高效液相色谱-HPLC教程文件
(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程
1. 目 的
描 述 Waters 高 效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程 。
2. 适 用 范 围
化 验 室
3. 责 任 者
化 验 员 应 严 格 遵 照 该 操 作 规 程 , QC 主 管 负 责 监 督 本 规 程 的 实 施 。
4. 定 义
HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高 效 液 相 色 谱 仪 。
5. 安 全 注 意 事 项
5.1 有 机 溶 媒 有 害 健 康 ， 各 溶 剂 瓶 口 应 封 严 。
5.2 注 意 检 查 废 液 桶 中 废 液 应 避 光 ， 防 止 废 液 桶 满 外 溢 。
6. 规 程
6.1. Waters HPLC的 组 成 ： 贮 液 器 输 液 泵 自 动 进 样 器 分 离 柱 (柱 温 箱 )
紫 外 检 测 器 控 制 及 数 据 处 理 系 统 (Millennium 32化 学 工 作 站 )。
6.2. HPLC系 统 的 打 开 及 关 闭 顺 序
6.2.1 打 开 顺 序
• 对 于 分 体 式 ： 请 按 泵 、 进 样 器 、 柱 温 箱 、 检 测 器 的 顺
序 打 开 开 关 ， 待 各 部 分 分 别 显 示 初 始 化 完 毕 后 ， 最 后
打 开 Millennium 32化 学 工 作 站 。
泵 与 色 谱 工 作 站 的 连 接：对 于 510 泵，因 为 此 泵 与 色 谱 工 作 站 是
单 向 联 系 ， 如 要 使 泵 在 Remote 状 态 下 由 工 作 站 控 制 ， 首 先 要 在 泵
的 键 盘 上 按 Menu 键 ， 待 显 示 屏 切 换 至 Mode 状 态 下 ， 其 状 态 是
Loca ，按 Edit/Enter 键 ，在 Local 的 L 前 有 闪 动 的 光 标 显 示，按 键，
高效液相色谱
高效液相色谱仪（HPLC）
开机
先打开电脑，然后从左往右开。在 waters600上按底下横排第二个键（Direct）→set：35（柱子温度）
测B组、叶酸冲机器 甲醇 流动相 二次水
A B C D
100（过一下）
抽水流速（0.10）
100（过一下）
抽水（流速0.10）
30 70
各至少40分钟流量为0.5、1.0一点一点往上调
70 30
100
30 70
30 70
做样结束后调流速为1.5 30 70
冲仪器。
自动进样器：打开开关按纽，按第三个键（PURGE PAGE），再按第一键（AUTO PAGE）冲洗针头。过一会等所有按纽跳到第一个键（START PUGRE）显深色后，按最后一个键，回到主菜单，关机。（这是每次做盐类产品做完后在关主机之前冲洗针头）
（注：在测完D3后应该在第二天早上要冲洗针头）打开开关按纽，按第三个键（PURGE
PAGE），再按第一键（AUTO PAGE）冲洗针头。过一会等所有按纽跳到第一个键（START
PUGRE）显深色后，按最后一个键，再按最后第二个键YES。然后再最后一个键，回到主菜单。
打印的报告中的PDA的结果表中看：纯度1角度＜纯度1阈值说明不受杂质影响（较好）
计算标样含量：标样质量*标品浓度*掩盖系数*1000000/50（容量瓶定容体积）/进样品稀释倍数 （掩盖系数VB1*0.787 VB6*0.823）
高效液相色谱仪操作手册(戴安全自动)
液相色谱操作规程-U3000(全自动)
一、操作前准备:
1.1流动相的配制:
1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜(0.45um)还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理:
1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品,用适当的溶剂(最好采用流动相或流动相的主成分)进行充分溶解(也可借助超声波进行超声溶解),使其浓度为
0.1~1mg/mL(根据检测结果再适当调节溶液的浓度)。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜(0.45um)还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择:根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机:
2.1打开电源,打开仪器接线板电源开关;
2.2打开电脑显示器电源,打开电脑主机电源,启动电脑;
2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源;等待各个部件自检完成2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,关闭界面。
2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标(工作站主程序)。
2.6在左下方点击仪器,则在右边会自动显示该仪器控制面板
2.7 旋开泵上的排液阀(两圈以上);设置A通道为100%,点击“冲洗”,然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”;(默认冲洗5分钟);然后用同样的方法分别“冲洗”流路中其他通道气泡;排完气泡后关闭排液阀;
2.8设置流动相的比例及流速后,点击“马达”。此时泵自动会以设置的流速进行运行。
2.9在控制面板“自动进样器”控制框中,分别执行“灌注注射器”,“清洗缓冲环”,“清洗针外壁”,执行“到进样位置”;(操作过程中注意注射器有没有气泡。如有先机器排气,如果不行手动拆除排气泡。)
HPLC的使用步骤
HPLC的使用步骤
HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种高效液相色谱技术，用于分离和分析溶液中的化合物。下面是HPLC的使用步骤：
1.样品准备：首先，需要准备样品。根据所研究的化合物性质，选择适当的提取和纯化方法。确保样品的浓度适当，并将其溶解于适当的溶剂中。
2.设定仪器参数：接下来，需要设置和检查仪器的相关参数。这包括选择适当的色谱柱、流动相、检测器和流速等。根据样品特性和分离要求，选择合适的操作条件。
3.预洗色谱柱：在开始实验之前，需要进行柱子的预洗。这可以通过将流动相在柱子上通过一段时间来完成。这有助于去除残留杂质并稳定柱子。
4.校准仪器：为了确保准确的分析结果，需要校准仪器。这可以通过使用标准样品来完成。选择适当的标准物质，根据其峰面积和浓度绘制标准曲线。
5.注射样品：将样品溶液注射到色谱仪中，通常使用自动注射器。确保样品注射量适当，以避免柱子过载。
6.运行分离：开始运行仪器，以分离样品中的化合物。流动相以设定的速率通过色谱柱，用于分离化合物。这个过程可能需要一段时间，取决于样品的复杂性。 7.监测检测器信号：使用合适的检测器监测流经柱子的化合物。常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器和质谱检测器等。通过检测器产生的信号，可以确定样品中的目标化合物的存在和浓度。
8.数据分析：分析检测器产生的信号，并将其转换为峰面积。使用标准曲线和峰面积，可以计算出样品中目标化合物的浓度。进行数据分析和处理，以获取所需的结果。
9.定性和定量分析：根据所需的目标，确定化合物的质量和纯度。可以使用定性和定量方法来确定目标化合物的结构和浓度。
10.清洗和保养：在使用HPLC之后，需要对仪器进行清洗和保养。这包括冲洗色谱柱、清洗注射器和流动相贮存器。确保所有的部件都干净，没有残留物。
这些步骤提供了使用HPLC进行分离和分析化合物的基本指南。根据具体的实验目的和所研究的化合物，可能需要进行调整和优化。在进行实验之前，还应详细了解仪器的操作手册，并充分理解实验的目的和原理。
皮革和毛皮 甲醛含量的测定 第1部分：高效液相色谱法-最新国标
1
皮革和毛皮 甲醛含量的测定 第1部分：高效液相色谱法
1 范围
本文件描述了高效液相色谱法（HPLC）测定皮革、毛皮中游离和水解甲醛含量的试验方法。
本文件适用于各种类型皮革、毛皮及其制品中甲醛含量的测定。
注： 本文件规定的方法具有选择性，受有色萃取液的干扰较小，特别适用于甲醛含量的精确定量测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696:1987，MOD）
GB/T 39364 皮革、化学、物理、机械和色牢度试验 取样部位（GB/T 39364-2020，ISO 2418:2017，
MOD）
QB/T 1267 毛皮 化学、物理和机械、色牢度试验 取样部位
QB/T 1272 毛皮 化学试验样品的准备
QB/T 1273 毛皮 化学试验 挥发物的测定
QB/T 2716 皮革 化学试验样品的准备
QB/T 2717 皮革 化学试验 挥发物的测定
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
在规定条件下用萃取溶液萃取试样，萃取液与2,4-二硝基苯肼混合，不同种类的醛和酮与其反应生
成各自相应的腙，分离后通过带有紫外检测器（UV）或二极管阵列探测器（DAD）的反相高效液相色谱
仪进行测定。
注： 本文件测定的是在标准规定条件下从皮革、毛皮中萃取的游离和水解的甲醛总量。
5 试剂和材料
除非另有规定，所用试剂均为分析纯。试验用水应符合GB/T 6682中三级水的规定，所用溶液均
为水溶液。
甲醛溶液，质量分数约37%。
注： 甲醛、甲醛与2,4-二硝基苯肼溶液均有市售，若使用市售溶液，无需进行8.1的程序。 碘溶液，0.05 mol/L，即每升中含有12.68 g碘。
(完整word版)Agilent1260高效液相色谱仪操作规程
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四川中安检测有限公司
作业指导书
Agilent1260高效液相色谱仪
操作规程
文件编号 ZAJC-3T-001
批 准 人
批准日期
编 制 人
编制日期
第 2 页 共 8 页
1.目的
正确使用仪器，确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器使用寿命。
2.范围
适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作。
3.职责
3.1操作人员：按照本操作规程操作仪器，对仪器进行自检，作使用登记。
3.2负责人：负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期自检、仪器综合管理。
4.要求
4.1开机
4.1.1溶剂准备
按要求准备所需流动相，每瓶均超声10min排气，将原来浸泡在甲醇中的滤头取出对应放在各个流动相中（A：二次蒸馏水；D:缓冲溶液；B:色谱纯甲醇C：色谱纯乙腈）。
4.1.2开启工作站
4.1.2.1启动计算机
打开计算机电源，登陆 windows 操作系统。
4.1.2.2启动工作站
打开 Agilent 1260 各模块电源，待 Agilent 1260 各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕桌面图标“HPLC -1260（联机）”，则进入工作界面。
模块右上角状态灯颜色说明：
无色：未开电源或者模块准备就绪；
黄色：模块未准备就；
绿色：正在进样分析 ； 第 3 页 共 8 页 红色：模块出错；
所有模块红色：仪器有漏液
工作站图形颜色说明：
绿色：模块准备就绪；
黄色：模块未准备就绪；
蓝色：正在进样分析；
红色：出错或者不能联机；
灰色：此模块没启用。
将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏 ，系统会自动显示未就绪或出错的原因。
4.1.3冲洗流动相管路
反时针旋开泵模块上的溶液排空阀 ，右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为 5ml/min。将实验中需要的各个通道分别设置“溶剂”为 100%，点击确定开始冲洗，每个通道冲洗3-5分钟，若冲洗通道时压力显示超过10 bar，则可换过滤白头。
HPLC培训教程
HPLC培训教程
我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：
方法 项目 数量
1985年版 1990年版 1995年版 2000年版
HPLC法 辨别 9 34 150
检查 12 40 160
含量测定 7 60 117 387
鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，是以每一个药品分析人员应当操纵并应用HPLC。
I．概论
一、液相色谱理论成长简况
色谱法的分别道理是：溶于流淌相(mobile phase)中的各组分经由固定相时，因为与固定相(stationary phase)产生感化（吸附、分派、离子吸引、排阻、亲和）的大年夜小、强弱不合，在固定相中滞留时刻不合，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分别植物色素时发明的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此差不多上成长出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开端时期是用大年夜直径的玻璃管柱在室平和常压下用液位差输送流淌相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时刻长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的差不多上，于60年代后期引入了气相色谱理论而灵敏成长起来的。它与经典液相色谱法的差别是填料颗粒小而平均，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流淌相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和长处
HPLC有以下特点：
高压—压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高效液相色谱进样操作流程
高效液相色谱进样操作流程
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summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to
know different data formats andwriting methods,please pay attention!高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，用于测定复杂样品中的化合物。进样操作是HPLC中的关键步骤，直接影响到分析结果的准确性和重复性。下面是高效液相色谱进样操作的详细流程：
高效液相色谱仪操作步骤(精)
八方泵业/
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高效液相色谱仪操作步骤：
1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)． 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)． 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)． 设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
安捷伦液相色谱Agilent-HPLC操作规程
1
型号：Agilent 1200 使用日期：
产地：美国 责任人：
Agilent 1200 高效液相色谱仪
操作步骤：
1. 开机
开机前需更换已过膜并超声脱气好的流动相，依次打开电脑及高效液相色谱仪各电源开关（从上往下），待仪器自检完毕后，打开purge阀，开泵，排空管路气泡，关闭purge阀，双击online图标，进入色谱工作站。
2. 方法编辑
从命令栏“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，或者从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，设置方法信息、仪器参数（包括泵、检测器）、数据采集参数等（详见《高效液相色谱仪（Agile 1200型）操作规程》），保存方法。
3. 样品运行
调用已编辑好的方法，等待仪器稳定。选择样品运行模式“single”或“sequence”，编辑样品信息，如：存贮路径（path-Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、进样体积等，待online界面左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，且压力平稳后，即可进行样品分析。单击START按钮，运行样品。进样结束后，关闭检测器并按要求冲洗色谱柱。
4. 数据分析
数据分析在offline工作站中进行（详见《高效液相色谱仪（Agile 1200型）操作规程》）。
5. 关机
色谱柱冲洗结束后，在online界面关闭泵及柱温箱。退出化学工作站及其它窗口，关闭计算机，关闭HPLC系统各电源开关（从下往上）。按有关规定填写仪器使用记录。
注意事项：
1. 流动相使用前必须过滤膜，有机相必须为色谱纯，过0.45微米的有机滤膜；水相必须用Milli-Q水，过0.22微米的水相滤膜，且不能使用超过2天，以防止长菌或者藻类。