荧光法测定多维
荧光光度分析法测定维生素B2的含量
荧光光度分析法测定维生素B2的含量引言荧光分光光度法简介有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。
荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。
由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。
利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。
同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。
这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。
测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。
荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g／m1，线性范围宽。
现在主要应用的是荧光分光光度计。
【实验目的】1. 学习荧光光度法测定维生素B2的含量的基本原理和方法。
2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。
【实验原理】在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c有以下关系：当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：这种以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。
荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度，可成倍提高荧光强度。
同时，提高仪器灵敏度，可提高荧光光度法的灵敏度。
而吸收光度法，无论是提高激发光强度还是提高仪器灵敏度，入射光和出射光同时增大，其灵敏度不变。
因此，荧光光度法比吸收光度法灵敏度高。
VB2(即核黄素)在430～440nm蓝光照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为535nm。
VB2的荧光强度在pH6～7时，在pH=11时基本消失。
维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
荧光法测定维生素B_2含量
【摘要】维生素 是人体必须的营养营养物质之一，为体内黄酶类辅基的组成部分，在人体内具有长大的生理意义。本实验通过荧光法测定标准维生素 的溶液的荧光强度，从而获取其浓度与荧光强度的线性关系，进而通过测定未知样的荧光强度来对维生素 的含量进行定量分析。
【关键词】荧光法、维生素 、含量
2、实验原理
维生素B2是橘黄色无臭的针状结晶，化学名称为7,8-二甲基-10-(1’-D-核糖醇基)异咯嗪，其结构式为：
由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。
维生素 溶液在450~470nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素 在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素 溶液浓度呈线性关系（在稀溶液中，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc），因此可以用荧光光度法测维生素 的含量。维生素 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素 的荧光强得多，故测维生素 的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
3.2.3、 激发光谱和荧光发射光谱的绘制（用3.00 mL 的标准溶液）
设置λem=520 nm为发射波长，在250~400 nm波长范围内扫描，记录520 nm波长处荧光发射强度和激发波长的关系曲线，得到激发光谱，记录最大激发波长。
根据在激发光谱上获得的最大激发波长设置λex，在400~600 nm波长范围内扫描，记录各个波长处荧光的发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱，从荧光发射光谱上找出其最大的发射波长λem。
多种维生素片中维生素K2含量检测研究
多种维生素片中维生素K2含量检测研究杨菊辉（哈药集团制药六厂，黑龙江哈尔滨 150056）摘 要：目的：建立快速测定多种维生素片中维生素K2含量的分析方法。
方法：样品使用美国Waters公司高效液相色谱仪检测，C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分离，流动相为甲醇，流速为1.0 mL·min-1。
结果：维生素K2保留时间约为54 min，在1.25～10.00 μg·mL-1线性关系良好，相关系数为0.998 2。
重复性实验相对标准偏差为1.69%，50%加标回收率为92.21%～100.22%，检出限为0.06 μg·g-1，定量限为0.20 μg·g-1。
结论：该方法准确度和精密度良好，灵敏度高，分离度好，可为多种维生素片中维生素K2的检测研究提供参考。
关键词：高效液相色谱检测法；维生素K2；保健食品Study on Vitamin K2 Content Detection in MultivitaminTabletsYANG Juhui(Harbin Pharmaceutical Group No.6 Pharmaceutical Factory, Harbin 150056, China) Abstract: Objective: To establish an analytical method for the rapid determination of vitamin K2 content in multivitamin tablets. Method: Samples were detected using a US Waters HPLC chromatograph, separated with a C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm), mobile phase in methanol at a flow rate of 1.0 mL·min-1. Result: Vitamin K2 retention time was about 54 min, with a good linear relationship in the concentration 1.25～10.00 μg·mL-1 range, the correlation coefficient was 0.998 2. The relative standard deviation of the repeatability experiments was 1.69%, and the 50% spiking recovery was 92.21%～100.22%. The limit of detection was 0.06 μg·g-1 and the limit of quantification was 0.20 μg·g-1. Conclusion: This method has good accuracy and precision, high sensitivity and good separation degree, which can provide a reference for the detection of vitamin K2 in various vitamin tablets.Keywords: HPLC detection method; vitamin K2; health food维生素K是一类具有叶绿醌生物活性的萘醌基团的衍生物。
荧光光法测定维生素B含量
实验五 荧光光度法测定维生素B 2的含量一、实验目的1、学习荧光分光光度法测定维生素B 2的分析原理；2、掌握荧光分光光度计的操作技术和测定维生素B 2的方法。
二、实验原理1.荧光光度法原理（1）常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下的关系：bc I I F εφ0303.2=当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：Kc I F =这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
（2）荧光分析法的特点：a. 与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度。
b. 选择性好。
荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。
c. 所需试样量少、操作方法简便。
（3）荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
（4）荧光分析仪器常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成，如下图所示：2. 荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量维生素B 2（又叫核黄素，VB 2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：H HO HO HO HNH H HOHNC NHNOOH 3CH 3C维生素B 2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B 2溶液在430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm 。
实验十 荧光光度计法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量
实验十荧光光度计法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量实验目的1、学习荧光光度计法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理。
2、掌握荧光光度计的操作技术。
实验原理1、维生素B2,又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚扥有机溶剂。
在中性或碱性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
2、维生素B2水溶液在430440nm蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535nm，在pH67的溶液中荧光强度最大，在pH 11的碱性溶液中荧光消失。
3、多维葡萄糖中含有维生素B1，B2，C，D2及葡萄糖均不干扰维生素B2的测定。
4、由于维生素B2在碱性溶液中经光线照射，会发生光分解而转化为光黄素，后者的荧光比核黄素荧光强的多。
因此，测定维生素B2的荧光时，溶液要控制在酸性范围内，且须在避光的条件下进行。
仪器与试剂仪器CRT970分子荧光光度计（上海三科仪器公司）。
试剂1、维生素B2标准溶液（1.0 g/L）准确的称取0.0100g维生素B2置于100mL烧杯中，用热二次蒸馏水溶解后，转移到1000mL容量瓶中，以二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、多维葡萄糖粉试样（4.0g/L）准确称取0.2000g多维葡萄糖试样，用少量水溶解后转入50mL 容量瓶中，加冰乙酸2mL，以二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
3、冰乙酸（AR）实验步骤1、标准溶液的配制于50mL容量瓶中，加入10ug/mL维生素B2标准溶液2.0mL，再加入冰乙酸2.0mL，以二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、绘制激光光谱和发射光谱在200800范围内扫描激发光谱；在200800范围内扫描荧光发射光谱。
3、未知试样的测定在上述选定的激发、发射波长处，测定维生素B2标准溶液以及试样的荧光发射强度。
荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中
荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量一、实验目的：1.学习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理；2.掌握荧光分光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。
二、实验原理：1.维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：HHOHOHO H NHHHOHNCNHNOOH3CH3C维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。
维生素B2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。
葡萄糖中含有维生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中维生素C 和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B2的测定。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
2.荧光分光光度计(1).常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系：当实验条件一定时，荧光强度IF与荧光物质的浓度成线性关系：这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
(2).荧光分析法的特点a.与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度。
b.选择性好。
荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。
c.所需试样量少、操作方法简便。
bcII F??0303.2?KcI F?．(3).荧光分析仪器a.常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成，如下图所示：b.荧光分析仪器与分光光度计比较主要差别有两点：(a).荧光分析仪器采用垂直测量方式，以消除透射光的影响；(b).荧光分析仪器有两个单色器，能够获得单色性较好的激发光并消除其它杂散光干扰。
同步荧光法测定药片中的维生素B2和B6
同步荧光法测定复合维生素B片中的维生素B2和B6一、实验背景B族维生素是一类重要的水溶性维生素，人体缺乏B族维生素可导致多种疾病的发生，如口角炎等。
而人体自身无法合成B族维生素，因此只能通过摄取食物获得，也可通过服用维生素药片加以补充。
因此，各种维生素B的含量测定对于复合维生素B片的质量评价十分重要。
二、实验目的1、学习和掌握同步荧光光谱法测定的原理。
2、学习和掌握荧光分光光度计的使用方法。
3、学习用标准曲线法进行定量分析。
三、实验原理B族维生素中，维生素B2和维生素B6为荧光物质，因此可采用荧光光谱法对其进行定量测定。
但由于它们的荧光光谱部分重叠，从而影响了同时定量分析的准确性。
同步荧光光谱法是荧光分析中的一种重要技术。
与常规荧光分析法相比，同步荧光分析法具有简化谱图、提高选择性、减少光散射干扰等特点，尤其适合多组分混合物的分析。
同步荧光分析法与常规荧光测定方法最大的区别是：同时扫描激发和发射两个单色器波长，由测得的荧光强度信号与对应的激发波长（或发射波长）构成光谱图，称为同步荧光光谱。
在同步荧光测定中，当实验条件一定且被测组分的浓度较低时，其同步荧光信号强度I与浓度c成正比，即I = K c据此可对被测组分进行定量分析。
本实验采用同步荧光光谱法对复合维生素B片中的维生素B2和维生素B6进行同时测定。
以维生素B2和维生素B6混合标准溶液的同步荧光光谱强度对其浓度绘制标准曲线，再根据被测样品溶液的同步荧光强度，由标准曲线计算出复合维生素B片中维生素B2和维生素B6的含量。
四、仪器与试剂1、仪器F-4600荧光分光光度计（日立），1cm石英样品池，分析天平，研钵，25mL、100mL容量瓶，5ml、10ml吸量管，吸耳球。
2、试剂维生素B2（40µg/mL），维生素B6（5µg/mL），0.2mol/L Na2HPO4-0.1 mol/L 柠檬酸缓冲溶液（pH 7.0），复合维生素B片。
荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量1
荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B 2的含量一、实验目的1、学习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B 2的分析原理；2、掌握荧光分光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B 2的方法。
二、实验原理：1、荧光光谱法定量分析：常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下的关系：bcI I F εφ0303.2=当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：Kc I F =2、荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
3、荧光分析仪器4、维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：维生素B 2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B 2溶液在430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm 。
维生素B 2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B 2的含量。
多维葡萄糖中含有维生素B 1、B 2、C 、D 2及葡萄糖，其中维生素C 和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B 1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D 2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B 2的测定。
维生素B 2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B 2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
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激发光波长：329 nm
荧光测定波长：401 nm
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
3.仪器设置：
插电源，开主机电源，仪器自检； 在主菜单里选择定量测定方式后进入二级菜单；
分别设置激发光波长和荧光测定波长；
设置测定灵敏度为 “low”;
空光路调0；
分别测定空白溶液、标准溶液、样品溶液荧光强
安排值日生打扫实验室卫生。
实验2
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
一、实验目的：
学习荧光定量分析法的基本原理 熟悉荧光分光光度计的使用方法
二、实验原理：
Vit-B6能发出荧光，在一定浓度范围内，荧 光强弱与其含量成正比。
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
三、仪器与试剂
仪器：RF-1501荧光分光光度计
试剂：柠檬酸缓冲液、 Vit-B6储备液
样品：复合维生素片
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
四、实验步骤：
1. 样品预处理： 取1片复合维生素片，将其碾压成粉后，用少量 3%醋酸溶液溶解并定容至50 ml，过中，用缓冲液稀释
至10 ml ，摇匀备用。
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
度值F并记录。
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
五、实验数据处理 六、书写实验报告
要求：实验目的、原理、步骤简写； 实验结果、讨论详写。
荧光光度法测定多维片中的Vit-B6
实验注意事项：
正确使用移液管；
小心使用各种玻璃器皿、荧光比色杯、荧 光分光光度计； 实验结束后个人清洗自己使用过的试管；