白介素1β(IL1b)检测试剂盒 SEA563Hu使用说明书
人白介素1β (IL-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
2022年修订第一版（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!）产品货号：E-EL-H0149c产品规格：96T/48T/24T/96T*5Elabscience 人白介素1β(IL-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
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Copyright ©2021-2022 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved目录用途 (3)基本性能 (3)检测原理 (3)试剂盒组成及保存 (4)试验所需自备物品 (5)样品收集方法 (5)注意事项 (6)■ 试剂盒注意事项 (6)■ 样品注意事项 (6)样本稀释方案 (6)检测前准备工作 (7)操作步骤 (8)结果判断 (10)技术资源 (10)典型数据 (10)性能 (11)■ 精密度 (11)■ 回收率 (11)■ 线性 (11)声明 (12)Intended use (13)Character (13)Test principle (13)Kit components & Storage (14)Other supplies required (15)Sample collection (15)Note (16)■ Note for kit (16)■ Note for sample (16)Dilution Method (17)Reagent preparation (17)Assay procedure (18)Calculation of results (20)Technical resources (20)Typical data (20)Performance (21)■ Precision (21)■ Recovery (21)■ Linearity (21)Declaration (22)用途该试剂盒用于体外定量检测人 血清、血浆或其他相关生物液体中IL-1β浓度。
人白介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒-高灵敏度标准OD值!
人白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒，高灵敏度+标准OD值!刚刚进入实验室的新手科研er一定会被ELISA试剂盒数以千计的种类、数以百家的品牌绕花眼，而实验老手们，可能也经常会被做实验时明明正常建模，标曲测定的数值和线性关系也正常，但就是结果出现各种问题所头疼，这个时候，大家就要思考一下，你所选择的ELISA试剂盒是不是最合适并且质量又可靠呢?人白介素1β(IL-1β)是大家做实验中比较常见的一种细胞因子，而它也与我们的常见的类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮性关节炎等息息相关，并且最近有研究表明，IL-1β的表达，还与口腔、胃支气管等多种病症相关，可研究价值巨大。
一般来说，OA患者滑液中IL-1β的含量平均为(90.51±5.03)pg/ml。
在实验过程中，我们通常采用ELISA法测定血清IL-1β的含量，这个时候，选择一款高灵敏度+完美标曲的ELISA试剂盒，就显得尤为重要。
我们推荐——Elabscience 人白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒，科研老手新手的“眼花头疼”问题统统解决!Elabscience 人白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒原理采用双抗体夹心ELISA法。
用抗人IL-1β抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-1β会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。
依次加入生物素化的抗人IL-1β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
抗人IL-1β抗体与结合在包被抗体上的人IL-1β结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。
用酶标仪在450nm波长处测OD 值，IL-1β浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-1β的浓度。
标准情况下，Elabscience 人白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒的灵敏度为4.69pg/ml，检测范围为7.81—500 pg/mL，可以说是非常标准的皮克级高敏试剂，且与其它相关蛋白无明显交叉反应，也基本不存在背景干扰，可以说是新老科研er们均适宜了。
人IL-1β ELISA kit说明书
标本收集: 1. 收集血液的试管应为无热原和内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐EDTA。 3. 避免溶血，高血脂标本。 4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
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5. 标本收集后若不及时检测，请按一次用量分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。 6. 可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
60分钟。 5. 洗板4次。 6. 除空白孔外，加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30分
钟。 7. 洗板4次。 8. 加入显色剂100ul/孔，避光37℃孵箱孵育10--15分钟。 9. 加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测量OD450值(5分钟内)。
结果判断: 1. 每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。 2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标
灵敏度，特异性和重复性: 1. 灵敏度：最小可测人IL-1β达2pg/ml. 2. 特异性：不与IL－2,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF及sTNF-RII等反应。 3. 重复性：板内，板间变异系数均<10%.
小鼠白介素1βIL-1βELISA试剂盒使用方法
小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒使用方法检测范围：96T2.5ng/L-80ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白介素1β (IL-1β)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素1β (IL-1β)水平。
用纯化的小鼠白介素1β (IL-1β)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素1β (IL-1β)，再与HRP标记的白介素1β (IL-1β)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白介素1β (IL-1β)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白介素1β (IL-1β)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-1β抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-1β抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-1β呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
用ELISA试剂盒检测人白介素1β IL-1b 方法步骤
双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-1β的浓度检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-1β的浓度。
IL-1β捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-1β会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人IL-1β抗体后，抗人IL-1β抗体与IL-1β接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在IL-1β将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-1β浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-1β浓度。
标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测；D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。
注意事项:1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.若标准品复溶后，请在三天内用完。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃。
小鼠(Mouse)白细胞介素1β(IL-1β)-NEWA
上海笃玛生物科技有限公司本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠（Mouse）白细胞介素1β（IL-1β）ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被白细胞介素1β（IL-1β）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素1β（IL-1β）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
上海笃玛生物科技有限公司5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120pg/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
人白细胞介素1βIL-1β 酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
仅供科研使用，不得用于临床检验。
人白细胞介素1β（IL-1β）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：人白细胞介素1β（IL-1β）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：Human Interleukin 1β（IL-1β）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素1β（IL-1β）的浓度。
【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。
在预包被抗人白细胞介素1β（IL-1β）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素1β（IL-1β）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素1β（IL-1β）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。
加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素1β（IL-1β）的浓度正相关。
拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素1β（IL-1β）的浓度。
【主要组成成分】主要成分校准品检测范围：3.9-250pg/ml。
校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
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SEA563Hu96T白介素1β(IL1b)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：人使用说明书仅供体外研究使用，不用于临床诊断!第12版（2016年05月修订）[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL1b含量。
[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板（预包被）196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。
请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。
注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
[标本的采集与保存]1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8o C1,000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
3、组织匀浆：不同类型的组织制备匀浆的方法会有所不同1）取适量组织块，在预冷PBS（0.01mol/L，pH=7.0-7.2）中清洗去除血液，匀浆前先称重。
2）将组织切成小块，均匀的放入放置在冰上的装有新鲜裂解缓冲液1的玻璃均质器中（微小的组织也要如此）。
（质量体积比=1:20-1:50，例如：1mL裂解缓冲液中加入20-50mg组织样本。
）3）将得到的悬浊液经过超声处理至澄清。
4）将制备好的匀浆液10,000×g离心5分钟，弃沉淀，上清即可用于检测或置于-20o C下保存。
4、细胞裂解液：在分析试验之前，细胞需利用以下方法处理：1）贴壁细胞应该用冷PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，于1,000×g离心5分钟后收集。
（悬浮细胞可通过离心直接收集）。
2）将收集到的细胞用冷PBS洗3次；3）将浓度为107个细胞/毫升的悬浮细胞加入新鲜裂解缓冲液中，如果需要，细胞可以进行超声波处理至溶液澄清。
4）将标本于2-8o C1,500×g离心10分钟，弃沉淀，上清即可用于检测或置于-20o C下保存。
5、细胞培养上清或其它生物标本：请1,000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
一般来说，常规样本的IL1b含量很低，但是其含量会在炎症或者其他刺激下升高。
下面提供一种细胞刺激方法的示例：THP1细胞（1×106/mL）用含10％胎牛血清，100U/mL青霉素，和100µg/mL硫酸链霉素的1640培养基培养。
此后用10µg/mL的LPS和10µg/mL的ConA共同刺激，24h后收集细胞上清，离心后取上清留用。
注意：1、以上标本均需密封保存，4o C保存小于1周，-20o C不超过1个月，-80o C不超过2个月。
2、标本出现溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
4、基于大量检测数据，我们推荐使用血清而不是血浆作为样本进行检测。
[试剂准备]1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温（18-25o C），如果该试剂盒在一段时间内不能使用，请仅取出本次试验所需的酶标条和试剂，并将剩余的酶标条及试剂按指定条件保存。
2、标准品（冻干品）：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时轻轻摇动（避免起泡），其浓度为2,000pg/mL(贮液)。
先将其稀释为1,000pg/mL(标准曲线最高浓度)后，再准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入500μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成1,000pg/mL,500pg/mL, 250pg/mL,125pg/mL,62.5pg/mL,31.2pg/mL,15.6pg/mL，标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
Tube123456789 pg/mL2,0001,00050025012562.531.215.603、检测溶液A及检测溶液B：Detection A及Detection B在使用前请用手甩几下或短暂离心处理，以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如：10μL检测溶液A/990μL 检测稀释液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2mL。
4、浓洗涤液：580mL蒸馏水或去离子水加入20mL洗涤液（30×）稀释至600mL至工作液浓度。
5、底物溶液：请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用，容器中剩余的底物应予丢弃，不要倒回TMB瓶中。
注意：1、标准品的稀释不能直接在板中进行。
2、标准品请于临用前15分钟内配制。
该标准品只能使用一次。
3、标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请使用相应的稀释液配制，稀释液不能混用。
用移液枪轻轻吹打充分混匀，避免起泡。
为保证实验结果的准确性请使用微量吸管，并校准微量移液器。
请依据所需的量精确配制，尽量不要使用微量配制的方法（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μL），以避免造成浓度误差。
4、请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液A工作液和检测溶液B工作液。
5、洗涤液（30x）中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀，至到结晶完全溶解再进行配制。
6、试剂盒中部分试剂为储存液，客户需配置成工作液后使用，在配置过程中可能因为纯净水质量差或水质污染，以及实验中所用耗材洁净度差，造成实验结果不准确，甚至完全错误。
请使用双蒸水配置。
[标本处理]1、本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
2、实验前应先预测样本中待测物浓度。
当浓度不在标准曲线的范围内时，用户必须确定其特定实验的最佳样品稀释倍数。
如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
样本稀释需用PBS。
3、若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。
4、使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5、若样本为细胞培养上清，因为该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
6、某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
7、建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会因蛋白降解或变性而导致实验结果偏差。
[操作步骤]1、加样：分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。
设标准孔7孔，依次加入100μL不同浓度的标准品（见试剂准备2）。
空白孔加100μL标准品稀释液（见试剂准备第二步最后一管），余孔加待测样品100μL，酶标板加上覆膜，37o C温育1小时。
2、弃去液体，甩干，不用洗涤。
3、每孔加检测溶液A工作液100μL（临用前配制），酶标板覆膜，37o C温育1小时。
4、弃去孔内液体，每孔用350μL的洗涤液洗涤，浸泡1-2分钟，在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体。
重复洗板3次。
最后一次洗涤后，吸取或倒出剩余的洗涤缓冲液，将酶标板倒扣在吸水纸上，将残留在孔内的液体全部吸干。
此过程也可采用喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。
5、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100μL，酶标板覆膜，37o C温育30分钟。
6、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤4。
7、每孔加TMB底物溶液90μL，酶标板覆膜，37o C避光显色（反应时间控制在10-20分钟，不要超过30分钟。
当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。
8、每孔加终止溶液50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。
终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
如出现颜色不匀一，请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。
9、在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度值（O.D.值）。
注意：1、试剂准备：准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。
2、加样：实验操作中请使用一次性的灭菌吸头，避免污染。
加样时注意不要有气泡产生，将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
与反应试剂加入一样，加样过程中第一个孔与最后一个孔加样时间间隔尽量小（一般控制在10分钟以内），如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
为了测值的准确性，推荐设置复孔进行实验。
3、温育：为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4、洗涤：充分洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液完全甩干。
洗涤过程中反应孔内残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，同时要轻轻擦除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。
如果使用自动洗板机，请在熟练使用后再用于正式实验过程中。
5、反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟观察一次），如观察到颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强而影响酶标仪光密度读数。