酶的抑制剂与激活剂

合物)。 在一定浓度范围内，蓝色深浅与含酚羟基氨基酸 (酪 氨酸)的量成正比，通过比较加入金属离子(或洗衣粉)后 和未加入金属离子(或洗衣粉)的反应酶液的OD680值，可 以推断出该种金属离子是该酶的激活剂还是抑制剂。
三.器材和用具
1.恒温水浴锅，试管，722紫外可见分光光度计，移液枪
，EP管，试管架。
酶的抑制剂与激活剂
授课教师: 余子全 研 究 生: 贾亮 何恋
一.目的与内容
目的：学习研究酶的抑制剂和激活剂的方法，并通 过几种金属离子和表面活性剂对枯草杆菌碱性蛋白酶 活力的影响，筛选出该酶的某些抑制剂和激活剂。
内容：1.几种金属离子Ca2+、Ag+、Cu2+、Hg2+和
Mg2+对枯草杆菌碱性蛋白酶活力的影响；2.洗衣粉对枯
(3)将混合液预热至40℃，加入预热的2%酪蛋白溶液1 ml
，于40℃反应10 min。
(4)反应结束时加入10%三氯醋酸溶液2 ml(终止反应) ，
立即摇匀，静置10 min。
(5)各取上清1.5ml于EP管中，6000rpm,离心1min 。取上
清1ml于试管中，各加入0.4 mol/L Na2CO3溶液5ml及 福林一酚试剂1 ml，置于40℃显色15 min 。 (6)测定OD680值 ，并以原酶活力为100，算出相对酶活 。空白试验时，先加三氯醋酸溶液，再加入酶液和
本实验所用的是枯草杆菌碱性蛋白酶，该酶是
由地衣芽孢杆菌经深层发酵提炼所得，能将大分 子蛋白质水解成游离的氨基酸等产物，最适pH值 一般为9-11，最适温度为40-50℃。
Folin-酚法测碱性蛋白酶酶活原理
Folin-酚试剂在碱性条件下，其磷钼酸盐-磷钨酸
盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混
底物，同样测定OD680值。
2．洗衣粉对酶活力的影响：
(1)分别在pH 7.0和pH 10.0酶液中加入洗衣粉(反应液
终浓度为0.03%)。 (2)混合液和pH7原酶液、 pH7空白(共4支)于25℃下放 置20 min。 (3)测酶活力，并以原酶活力为100，算出相对酶活。
五.注意事项
1.实验中，以先加TCA的酶液为空白，以原酶液试管为
2.试剂：20mM/L氯化钙， 20mM/L硝酸银， 20mM/L硫 酸铜， 20mM/L氯化汞， 20mM/L氯化镁，0.6％洗衣 粉， 0.4 mol/L 碳酸钠， 2％酪蛋白，枯草芽孢杆菌碱 性蛋白酶(稀释2000倍)，福林-酚(市售福林-酚试剂加

水稀释1倍，约为1 mol/L )， 0.5M/L氢氧化钠，pH10
Ag+
表2 洗衣粉对酶活力的影响
剩余酶活 pH7.0 酶 标 准 pH10.0 酶 100 相对酶活
100
洗 衣 粉
pH7.0酶
100
pH10.0 酶
100
八.问题与思考
1.根据你的实验结果，上述实验因子哪些是枯草杆
菌碱性蛋白酶的抑制剂，哪些是激活剂？
2.用何方法可以解除或避免金属离子对酶的抑制作
标准液，对其操作应与实验试管同步一致。
2.由于分光光度计比较精密，所以往试管中加药品的
时候要尽量做到准确。
3.拿比色皿是要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑
面；擦拭比色皿要顺着一个方向擦。
4.在比色皿中装入的液体量大约是比色皿体积的三 分之二。
六.实验报告
将实验结果填入下表中。
表1 金属离子对酶活力的影响
硼砂缓冲液，pH7磷酸缓冲液， 10% TCA。
四.操作步骤
1．金属离子对酶活力的影响：
(1)分别将1ml pH 10.0酶液与相应体积的氯化钙、硝酸银
、硫酸铜、氯化汞、氯化镁溶液混合，使反应液中金 属离子终浓度分别为0.8 mmol/L和0.4mmol/L。 (2)混合液及pH10原酶液、 pH10空白(共12支)25℃放置 20 min。
金属离子 0.8 mmol/L Ca2+ 0.4mmol/L 0.8 mmol/L 0.4 mmol/L Cu2+ 0.8 mmol/L 0.4mmol/L Hg2+ 0.8 mmol/L 0.4 mmol/L Mg2+ 0.8 mmol/L 0.4 mmol/L 剩余活力 相对活力 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
草杆菌碱性蛋白酶活力的影响。
二.基本原理
酶分子与配体结合后，可以改变酶的活性。使酶
活性降低乃至完全丧失活性的配体，称为酶的抑制
剂；能启动和（或）增强酶的活性，称为酶的激活
剂。研究酶的抑制和激活作用，具有重要的实用价
值。 抑制剂或激活剂的作用部位，主要是酶的活性中 心的必要基团或直接影响酶的结构残基所引起的效 应。
用？
3.查阅文献，试对你的实验结果作出机理上的可能 解释。