胡萝卜组织培养系统实验
胡萝卜组织培养
2.2.2 培养条件
◆接种环境
1先用75%酒精擦拭无菌操作台的内部6个面。
2将现配的75%的酒精、1%次氯酸钠、刀、镊子、无菌纸、无菌水、小烧杯、培养皿、废液缸、试管架、打火机等操作用的工具放置到相应位置。
3将酒精灯添加适当的酒精（不超过容积的2/3），并检查是否可以点燃。
4先开紫外灯40min，后再通风20min。
5进入操作台的物品都要经酒精消毒。
◆操作过程及有关条件
1在无菌操作台上操作。
2点燃酒精灯，倒平板。
3消毒外植体。
把清洗好的胡萝卜块根放入无菌操作台，消毒先用75%酒精
对胡萝卜直根消毒10s 再用1%的次氯酸钙溶液消毒7~8min，用无菌水冲
洗3次，放入成有无菌水的烧杯中待用。
4拆刀镊，并消毒。
5切外植体。
用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度3~5mm左右的小圆片，然后如图所示切，将韧皮部和木质部切去，留下形成层。
6 接种外植体，4~5个/培养皿。
7 封口。
◆培养环境
25℃暗处理
图1
图2
图3
胡
萝
卜
愈
伤
组
织
培
养
化学与生物学院
生物11级二班
31 赵如月。
胡萝卜组织培养
这一次组织培养的是胡萝卜纵切面的形成层
·
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实验仪器与材料
What we hope to achieve in the short and long run
胡萝卜(市场购买)、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、小刀、培养皿、解剖刀、镊子。 外植体培养基：MS+1.5mg／L 2，4一D+1．0mg／L KT的固体培养基。 KT分为0.5;1.0;1.5;2.0; 2.5mg/L ph为6左右 愈伤组织培养基：MS+0．3mg／L 2．4 一D + 3％蔗糖的液体培养基(pH5．8)中。 生芽培养基：MS固体培养基。 生根培养基： MS+2mg ／L NAA的固体培养基。
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实验过程
What we hope to achieve in the short and long run
外植体消 毒
切出外植体 （形成层）
外植体培养
生根培养
生芽培养
愈伤组织培养
愈伤组织获 取
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示例
What we hope to achieve in the short and long run
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注意事项
What we hope to achieve in the short and long run
①切取外植体时尽量取胡萝卜的形成层进行接种，形成层相对木质部和韧 部较容易诱导出 愈伤组织。 ② 实验过程中所需要用到的实验用具以及固体液体培养基都要经过严格 的灭菌，防止实验污 染导致实验失败。
2015
The autumn
胡萝卜的植物组织培养
For concept, process, principle, result
胡萝卜组织培养
六、常见错误举例
• 材料切得过小。 • 材料消毒时间过长。 • 切材料时下面没垫滤纸。 • 镊子、刀在酒精灯上烧过立即放到盛酒精的烧杯里。 • 操作时，手、三角烧瓶在盛材料的培养皿上方活动，
容易把菌带到材料上。 • 把接种的切块压入培养基里面。 • 接种时瓶口垂直向上，手、镊子上的脏物掉到瓶里。 • 升汞回收倒入酒精桶里。
七、课后作业及预习
• 课后作业
有几种常用的外植体消毒液？主要原理是什 么？效果如何？
• 预习
根癌农杆菌转化的原理及方法。
实验步骤
• 材料处理
安全第一
1）配75%酒精，倒升汞；
2）把胡萝卜切成约440×20×10 mm方块，4条。
• 消毒和清洗
4）把切好的材料，放在100 mL的烧杯里，加入75％酒精，浸
8）用烧过的镊子将外植体放到培养基上，3块/瓶；
9） 盖好封口膜和牛皮纸，放回316，23~28℃，避光培养。
• 在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养 基上，每瓶接种2~4个，防止交叉污染。
• 接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿 用无菌胶带封口。
三、无菌操作步骤
• 接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开紫外线 灯进行杀菌；
• 接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； • 接种员洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，换穿拖鞋等； • 上工作台后，用酒精棉球搽拭双手（特别是指甲处）和工作
泡30秒；
5）然后将外植体转入0.2％升汞中，浸泡25~30分钟，不能超
过30分钟；
6）把带有升汞和组织材料的烧杯拿到超净工作台，取出材料，
放入培养皿，用灭菌水洗4~5分钟，重复3次，用滤纸吸干。
• 接种与培养
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计引言概述：胡萝卜是一种常见的蔬菜，其组织培养技术在植物生物技术研究中起着重要作用。
本文将介绍胡萝卜组织培养的教学设计，包括实验目的、实验步骤、实验材料和实验结果的分析等内容。
一、实验目的：1.1 了解胡萝卜组织培养的原理和意义；1.2 学习培养胡萝卜愈伤组织的方法；1.3 掌握胡萝卜愈伤组织的分化与再生过程。
二、实验步骤：2.1 材料准备：2.1.1 胡萝卜种子的消毒处理；2.1.2 培养基的制备。
2.2 组织培养的操作步骤：2.2.1 胡萝卜愈伤组织的诱导；2.2.2 胡萝卜愈伤组织的培养与增殖；2.2.3 胡萝卜愈伤组织的分化与再生。
2.3 实验观察和记录：2.3.1 观察愈伤组织的形态和颜色变化；2.3.2 记录愈伤组织的生长速度和增殖情况；2.3.3 分析愈伤组织的分化和再生能力。
三、实验材料：3.1 胡萝卜种子；3.2 无菌培养基；3.3 愈伤组织诱导剂；3.4 培养器具（包括培养皿、培养瓶、移液器等）；3.5 显微镜。
四、实验结果的分析：4.1 胡萝卜愈伤组织的诱导效果；4.2 胡萝卜愈伤组织的生长速度和增殖情况；4.3 胡萝卜愈伤组织的分化和再生能力。
五、实验的意义和应用：5.1 胡萝卜组织培养技术在植物生物技术研究中的应用；5.2 胡萝卜组织培养技术在植物育种中的意义；5.3 胡萝卜组织培养技术在植物病害防治中的潜力。
总结：通过本文的介绍，我们了解了胡萝卜组织培养教学设计的内容和步骤。
胡萝卜组织培养技术的掌握对于植物生物技术研究、植物育种和植物病害防治等领域具有重要意义。
希翼本文能够为胡萝卜组织培养教学提供一定的参考和指导。
胡萝卜组织培养
. 研究背景1.1 胡萝卜胡萝卜(Daucus carota L．)为伞形科植物，是世界上最重要的蔬菜作物之一，占蔬菜生产总量的3％，达13．5百万吨(Hole，1996)。
胡萝卜块根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪[1] 。
由于其富含维生素A前体类胡萝b素和植物纤维，因而是一种重要的营养保健品。
其适于生食、加工、烹调等多种用途。
中国是农业大国，胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。
因此继续深入研究胡萝卜细胞培养还是很有必要的。
1.2 组织培养植物组织培养是在含有营养物质及植物生长物质的培养基中，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术[2]。
其理论基础是植物细胞具有全能性，即一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，具有发育成完整植株的潜能，在适宜的条件下能够发育成一个完整的植株。
进行离体培养时，植物的组织或器官通过脱分化形成愈伤组织。
胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
2. 材料与方法2.1 材料培养皿、锥形瓶、无菌纸、镊子、解剖刀、烧杯、量筒、玻璃棒、酒精灯、无菌操作台、高压灭菌锅、微波炉、PH试纸。
MS培养基、2,4-D、6-BA、活性炭、无菌水、蔗糖、琼脂粉、75%酒精、1% (体积比)浓度的次氯酸钙溶液、胡萝卜块根（2012-2-21-怡购，2012-2-24-水果摊，2012-3-13-水果摊，2012-3-21-珠影，2012-3-29-荣一）2.2 方法2.2.1 MS培养基的配制200ml◆用大烧杯取无菌水100-120ml◆依次用移液管量取加入母液：20ml大量（10x）、2ml微量（100x）、2ml铁盐（100x）、4ml有机（50x）、2mg/L2,4-D。
◆称取6g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解。
胡萝卜的组织培养-北师大版选修1生物技术实践教案
胡萝卜的组织培养-北师大版选修1 生物技术实践教案一、实验目的1.了解植物的组织培养技术，掌握常用植物的组织培养方法；2.学习如何构建植物组织培养的基本实验流程；3.初步探究不同植物体部位对于组织培养的影响。
二、实验设备和物料1. 设备不锈钢工作台、蒸馏水机、显微镜、移液器、扩展罐、手套箱、烧杯、移液管、无菌操作台等。
2. 物料•pH=5.8~6.2的MS培养基•10~20g/L蔗糖•不同部位的胡萝卜组织，还包括含有胡萝卜素的幼茎、幼芽、茎叶、幼根等部位。
•NaN3或酒精(用于杀死胡萝卜的外界细菌)•过氧化氢•活性炭(用于吸收干燥剂带来的湿度)三、实验流程1. 组织消毒将胡萝卜取出，剪去较老的部分，然后将鲜活的胡萝卜以及所需要的其他部位进行取样切碎，然后液体表面无菌处理（消毒），传统方法为用70%的乙醇漂流消毒，维持采样器具无菌工作等级。
2. 组织培养取一个无菌组织，放入MS培养液中，控制装置培养10d ~ 14d。
3. 生长检测可以用显微镜观察植物组织的生长情况。
4. 分析分析组织培养的成功率以及植物组织的生长情况，探究胡萝卜不同组织的生长特性。
四、实验注意事项1.操作前要进行完备无菌措施，保证实验结果的准确性；2.胡萝卜取样均要使用锐利的工具，并保证其在取样工具的范围内；3.胡萝卜的处理、培养、检测各个环节都要严格按照操作规范进行，否则会影响实验结果；4.植物组织培养液的温度、光照、湿度应当根据实验情况进行调整，操作时要进行多次调整。
五、实验结果分析经过实验，胡萝卜的组织培养成功率较高，可以通过MS培养液为基础进行培养。
同时，在实验中发现，不同部位的胡萝卜组织对于生长的影响较大，含胡萝卜素的部位如茎叶组织生长较快，而幼根组织生长较缓慢。
胡萝卜组织培养系统实验
胡萝卜组织培养系统实验文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称：细胞工程实验院系：生命科学学院年级专业：2013级生物技术（国家生命科学与技术基地班）姓名：杨梦梅选课号：学号：座号：A2开课日期：学期：2015秋季学期任课教师：吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者：杨梦梅同组实验者：赵姗( 云南大学生命科学学院,昆明650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT;继代培养1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系；细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期（生长平台）。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspension cell lines ofCarrots’ callusAbstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishessusp ension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to thepeak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density 胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计引言概述胡萝卜是一种常见的蔬菜，其组织培养技术在生物学教学中具有重要意义。
通过胡萝卜组织培养实验，学生可以了解植物细胞培养的基本原理和操作技巧，培养他们的实验操作能力和科学素质。
本文将介绍胡萝卜组织培养教学设计的具体内容。
一、实验材料准备1.1 选择新鲜的胡萝卜在进行组织培养实验前，首先要选择新鲜的胡萝卜作为实验材料。
新鲜的胡萝卜组织细胞活力高，有利于细胞分裂和再生。
1.2 消毒处理将胡萝卜表面进行消毒处理，以防止外源微生物的污染。
可以使用75%酒精或者含有消毒剂的溶液对胡萝卜进行消毒处理。
1.3 切割准备将胡萝卜切成小段，保证组织培养时细胞易于释放和培养。
切割时要注意使用锋利的刀具，避免对组织细胞造成伤害。
二、组织培养基的配制2.1 选择适当的培养基根据实验的目的和要求，选择适合胡萝卜组织培养的培养基。
常用的培养基包括MS培养基、B5培养基等。
2.2 添加植物生长调节剂在培养基中添加适量的植物生长调节剂，如激素和细胞分裂素，促进胡萝卜组织的分裂和再生。
2.3 调节pH值和渗透压调节培养基的pH值和渗透压，保持培养环境的稳定性，有利于组织细胞的生长和分化。
三、组织培养操作步骤3.1 组织释放将切好的胡萝卜组织放入含有酶解剂的培养基中，利用酶解剂分解细胞壁，释放组织细胞。
3.2 培养条件控制控制培养基的温度、光照、湿度等条件，提供适宜的生长环境，促进组织细胞的生长和分化。
3.3 观察和记录定期观察胡萝卜组织的生长情况，记录细胞分裂和再生的过程，培养学生的观察和记录能力。
四、实验结果分析4.1 细胞分裂和再生分析实验结果，观察细胞分裂和再生情况，了解植物细胞的生长和分化机制。
4.2 形态特征观察观察胡萝卜组织的形态特征，比较不同处理条件下组织的生长状况，培养学生的观察和分析能力。
4.3 数据统计和图表制作对实验结果进行数据统计和分析，制作数据图表，培养学生的数据处理和表达能力。
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云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称：细胞工程实验院系：生命科学学院年级专业：2013级生物技术（国家生命科学与技术姓名：杨梦梅选课号：2015107066学号：20131070156座号：A2开课日期：2015.09 学期：2015秋季学期任课教师：吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者：杨梦梅同组实验者：赵姗( 云南大学生命科学学院,昆明650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT;继代培养 1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系；细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期（生长平台）。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspension celllines of Carrots’ callusAbstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh root s really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density 胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国, 胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。
因此, 加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来, 随着生物技术与分子生物学技术的快速发展, 作为生物技术研究的理想材料, 许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展, 特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多, 因此继续深入研究还是很有必要的。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨, 为其次生代谢产物α- 胡萝卜素、β- 胡萝卜素（维生素A前体）的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础。
1 材料和方法1. 1材料来源胡萝卜肉质根自农贸市场购买.1. 2 方法1. 2. 1MS培养基的配制1000ml1)用大烧杯取蒸馏水100-120ml2)依次用移液管量取加入母液：100ml大量（10x）、100ml大量钙盐（10x）、10ml微量I（100x）、1ml微量II（1000x）、10ml铁盐（100x）、10ml有机（100x）、100ml有机肌醇（10x）、以及适当含量植物激素。
3)称取30g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解，作为1号溶液备用。
4)称取9g琼脂，用量筒量取500ml蒸馏水一起加入1000ml体积白瓷缸中，放在电炉上一边加热一边搅拌，加热直至清澈无沉淀。
将1号溶液加入，继续加热搅拌，至将要沸腾，离火。
5)用pH试纸调pH至5.8-6.0 。
6)在白瓷缸中定容至1000ml，搅拌均匀。
7)分装至350ml培养瓶中每瓶约40~50ml。
121℃高压灭菌20min。
探究实验：( 1) 以胡萝卜肉质根形成层为外植体诱导。
用自来水洗净胡萝卜肉质根, 用小刀切成长约6~7cm块段, 将其在 75% 的酒精中消毒 60s, 再用0. 1% 的升汞消毒 10min或用20%次氯酸钠水溶液消毒20min, 最后用无菌水漂洗三遍每遍5~10min..（2）消毒好的胡萝卜根块, 切去形态学下端的5~10mm厚的一片, 留下部分用消毒好的小刀, 沿截面横切成厚度 3~5mm 左右的小圆片, 然后将小圆片的韧皮部和木质部切去, 留下形成层, 再切成长 3mm, 宽 1. 5mm, 高 3~5mm 的小长块, 分别接种在M1、M2、M3、M4的诱导培养基上.（3）获得愈伤后进行继代培养, 培养环境条件与诱导培养相同.1. 2. 3胡萝卜愈伤组织的继代（1）从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
用记号笔标注操作者、组别和日期。
（2）3~4周后在相同培养基上继代培养1次。
1. 2. 4胡萝卜细胞无菌系的建立悬浮培养（1）用镊子夹取在固体继代培养基上继代 10d 左右的胚性愈伤组织即分散性好、疏松的愈伤, 称取鲜重2g左右的胡萝卜愈伤组织，在灭过菌的培养皿中用无菌镊子尽量将其拨散。
（2）将散碎的愈伤组织转移入盛有20ml液体无激素MS培养基的三角瓶中。
（3）置于80~120r/min摇床上25℃暗培养。
（4）每隔3天换液1次，用吸管吸去3/4旧培养液，再加入等量新鲜培养液。
连续培养2 代~ 4 代后逐渐形成稳定的细胞系。
1.2.5胡萝卜细胞再分化实验构建——胡萝卜愈伤组织的“器官分化”与“体细胞胚发生”（1）在超净工作台上，用镊子去除继代培养1~2次的疏松愈伤组织，在无菌载台上分割成长 3mm, 宽 1. 5mm, 高 3~5mm 的小长块，去除黑色、灰色或棕色的坏死细胞部分。
（2）接种在M5、M6培养基上，每瓶1~3块，轻轻压实，以保证和培养基充分接触。
（3)标注清楚组别和日期。
26℃，光照16h/d，4周后观察实验结果。
2 实验结果2. 1实验结果记录：2.1.1培养基配置结果：我们组负责配置的是M1，M2，M3，M4每种各接种两瓶。
g 值质量g1 1.98 2.00 2.73 3.90 0.142.1.5胡萝卜细胞再分化实验构建——胡萝卜愈伤组织的“器官分化”与“体细胞胚发生”结果：因实验培养时间问题，还未观察到具体结果。
预测实验结果为：如果愈伤组织脱分化以后进行再分化，则应当先时愈伤组织下部分化出根，在上部发育出芽，随着不断地生长，最终发育成完整的植株；如果是体细胞胚发生，则可以不经过愈伤组织阶段就可以发育为体细胞胚；但是体细胞胚比愈伤组织难生成得多，很多植物还无法进行体细胞胚的诱导生成，体细胞胚一旦形成，便可慢慢的分化为完整的植株。
与愈伤组织发生相比，体细胞胚更不容易发生遗传变异，从而诱导分化发育成的植株更稳定。
2.2实验结果图片第一次培养M1-1 M2-1 M2-2 M4-1 M3-1 培养成功M4-2 霉菌M1-2 细菌污染M3-2 细菌污染烫伤污染情况：接种8瓶，污染3瓶，5瓶未污染第二次培养1-2烫伤2-1霉菌1-1 愈伤组织2-2愈伤组织继代实验情况因未观察到，所以未附图。
3.分析讨论：3.1对实验现象、实验结果的分析及其结论3.1.1胡萝卜愈伤组织诱导实验中，被污染了5瓶，说明在整个实验过程中，一定要注意无菌操作，否则，任何一个环节染菌都会导致外植体被污染，使得实验失败。
3.1.2外植体的选择很重要，由于实验中选了根部上端，但切面比较靠内的胡萝卜，与其他组相比愈伤组织的量或是色泽方面都比较好，但切块太小，也许是因为不一样大小的胡萝卜，但消毒时间是一样的，可能使得胡萝卜组织受伤较重。
3.1.3同一小组中，或同一个人的实验结果都会不一样，这是由于个人操作差异，主要是培养基分装时没混匀，以及无菌操作不够规范，实验熟悉度不过造成的。
3.1.4外植体经过消毒等处理，可在愈伤组织诱导培养基上进行培养，诱导脱分化形成愈伤组织，并且通过改变2,4-D和KT的浓度，可以诱导愈伤组织再分化形成植物体然后再在继代培养基上可以增殖得到更多更好的愈伤组织。
3.2实验总结3.2.1植物组织培养实验一般历时较长，因此要及时将实验过程中的每一部分的操作内容以和实验数据记录下来。
以后每门实验课都应当准备一本实验记录本，用于记录数据，在实验数据出现问题时也方便排查问题所在。
3.2.2由于是以小组形式进行实验，所以每个人的工作安排合理的话，可以提高效率。
各个大组分别轮流成批配置培养基可地有效节约了时间与精力。
3.2.3在本次实验中我了解并掌握了胡萝卜愈伤组织的诱导和继代培养的原理和一般流程。
3.2.4对植物组织培养实验中熟练掌握无菌操作的技术十分的重要，它对实验的成功直接影响，可有效提高愈伤组织的成活率。
3.2.5由于本次实验中所需的培养基配方是由老师提供的，所以对于培养基配方的确定这一方面的把握不够。
实验中愈伤组织的诱导培养和继代培养条件和时间等都是由老师进行安排，我们只是来看结果，所以实际上，对于培养条件等我们都掌握不够。
3.2.7总得来说，对于实验操作流程和注意事项，以及实验结果的观察分析还是能够掌握的。
4.展望拓展：这次的实验总体来说还是失败的，第一次实验成功率低原因在于在做实验前没有好好了解实验流程，虽然老师在上课时做了相应的讲解，但一些细节上的操作和技巧还是没有弄明白,对于无菌操作的重要性还是没有深刻的意识。
在第二次实验中我更加注意了这个问题，将无菌操作台上的物品按最合理的方式放置，既不影响操作，也方便拿取，操作过程不离实验台，仪器轻拿轻放，尽量不带起空气大幅度流动，将酒精灯移到空气滤膜附近，在整个过程都在酒精灯旁操作；另一方面，在以后的实验中自己一定要提前对实验内容有所了解，将课件及实验讲义上的知识吃透,理清实验思路。