FISH实验室质控标准初稿
(完整版)FISH检测标本要求
A
B
Her-2基因扩增状况
A. 无须计数的大簇团信号 （高度扩增）
B. 颗粒状信号（R>10，高度扩增）
C. 须计数的颗粒状信号 （R=3.5，低度扩增）
C
Her-2基因无扩增情况
FISH技术的特点
操作简便，探针标记后稳定，可与多种技术结合， 可成功地帮助细胞遗传学家做出回顾性分析 方法敏感，能迅速得到结果，24小时就可以完成检测 标本来源丰富，间期细胞，分裂中期细胞、分化或 未分化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测
FISH探针的种类
CSP探针：染色 体着丝粒探针
GLP探针：位点 特异性探针
FISH技术在乳腺癌检测中的应用
乳腺癌 Her-2基因
致癌基因：Her-2基因； 位点：17q11.2-q12； 编码蛋白：跨膜蛋白（与 表皮生长因子受体部分同 源）； 25-30%乳腺癌病人都有 HER-2的扩增； HER-2基因扩增是决定 Herceptin治疗是否有效的关键 性指标。
×100
免疫组化（－）与FISH对比图1
×40 <30%的肿瘤细胞弱的着色或不着色
×100
住院号：176846 浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：－ FISH： Ratio＝1.02， Her2基因无扩增
免疫组化（－）与FISH对比图2
肿瘤细胞不着色
×40
住院号：175472 浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：－ FISH：呈簇状扩增
17号染色体数目的变化
IHC与FISH结果不一致原因分析
➢ IHC判断标准的主观性
➢ 内对照探针——17号染色体着丝粒探针的建立，
实验鱼质量控制标准研制的思考与建议
2020年2月第28卷第1期中国实验动物学报ACTA LABOＲATOＲIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICAFebruary 2020Vol．28No．1余露军，李建军，蔡磊，等．实验鱼质量控制标准研制的思考与建议［J ］．中国实验动物学报，2020，28（1）：115－122．Yu LJ ，Li JJ ，Cai L ，et al．Suggestions for the development of experimental fish quality control standards ［J ］．Acta Lab Anim Sci Sin ，2020，28（1）：115－122．Doi ：10.3969/j．issn．1005－4847.2020.01.017［基金项目］国家科技支撑计划项目（2015BAI09B05）。
Funded by National Key Technologies Ｒ＆D Program of China （2015BAI09B05）．［作者简介］余露军（1982—），男，硕士，工程师，研究方向：水生实验动物微生物学。
Email ：ljyu1212@163．com ［通信作者］黄韧（1959—），男，博士，研究员，研究方向：实验动物学。
Email ：1649405216@qq．com实验鱼质量控制标准研制的思考与建议余露军，李建军，蔡磊，魏远征，苗宗余，黄韧*（广东省实验动物监测所，广东省实验动物重点实验室，广州510663）【摘要】实验鱼作为重要的实验材料，在生命科学、医学以及水环境安全性评价等研究中发挥着越来越重要的作用。
目前，国内实验鱼生产量和研究队伍发展迅速，实验鱼的使用量也逐年上升，但实验鱼质量良莠不齐，可能对科学实验结果造成严重影响，因此迫切需要制定实验鱼质量控制标准对其生产加以规范和引导。
本文就实验鱼质量控制及其研究现状进行综述，以期为实验鱼质量控制标准的制定提供建议和参考。
评价FISH探针质量标准
评价FISH探针质量标准FISH技术的探针要求必须具有较好的特异性、灵敏性和良好的组织渗透性。
根据需要合成的DNA或RNA寡核苷酸探针可识别靶序列内一个碱基的变化,能够用酶学或化学方法进行非放射性标记。
FISH技术不仅能提供静止的实验结果,还可以动态地观察流动水体中的微生物种群变化,因此FISH技术被用于监测环境中微生物在时间或空间上的动态变化,以帮助人们理解环境中微生物种群的组成和生长动力学。
FISH的首次应用是在1980年，B a u man [1]等用荧光染料直接标记探针RNA的3端，检测到了特异的DNA，1988年G i o v n an o FISH 探针[2]等将FISH技术引进到了细菌学，他第一次用放射性同位素标记已知的FISH探针寡核苷酸探针进行细菌的显微镜观察，随后该技术在系统发育微生物学、微生物生态学、微生物的诊断和周围环境的研究中得到了迅速的发展。
目前在单一样品(如纯培养菌种)检测中的应用已十分普遍，准确度较高〔3，4]，但在复杂样品(如活性污泥)检测中的应用仍不成熟，易受到样品中所含杂质的影响，出现假阳性或假阴性信号[5]。
本文采用细菌通用探针EUB338，结合DAPI全细胞染色技术，探讨了针对活性污泥样品的荧光原位杂交实验方法，并对自发荧光和真实信号的辨别要点进行了讨论。
荧光原位杂交技术结合分子生物学的精确性和显微镜的可视性,可进行微生物的空间分布情况分析和特征性微生物的鉴定与定量分析。
1989年, DeLong首次将荧光标记寡核苷酸探针应用于检测单个微生物细胞[3],开创了应用于微生物生态学的先河。
由于该法操作容易、安全、检测迅速,目前已广泛应用于环境微生物生态学[4,5]和食品学[ 6]等领域,成为研究微生物群落最具生命力的技术之一。
FISH检测标本要求
FISH检测标本要求FISH（荧光原位杂交）是一种基因诊断技术，可用于检测染色体异常或一些基因的扩增、缺失或重排等变异。
在进行FISH检测时，标本的质量和处理方法对检测结果至关重要。
下面是FISH检测标本所需的一些要求：1.标本类型：FISH检测可以使用不同类型的标本，包括固定组织切片、细胞悬液或细胞块等。
标本的选择取决于要检测的疾病类型和目标基因。
2.标本采集：标本采集必须严格按照操作规范进行，以确保标本的完整性和准确性。
对于组织切片标本，应按照标准的组织取样技术采集。
对于细胞悬液或细胞块标本，应使用无菌工具采集，并避免污染或损伤细胞。
3.标本固定：标本固定是指使用合适的固定剂将标本中的细胞或组织固定在载玻片上，以便进行后续处理。
常用的固定剂包括4%的甲醛和乙酸乙酯等。
固定必须足够强度以保持细胞形态和染色质结构的完整性。
4.标本处理：标本处理是指对固定的标本进行前处理步骤，以去除固定剂、蛋白质等，以提高FISH信号的强度和清晰度。
标本处理涉及细胞膜的渗透性改变、DNA的变性和解聚，以及FISH探针结合的条件等。
标本处理通常包括脱水、去脂、裂解和蛋白酶消化等步骤。
5.FISH探针：FISH探针是用于与目标DNA序列特异性结合的荧光标记探针。
对于不同的FISH应用，需要选择不同的探针，如诊断性FISH探针、定量FISH探针和断裂FISH探针等。
探针的选择应根据需要检测的基因、染色体和疾病类型进行。
6.标本稳定性：标本的稳定性是指在采集和处理过程中，标本中的核酸和蛋白质的完整性是否保持良好，以确保准确的FISH结果。
标本应在适当的温度下存储，并且在处理之前应避免冻结和解冻的过程。
7.检测结果的解读：FISH检测结果的解读应由经验丰富的专业人员进行，因为FISH结果的解读涉及对不同信号模式、缺失或重排等变异类型的鉴别。
除了以上的要求，FISH检测标本还应根据具体的疾病类型和检测需求，进行其他特定的处理步骤和质量控制。
渔业检测实验室样品管理质量控制
渔业检测实验室样品管理质量控制谢宗升;黎小正;吴祥庆;陈静;周靓婧;黄玉柳;黄玉英【摘要】[目的]为了对渔业检测实验室样品管理进行有效的质量控制.[方法]运用要素控制的方法,对样品管理过程中样品管理员和样品的采集、运输、接收、制作、贮存、流转、处置及样品的安全和保密等要素和环节进行质量控制研究.[结果]通过对各要素、环节进行严格的质量控制,实现了样品的有效管理.[结论]该研究为实现检测结果的合法性、准确性、有效性奠定了坚实基础,确保了渔业检测实验室质量管理体系的有效运行.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)008【总页数】2页(P3344-3345)【关键词】渔业检测实验室;样品管理;质量控制【作者】谢宗升;黎小正;吴祥庆;陈静;周靓婧;黄玉柳;黄玉英【作者单位】广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】S951关于样品管理，不少实验室狭隘地将它理解为样品的贮存和处理，从而使检测样品在流转过程中的某些环节处于失控状态，直接影响到检测数据的合法性、准确性和可靠性。
对于具有第三方资质的实验室来说，样品管理是实验室质量活动的一个重要环节。
样品管理包括采样控制、运输过程管理、样品接收、样品标识管理、样品贮存管理、样品准备与确认、样品流转过程管理、样品处置以及样品安全和保密管理等。
因此，凡样品检测前的各个环节和过程均应属样品管理范畴。
样品管理贯穿于实验室整个检测流程的开始和结束环节，是实验室质量体系运作的中枢环节。
检测样品的有效性和完整性直接关系到检测结果的合法性和准确性。
因此，必须对样品管理员和样品的采集、运输、接收、制作、贮存、流转、处置及样品的安全和保密等环节实施有效的质量控制，确保实验室质量管理体系的正常运行。
FISH检测标本要求
×100
评价17号染色体的意义
17号染色体非整倍性：每个细胞中17号染色体多于或少 于2个；
乳腺癌遗传学特征之一，可能预示预后不良；
17号染色体多体性是导致IHC 3+但FISH检测为阴性的 主要原因；
我实验室完成病例中17号染色体非整倍性发生率为
33.3%。
评价Her-2基因状态的同时应考虑
乳腺癌 Her-2基因
致癌基因：Her-2基因； 位点：17q11.2-q12； 编码蛋白：跨膜蛋白（与 表皮生长因子受体部分同 源）； 25-30%乳腺癌病人都有 HER-2的扩增； HER-2基因扩增是决定 Herceptin治疗是否有效的关键 性指标。
Her-2基因的检测方法
检测方法 检测指标
优点
缺点
IHC CISH FISH
Her-2蛋白 Her-2 DNA Her-2 DNA
费用低 光镜即可观察结果
光镜即可观察结果
对于低倍、高倍染色 体非整倍性扩增检测 准确性高，灵敏度特 异性好，结果判断客 观
准确性差，主 观性强，假阳 性率高
对低度扩增及 染色体非整倍 扩增检测灵敏 度下降
×100
免疫组化（2+）与FISH对比图 1.
>30%的肿瘤细胞全部 的细胞膜弱至中等着色
×40
住院号：175465 浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：++ FISH：Ratio>5，中度扩增
×100
免疫组化（2+）与FISH对比图 2.
>30%的肿瘤细胞全部 的细胞膜弱至中等着色
×40
×100
住院号：176921 浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：++ FISH：Ratio＝1.45，无扩增
水产质量检测标准
水产质量检测标准导言水产品是人们日常生活中不可或缺的重要食材之一，关乎人们的饮食安全和身体健康。
为了确保水产品的质量和安全，制定和执行一系列水产质量检测标准显得尤为重要。
本文将从水产质量的定义、质量检测的目的、主要指标等方面展开论述，以期对水产质量检测标准有更加全面和深入的了解。
一、水产质量的定义水产质量是指水产品在规定的检测条件下，根据一定的标准和检测方法，经过定性和定量分析比较，从而反映出水产品的安全性、营养性、口感以及其他相关性能指标。
水产质量的评价是通过检测分析的结果来进行判断的，确保水产品的质量符合相关的标准要求。
二、水产质量检测的目的1. 保护消费者权益：通过水产质量检测可以减少或消除由于水产品质量不达标导致的食物中毒、营养失衡等健康问题，保护消费者的合法权益和身体健康。
2. 促进水产产业发展：水产质量检测可以鼓励企业提升产品质量，形成良性竞争，提高整个水产产业的竞争力和可持续发展能力。
3. 强化监管措施：水产质量检测可以提供科学的依据，帮助监管部门进行有效的检查和监督，加强对水产品市场的规范管理。
三、水产质量检测的主要指标1. 营养成分：包括水产品中蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等的含量分析，评估水产品的营养价值和丰富度。
2. 重金属残留：重金属在水产品中的残留问题直接关系到人们的健康。
针对水产品中常见的重金属如汞、铅、镉等进行检测，确保其含量符合相关标准。
3. 肉质特性：通过测定水产品的硬度、弹性、嚼劲等指标，判断产品的口感和储存性能。
4. 微生物指标：对水产品中的细菌、霉菌、酵母菌等进行检测，以评估产品的新鲜度和卫生安全性。
5. 添加物检测：包括防腐剂、色素、增稠剂等添加物的检测和评估，确保水产品没有超标使用这些化学物质。
6. 农药残留：对于水产中可能存在的农药残留物进行检测，确保不影响消费者的健康和安全。
四、水产质量检测的方法1. 传统物理化学方法：包括光谱分析、色谱分析、离子色谱法、质谱分析等，可以对水产品的物理、化学指标进行定性和定量测定。
乳腺癌HER2基因FISH检测判读标准
乳腺癌HER2基因FISH检测判读标准乳腺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其中HER2基因的状态对于乳腺癌的治疗和预后评估具有重要意义。
荧光原位杂交（FISH）是检测HER2基因状态的重要手段之一。
以下是乳腺癌HER2基因FISH检测判读的标准，主要包括探针信号识别、细胞计数规定、比例阈值判定、非整倍体评估、基因拷贝数判定、结果分类解读以及质量控制要求等方面。
一、探针信号识别在进行FISH检测时，首先要正确识别探针信号。
通常，HER2基因和对照基因（如CEP17）会被标记为不同的颜色。
正常情况下，HER2基因和CEP17的信号应为红色和绿色。
每个细胞核内应有2个CEP17信号和2个HER2信号。
二、细胞计数规定对于每个样本，应至少分析20个非重叠的、完整的、清晰可辨的细胞核。
如果细胞核不完整、重叠或信号模糊，则该细胞核不应纳入计数。
三、比例阈值判定HER2基因与CEP17的比例（HER2/CEP17）是判定HER2基因状态的关键指标。
根据FISH检测的结果，可以将HER2基因状态分为以下几类：1. HER2基因扩增：当HER2/CEP17比例大于2.0时，判定为HER2基因扩增。
2. HER2基因无扩增：当HER2/CEP17比例小于或等于2.0且大于1.8时，判定为HER2基因无扩增。
3. HER2基因不确定：当HER2/CEP17比例小于或等于1.8时，判定为HER2基因状态不确定，需要进一步检测或结合其他检测方法。
四、非整倍体评估在非整倍体细胞中，CEP17信号可能会超过2个或少于2个。
如果样本中存在非整倍体细胞，应将这些细胞排除在计数之外。
五、基因拷贝数判定除了比例阈值外，还可以根据HER2基因和CEP17的拷贝数来判定HER2基因状态。
通常认为，当HER2基因拷贝数大于6时，为HER2基因扩增。
六、结果分类解读根据以上判读标准，可以将FISH检测结果分为以下几类：1. HER2阳性：当HER2基因扩增或基因拷贝数大于6时，判定为HER2阳性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
FISH实验室质控标准初稿
一：温度控制：
①：水浴锅的温度每周记录并用温度计测量其温度显示是否正常。
②：考普林瓶使用时加盖，保证瓶内温度均一，稳定。
③：杂交仪工作时保证密封状态。
④：试剂冰箱，标本冰箱的温控。
二：时间控制：
①：低渗时间控制，足够的低渗时间才能让细胞核展开，利于杂交。
如遇到羊水标本有少量木血污染，应将低渗时间缩短，让胎儿上皮细胞与母体血细胞容易区分（区分方法：（1）：核形态的区分，上皮细胞细胞核呈不规则的椭圆形，血细胞核呈规则圆形。
二：在低渗20min 的情况下，上皮细胞能观察到带膜，血细胞为裸核状态。
）
②：2XSSC浸泡时间控制，时间过长：容易掉片。
时间过短：起不到洗涤，缓冲的作用，不利于信号杂交。
③：烤片的时间控制：时间过长：DNA降解，信号杂交不上（石蜡样本不受影响）。
时间过短：掉片。
④：胃蛋白酶工作液或PK工作液的时间控制：时间过长：消化过度，呈空核。
时间过短：消化不完全，信号不易杂交。
（尤其石蜡组织切片时PK工作液的消化时间控制，因为每次切片的厚度不一样，所以容易消化过度，或者消化时间不足，一般做2-3张片子梯度消化，并最好用胃蛋白酶工作液代替PK工作液，）
⑤：NP-40洗涤时间控制。
三：试剂控制：比如新配的20XSSC 0.1%NP-40/2XSSC 2XSSC保存6个月，1M Hcl 保存一个月。
四：暗室控制，实验的大多部分以及阅片均应在暗室下进行，不让会让探针荧光信号猝灭。
五：滴片的控制：滴片浓度不宜过稀（难以找到足够符合计数要求的细胞）。
不宜过密（细胞核重叠，不能计数）。
六：其他质控：如玻片的洁净度（防止背景过强），离心转速（过大的转速能使为固定的细胞形态发生改变，尤其是在低渗后，细胞核膨胀，比较脆弱。
）。