植物体内过氧化物酶活性测定的实验教学改进

３ 实 验 结 果 的 整 理
一般实验指导书 中 的 实 验 方 法 相 对 简 单，学 生 对 实验结果的分析讨 论 也 相 对 简 单。 经 过 改 进 后，由 于 实 验 条 件 的 多 元 化 ，实 验 结 果 比 较 复 杂 多 样 了 些 ，同 时 出于提高学生对实验 数 据 分 析 能 力 的 考 虑，布 置 学 生 按以下要求撰写实验报告。 ３．１ 实 验 数 据 的 处 理
要 求 学 生 分 别 用 逐 步 笔 算 （按 照 生 物 统 计 学 方 法 ） 或计算机 Ｅｘｃｅｌ和 ＳＰＳＳ 软 件 进 行 数 据 处 理，即：对 不 同实验条件下所得各 组 实 验 数 据 进 行 方 差 分 析，对 实 验结果进行差异显著性检验。通过这些不同方法在运 算效率和精度中的区 别，学 生 自 觉 运 用 统 计 学 知 识 和 计算机软件的统计 分 析 功 能 的 理 念，准 确、高 效、方 便 和快捷处理数据的技能均得到培养。 ３．２ 实 验 结 果 的 分 析
ＩＳＣＳＮＮ１ １１０－０２２０－３４４／９Ｔ５６
实 验 技 术 与 管 理 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ
第
２９ 卷 第 ７ 期 ２０１２ 年 ７ 月 Ｖｏｌ．２９ Ｎｏ．７ Ｊｕｌ．２０１２
植物体内过氧化物酶活性测定的实验教学改进
培养。实验时由学生独立制定实验方案和进行实际操 作 ，教 师 只 为 学 生 准 备 必 需 的 实 验 药 品 、仪 器 和 必 要 的 实 验 条 件 ，实 验 过 程 中 给 予 必 要 的 帮 助 和 指 导 。
１ 植 物 材 料 来 源 及 保 存 处 理 设 计 的 多 样 化
在这一实验中，对 不 同 组 的 学 生 分 别 设 置 不 同 的 植物材料来源及保存处理方法。新鲜样品采后直接分 别放入常规冰箱（－２４ ℃）和 超 低 温 冰 箱 （－８０ ℃）冷 冻过夜处理，或采后经液氮速冻３０ｍｉｎ后分别放 入常 规冰箱（－２４ ℃）和超低温 冰 箱 （－８０ ℃）冷 冻 过 夜 处 理 。 上 述 经 低 温 处 理 的 样 品 经４ ℃ 化 冻 后 再 次 分 别 直 接放入和液氮速冻３０ｍｉｎ后放入常规冰 箱（－２４ ℃） 和超低温冰箱（－８０ ℃）冷冻过夜处理。
学生主动钻研实 验 技 术，尤 其 是 酶 促 反 应 实 验 的 能力得到了锻炼和提高。 ３．３ 实 验 报 告 的 写 作
要求学生在实验 报 告 中 详 细 列 出 实 验 设 计、原 始 数据记录、运算过程 和 计 算 机 相 关 操 作 流 程 和 运 算 结 果，数据以图或表列 出，图 表 格 式、实 验 结 果 与 分 析 以 及讨论均严格按照科学论文格式和要求撰写。
Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｅａｃｈｉｎｇ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐｌａｎｔ
Ｌｉｕ Ｈａｉｙｉｎｇ，Ｊｉｎ Ｐｉｎｇ，Ｗａｎｇ Ｍａｎ，Ｇｕｏ Ｊｉｎｇｊｉｎｇ，Ｚｈａｏ Ｑｉａｎ，Ｙｉｎ Ｐｅｉｑｉ，Ｗａｎｇ Ｌｉｎａ
收 稿 日 期 ：２０１１－１０－３０ 修 改 日 期 ：２０１２－０２－２４ 基 金 项 目 ：河 南 省 教 育 厅 基 础 项 目 ［教 基 （２００９）４５２］ 作者简介：刘海英（１９７４—），女，河 南 鹤 壁，博 士，副 教 授，研 究 方 向 为 植
物生长发育调控． Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｂｈａｉｙｉｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
（１）相同酶 液 和 反 应 混 合 液 加 入 量、酶 液 保 存 与 酶活性恢复条件下，不 同 取 样 量 对 过 氧 化 物 酶 活 性 的 影响；
（２）相 同 取 样 量 、相 同 反 应 混 合 液 加 入 量 、酶 液 保
存与酶活性恢复条件 下，不 同 酶 液 稀 释 倍 数 对 过 氧 化 物酶性的影响；
２ 实 验 条 件 设 定 的 多 元 化
一般实验指导书中对此实验都是直接给出最佳的 酶 活 测 定 取 样 量 、酶 液 和 反 应 混 合 液 加 入 量 、酶 液 保 存 方法：取样量为 １．０ｇ；酶液加入量为 １．０ ｍＬ；反应混
刘 海 英 ，等 ：植 物 体 内 过 氧 化 物 酶 活 性 测 定 的 实 验 教 ｍＬ；酶 液 保 存 在 冷 处 。 未 涉 及 有 关 酶液保存后活性恢复的问题。如果完全按这样的条件 进 行 ，不 利 于 培 养 学 生 对 新 实 验 ，尤 其 是 酶 促 反 应 相 关 实验的研究能力。为了让学生了解酶活测定条件的重 要性，因而在教学中 由 学 生 自 己 对 实 验 条 件 做 了 以 下 多种改进：
要求学生根据这 些 不 同 实 验 结 果 进 行 总 结，测 定 结果以４７０ｎｍ 波长下吸光度值自０开始匀速上升，每 分 钟 变 化 幅 度 在 ０．０４０～０．１００ 之 间 ，且 稳 定 变 化 时 间 在８ ｍｉｎ 以 上 较 好，最 终 确 定 过 氧 化 物 酶 活 性 测 定 中 的适宜实验条件。
（１）取 样 量 。 建 议 学 生 探 讨 如 何 确 定 合 适 的 取 样 量，以实验指导书中的 参 考 取 样 量 为 中 等 取 样 量 （１．０ ｇ），另 外 增 设 低 取 样 量 （０．５ｇ）和 高 取 样 量 （１．５ｇ）。
（２）酶促反应中的酶液稀释倍数。 实验指导书中 的 酶 液 加 入 量 设 定 比 较 单 一 ，一 般 不 涉 及 酶 液 的 稀 释 ， 或对此一带而过，这 样 並 不 能 反 映 酶 促 反 应 中 酶 液 稀 释 倍 数 与 反 应 速 度 之 间 的 数 量 关 系 变 化 特 点 ，为 此 ，将 酶液 稀 释 倍 数 分 为 ７ 个 水 平，即：１ 倍、２ 倍、５ 倍、１０ 倍、２０倍、５０ 倍和１００ 倍。 不 同 稀 释 倍 数 的 酶 液 用 酶 液 母 液 加 入 样 品 提 取 缓 冲 液 ，逐 级 稀 释 而 成 。
４ 总 结 与 体 会
（１）实 验 测 定 过 程 中 样 品 可 分 批 按 次 序 逐 个 进 行 活 性 恢 复 ，即 ：在 上 一 个 样 品 每 分 钟 在 ４７０ｎｍ 处 读 取 一 次 吸 光 度 值 ，连 续 读 取 几 分 钟 过 程 中 ，在 适 当 的 时 间 段 进 行 下 一 个 样 品 的 酶 活 性 恢 复 ，以 避 免 出 现 下 一 个 样 品 酶 活 性 恢 复 已 经 完 成 ，而 分 光 光 度 计 仍 在 进 行 上 一 个 样 品 的 测 定 的 情 况 ，保 证 实 验 能 够 顺利进行。
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｔｈｅ ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｓｅｌｆ－ｓｔｕｄｙ ａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｄｅｓｃｒｉｂｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｍａｔｅｒｉａｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｄａｔａ，ａ ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ ａ ｒｅ－ ｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｒｅ ａｓｋｅｄ．Ａｌｌ ｔｈｅｓｅ ｃａｎ ｍａｋｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｃｏｎ－ ｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｄａｔａ，ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｅ ｔｈｅ ａｔｔｉｔｕｄｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｈａｂｉｔ，ａｎｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ．Ａｂｏｖｅ ａｌｌ，ｔｈｉｓ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｈａｓ ｓｏｍｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｆｏｒ ｓｔｕｄｅｎｔｓ ｔｏ ｗｏｒｋ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ；ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
刘海英，靳 萍，王 曼，郭净净，赵 倩，殷佩齐，王莉娜
（河南师范大学 生命科学学院，河南 新乡 ４５３００７）
摘 要：为了提高学生自主探究酶活 力 测 定 的 适 宜 实 验 条 件 的 能 力 ，在 植 物 体 内 过 氧 化 物 酶 活 性 测 定 实 验 中，通过材料来源、保存处理和实验条件的多元化设定，进 行 实 验 结 果 的 整 理 和 实 验 报 告 的 写 作 ，增 加 了 学 生 对实验条件的摸索和对数据的科学处理能力，强化了学生 的 生 命 科 学 研 究 理 念 ，对 学 生 独 立 开 展 酶 水 平 的 相 关研究具有积极的意义。 关 键 词 ：过 氧 化 物 酶 ；活 性 测 定 ；实 验 改 进 中 图 分 类 号 ：Ｑ９４－３３ 文 献 标 志 码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：１００２－４９５６（２０１２）０６－０１３６－０２
（３）酶 液 保 存 。 将 原 有 实 验 指 导 书 中 的 酶 液 保 存 在冷处，按温度改为２ 个 水 平，即：４ ℃ 和 －２４ ℃，按 保 存 时 间 分 为 ４ 个 水 平 ，即 ：１０ ｍｉｎ、３０ ｍｉｎ、６０ ｍｉｎ 和 过 夜 保 存 ，不 同 温 度 均 用 常 规 冰 箱 调 节 而 成 。
（４）酶 活 性 恢 复 。 在 原 有 实 验 书 指 导 基 础 上 补 充 了酶液保存后活性恢复的内容。样品在冷处保存后， 在 进 行 下 一 步 操 作 之 前 ，对 酶 液 的 处 理 分 为 ５ 个 水 平 ， 即常温放置０ｍｉｎ（立即测定）、５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ ｍｉｎ、 ３０ｍｉｎ、６０ ｍｉｎ 和 常 温 过 夜，比 较 不 同 酶 液 活 性 恢 复 处理对实验结果的影响。