可口可乐中阿斯巴甜因含量的测定
可口可乐中阿斯巴甜因含量的测定
分析化学课程设计题目: 可口可乐中阿斯巴甜含量的测定姓名：孙毅专业：应用化学班级： 1223002学号： 0228指导老师：周瑜芬 2015年5月目录摘要 (1)关键词 (1)一、引言 (2)测定阿斯巴甜的目的与意义 (2)阿斯巴甜的性质 (3)二、测定方法及原理 (3)阿斯巴甜的测定方法 (3)阿斯巴甜的测定原理 (3)三、具体测定步骤 (4)仪器与药品 (4)仪器 (4)药品 (4)方法与过程 (4)色谱分析条件 (4)对照品溶液的制备 (5)进样精度 (5)标准曲线的绘制 (5)样品溶液的配制 (5)加标回收率 (5)稳定性实验 (5)样品含量测定 (5)四、数据分析与处理 (6)图表的绘制 (6)阿斯巴甜对照品色谱图 (6)精密度实验图 (6)标准曲线的绘制 (6)加标回收率图 (6)稳定性实验图 (6)阿斯巴甜含量计算 (7)五、阿斯巴甜的安全性 (7)摄入量 (7)代谢 (7)癌症 (7)神经及精神症状 (8)头痛 (8)体重变化和饥饿 (8)阿斯巴甜安全性结论 (9)六、阿斯巴甜的应用 (9)七、总结 (9)参考文献 (10)可口可乐中阿斯巴甜含量的测定摘要：2009年可口可乐旗下新品－“零度”(ZERO) 无糖可乐致癌的说法在国内众多博客、网上论坛及民间广为流传。
传闻称“零度”中所含的阿斯巴甜有损神经系统，将引发头痛、记忆力衰退、癫痫、视力消失、昏迷乃至癌肿。
本文将介绍对备受争议的“阿斯巴甜”采用高效液相色谱法将可乐样品经水提取后,在ODS-C18色谱柱上以磷酸二氢钾水溶液和乙腈作为流动相进行色谱分离,用HPLC法在VWD208nm 处检测可口可乐中阿斯巴甜的含量[1]。
同时，对阿斯巴甜的安全性和在食品中的应用作了简单的介绍。
关键词：阿斯巴甜高效液相色谱法测定安全应用一、引言本节将介绍测定可乐中阿斯巴甜含量的目的和意义及阿斯巴甜的性质。
测定阿斯巴甜的目的与意义2009年可口可乐旗下新品－“零度”(ZERO) 无糖可乐致癌的说法在国内众多博客、网上论坛及民间广为流传。
可乐食品添加剂检测报告
可乐食品添加剂检测报告
检测机构：XXXX化验所
检测对象：可乐食品添加剂样品
检测日期：2021年X月X日
一、检测项目及方法
本次检测对可乐食品添加剂样品进行了以下检测项目：
1. 色素类添加剂：采用高效液相色谱法测定。
2. 酸味调节剂：采用滴定法测定。
3. 甜味剂：采用气相色谱法测定。
4. 防腐剂：采用气相色谱法测定。
5. 发泡剂：采用称重法测定。
二、检测结果
经过严格的检测和分析，本次检测结果如下：
1. 色素类添加剂：该样品中不存在任何色素类添加剂。
2. 酸味调节剂：该样品中存在柠檬酸，含量为1.23g/100ml。
3. 甜味剂：该样品中存在糖精钠和阿斯巴甜，含量分别为
0.02g/100ml和0.03g/100ml。
4. 防腐剂：该样品中不存在任何防腐剂。
5. 发泡剂：该样品中存在二氧化碳，含量为3.2g/100ml。
三、结论
本次检测结果显示，该样品中色素类添加剂和防腐剂均未检出。
各种添加剂的含量均符合国家标准和相关法规要求。
因此，可乐
食品添加剂样品检测合格。
四、附注
1. 本报告仅对检测样品负责。
2. 本报告结果仅针对样品，不能用于其他类似产品。
3. 如有疑问，请直接联系检测机构。
高效液相色谱法测定食品中阿斯巴甜、阿力甜两种甜味剂
高效液相色谱法测定食品中阿斯巴甜、阿力甜两种甜味剂摘要：目的：采用高效液相色谱法来对食品当中的阿斯巴甜和阿力甜两种甜味剂进行测定。
方法：在采用高效液相色谱法测定的过程中，采用色谱柱，流动相为甲醇和水，二极管所检测的位置是208nm处。
结果：最终检测的结果显示采用这种方法最低可以检测到的阿力甜与阿斯巴甜量分别是32.8ng与3.8ng，且曲线呈现出良好的线性，回收率在90%以上。
结论在食品当中对阿斯巴甜与阿力甜甜味剂进行检测时采用高效液相色谱法检测简单易行，快速灵敏度比较高。
关键词：高效液相色谱法；食品；甜味剂；阿斯巴甜；阿力甜甜味剂是我们在食品当中常见的添加剂。
近几年来阿力甜以及阿斯巴甜这两种甜味剂都得到了十分广泛的应用[1]。
人们在摄入阿斯巴甜后不会随着被人体的消化吸收等产生不良影响，具备较高的安全性。
阿力甜的甜度更高，有着很好的稳定性能。
当前常见的甜味剂当中很多都不是单一的，而是由很多不同的成分复合形成[2]。
复合方式可以减少单一甜味剂的副作用，使成本得到降低，促进口感的改善。
所以应当构建起简便、快速的测定方法。
一、资料和方法1.1 仪器和试剂本次研究所采用到的试剂是阿斯巴甜以及阿力甜，这些都是从安谱公司购买的。
而使用到的仪器则主要是高效液相色谱仪，真空脱气机等以及色谱工作站，二极管矩阵检测仪器等。
1.2色谱的相关条件所选择的色谱柱是ZORBAX-SB-C18 4.6×250mm 5-Micron的，同时选择水和甲醇（61+39）来作为流动相，其流速控制在每分钟1毫升。
色谱柱的温度为常规的室温，所检测的波长为208nm。
同时明确测定的波长范围等。
1.3 曲线绘制需要针对这两种物质分别绘制相应的曲线。
其中阿斯巴甜应当加入到容量为10ml的容量瓶当中，将蒸馏水加入溶解后，定容到预定的刻度。
放置在冰箱当中保存好，阿斯巴甜标准液还需要进行逐级的稀释，最终得到不同标准的样本。
阿力甜储备液所需要加入的剂量是0.053g，容量瓶为100ml，在加入蒸馏水溶解之后进行定容到相应的刻度。
阿斯巴甜的研究现状及前景展望
阿斯巴甜的研究现状及前景展望摘要：随着近年来人们对于可乐饮料对人体危害的认识的加深，尤其是其中糖的影响的关注，人们把研究的重点放在了寻找新型甜味剂上边。
阿斯巴甜营运而生，本文对于阿斯巴甜的基本性质、生产现状、及前景的展望等内容做以介绍。
关键字：阿斯巴甜、苯丙氨酸、甜味剂、合成2008年初，可口可乐在国内推出了一款黑色外包装的无糖可乐“零度”无糖可乐并不是没有甜味，而是使用了一种代替蔗糖的成——阿斯巴甜，有网友发帖说阿斯巴甜可能让饮用者产生偏头痛甚至有致癌的风险，随即对可乐的安全性引起了网上的热议[1]。
那么什么是阿斯巴甜呢?它有什么用途呢?传统的食品工业主要以糖类作甜味物质，但其热量高，易引起心血管病、肥胖症和龋齿等威胁人类健康的疾病。
随着人们生活水平的提高，人们对食品中的蔗糖含量很敏感，但又不太适应低糖或无糖食品，因此开发新型甜味剂就显得非常重要，阿斯巴甜正是其中的佼佼者。
1阿斯巴甜的特点:阿斯巴甜(Aspartame，APM)，俗称天冬甜素、甜味素，化学名称为a—L-天图门冬氨酰一L广苯丙氨酸甲酯，是由L-天门冬氨酸和L-苯丙氨酸甲酯构成的二肽类甜味剂，结构式如2。
阿斯巴甜外观为白色结晶粉末，在水中的最大溶解度为1％(25℃)，乙醇中为o．26 mg／lOO mL，在常温、弱酸性(pH=3～5)下十分稳定，但在长时间高温加热，pH又高的条件下，会分解成无毒无味的二酮哌嗪。
当前世界上采用的甜味剂主要有蔗糖、糖精、安赛蜜(AK糖)、甜蜜素、甜味菊甘、阿斯巴甜等，其中阿斯巴甜作为一种新型甜味剂具有许多优点，备受食品专家的推荐与厚爱。
其主要特点如下：1.1甜度高、昧美阿斯巴甜口味纯正清爽，甜味强烈，类似蔗糖，但甜度约为蔗糖的200倍，没有人造甜味剂常有的苦味、化学味或金属的后味。
另外阿斯巴甜与其他甜味剂共用时会产生明显的甜味增效作用，即甜度高于单独使用的甜度之和，并能屏蔽其他甜味剂如糖精等的苦涩味，而且对某些食品、饮料风味也有明显的增效作用，特别是对酸型水果风味。
阿斯巴甜 jecfa标准
阿斯巴甜jecfa标准
阿斯巴甜是一种人工合成的低热量甜味剂，其国际上的食品添加物标准通常由联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）的联合专家委员会——联合国食品和农业组织/世界卫生组织食品添加物专家委员会（JECFA）负责评估和制定。
以下是关于阿斯巴甜的JECFA标准的一些基本信息：
1.ADIs（每日容许摄入量）：JECFA评估了阿斯巴甜的安全性，并确定了ADIs，即每日容许摄入量。
ADIs是以每公斤体重每天的毫克数来表示，用于衡量一个人每天可以摄入的阿斯巴甜的最大安全量。
2.最大残留限量：针对某些食品中阿斯巴甜残留的问题，JECFA通常也会制定最大残留限量，以确保食品中的阿斯巴甜含量在安全水平内。
3.规范和标准：JECFA会制定关于阿斯巴甜在食品中使用的规范和标准，以确保其安全使用。
这包括阿斯巴甜在特定食品中的使用量、工艺条件等。
4.毒理学和安全性评估：JECFA进行了详细的毒理学和安全性评估，考虑了阿斯巴甜对人体的潜在危险性，并确保其在合理使用条件下是安全的。
这些标准和评估可能会随着时间的推移而更新，因此建议查阅最新的JECFA文档或相关法规以获取最准确的信息。
实验7 液相色谱法测雪碧、可乐中的咖啡因含量
液相色谱分离测定雪碧、可乐中的咖啡因【摘要】色谱法是一种分离和分析方法，本实验采用的是液相色谱中的反相分配色谱，反相色谱的固定相极性小于流动相，样品根据在固定相和流动相中的分配系数不同而进行分离。
通过标准样品的保留时间进行定性，以峰面积对浓度绘制的工作曲线定量测定可乐和雪碧中的咖啡因。
【关键字】液相色谱反相色谱咖啡因外标法【Summary】Chromatography is a separation and analysis method.This experiment uses reversed-phase distribution chromatography in liquid chromatography.The reversed-phase chromatography has a smaller stationary phase than the mobile phase.Samples have different distribution coefficients in the stationary phase and the mobile phase. And separation.Quantitative determination of caffeine in Cola and Sprite was performed by quantifying the retention time of the standard sample and by plotting the peak area versus the concentration plotted.【Keywords】liquid chromatography reversed phase chromatography caffeine external standard method【实验目的】1、学习液相色谱仪的基本原理，尤其是反相色谱的基本规律，构成和使用方法2、了解高效液相色谱仪（以安捷伦1260为例）的结构及基本操作；3、掌握色谱的基本定性、标准曲线定量方法。
真相探寻：可乐含糖量之无糖可乐含糖量？
真相探寻：可乐含糖量之无糖可乐含糖量？饮食的健康和安全是越来越多当代人所关注的头等大事，病从口入这个概念自古以来就制约着追求美食美味的人们对口腹之欲的过度需求。
大家对于可乐含糖量比较看重，所以，当一款号称无糖健康饮料出现在市面上时，对需要控制糖份摄入量，又要追求享受的人们来说无疑于天大的喜讯。
这个喜讯同时也伴随着无数的质疑声：市面上的无糖可乐真的无糖吗？可乐含糖量真的是零吗？如何让消费者安全又安心的接受这款新产品，饮料生产企业的资深研究员自然可以很好的解答这个问题。
下面，让我们从三个方面来为无糖可乐做个鉴定：一、无糖可乐的无糖是个什么概念：无糖可乐顾名思义就是没有真正意义上白砂糖的成分，而将糖换作代糖，即阿斯巴甜，这种代糖经常使用在低糖饮料当中，一直广为流传。
研究己证明代糖能释放自由甲醇，也就是我们俗称的木糖醇，占代糖的1/3，很多低糖可乐、低糖汽水、无糖口香糖、冰淇淋中都含有阿斯巴甜这种代糖成分。
①无糖可乐真的无糖吗？答案是在无糖的同时且具有普通可乐的正宗口味，是可乐的又一畅销保证。
二、无糖可乐对消费者有什么益处：首先可得知，无糖可乐针对的人群无非三种——因摄糖过多导致肥胖的人士、必须严格控制摄糖量的如糖尿病患者、因摄糖过多导致牙损伤的人士。
目前，无谓无糖类食品，大多是以阿斯巴甜作为甜味剂的，这种代糖被一些糖尿病患者亲切的称为“蛋白糖”，属于在人体内不会参与代谢的一种甜味剂。
不参与代谢的意思即这种物质不会在人体内分解并吸收，而是保持原样在人身体里“走一遭”，然后通过尿液、粪便排出体外。
因此上来说，无糖可乐真的无糖吗？对此类消费者有着无比重大的意义。
②三、无糖可乐的安全保证有哪些？在我们国内刚刚兴起无糖、低糖食品的时候，国外的无糖食品己流通多年，在可乐无比畅销的国家，至今无糖可乐仍是大多数保健人士的首选，因此上市面上的销售经验己印证了无糖可乐的安全性，对此有需求的消费者可以安心的进行选择饮用。
在美味与健康可以兼得的当今社会，我们一定要依据理性的眼光来看待流言和真相。
饮料中糖含量的测定
饮料中糖含量的测定引言饮料是我们日常生活中常见的消费品，而糖是其中的主要成分之一。
了解饮料中的糖含量对于控制摄入的糖的数量以及健康管理非常重要。
本文将介绍一种常用的方法来测定饮料中的糖含量，以帮助人们更好地了解饮料的营养成分。
实验材料和方法实验材料•饮料样品•蒸馏水•盐酸溶液•酚酞指示剂溶液•硫酸溶液•甲基橙指示剂溶液•糖溶液（备用）实验步骤1.取一个饮料样品，并将其称重记录下来。
2.将样品倒入500毫升锥形瓶中。
3.将蒸馏水加入到锥形瓶中，使液位上升到容量线附近。
4.将锥形瓶中的液体转移到锥形瓶中，重复此步骤5次，以充分混合。
5.取锥形瓶中的一小部分液体（约10毫升）置于玻璃烧杯中。
6.加入酚酞指示剂溶液，并滴加盐酸溶液，直到溶液变红。
7.将锥形瓶中的液体归还到烧杯中，并用蒸馏水冲洗锥形瓶以确保所有液体都转移到烧杯中。
8.在烧杯中加入甲基橙指示剂溶液，直到溶液变橙色。
9.分别加入酚酞指示剂溶液和硫酸溶液，直到溶液变红或变黄。
10.取出另外一个锥形瓶，并将锥形瓶中的糖溶液称重记录下来。
11.将糖溶液倒入锥形瓶中。
12.重复步骤6至9，以测定糖溶液中的糖含量。
结果和讨论根据实验步骤得到的数据，我们可以计算出饮料样品中的糖含量。
通过与糖溶液的对照组进行比较，可以确定饮料样品中的糖含量是否超出了健康范围。
在这个实验中，我们使用酚酞指示剂溶液和硫酸溶液来进行滴定。
酚酞指示剂溶液可以在酸性条件下变红，而硫酸溶液可以在碱性条件下变黄。
这样，我们可以通过观察溶液的颜色变化来确定滴定终点。
需要注意的是，该方法只能确定总糖含量，并不能对不同种类的糖进行分析。
此外，根据不同的实验条件和指示剂的使用，可能会得到稍有不同的结果。
因此，在进行实验时，应该保持一致的操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
结论本实验介绍了一种测定饮料中糖含量的方法。
通过该方法，我们可以确定饮料样品中的糖含量，并与糖溶液的对照组进行比较，以评估饮料的营养成分。
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分析化学课程设计题目: 可口可乐中阿斯巴甜含量的测定姓名：孙毅专业：应用化学班级：1223002学号：201220300228指导老师：周瑜芬2015年5月目录摘要 (1)关键词 (1)一、引言 (2)1.1测定阿斯巴甜的目的与意义 (2)1.2阿斯巴甜的性质 (2)二、测定方法及原理 (3)2.1阿斯巴甜的测定方法 (3)2.2阿斯巴甜的测定原理 (3)三、具体测定步骤 (3)3.1仪器与药品 (3)3.1.1仪器 (3)3.1.2药品 (3)3.2方法与过程 (4)3.2.1色谱分析条件 (4)3.2.2对照品溶液的制备 (4)3.2.3进样精度 (4)3.2.4标准曲线的绘制 (4)3.2.5样品溶液的配制 (4)3.2.6加标回收率 (4)3.2.7稳定性实验 (4)3.2.8样品含量测定 (5)四、数据分析与处理 (5)4.1图表的绘制 (5)4.1.1阿斯巴甜对照品色谱图 (5)4.1.2精密度实验图 (5)4.1.3标准曲线的绘制 (5)4.1.4加标回收率图 (5)4.1.5稳定性实验图 (5)4.2阿斯巴甜含量计算 (6)五、阿斯巴甜的安全性 (6)5.1摄入量 (6)5.2代谢 (6)5.3癌症 (6)5.4神经及精神症状 (7)5.5头痛 (7)5.6体重变化和饥饿 (7)5.7阿斯巴甜安全性结论 (7)六、阿斯巴甜的应用 (7)七、总结 (8)参考文献 (8)可口可乐中阿斯巴甜含量的测定摘要：2009年可口可乐旗下新品－“零度”(ZERO) 无糖可乐致癌的说法在国内众多博客、网上论坛及民间广为流传。
传闻称“零度”中所含的阿斯巴甜有损神经系统，将引发头痛、记忆力衰退、癫痫、视力消失、昏迷乃至癌肿。
本文将介绍对备受争议的“阿斯巴甜”采用高效液相色谱法将可乐样品经水提取后,在ODS-C18色谱柱上以磷酸二氢钾水溶液和乙腈作为流动相进行色谱分离,用HPLC法在VWD208nm 处检测可口可乐中阿斯巴甜的含量[1]。
同时，对阿斯巴甜的安全性和在食品中的应用作了简单的介绍。
关键词：阿斯巴甜高效液相色谱法测定安全应用一、引言本节将介绍测定可乐中阿斯巴甜含量的目的和意义及阿斯巴甜的性质。
1.1测定阿斯巴甜的目的与意义2009年可口可乐旗下新品－“零度”(ZERO) 无糖可乐致癌的说法在国内众多博客、网上论坛及民间广为流传。
传闻称“零度”中所含的阿斯巴甜有损神经系统，将引发头痛、记忆力衰退、癫痫、视力消失、昏迷乃至癌肿。
2015年4月24日，百事可乐宣布将在美国销售的无糖碳酸饮料中停止使用甜味剂阿斯巴甜，转而用另一甜味剂三氯蔗糖(Splenda)替代。
虽然此前不少专家都表示该人工甜味剂是安全的，但消费者对阿斯巴甜安全性的担忧还是使百事可乐改变配方。
全世界目前已有80多个国家批准阿斯巴甜的使用, 我国规定除罐头食品外可用于各类食品, 其用量按生产需要适量使用。
20 世纪 80 年代以来, 全球阿斯巴甜的年消费增长率超过20% , 远远超过其他人工合成甜味剂平均增长率 5%的速度。
但是目前国际上对阿斯巴甜的安全性存在很大的争议, 众多关于阿斯巴甜的食品安全问题引起了公众对阿斯巴甜这一甜味剂的质疑[2]。
2005 年 7 月, 意大利科学家公布的一份研究结果称, 动物实验证明, 阿斯巴甜可导致大鼠肿瘤。
无论如何, 阿斯巴甜作为一种食品添加剂, 为保护人体健康, 防止其对人体的潜在危害, 其添加量应该受到监控, 因此对各种食品、药品中阿斯巴甜的测定很有必要。
本次对可乐中阿斯巴甜含量的测定将确定可口可乐中阿斯巴甜的含量并讨论其对人体健康的影响。
1.2阿斯巴甜的性质阿斯巴甜由L-苯丙氨酸（或L-甲基苯丙氨酸酯）与L-天冬氨酸以化学或酶催化反应制得。
前者产生有甜味的α-阿斯巴甜和无甜味的β-阿斯巴甜，要将α-阿斯巴甜和β-阿斯巴甜分离，并经纯化，酶促过程只产生α-阿斯巴甜。
阿斯巴甜的分子式为C14H18N2O5，国外商品名称为Nutrasweet、EqualTablets，又称甜味素、蛋白糖、天冬甜母、天冬甜精、天苯糖等。
常温下，为白色结晶性的粉末。
阿斯巴甜为JamesM.Schlatter于1965年发现。
这名化学家在G.D.Searle&Company工作时合成制作抑制溃疡药物时发现的一种二肽甜味剂[3]。
其甜度约为蔗糖的200倍, 甜味酷似蔗糖, 外观呈白色针状结晶或结晶粉末, 具有安全、低热量、甜味纯净、防龋齿、代谢不需胰岛素参与等特点。
但使人感到到甜味所需的阿斯巴甜量非常少，以至于可忽略其所含的热量，因此也被广泛地作为蔗糖的代替品。
阿斯巴甜的味道和一般蔗糖的味道有所不同。
阿斯巴甜的甜味与糖相比较，可延缓及持续较长的时间。
目前阿斯巴甜作为低卡路里甜味料,用于制造5000多个品种, 包括饮料、酸奶、甜片、果冻、各类保健食品等[4]。
阿斯巴甜结构式二、测定方法及原理本节将具体介绍测定可口可乐中阿斯巴甜含量的方法及原理。
2.1阿斯巴甜的测定方法食品中阿斯巴甜的测定方法主要有滴定法、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法和高效毛细管电泳法等。
国内外应用较多的是高效液相色谱法。
但在应用中我们发现, 食品添加剂中阿斯巴甜的高效液相色谱法样品处理烦琐,且色谱峰形差, 分析周期长。
本研究采用纯水超声提取可乐样品, 提取液用水定容, 微孔滤膜过滤后直接进样测定, 改进了流动相体系, 简化了操作步骤, 加快了分析速度, 应用本法测定了可乐样品中的阿斯巴甜。
2.2阿斯巴甜的测定原理色谱法利用混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出，与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
国标GB/ T 2225—2008适用于碳酸饮料、乳饮料、浓缩果汁和固体饮料中阿斯巴甜的检测。
根据阿斯巴甜易溶于水和乙醇等溶剂的特点, 饮料中的阿斯巴甜用蒸馏水在超声波振荡下提取, 提取液用水定容;碳酸饮料类试样除二氧化碳后用水定容;乳饮料类试样中阿斯巴甜用乙醇沉淀蛋白, 上清液用乙醇+ 水(2 +1)定容, 提取液在液相色谱ODS-C18 反相柱上进行分离, 在波长208 nm处检测[5]。
三、具体测定步骤本节将具体介绍测定可口可乐中阿斯巴甜含量的步骤。
3.1仪器与药品3.1.1仪器：赛多利斯电子天平220S（北京赛多利斯仪器系统有限公司），超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司，型号 KQ-100B），高效液相色谱仪(日本日立)，包括HITACHI Pump L-2130 ，HITACHI Autosampler L-2200 ， Organizer ， HITACHI UV-VIS Detector L-2420。
3.1.2药品：阿斯巴甜对照品（常州市牛塘化工厂有限公司 20090512），乙腈为色谱纯（fish），磷酸二氢钾为分析纯。
3.2方法与过程3.2.1色谱分析条件色谱柱：THERMO ODS-2 C18（4.6×250 mm，5µm）；紫外检测的波长：208 nm（国标）；流速：根据测定实际确定；进样量：根据测定实际确定；流动相：0.01 mol∙L-1磷酸二氢钾:乙腈（比例根据测定实际确定）。
柱温：根据测定实际确定。
3.2.2对照品溶液的制备精密称取阿斯巴甜对照品0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，先用部分纯净水溶解，超声10 分钟，定容，超声。
得100 µg/mL的对照品溶液。
3.2.3进样精度按照对照品溶液制备方法3.2.2，配制溶液，按照2.1 项下的方法测定。
3.2.4标准曲线的绘制分别精密移取对照品溶液0.50、1.00、1.50、2.00、 2.50 mL，分别置于5 mL 的棕色容量瓶中用纯净水稀释，超声定容。
按照 2.1 项下的方法测定，绘制标准曲线，由面积和浓度进行线性回归，得到回归方程。
3.2.5样品溶液的配制可乐样品1 mL，用纯净水稀释在5 mL 的容量瓶中，超声10 分钟，定容。
过滤，得样品溶液。
3.2.6加标回收率按照2.2 的方法，配制含有20 mg/L 的溶液1 L，分别精密称取7.00，10.00，13.00 mg 对照品，混匀后超声。
按照 2.1 项下的方法测定。
并根据回归方程计算平均回收率。
3.2.7稳定性实验取浓度为20 µg/mL 的对照品溶液，放置于室温阴暗处1、2、4、8、12、24 h，按照2.1 项下的方法测定，确定其稳定性。
3.2.8样品含量测定取可乐样品，按照 2.1 项下的方法测定。
按照回归的方程进行计算阿斯巴甜的含量。
四、数据分析与处理4.1图表的绘制4.1.1阿斯巴甜对照品色谱图根据测定实际绘制4.1.2精密度实验图根据测定实际绘制4.1.3标准曲线的绘制根据测定实际绘制4.1.4加标回收率图根据测定实际绘制4.1.5稳定性实验图根据测定实际绘制4.2阿斯巴甜含量计算将可乐测试所得的峰面积代入标准曲线回归方程计算浓度五、阿斯巴甜的安全性本节将从大众对阿斯巴甜可能对人体产生的几种不利影响对阿斯巴甜的安全性展开分析。
5.1摄入量欧盟食品科学委员会限定阿斯巴甜日容许摄入量为40毫克每千克体重[25]，美国疾病控制与预防中心则限定为50毫克每千克体重[26]。
1罐355毫升无糖可乐约含180毫克，对于一个体重75公斤的成年男性而言需要饮用大约21罐（7.3升）无糖可乐才能达到FDA规定的50毫克每千克体重的摄入上限。
5.2代谢阿斯巴甜在体内迅速代谢为天冬氨酸、苯丙氨酸和甲醇。
即使大量摄入阿斯巴甜（200毫克每千克体重），在血液内也不能检测到阿斯巴甜。
由阿斯巴甜提供的天冬氨酸仅占人体每日所摄入量的1-2%。
虽然天冬氨酸和一些氨基酸（如谷氨酸）联合作用可能对神经细胞造成损伤，但研究表明阿斯巴甜并无神经毒性，而通过阿斯巴甜摄入的天冬氨酸无法达到足够产生毒性的剂量。
甲醇在体内代谢为甲醛，进而氧化为甲酸，以甲酸形态在体内停留时间最长，因此被认为是甲醇毒性的作用机理。
但由阿斯巴甜提供的甲醇不会引起严重健康问题。
首先，阿斯巴甜提供的甲醇少于果汁和柑橘类水果，而啤酒等发酵类饮品中甲醇含量更高。
然后，阿斯巴甜产生的甲醛量远远小于人体正常饮食产生的甲醛量，哪怕以最大剂量摄入阿斯巴甜，在血液中甲醛和甲酸浓度并无明显升高。
5.3癌症审查发现阿斯巴甜和癌症之间没有关联。
这些审查是在众多的动物致癌性研究，人类流行病学研究以及在体外基因毒性研究。
这些研究都没有发现显著的证据表明，阿斯巴甜会导致动物的癌症，损坏的基因组，或在目前使用的剂量下导致人类癌症。