免疫组化技术在病理诊断中的应用研究
免疫组化技术在病理诊断中的应用
免疫组化技术在病理诊断中的应用发布时间：2021-04-02T15:47:53.450Z 来源：《医师在线》2021年5期作者：崔晓雪[导读] 目的：分析病理诊断中免疫组化技术的应用效果。
崔晓雪黑龙江省鸡西市人民医院病理科黑龙江省鸡西市158100摘要：目的：分析病理诊断中免疫组化技术的应用效果。
方法：本次选择102例肿瘤患者为对象展开研究，按诊断技术将其分为对照组与观察组。
结果：观察组确诊率高于对照组，差异比较，存在统计学意义。
观察组阳性率92.15%，对照组阳性率72.54%，数据差异存在，存在统计学意义。
结论：在病理诊断中，采取免疫组化技术，可提高检测结果准确性，提高制片的质量水平，为疾病诊断提供依据。
关键词：免疫组化技术；病理诊断；应用；研究近年来我国医疗诊断技术逐渐优化发展，在病理诊断中免疫组化技术得到了广泛应用[1]，涉及诸多领域，如，肿瘤原发部位确定、肿瘤组织起源鉴别、未分化恶性肿瘤性质的判定，随着研究的不断深化，免疫组化技术在病理诊断中发挥出一定作用，可提升诊断的准确性[2]。
1.资料与方法1.1一般资料选取2017年1月~2018年1月我院收治的肿瘤患者102例为对象，根据诊断技术随机将全部患者分成51例对照组、51例观察组。
对照组患者平均（43.7±8.2）岁，采取常规技术诊断；观察组患者平均（45.1±9.5）岁，采取免疫组化技术诊断，比较两组基本资料，具有可比性。
1.2方法对照组采取常规技术诊断：根据患者病灶大小、位置及类型进行穿刺活检，将患者肿瘤组织取下，比较标准组织。
观察组采取免疫组化技术诊断：选择试剂包括：蒸馏水、透明液、脱水液、浸蜡液、树胶、甲醛固定液，在石蜡中置入样本，将其切片，厚度控制在2UM，随后进行免组染色，将其置于浓度为3%的过氧化氢液体中，浸泡100min，温度控制在37摄氏度左右，清洗采用蒸馏水，待孵育后DBA显色，采用树胶来封固[3]。
免疫组化技术在制作病理组织切片中的应用价值分析
免疫组化技术在制作病理组织切片中的应用价值分析随着医疗技术的不断进步，免疫组化技术在病理学领域中的应用越来越广泛。
免疫组化技术是一种在组织切片中应用抗体特异性与抗原相互作用的方法，通过对组织中一些特定分子的免疫活性成分进行定位和检测，从而得到更为精准的病理诊断结果。
本文将从技术原理、应用优势、应用领域和发展趋势等方面进行分析，探讨免疫组化技术在病理组织切片中的应用价值。
一、技术原理免疫组化技术是基于免疫学原理，通过特异性抗原与抗体之间的结合来检测组织切片中的蛋白质、细胞因子等生物大分子，从而对细胞及组织的结构、功能和病变进行定位和分析的方法。
其核心原理是利用抗体的高度特异性和亲和力，来实现对组织中特定蛋白或生物分子的识别。
免疫组化技术主要分为直接法和间接法两种。
直接法是将荧光标记或酶标记的抗体直接与待检测的抗原结合，然后通过显微镜观察标记物的位置和数量。
间接法则是将一种第一抗体与待检测抗原结合，然后用另一种标记有酶或者荧光素的第二抗体去识别第一抗体，最后通过显色反应或者荧光显微镜观察标记物的位置和数量。
这两种方法都能够实现对组织切片中特定蛋白质或生物分子的定位和检测。
二、应用优势1. 提高诊断的准确性：免疫组化技术通过对组织切片中特定抗原的检测，可以为病理医生提供更为精确的诊断信息，有助于区分病变类型和疾病分期，从而提高了病理诊断的准确性。
2. 发现新的生物标志物：通过免疫组化技术可以检测到组织中一些特定蛋白质的表达情况，进而发现新的生物标志物，帮助预测疾病进展和评估治疗效果，为临床治疗提供更为准确的依据。
3. 研究疾病发病机制：免疫组化技术可以帮助研究人员对疾病的发病机制进行深入研究，通过检测疾病相关蛋白的表达情况，揭示疾病的发生和发展过程，为疾病的治疗和预防提供理论依据。
4. 指导个性化治疗：通过检测组织中特定蛋白的表达情况，可以为临床治疗提供更为个性化的治疗方案，帮助临床医生制定更为合理的治疗方案，提高治疗效果。
免疫组化检查在病理诊断中的应用及其意义
免疫组化检查在病理诊断中得应用及其意义免疫组化就是利用抗原与抗体特异性结合得原理,通过化学反应使标记抗体得显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽与蛋白质),对其进行定位、定性及定量得研究,称为免疫组织化学。
免疫组化实验中常用得抗体为单克隆抗体与多克隆抗体。
实验所用主要为组织标本与细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片与组织芯片)与冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片与细胞涂片。
其中石蜡切片就是制作组织标本最常用、最基本得方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定得影响,但可进行抗原修复,就是免疫组化中首选得组织标本制作方法。
石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。
所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成得交联破坏,而恢复抗原得原有空间形态。
常用得抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用得修复液就是pH6、0得0、01 mol/L得柠檬酸盐缓冲液。
免疫组化常用得染色方法根据标记物得不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲与组织化学法,后者就是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础得检测方法。
这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平得定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。
一、病理外检中常用抗体标记上皮类标记AE1/AE3最常用,胞浆阳性着色,细丝状,与低、中分子量角蛋白反应,肝细胞为阴性,而胆管细胞阳性,用于确定肿瘤为上皮源性;CAM5、2胞浆阳性着色,细丝状,包含CK8 与CK18,主要染色神经内分泌细胞与腺上皮,正常鳞状上皮阴性,用于染小细胞癌、胸腺瘤与梭形细胞癌、肝细胞癌:AE1/AE3 CAM5、2 (+),用于乳腺外得Paget’s病;CK34BE胞浆阳性着色,鳞状上皮与鳞状细胞癌阳性,用于染前列腺得基底层细胞,鉴别浸润癌,染涎腺肿瘤得肌上皮,用于染Mallory小体;EMA细胞膜/细胞浆阳性着色,上皮标记得替代品,浆细胞阳性,很好得内对照,用于染滑膜肉瘤、大细胞分化不良性淋巴瘤、L&H 富于淋巴细胞得结节状何杰金、脑膜瘤EMA(+)AE1/AE3(–)、浆细胞瘤;CK7与CK20胞浆阳性着色,两者联合应用可鉴别很多种癌得原发部位,CK7 常常在胃肠道得癌为阴性,CK20 只有胃肠道癌与Merkel 细胞癌阳性。
免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用
在诊断性免疫组化中的质量控制是个重要问题。 美国生物染色委员会附属商品以及商品试剂信息标准化，美国食品及药品 管理局（FDA)通过美国病理学会批准出台一项政策， 列出了61种在一些严重疾病的诊断和/ 或监测中充分标 准的单克隆抗体，并要求制造商自政策发表之日起的 30个月内向FDA提交合适的产品使用申请，在此期间产 品虽被允许用于医学目的在市场销售，但制造商们必 须在产品上标明“未经法律批准，暂时供应以满足重 要的医学目的”。
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免疫酶学技术还包括碱性磷酸酶-抗碱性磷酸 酶(APA-AP)系统[2] 及葡萄糖氧化酶─抗葡萄糖氧化 酶（GAG)系统等，这些技术与PAP技术相似，只 不过是将碱性磷酸酶或葡萄糖氧化酶代替辣根过 氧化物酶而已，据称这两种技术可以减少背景染 色的干扰，因为相应的内源性酶在组织中分布有 限，尤其是APA -AP技术更适用于血液标本染色。
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抗体保存在不吸附蛋白质的材料中，如储存抗体中蛋白 浓度很低时（10-100mg/l），应另加隔离蛋白，以减少容器 对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋 白。绝大多数已稀释的抗体应保存在4℃-8℃的条件下，以 免冻融对抗体蛋白产生有害的效应。抗体原液和已分离的 免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件，避免反复冻融。冷冻 的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温 快速解冻。被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，为了 防止细菌污染，可在抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经 真空冷冻干燥后置-20℃以下可以保存2-3年，保存稀释后的 单抗应加入0.1%叠氮钠。大多数稀释抗体不可进行冷冻保 存，多数抗体可能会丢失抗原活性，多数抗体只要蛋白浓 度适当，可在4℃下保存数月。
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PAP法是过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)复合物， 包括辣根过氧化物酶抗体，及辣根过氧化物酶抗原 组成的可溶性复合物为五环状结构，3个分子辣根过 氧化物酶和二个抗体分子组成，极为稳定，比免疫 荧光法敏感100-1000倍，比酶桥法敏感20倍，其原理 是特异性初级抗体（一抗）的Fab段与组织抗原结合， 二抗（桥抗）在一抗与PAP复合物之间形成分子桥联， 此时一抗与PAP中的免疫球蛋必须是同一种属，以使 得衍生自其它种属的二抗，对一抗分子PAP中的FC段 及稳定成份都具有特异性。
【精编】免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用
人工智能
通过机器学习算法对免疫 组化图像进行自动识别和 分析，减少人为误差。
未来发展方向与前景
标准化和规范化
制定统一的免疫组化操作指南和标准，提高诊断的一致性和可靠 性。
临床转化应用
加强免疫组化技术在临床实践中的应用，提高肿瘤诊断和治疗水 平。
多学科合作
加强病理学、肿瘤学、免疫学等多学科合作，共同推动免疫组化 技术的发展和应用。
乳腺癌免疫组化诊断
总结词
乳腺癌免疫组化诊断是利用免疫组织化学技术对乳腺癌进行诊断的方法。
详细描述
通过检测乳腺癌组织中特定抗原的表达，有助于确定肿瘤的分子分型，预测患者的预后和指导治疗。常见的乳腺 癌免疫组化指标包括雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）等。
肺癌免疫组化诊断
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案例分析
乳腺癌免疫组化诊断案例
总结词
乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，免疫组化在 乳腺癌的诊断中具有重要作用。
详细描述
通过免疫组化技术，可以检测乳腺癌组织中 雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和 人表皮生长因子受体2（HER2）的表达情况 。这些标志物的表达状态对于乳腺癌的分类 、预后评估和指导治疗具有重要意义。例如 ，ER和PR阳性提示患者可能对内分泌治疗 敏感，而HER2阳性则提示患者可能从靶向 治疗中受益。
总结词
肺癌免疫组化诊断是利用免疫组织化学技术对肺癌进行诊断的方法。
详细描述
通过对肺癌组织中特定抗原的表达进行检测，有助于肺癌的分类、分期和预后评估。常 见的肺癌免疫组化指标包括细胞角蛋白（CK）、甲状腺转录因子1（TTF-1）等。
结直肠癌免疫组化诊断
总结词
结直肠癌免疫组化诊断是利用免疫组织 化学技术对结直肠癌进行诊断的方法。
免疫组化技术在病理诊断中的应用
免疫组化技术在病理诊断中的应用
免疫组化技术是一种用于病理诊断的重要方法，它利用抗体与细胞或组织中的特定分子结合，从而检测、定位和定量这些分子。
免疫组织化学技术可以用于肿瘤学、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经病理学等领域的病理诊断。
在肿瘤学中，常用的免疫组化技术有肿瘤标记物检测、肿瘤分型和分级，以及预后指标的检测。
例如，通过检测细胞分裂素Ki-67的表达水平，可以评估肿瘤的增殖指数，从而判断肿瘤的生长速度和恶性程度。
在感染性疾病中，免疫组化技术可以用于检测病原体的存在和分布。
例如，通过检测病毒抗原或病原菌抗原的表达，可以确定感染的类型和感染程度。
在自身免疫性疾病中，免疫组化技术可以用于检测自身抗体的存在和分布。
例如，通过检测ANA（抗核抗体）的表达，可以确定病人是否患有系统性红斑狼疮。
在神经病理学中，免疫组化技术可以用于检测神经元标记物的表达。
例如，通过检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达，可以确定脑肿瘤细胞是否来源于神经元。
总之，免疫组化技术在病理诊断中有着广泛的应用，它可以增强诊断的准确性和可靠性，为病人的治疗提供更好的指导。
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免疫组化在病理诊断中的应用
免疫组化在病理诊断中的应用
免疫组化是一种病理诊断技术，可以通过检测组织或细胞中的特定蛋白质来确定疾病的类型和程度。
它通过染色技术使用标记有荧光或酶的抗体来探测细胞或组织中的特定蛋白质，从而提供对疾病的更深入的了解。
以下是免疫组化在病理诊断中的主要应用步骤。
1. 准备组织样本
首先，需要采集组织样本，并根据需要适当切片。
切片后，样本需要通过固定和去水来准备，这可以防止蛋白质失去结构和形态。
然后，需要将样本嵌入到蜡块中，以便进行染色处理。
2. 进行抗原恢复
接下来，需要进行抗原恢复。
抗原恢复是将细胞或组织中的蛋白质处理，以便它们更容易被检测到。
通常，这涉及在加热和非加热的液体中浸泡样本，以稍微破坏组织，使抗体更容易进入组织中。
3. 应用抗体
准备好样本后，需要对其应用抗体。
此时，可以使用单克隆或多克隆抗体。
这些抗体含有特定的标记，可以检测到特定的蛋白质。
抗体应该与样本一起孵育，以确保它们与细胞或组织中的特定蛋白质发生反应。
4. 观察和分析结果
完成抗体应用后，需要观察和分析结果。
结果通常是显微镜下可见的染色。
根据染色的程度和位置，可以确定疾病的种类和程度。
比如，检测到某种癌症可能会显示出比正常细胞更强的染色。
总之，免疫组化是一种有效的病理诊断技术，可以帮助医生确定疾病的类型和程度。
然而，要正确应用免疫组化技术需要熟悉这种技术的操作步骤和原理。
同时，还需要了解每种抗体和标记的优缺点，以确保使用正确的抗体来提高准确性和可重复性。
免疫组化在临床诊断中的应用
免疫组化在临床诊断中的应用在临床病理诊断中，免疫组织化学（IHe）是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。
但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。
深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。
在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。
由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床治疗中的作用。
1.免疫组化技术观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂（酶、荧光素、同位素、金属离子等等）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。
IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本最常用、最基本的方法是石蜡切片。
石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存；石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
2.免疫组化技术在临床诊断中的作用目前免疫组化技术应用于临床主要有以下几个方面：2.1肿瘤良恶性的判断对于反应性增生还是肿瘤性增生，可用免疫球蛋白（Ig）的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。
在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白（bc1-2）,be1-2阴性；而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上肿瘤性滤泡细胞有bc1-2的高表达，bc1-2阳性。
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免疫组化技术在病理诊断中的应用研究
经过近几年的发展，免疫组化技术实现了在诊断、肿瘤分类等方面的广泛应用，有效提高了治疗效果。
本文将分析临床病理诊断中免疫组化技术的应用，将免疫组化在病理诊断、鉴别诊断、临床治疗以及预后方面的指导作用凸现出来，使其得到更充分的应用。
标签：免疫组化技术；病理诊断；应用
当前，临床诊断疾病的方法多种多样，但是临床病理诊断是众多疾病诊断方法中准确性最高的一种。
临床病理诊断较于常规的诊断方法，在准确性、可信性以及权威性上有较大的优势，并且免疫组化技术已经成为临床病理诊断的主要手段。
免疫组化技术在病理诊断中的应用始于上个世纪后期，在为临床肿瘤的治疗和预后提供重要依据方面发挥重要作用。
随着现代医学对免疫组化技术的不断推广和应用，随即产生了一些问题，在一定程度上制约了免疫组化技术的深入发展。
1 免疫组化技术在病理诊断中的应用
免疫组化技术在病理诊断中的应用主要体现在以下几个方面，即对肿瘤的性质、分期、属性、来源部位以及“未分化”恶性肿瘤进行判断。
1.1 肿瘤性质判断
采用Ig轻链抗体检测B细胞增生的方式，可以判断细胞属于反应性增生还是肿瘤性增生。
在淋巴滤泡出现反应性增生的情况下，bcl-2表现为阴性。
在滤泡性淋巴瘤中，bcl-2表现为阳性。
肿瘤细胞在实际情况中的增生程度可以作为评价周期素、增值细胞核抗原等的依据，对肿瘤细胞的性质为良性还是恶性进行判断。
1.2 肿瘤分期判断
肿瘤分期是判断预后的主要指标，这与淋巴管的存在与否、有无血管侵润或者血管侵袭之间直接相关[1]。
通过对免疫组化技术的应用可以对是否存在淋巴管侵润、有无血管侵润、血管侵袭进行明确的判断。
层粘连蛋白与IV型胶原单克隆体具有清晰显示主要基膜的作用，进而可以对浸润癌和原位癌进行区分。
比如说，如果上皮性癌突破了基膜，就是侵润癌；如果上皮性癌没有突破基膜，就是原位癌。
可以显示血管的标志区，如D-40、Anti-HAP40抗体等，能够将肿瘤对血管或者淋巴管的侵润表示出来，因此，免疫组化的最终结果通常作为临床病理诊断中鉴别肿瘤的良性或者恶性与是否有血管侵润或者淋巴管侵润的重要依据。
1.3 肿瘤属性判断
为了判断肿瘤的属性以及明确肿瘤的来源，通常采用特定抗体来标志细胞内的抗原成分。
比如，肌酸激酶（CK）是一种上皮性标志，上皮源性肿瘤主要显示为肌酸激酶阳性；降钙素多克隆抗体为甲状腺髓样癌的主要标记；胶质肿瘤是神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性一种可能；Tg阳性为状腺滤泡状癌的主要提示；胃肠道间质瘤（CD117）在胃肠质瘤中呈阳性。
特定抗体作为标志物在肿瘤属性判断中的应用，提高了肿瘤属性判断的效率并且有助于肿瘤来源的确认。
1.4 来源部位判断
临床中经常出现对部分肿瘤来源不明确的现象，通过对免疫组化技术的应用，能够确定恶性肿瘤的具体来源，进一步明确肿瘤的原发位置[2]。
比如，在胃肠道癌、胆管癌、胰腺癌中，细胞角蛋白表现为阳性，而在肾癌、乳腺癌、肺癌中，细胞角蛋白表现为阴性；如果Tg表现为阳性，那么应该将甲状腺会否发生转移作为首要考虑的情况；如果染色法（PAS）表现为阳性，那么就要提高对前列腺转移的的警惕程度；如果S-100蛋白表现为阳性，那么黑色素瘤的可能性就比较大；在波形蛋白呈阳性时需要进行临床中的肉瘤诊断；肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白、肌红蛋白的出现，则首先警惕横纹肌肉瘤的可能。
通过对肿瘤来源具体位置的确定，对临床治疗和预后起到关键性的作用并为临床治疗和预后提供可靠的依据。
1.5 “未分化”恶性肿瘤的判断
肉瘤和癌是“未分化”肿瘤的主要形式，由于肿瘤处于尚未分化的状态，其细胞起源特征不明显，因此不能准确进行分类。
在组织学的分类中，通常采用特异性抗体和非特异性抗体进行准确的鉴定。
除此之外，免疫组化技术在病理诊断中的应用能够对位于组织器官交界处的不同类型的肿瘤进行准确的划分和定位，对微小病灶也能够及时准确的发现，实现在临床治疗和预后判断的重大意义。
并且，在诊断的过程中可以通过对一些特异性抗体，如病毒、细菌、真菌等，进行染色，对各种传染疾病进行诊断。
2 免疫组化技术的局限性
在临床上对肿瘤进行诊断的过程中，理想标记物具有高准确性、灵敏性以及特异性的特点。
但是在实际操作中很难保证左右的标记物都能达到理想的状态，并且也可能出现正常细胞分泌标记物的情况。
所以，细胞学检查通常不会采用单一的抗体进行标记，而是选择一组标记物进行全面准确的分析。
在诊断肿瘤的过程中，免疫组化技术的局限性主要表现在特异性抗体，即标志物等方面。
在实际操作的过程中，有必要设置阴性对照和阳性对照，如果出现对照组理想程度不高以及直接忽略的情况，应该特别谨慎的对免疫组化的最终结果进行细致的分析，保证结果的高度精确性[3]。
操作时应严格按照规定程序进行，再以适当的解释作为辅助，在对染色结果进行报告的时候，应该结合抗体特性、临床诊断以及鉴定等进行而不是一味解释。
需要注意的是，必须要排除假阴性和假阳性等各种干扰因素对结果准确性的影响。
3 小结
在现代医学不断发展的过程中，通过病理诊断逐渐发掘出各种抗体的特性和用途，使得免疫组化的应用范围不断扩大，有效提高了临床诊断的正确率。
然而，由于来自技术等各方面因素的制约，免疫组化技术在病理诊断中的引用存在较为薄弱的环节。
因此，病理医生和相关专业技术人员应提高对免疫组化技术各个方面的重视程度，尽量减少或者避免误差。
通过结合设计操作对免疫组化技术进行优化和调整，实现操作的规范化并进一步提高病理诊断的正确性和精确性。
免疫组化技术的有效应用，不仅能够为临床在病理诊断提供有效的手段，还在医学研究上发挥重大的作用，有助于临床医学的进一步发展。
参考文献
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[3]掌娟.病理诊断中免疫组化技术的应用[J].大家健康（学术版），2014，（14）：79.。