优选动物实验基本操作技术
动物实验的基本操作技术
动物实验的基本操作技术生理学实验主要以动物为实验对象，为了能获得满意的实验结果，应对动物品系特性有所了解。
实验动物系指供生物医学实验而科学育种、繁殖和饲养的动物。
高质量的实验动物是指通过遗传学与微生物学的控制，培育出来的个体；其具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验再现性。
一、常用实验动物的种类及其特点（一）青蛙与蟾蜍两者均属于两栖纲，无尾目。
蟾蜍和青蛙是教学实验中常用的小动物。
其心脏在离体情况下仍可有节奏地搏动很久，可用于心功能方面的实验。
蛙舌与肠系膜是观察炎症和微循环变化的良好标本。
此外，蛙类还能用于水肿和肾功能不全的实验。
（二）小白鼠属于哺乳纲，啮齿目，鼠科。
其繁殖周期短、产仔多、生长快，饲料消耗少，温顺易捉，操作方便，又能复制出多种疾病模型，是药学实验中用途最广泛和最常用的动物。
（三）大白鼠亦属鼠科。
性情不像小白鼠温顺。
受惊时表现凶恶，易咬人。
雄性大白鼠间常发生殴斗和咬伤。
具有小白鼠的其他优点，故在药学实验中的用量仅次于小白鼠。
（四）豚鼠豚鼠又名天竺鼠、荷兰猪。
原产于欧洲中部。
属于哺乳纲，啮齿目，豚鼠科。
性情温顺，胆小。
不咬人也不抓人。
豚鼠可分为短毛、长毛和刚毛3种。
短毛种豚鼠的毛色光亮而紧贴身，生长迅速，抵抗力强，可用于实验。
其余两种对疾病非常敏感，不宜用于实验。
（五）家兔家兔属于哺乳纲，啮齿目，兔科，为草食哺乳动物。
家兔性情温顺、怯懦、惊疑、胆小，是常用的实验动物。
家兔品种很多，在实验室中常用的有：（1）青紫蓝兔：体质强壮，适应性强，易于饲养，生长较快。
（2）中国本兔（白家兔）：抵抗力不如青紫蓝兔强。
（3）新西兰白兔：是近年来引进的大型优良品种，成熟兔体重在4～5.5kg。
（4）大耳白兔：耳朵长大，血管清晰，皮肤白色，但抵抗力较差。
（六）狗狗属于哺乳纲，食肉目，犬科。
狗的嗅觉很灵敏，对外环境的适应力强；血液、循环、消化和神经系统等均很发达，与人类很相近。
狗喜欢接近人，易于驯养。
动物实验的基本操作
动物实验的基本操作（动物的捉拿与给药方法）小鼠捉拿法有二种：一种是用右手提起尾部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后上方轻拉，此时小鼠前肢紧紧抓住粗糙面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤并用小指和手掌尺侧夹持其尾根部固定手中；另一种抓法是只用左手，先用拇指和食指抓住小鼠尾部，再用手掌尺侧及小指夹住尾根，然后用拇指及食指捏住其颈部皮肤。
大鼠捉拿时，右手抓住鼠尾基部，将大鼠放在粗糙面上，左手戴上防护手套或用厚布盖住大鼠，抓住其整个身体并固定其头部以防咬伤。
捉拿时勿用力过猛，勿捏其颈部，以免引起窒息。
家兔捉拿时一手抓住其颈背部皮肤。
轻轻将兔提起，另一手托住其臀部。
猫捉拿时先轻声呼唤，再慢慢将手伸入猫笼中，轻抚猫的头、颈及背部，抓住其颈背部皮肤并以另一手抓其背部。
如遇凶暴的猫，不让接触或捉拿时，可用套网捉拿，必要时可用固定袋将猫固定。
实验动物的给药方法1．灌胃法小鼠灌胃法将小鼠放在粗糙面上，左手拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手掌上，使小鼠腹部朝上，注意使口腔和食管成一直线。
右手持灌胃针管从小鼠口角插入口腔内，经舌面紧贴上腭进入食管，进针2~3cm 后，如此时动物安静并无呼吸异常，即可将药注入。
如遇阻力或动物憋气时则应抽出重插，不能强插以免刺破食管或误入气管使动物死亡。
兔灌胃法用兔固定箱，可一人操作。
右手将开口器固定于兔口中，舌压在开口器下面，左手将导管经开口器中央小孔插入。
如无兔固定箱，则需两人协作进行，一人就坐，腿上垫好围裙，将兔的躯体夹于两腿间，左手紧握双耳，固定其前身，右手抓住其两前肢。
另一人将开口器横放于兔上下颌之间，固定在舌面上,将导管自开口器中央的小孔插入，慢慢沿兔口腔上腭壁插入食道约15～18cm。
插管完毕将胃管的外口端放入水杯中，切忌伸入水过深。
如有气泡从胃管逸出，说明不在食道内而是在气管内，应拔出来重插。
如无气泡逸出，则可将药推入，并以少量清水冲洗导尿管保证管内药液全部进入胃内。
动物实验常见操作技术
动物实验常见操作技术动物实验是科学研究中常用的一种手段，通过对动物进行各种操作和处理，获得与人类相关的科学数据和知识。
以下是动物实验中常见的操作技术。
一、麻醉和镇痛技术动物实验中会应用麻醉药物使动物失去感觉和意识，以减少动物在实验过程中的痛苦和压力。
常用的麻醉技术包括静脉麻醉、吸入麻醉和局部麻醉。
镇痛技术用于减轻术后疼痛，常采用各种药物如阿片类和非甾体抗炎药等。
二、手术技术手术技术是动物实验中常见的一项操作技术，用于在动物体内插入仪器、移除组织样本、修复组织或器官的损伤等。
常见的手术技术包括卵巢切除术、肝脏切片术、心脏手术等。
三、体内采样技术体内采样技术是从动物体内获取生物样本的一种方法，用于分析动物的生理和生化指标。
常见的体内采样技术包括血液采样、尿液采样、肠道内容物采样等。
四、药物给药技术药物给药技术是将药物通过各种途径输入动物体内，以研究药物的药代动力学和药效学等。
常见的给药途径包括静脉注射、腹腔注射、皮下注射等。
五、环境控制技术环境控制技术用于控制实验动物的环境条件，以确保实验结果的准确性和可靠性。
常见的环境控制技术包括温度控制、湿度控制、光照控制等。
六、行为测定技术行为测定技术用于评估动物的行为特征和认知功能，常用于研究动物的学习记忆、情绪行为等。
常见的行为测定技术包括开放田间测试、旋转杆测定、挖洞测试等。
七、分子生物学技术分子生物学技术用于研究动物的基因表达、DNA/RNA的分离和测定等。
常用的分子生物学技术包括PCR技术、凝胶电泳技术、蛋白质电泳技术等。
八、影像学技术影像学技术用于研究动物的器官结构、功能和病理变化等。
常见的影像学技术包括X线摄影技术、CT扫描、MRI等。
九、细胞培养技术细胞培养技术用于研究动物的细胞生长、增殖和代谢等。
常用的细胞培养技术包括离心培养、悬浮培养、共培养等。
以上列举了动物实验中常见的操作技术，不同实验目的和研究领域需要选用不同的操作技术，以获得准确和可靠的实验结果。
实习二 动物实验的基本操作技术
实习二动物实验的基本操作技术一、实训目的：掌握常用实验动物的捉拿、保定方法，为临床诊疗工作打下基础。
二、器材准备：灌胃导管，一次性注射器，小鼠灌胃器，药勺，酒精棉球，脱脂棉，生理盐水，实验动物（家兔、小白鼠）三、方法步骤1、兔的捉拿和保定方法：连同耳部抓取兔颈背部毛皮一起提起，然后用另一只手托住兔臀部使其体重主要落在这只手上。
兔一般不咬人，但其爪锐利，当挣扎时，极易抓伤操作人员，故应防避其四肢的活动。
另外，不能只提兔双耳或双后腿，也不能仅抓腰、提背部皮毛，以避免造成耳、肾、颈椎的损伤或皮下出血．麻醉后的兔的保定一般采用盒式保定架或台式保定架，这类保定方法适用于采血、注射、外科手术等。
绑缚兔四肢时，应将粗棉带打成活结，不能系死结，以免在紧急情况下迅速松绑困难，造成动物四肢骨折或其它部位的损伤。
上图家兔抓取方法中，1、2、3均为不正确的抓取方法（1．可损伤两肾，2．可造成皮下出血，3．可伤两耳），4、5为正确的抓取方法。
颈后部的皮厚可以抓，并用手托兔体。
附：毛巾保定法（1）将兔置于一条大毛巾的中央，用毛巾的一角确实地裹住兔的颈部和一条前腿，用毛巾的另一角再确定裹住兔。
只把头留在外面2.小鼠的捉拿、保定捉拿小鼠的方法是，从笼盒内将小鼠尾部捉住并提起，放在笼盖（或表面粗糙的物体）上，轻轻向后拉鼠尾，在小鼠向前挣脱时，用左手（熟练者也可用同一只手）拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，无名指、小指和手掌心夹住背部皮肤和尾部，并调整好动物在手中的姿势。
这类捉拿方法多用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等。
如若进行心脏采血、解剖、外科手术等实验时，就必须要固定小鼠。
使小鼠呈仰卧位（必要时先进行麻醉），用橡皮筋将小鼠固定在小鼠实验板上。
如若不麻醉，则将小鼠放人保定架里，固定好保定架的封口。
注意事项：抓取实验动物时注意安全，不要被动物咬伤。
动物实验的基本操作方法
（一）皮下注射 （二）皮内注射 （三）肌肉注射 （四）腹腔注射 （五）静脉注射 （六）淋巴囊注射 （七）经口给药 （八）其它途径给药
如呼吸道给药、皮肤给药、脊髓腔内给药、小脑延 髓池给药、脑内给药、直肠内给药、关节腔内给药等。
六、实验动物的Байду номын сангаас醉
（一）常用的麻醉剂 1、挥发性麻醉剂；2、非挥发性麻醉剂； 3、中药麻醉剂。
（五）兔的抓取固定方法
1、抓取：一般以右手抓住兔颈部的毛皮提起，然后左手托其 臀部或腹部，让其体重重量的大部分集中在左手上。
2、 固定：一般将家兔的固定分为盒式、台式和马蹄形三种。 盒式固定，适用于兔耳采血、耳血管注射等情况；若做血压
测量、呼吸等实验和手术时，则需将兔固定在兔台上;马蹄形 固定多用于腰背部，用马蹄形固定器可使兔取用背卧位和腹卧 位，所以是研究中常采用的固定方法。
（二）动物的麻醉方法 1、全身麻醉 （1）吸入法；（2）腹腔和静脉给药麻醉法 2、局部麻醉 3、麻醉注意事项 （1）静脉注射必须缓慢 （2）麻醉时需注意保温
七、实验动物采血方法
（一）小鼠、大鼠采血法 1、割（剪）尾采血 2、鼠尾刺血法 3、眼眶静脉丛采血 4、断头取血 5、心脏采血 6、颈动静脉采血 7、腹主动脉采血 8、股动（静）脉采血
（一）小鼠抓取固定方法 小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提
起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇 指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中， 把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。
尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定，先根据动物 大小选择好合适的固定架，并打开鼠筒盖，手提鼠尾巴，让动 物头对准鼠筒口并送入筒内，调节鼠筒长短合适后，露出尾巴，
动物实验基本操作技术
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2. 根据体重鉴定日龄 ⑴ 小鼠日龄与体重的对应
日龄/d 体重/g 初生 1.8 5 4.0 10 6.0 15 11.0 20 15.0 25 21.0 30 21.0
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日龄/d 1 3 4 5 外观形态特征 仔鼠裸体鲜红 耳壳露出表皮 脐带瘢痕脱落 能翻身
8
能爬行
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10
日龄/d 10 9～11
外观形态特征 能听到声音 全身被白毛，门齿长出
13～15
18以后
眼皮张开，能跳跃，能抓取东西
能自行采食，独立生活
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年龄 2～4个月 4～6个月 1岁 2岁
犬齿更换和磨损情况 更换门齿 更换犬齿(白，牙尖圆钝) 牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突 下门齿尖突部分磨乎
2个月以下 仅有乳齿(白、细、尖)
6～10个月 更换臼齿
3岁 4～5岁 6～8岁 9～10岁 10岁以上
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上、下门齿尖突大部分磨平 上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄 门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损 唇部、胡须发白 门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白
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二、豚鼠的抓取固定法
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三、家兔的抓取固定法
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第二节 性别鉴定
动物实验常用操作技术
动物实验常用操作技术动物实验常用操作技术是指在动物实验过程中常用的一些操作技术，用于进行动物实验的各项实验操作。
这些操作技术的选择和使用对于实验结果的准确性和可靠性有着重要的影响。
在动物实验中，常用的操作技术主要包括动物麻醉、注射、剖检、培养和观察等。
一、动物麻醉技术动物麻醉技术是在动物实验中常用的首要操作技术之一、麻醉技术的运用可以使实验动物保持在一定的安静状态下，减轻动物实验过程中的痛苦和压力，同时还可以提高实验的可靠性和准确性。
常用的动物麻醉技术主要有局部麻醉、全身麻醉和麻醉复苏等技术。
局部麻醉常用的方法有局麻药物的表面涂擦、注射、浸渍和包扎等方式；全身麻醉常用的方法有麻醉药物的口服、皮下、肌肉注射、静脉注射等方式；麻醉复苏技术包括将动物由麻醉状态逐渐恢复到清醒状态，并监测复苏过程中的生理指标。
二、动物注射技术动物注射技术是在动物实验中常用的操作技术之一、注射技术的运用可以向实验动物的体内引入药物、疫苗或其他试剂，观察其对动物的作用和效果。
常用的动物注射技术主要有皮下注射、肌肉注射、静脉注射和腹腔注射等。
皮下注射一般是将药物或试剂注射到动物的皮下组织中；肌肉注射是将药物或试剂注射到动物的肌肉组织中；静脉注射是将药物或试剂注射到动物的血管中；腹腔注射是将药物或试剂注射到动物的腹腔腔隙中。
三、动物剖检技术动物剖检技术是在动物实验中常用的操作技术之一、剖检技术的运用可以观察动物内部器官的结构和病变，对实验结果的解释和分析起到关键的作用。
常用的动物剖检技术主要包括尸体解剖和活体解剖两种。
尸体解剖是在动物死亡后对尸体进行的解剖，以观察其内部器官的结构和异常情况；活体解剖是在动物存活的情况下进行的解剖，以观察其内部器官的运动和功能情况。
四、动物培养技术动物培养技术是在动物实验中常用的操作技术之一、培养技术的运用可以在体外条件下维持动物细胞和组织的生长和繁殖，为研究动物细胞和组织的生物学特性提供便利。
常用的动物培养技术主要有细胞培养和组织培养两种。
动物实验基本操作技术
第三章动物实验基本操作技术3.1 常用手术器械及使用方法生理学实验常用手术器械与医学外科手术器械大致相同，但也有一些专用器械，下面所列的是几种常规的手术器械（图3.1-1）。
图3.1-1 常用的生理实验手术器械（1）手术刀：用于切开皮肤和脏器。
由刀片和刀柄组成，刀片有圆刃、尖刃和弯刃3种，可根据需要自由拆装和更换（图3.1-2）。
常用的执刀方法有4种（见图3.1-3），其中执弓式是一种常用的执刀方法，动作范围大而灵活，用于腹部、颈部、股部的皮肤切口。
图3.1-2 安装、取下刀片法图3.1-3 执刀方法1．执弓式；2．握持式；3．执笔式；4．反挑式（2）手术剪：手术剪分钝头剪和尖头剪，其尖端有直、弯两型。
用于剪切皮肤、肌肉、血管等软组织。
钝头手术剪的钝头端可插入组织间隙，分离、剪切无大血管的肌肉和结缔组织。
还有一种小型的眼科剪刀，常用于剪神经、血管、包膜等。
正确的执剪姿势是用拇指和环指持剪，示指置于手术剪的上方（图3.1-4）图3.1-4 手术剪的握持方法禁用手术剪刀剪骨头等坚硬组织。
在蛙类实验中，常用粗剪刀（即普通剪刀）剪切蛙的脊柱、骨和皮肤等粗硬组织。
（3）镊子：分有齿和无齿两类，大小长短不一，主要用于夹捏或提起组织。
圆头镊子用于较大或较厚的组织及牵拉皮肤切口，眼科镊子或钟表镊子用于夹捏细软组织。
执镊方法为用拇指对食指和中指（图3.1-5）。
图3.1-5 镊子的握持方法（4）止血钳：有大、小、有齿、无齿、直形、弯形之分。
根据不同操作部位选用不同类型的止血钳。
小号止血钳也叫“蚊式钳”。
持止血钳的方法与手术剪相同。
主要用于夹血管或止血点，以达止血目的，也用于分离组织、牵引缝线等。
正确持钳和持剪方法相同（图3.1-6）。
开放血管钳的方法是利用右手已套入止血钳的拇指与环指相对挤压，继而两指向相反的放向旋开，放开止血钳（图3.1-6）。
图3.1-6 持钳法和松钳法（5）骨钳：先用颅骨钻钻孔，然后用骨钳咬切骨质，扩大骨孔。
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随机数字：78 38 69 57 91 0 37 45 66 82 65 41 随机数字的奇数代表甲组，偶数代表乙组：
动物编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 组 别：乙 乙 甲 甲 甲 乙 甲 甲 乙 乙 甲 甲
能自行采食，独立生活
2. 根据体重鉴定日龄 ⑴ 小鼠日龄与体重的对应
日龄/d 体重/g
初生 5 1.8 4.0
10 15 20 25 30 6.0 11.0 15.0 21.0 21.0
⑵ 大鼠日龄与体重的对应
日龄/d 初生 10
20
30
40
体重/g 6～7 17～25 35～50 55～90 100～150
Female
Male
第三节 年龄的大致判断
一、大、小鼠 1. 根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）
日龄/d 1 3 4 5 8
外观形态特征 仔鼠裸体鲜红 耳壳露出表皮 脐带瘢痕脱落
能翻身 能爬行
日龄/d 10
9～11 13～15 18以后
外观形态特征 能听到声音
全身被白毛，门齿长出 眼皮张开，能跳跃，能抓取东西
33 46 65 31 CA
9 52 68 7 4 3 21 1 1 21 B DFE
二、编号标记方法
实验动物分组后，为了区分、观察并记录每个个体的 反应情况，必须给每只动物进行编号标记。
初生
7
20
30
60
60～80 100～120 150～200 170～220 240～300
90
120
180
330～400 400～470 520～600
三、家兔 家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴 别的重要标志。 青年兔：门齿洁白，短小，排列整齐； 老年兔：门齿暗黄,厚而长,排列不整齐,有破损。 1岁家兔趾：红色与白色长度相等； 1岁以下：红多于白； 1岁以上：白多于红。
第四节 妊娠检查
妊娠诊断(pregnancy diagnosis)：在配种以后能及 时掌握雌性动物是否妊娠、妊娠的时间及胎儿和 生殖器官的异常情况，采用临床和实验室的方法 进行检查。 通过妊娠检查，可以及时地对雌性动物加强护理 或再次配种，以保护母体和胎儿的正常发育，避 免胎儿早期死亡和流产及减少繁育时间的损失。
组别
鼠的编号
甲组 3 4 5 7 8 12
乙组 1 2 6 9 10 11
(二) 为三组：A组、B组、C组 分组方法：落点是随机数字表第40行17列的08， 则从08开始，自左到右抄12个随机数字， 以3除各 随机数字，若余数为l，即该鼠归A组；余数为2， 归人B组；余数为3，归入C组。 动物编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 随机数字：08 27 01 50 15 29 39 39 43 79 69 10 除 3 余数： 2 0 1 2 0 2 0 0 1 1 0 1 组 别： B C A B C B C C A A C A 调整组别：B
如动物的抓取、固定、标号、脱毛、麻醉、给药、采血、采 尿、处死等，对于实验研究者来说无论从事哪一类研究项 目，都会不同程度的应用这些技术。
第一节 实验动物的抓取与固定
一、大、小鼠的抓取固定
盒定固
二、豚鼠的抓取固定法
三、家兔的抓取固定法
第二节 性别鉴定
一、大、小鼠的性别鉴定
二、兔的性别鉴定
乙组5个，甲组7个，两组数字不等 继续用随机方法将甲组多余的一只调整给乙组， 从上面最后一随机数字41，接下去抄一个数为62， 以7除之(因甲组原分配7只)得6，即把原分配在 甲组的第6个甲(即11号大鼠)调入乙组。
如果甲组多两个，则接下去抄两个数。分别 以8，7除之，余数即指要调入乙组的第几个甲， 余此类推。最后各组的鼠数就相等了。调整后 各组鼠的编号为：
妊娠检查方法有
① 外部检查法 ② 摸胎法 ③ 阴道检查法 ④ 直肠检查法 ⑤ 超声波检查法 ⑥ 孕酮含量测定法 ⑦ 青蛙试验
第五节 分组与编号
动物实验前对实验动物进行随机分组和编号标记 一、随机分组：随机数字表（随机抽样原理） （一） 为二组 例：设有雄性Wistar大鼠12只，按体重大小依
次编为1，2，3，…，12号，试用完全随机的方 法，分为甲、乙两组。
优选动物实验基本操作技 术
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动物实验流程
引进
动物 给药
动 动 动 途径 物 物 物 和方 实抓编 法 验取号 准 固 标 动物 备 定 记 麻醉
体液 采集
实验 术 术 术 外科 前 中 后 技术 准 技 护 操作 备 术 理
动物 处死
动物实验基本操作技术
动物实验的方法是各种各样的，如常用模型复制法、切开 和分离法、切除和注入法、离体组织器官法等，在不同的 研究领域有其不同的目的和应用，但是一些基本的操作技 术方法是一样的。
（三） 每个动物为一组：
例：设有A，B，C，D，E，F代表的6只家兔， 试用完全随机法将其每只分为一组。
分组方法：从随机数字表上用铅笔任指一点，若 为第21行第17列的33，则从33向左抄用6个数字，然 后分别以6，5，4，3，2，l除之。凡除不尽的，即 将余数写下。
随机数字 除数 余数 随机排列
日龄/d
50
60
70
80
体重/g
150～210 170～240 210～270 240～320
二、豚鼠 老年豚鼠：牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆 滞，行动迟缓。 年轻豚鼠：牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷， 被毛有光泽，且紧贴身体。同日龄雌性体重略高于雄性。
日龄/d 体重/g 日龄/d 体重/g
五、犬 犬的年龄主要以牙齿的生长情况、磨损程度、 外形颜色等情况综合判定。
年龄 2个月以下 2～4个月 4～6个月 6～10个月 1岁 2岁 3岁 4～5岁 6～8岁 9～10岁 10岁以上
犬齿更换和磨损情况 仅有乳齿(白、细、尖) 更换门齿． 更换犬齿(白，牙尖圆钝) 更换臼齿 牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突 下门齿尖突部分磨乎 上、下门齿尖突大部分磨平 上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄 门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损 唇部、胡须发白 门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白