ml-1，2.934～73.35 mg·ml-1，2.996～74.9 mg·ml-1 ,三种成分的方法回收率依次是97.5%，99.7%，100.5% ，RSD依次是1.21%，1.5%，0.9%。

结论该方法分离质量佳，高效快捷，能够很好的控制多维片中维生素B1 、B2、B6的质量。

关键词：HPLC法，维生素B族片；维生素B1 ，维生素B2 ，维生素B6 B族维生素由于其水溶性特点在人体新陈代谢中扮演着重要的角色。

维生素B 族片在临床上主要用于防治因缺乏多种B族维生素所致的各种疾病,同时也常作为营养及能量补充剂。

对B族维生素分析检测目前有些报导采用分光光度法[1]电化学法[2]、荧光法，微生物法等，操作繁琐费时。

本文用HPLC法在对含有多种维生素的片剂中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量测定时同时进行测定，得到满意结果，该方法简便、准确、快速、重现性好，可用于对维生素B1 ，维生素B2，维生素B6的质量控制。

1.实验仪器与试药1.1 仪器Agilent 1200高效液相色谱仪1.2 试剂产自国药集团的冰醋酸和三乙胺均为分析纯；而自东京化成工业株式会社进口的庚烷磺酸钠是色谱纯；甲醇（TEDIA COMPANY ,LOT 001917）为色谱纯。

试验过程中的水一律采用蒸馏水；三种成分的对照品全是中国药品生物制品检定所提供，其中维生素B1 对照品的批号是100390-200301；B2 对照品的含量98.7%、批号是100369-200502，维生素B6 对照品的批号是100116-200502）。

维生素B2片分析方法验证方案

一．概述1.维生素B2片含量测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。

1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇(85∶10∶5)为流动相；检测波长为444nm。

理论板数按维生素B2峰计算不低于2000。

1.2测定法避光操作。

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素B2 10mg)，置500ml量瓶中，加盐酸溶液(1→2)10ml，振摇使维生素B2 溶解，加水20ml，继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品约10mg，同法测定。

按外标法以峰面积计算，即得。

1.3本品含维生素B2计算，应为标示量的90.0% ～110.0%。

2. 维生素B2片溶出度测定：照溶出度与释放度测定法（通则0931第二法）测定法避光操作。

取本品，以冰醋酸3ml与4%氢氧化钠溶液18ml用水稀释至600ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经20分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液，照紫外-可分光光度法（通则0401)，在444nm的波长处测定吸光度，按C17H20N4O6的吸收系数()为323计算每片的溶出量。

限度为标示量的75%，应符合规定。

3. 维生素B2片有关物质测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件照含量测定。

避光操作。

取本品的细粉适量（约相当于维生素B2 10mg)，置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（1→2)5ml，振摇使维生素B2溶解，加水10ml，继续振摇数分钟，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

精密量取供试品溶液与对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.75倍(1.5% ) ，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（3.0% )。

高效液相法测定维生素B2原料药的含量

高效液相法测定维生素Ｂ２原料药的含量作者：唐红梅罗文华陈华樊宇戎张金莲来源：《中国医药导报》2009年第01期[摘要] 目的：建立HPLC法测定维生素B2的含量方法。

方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）；流动相为甲醇-0.35%磷酸的0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液(26∶74)；检测波长267 nm；流速1.0 ml/min；柱温35℃。

结果：维生素B2在1.5～12 μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为Y=94.617 65X-0.467 68（r=0.999 95，n=6），低、中、高三种浓度的回收率分别为99.48%、99.26%、100.54%，RSD分别为0.37%、0.18%、0.18%。

结论：该法快速、准确，灵敏度高，重现性好，可用于维生素B2的质量控制。

[关键词] 维生素B2；高效液相色谱法；含量测定[中图分类号] R927.2[文献标识码]Ｂ [文章编号]1673-7210（2009）01（a）-045－０3Determination of vitamin B2 in vitamin B2 bulk drug with HPLCTANG Hong-mei1, LUO Wen-Hua1*, CHEN Hua1 , FAN Yu- rong1,ZHANG Jin -lian2（1.Jiangzhong Pharmaceutical Co.LTD.,Nanchang330004, China; 2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang330004, China）[Abstract] Objective: To establish a HPLC method for the determination of content of vitamin B2 in vitamin B2 bulk drug. Methods: The Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）was used, mobile phase was methanol-0.35%phosphoric acid and 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate solution (26∶74) with the flow rate of 1.0 ml/min, detected wavelength was set at 267 nm, column temperature was 35℃. Results: The calibration curve was linear at the range of 1.5-12 μg/ml for vitamin B2. The linear equation was Y=94.617 65X-0.467 68(r=0.999 95, n=6), The average recovery of vitamin B2 in the low, medium and high concentrations were 99.48%, 99.26% and 100.54%, respectively; RSD were 0.37%, 0.18%, 0.18%, respectively. Conclusion: This method is rapid, accurate, high sensitivity and good reproducibility, it can be used for quality control of vitamin B2 bulk drug.[Key words] Vitamin B2; HPLC; Determination维生素B2，又名核黄素，为水溶性维生素，容易消化和吸收。

HPLC法测定维生素B2片的含量

54• 实验研究 •下午4时最高，入睡后由于血液流动相对缓慢，血液黏稠度增加，若于此时加服降高血压药物，就会使血压进一步下降，易引起有脑动脉硬化的高血压患者形成脑血栓，故不宜在睡前服用。

建议降高血压药根据药物半衰期在早晨7时一次给药，或上午、下午两次给药。

2.5 糖皮质激素类肾上腺皮质激素在体内有昼夜节律，长期应用突然停药可能发生肾上腺功能不全，引起严重后果，导致肾上腺皮质功能和其他功能的昼夜节律紊乱，如果在体内血液中皮质激素的自然峰值时（早晨7~8时）一次性给药，则对脑下垂体促皮质激素释放的抑制程度要比通常平均分为3~4次的给药方法轻得多，因此，应将皮质激素的药物给药每日总量在每日或隔日的早晨一次性给药，达到更合理的用药目的，如用泼尼松、地塞米松等在肿瘤化疗前和控制某些慢性疾病时，采用隔日给药法，即把48h用药量在早饭后8时左右1次服用，其疗效较每日用药好，而且不良反应小。

2.6 强心苷类心力衰竭患者对西地兰、地高辛等药物的敏感性以凌晨4时最高，比其他时间给药的效应高达40倍。

因此，如果需要早晨注射强心苷药物时应减少剂量，否则易出现毒性反应。

2.7 抗癌类根据有关资料和临床实践表明，上午10时是抗癌药物使用的最佳时间，因为癌细胞的DNA在每天上午10繁殖复制速度最快，晚上10时最慢，如：用抗癌药（阿糖胞苷）治疗白血病时最好是上午8~11时给药，而此时用药的毒性也最小。

2.8 胰岛素降血糖药糖尿病患者有“拂晓现象”的特点，对胰岛素的敏感时间大约在早晨，若此时给予最低剂量，便可获得最满意的疗效，故胰岛素降血糖药的使用，在上午给药要比下午给药好。

2.9 解热镇痛抗风湿阿司匹林在早晨服药的生物利用度较晚间服药者大，其体内消除速率慢，半衰期长，血药浓度高，建议早晨一次性服用。

吲哚美辛上午7时口服可达最高血浓度，不达到峰值也较其他时间服药时快；如在19时服药，血药浓度峰值则较24平均值低20%。

风湿、类风湿病患者常服吲哚美辛，不良反应较大，因此，为提高疗效减少不良反应，早晨剂量宜小，晚间剂量宜大。

高效液相法测定维生素B2原料药的含量

高效液相法测定维生素Ｂ2原料药的含量目的：建立HPLC法测定维生素B2的含量方法。

结论：该法快速、准确，灵敏度高，重现性好，可用于维生素B2的质量控制。

[Abstract] Objective: To establish a HPLC method for the determination of content of vitamin B2 in vitamin B2 bulk drug. Methods: The Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）was used, mobile phase was methanol-0.35%phosphoric acid and 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate solution (26∶74) with the flow rate of 1.0 ml/min, detected wavelength was set at 267 nm, column temperature was 35℃. Results: The calibration curve was linear at the range of 1.5-12 μg/ml for vitamin B2. The linear equation was Y=94.617 65X-0.467 68(r=0.999 95, n=6), The average recovery of vitamin B2 in the low, medium and high concentrations were 99.48%, 99.26% and 100.54%, respectively; RSD were 0.37%, 0.18%, 0.18%, respectively. Conclusion: This method is rapid, accurate, high sensitivity and good reproducibility, it can be used for quality control of vitamin B2 bulk drug.[Key words] Vitamin B2; HPLC; Determination维生素B2，又名核黄素，为水溶性维生素，容易消化和吸收。

2013HPLC法测定维生素B_2片的含量及有关物质_谢子立

HPLC法测定维生素B2片的含量及有关物质谢子立(安徽省食品药品检验所，安徽合肥230051)摘要：目的建立高效液相色谱法测定维生素B2片的含量和有关物质。

方法采用C18色谱柱（250mmˑ4．6mm，5μm）；以甲醇—乙腈—10mmol·L－1庚烷磺酸钠溶液（含冰醋酸为0．5%）（5ʒ10ʒ85）为流动相；检测波长：444nm；流速：1．0mL·min－1。

结果在建立的色谱条件下，维生素B2能与杂质完全分离；维生素B2在0．1117 0．8938μg范围内线性关系良好，r=1．000；平均回收率为100．5%（n=9）；测定维生素B2的最小检出量为2．2ng。

结论该方法操作方便、准确，灵敏度高，专属性强，可用于维生素B2片的质量控制。

关键词：维生素B2片；高效液相色谱法；含量测定；有关物质HPLC determination of vitamin B2tabletsXIE Zi-li（Anhui Institute for Food and Drug Control，Hefei230051，China）Abstract：Objective To establish a method for the determination of content and related substances for vitamin B2tablets．MethodsC18column（250mmˑ4．6mm，5μm）was adopted with the mobile phase of a mixture of methanol-acetonitrile-10mmol·L－1sodium heptanesulfonate solution（0．5%glacial acetic acid）（5ʒ10ʒ85）．The flow rate was1．0mL·min－1and the detection wavelength was444nm．Results Under the described chromatographic condition，vitamin B2was completely separated from its impurities．A linearity be-tween peak area and vitamin B2was achieved in the range of0．1117 0．8938μg，with r of1．000．The average recovery（n=9）was 100．5%．The lowest detectable amount was2．2ng．Conclusion The method is convenient，accurate，specific and sensitive and can beused for quality control of vitamin B2tablets．Key words：vitamin B2tablets；HPLC；content；related substances维生素B2别名维他命B2、核黄素等，它是人体多种辅酶的重要组成部分，临床用于治疗口角炎、眼结膜炎、脂溢性皮炎以及阴囊炎等。

HPLC法测定复合维生素B片中四种成分的含量

ＨＰＬＣ法测定复合维生素Ｂ片中四种成分的含量目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定复合维生素B片中烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2 四种成分的含量。

方法：采用C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸（70∶30∶0.5）；流速为1.0 ml/min；检测波长：278 nm；柱温30℃。

结果：烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2分别在100.92~605.52、21.24~127.44、97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

结论：本方法简便、快速，可用于复合维生素B片的质量控制。

[Abstract]Objective:To establish a HPLC method for contents determination of the four components in Compound Vitamin B Tablets. Methods: The HPLC system consisted of C18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm), 0.005 mol/L sodium hexane sulfonate-methanol-glacial acetic acid(70∶30∶0.5) as the mobile phase with the flow rate of 1.0ml/min ,and 278 nm as the detective length.Results:The linear ranges of nicotinamide,vitamin B6,vitamin B1 and vitamin B2 were 100.92~605.52,21.24~127.44,97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml respectively.Conclusion:This method is simple,rapid and it can be used for the qulity control of Compound Vitamin B Tablets.[Key words]HPLC; Compound Vitamin B Tablets; Nicotinamide;Vitamin B6;Vitamin B1; Vitamin B2;Contents复合维生素B片是由烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2四种成分组成的复方制剂。

HPLC法测定维酶素片中维生素B2的含量

ＤｅｅｍｉａｉｎｏｆＶｉａｉｎＶｉａｏｎｚｍｅＴａｅｓｂＰＬＣｔｒｎｔｏｔｍｎＢｅｉｔｃｅｙｂｌｔｙＨ
ＦｕＰｎｐｎ，Ｚａｈｗｅｎｕｈｑａｇ（ｏｉｇＩｓｉｕｅｏＤｒｇＣｏｔｏ，ｉｇｉｇｈｏＺｉｉａｄＳｎＺｉｉｎＢａｄｎｎｔｔｔｆｒｕｎｒｌ
收率为９．３９１（一９，ＲＤ为０６。ｎ）Ｓ．９
关键词：维酶素片；维生素Ｂ；ＨＰ２ＩＣ
中图分类号：Ｒ９７２２．文献标识码：Ａ文章编号：１０ —７７（０８１０６— ３０２７７２０）０ —０５０
ｒｔｆ１０ｍＩａｅｏ．・ｍｉ．Ｔｈｅｅｔｖｖｌｎｔｓａ４ｎｎｅｄｔｃｉｅｗａｅｅｇｈｗａｔ４４ｍ．Ｉｈｄａｇｏｉｅｒｔｎｔｅｒｎｅｏｔａｏｄｌａｉｙｉｈａｇｆｎ００３６５３６ｇ（一１００．Ｔｈｖｒｇｅｏｅｙｗａ９１．５５４．５ “ ｒ．００）ｅａｅａｅｒｃｖｒｓ９．３ＫＥＹＷＯＲＤＳＶｉａｏｎｙｂｅｓｖｔｍｉ；ＨＰＩｔｃｅｚｍｅＴａｌｔ：ｉａｎＢ，（一９ｗｉｈＲＳｏ．９．ｎ）ｔＤｆ０６
维酶素片系以黄豆为主要原料，经生物发酵后
精制加工而成的一种复方制剂，其主要成分为核黄

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用于维生素Ｂ，片的质量控制。
该方法操作方便、准确，灵敏度高，专属性强，可
关键词：维生素Ｂ片；高效液相色谱法；含量测定；有关物质
ＨＰＬＣｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｉｔａｍｉｎＢ．ｔａｂｌｅｔｓ
安徽医药ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ２０１３Ｆｅｂ；１７（２）
ＨＰＬＣ法测定维生素Ｂ２片的含量及有关物质
谢子立
ｔｗｅｅｎｐｅａｋａｒｅａａｎｄｖｉｔａｍｉｎＢ２ｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０．１１１７～０．８９３８ｘＩｇ，ｗｉｔｈｒｏｆ１．０００．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙ（ｎ＝９）ｗａｓ
Ｃｌ８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ｍ）ｗａｓａｄｏｐｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ — ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一１０ｍｍｏｌ・Ｌｓｏｄｉｕｍｈｅｐｔａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎ（０．５％ｇｌａｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）（５：１０：８５）．Ｔｈｅｌｆｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ・ａｒｉｎａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｅｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ４４４
１００．５％．Ｔｈｅｌｏｗｅｓｔｄｅｔｅｃｔｂｌａｅａｍｏｕｎｔｗａｓ２．２ｎｇ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ．ａｃｃｕｒａｔｅ．ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｏｒｆｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｖｉｔａｍｉｎＢ２ｔａｂｌｅｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｖｉｔａｍｉｎＢ，ｔａｂｌｅｔｓ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ；ｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ
ｎｍ．ＲｅｓｕｌｔｓＵｎｄｅｒｔｈｅｄｅｓｃｉｒｂｅｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｖｉｔａｍｉｎＢ２ｗａｓｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｉｔｓｉｍｐｕｉｒｔｉｅｓ．Ａｌｉｎｅａｒｉｔｙｂｅ —
ＸＩＥＺｉ．１ｉ
（ＡｎｈｕｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｈｅｆｅｉ２３００５１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｏｆｒｖｉｔａｍｉｎＢ２ｔａｂｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
（安徽省食品药品检验所，安徽合肥摘要：目的建立高效液相色谱法测定维生素Ｂ片的含量和有关物质。方法２３００５１）采用Ｃ．色谱柱（２５０ｉｎｎ×４．６ｎｌｎｌ，５ｍ）；以钠溶液（含冰醋酸为０．５％）（５：ｌ０：８５）为流动相；检测波长：４４４ｎｍ；流速：１．０ｍ１・ａｒｉｎ～ ’ 结果在建立的色谱条件下，维生素Ｂ２能与杂质完全分离；维生素Ｂ２在０．１１１７— ０．８９３８肛ｇ范围内线性关系良好，ｒ：１．０００；平均回收率为１００．５％（ｎ＝９）；测定维生素Ｂ：的最小检出量为２．２ｎｇ。结论