核桃分心木化学成分与生物活性研究_杨明珠
维吾尔药核桃分心木不同提取物对肾阳虚模型小鼠的实验研究
（Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｆ Ｐ ａ ｍａ ｅ ｔ ａ ｈ ｍｉ ｒ ｎ ｒ ａ ｉ Ｃ ｅ ｓ ｙ， ｃ ｏ ｌ ｆ Ｐ ａ ｍ ｃｕｉ ｌ ｃｅ ｃｓ ｐ ｒｍｅ ｔ ｈ ｒ ｃ ｕｉ ｌ ｅ ｓ ｙａ ｄ Ｏ ｇ ｎｃ ｈ ｍｉ ｒ Ｓ ｈ ｏ ｈ ｒ ａ ｅ ｔ ａ ｉｎｅ ， ｏ ｃ Ｃ ｔ ｔ ｏ ｃ Ｓ
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分心木化学成分及功效调查
分心木化学成分及功效调查分心木（Diaphragma juglandis Fructus）拉丁文名Juglans regia，是胡桃科植物胡桃果核的干燥木质隔膜，始载于《山西中药志》，具有利尿清热，健脾固肾，涩精等功效。
分心木是新疆维吾尔族传统药物之一，加水煮沸后代茶饮治疗肾虚遗精疗效显著。
目前关于分心木单体化学成分分离、结构鉴定及对分心木的药理活性与化学成分研究报道十分有限。
报道中采用传统化学反应方法对分心木的化学成分进行了定性分析，初步推断其中含有氨基酸、蛋白质、糖类、酚类、有机酸、黄酮、生物碱、强心苷、挥发油、甾类、皂苷、蒽醌类、内酯、香豆素等多种成分。
利用色谱方法进行化学成分分离与纯化,分离了17个化合物；通过现代波谱分析及化学方法,分别确定为催吐萝芙木醇、二氢槲皮素、p-谷甾醇、大黄素、齐墩果酸、4,8一二羟基-1-四氢萘醌、2-乙氧基胡桃醌、正十七烷、3-羟基-1-(4-羟基取代苯基-l-丙酮、硬脂酸-l-甘油单酯、柚皮素、没食子酸、儿茶素、没食子酸乙酯、核桃素D、对羟基苯甲酸、香草酸。
微量元素分析结果显示分心木中Ca元素含量较壳与仁中高出许多。
主要单体成分及功效详见下表：表1 单体成分及其生物活性主要功效1、抗炎抗菌活性对分心木提取物的抑菌作用进行了初步研究，通过纸片扩散法和常量肉汤稀释法测定分心木的抗菌活性。
结果表明：分心木各部位提取物具有不同程度的抗菌活性,而通过乙酸乙酯提取后活性最强，其乙酸乙酯提取物的抑菌作用明显强于其它各个提取物，说明乙酸乙酯部位是抗菌的有效部位; 由该部位分离得到的单体成分没食子酸乙酯也显示出很好的抗菌活性与较大抗菌谱，间接证实分心木被用于治疗淋病、血尿带下、泻痢、肾炎等病症具有一定的科学依据。
2、抗氧化活性以ＶＣ作为阳性对照，核桃分心木中总皂苷和总黄酮对超氧阴离子（－Ｏ２）、羟基自由基（－ＯＨ）、ＤＰＰＨ等的清除作用。
并对总皂苷和总黄酮的还原能力进行了测定。
核桃分心木活性成分及其功效研究进展
胡桃(Juglans regia L.)具有较高的营养价值，中国以加工胡桃仁为主，主要产品有核桃仁食品、核桃油、胡桃保健品等，充分体现了胡桃种植、加工的巨大食用价值[1]。
分心木，又名胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔，质地较脆，味道略苦[2]，含有黄酮、多糖、皂苷、生物碱、氨基酸等多种活性成分[3],可用于治疗慢性肾炎、失眠、前列腺炎、遗精、小便频急、糖尿病等[4-9]。
结合近年来相关文献中的内容，总结核桃分心木活性成分及其功效。
1 活性成分核桃分心木在中国、伊朗等国的古代医药中均有一定的效用，近年来相关研究更多关注核桃分心木的活性成分，研究者们通过响应面分析法（Box-Benhnken）、液质联用技术、回流提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、酶辅助提取等提取方法[10-13]分离提取核桃分心木中的活性成分，并取得了相关成果。
1.1 黄酮类在众多研究结果中，黄酮类单体是分心木中目前分离到的主要成分[13]。
根据LIU R X 等研究，核桃分心木中能够提取出槲皮素、二氢槲皮素、槲皮苷等主要成分[12-21]，这些化学物质中，不仅有植物界广泛分布的槲皮素、槲皮苷等，还有较为少见的二氢槲皮苷，且其含量相对较高。
见表1。
表1 分心木中主要的黄酮类活性成分单体名称分子式含量范围（μg/g）参考文献槲皮素C 15H 10O 7 4.76～17.43[12][14][15][16][17]二氢槲皮素C 15H 12O 733.99～153.31[12][14][15][16]槲皮苷C 21H 20O 11145.42～983.58[12][18] 异槲皮苷C 21H 20O 1220.89～116.68[12][14]儿茶素C 15H 14O 6251.69～693.32[12][19] 杨梅素C 15H 10O 811.22～28.13[12]柚皮素C 15H 12O 589.50～115.72[12][20]金丝桃苷C 21H 20O 12 4.20～60.27[12][14]落新妇苷C 21H 22O 119.19～31.62[12]（2S，3S）-花旗松素-3-O-α-D-阿拉伯呋喃糖苷C 20H 20O 11519.60～2181.84[12][19][21]Research progress on active components and efficacy of diaphragma juglandis fructus Liu Peng, Liu Ruiting, WangZhen, Hu Benxiang. Shangluo V ocational and Technical College, Shangluo 726000, China【Abstract 】Juglans regia L. is a plant of the genus Juglans in the family Juglans, which is one of the most widely distributed economic tree species in China. Walnut distraction wood is the wooden membrane in the walnut kernel of the walnut plant, which contains amino acids, proteins and other nutrients and flavonoids, soaps, alkaloids, phenols and other active substances. However, as a non-edible part, walnut distraction wood is generally discarded. Therefore, walnut distraction wood is expected to play a greater role in medicine, industry, food and other fields in the future. In this paper, the related studies on the active components and functions of walnut pistachio in recent years are systematically reviewed, so as to provide reference for the next experimental and clinical research.【Key words 】Diaphragma juglandis Fructus; Active ingredients; Effect 核桃分心木活性成分及其功效研究进展刘鹏 刘睿婷 王震 胡本祥基金项目：2017年陕西省重点研发计划项目（编号：2017NY-195）作者单位：726000 陕西省商洛市，商洛职业技术学院（刘鹏、王震）；中山大学中山医学院（刘睿婷）；陕西中医学院附属医院（胡本祥）【摘要】 胡桃是胡桃科胡桃属植物，是中国经济树种中分布最广的树种之一。
分心木的化学成分及药理作用研究进展
分心木的化学成分及药理作用研究进展摘要分心木（Diaphragma juglandis Fructus），又称作核桃隔膜，是胡桃科植物核桃果核中的干燥的木质隔膜。
在食用核桃时，分心木往往被忽略，与核桃壳一同当作垃圾处理。
然而现有资料显示，分心木中含有黄酮类，醌类，多糖类，挥发油类，酚酸类，鞣质和微量元素等多种有益于人类身体健康的物质。
分心木也可以起到抑菌，抗氧化、抗衰老，改善肾阳虚，体外抗肿瘤，降糖，镇静催眠等多种药理作用。
我国对分心木的研究尚且较少，因此对分心木的进一步了解有利于我们充分利用其生物价值，减少药物的浪费。
关键词分心木; 化学成分; 药理作用1.化学成分1.1黄酮类黄酮类物质的分布非常普遍，存在于自然界的绿色植物中，具有广泛的生物活性。
目前我国学者从分心木中分离出的黄酮类物质有：儿茶素、二氢槲皮素、柚皮素、山柰酚、槲皮素、槲皮苷、Taxifolin-3-O-、5，7，8，3’，4’-黄酮醇-3-O-a-D-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(6"-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷和槲皮素-3-O-(4"-O-乙酰基)-L-鼠李糖苷等。
1.2醌类学者在实验中通过硅胶柱色谱结合Sephadex LH-20柱色谱法，从分心木中分离出大黄素、4,8-二羟基-1-四氢萘醌、2-乙氧基胡桃醌、2-乙氧基-5-羟基-1,4-萘醌等醌类物质。
1.3多糖类到目前为止，学者利用离子柱和凝胶柱色谱等方式分离的方法，再经过色谱分析，发现了分心木中含有一种多糖，由葡萄糖、鼠李糖、果糖、甘露糖和阿拉伯糖组成。
之后，经过进一步的更加精细的研究，发现此酸性多糖的组成及摩尔比例为：阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:半乳糖醛酸=1:2.62:4.45:18.53。
[1]1.4挥发油类分心木中含有多种挥发类物质。
采用水蒸气蒸馏法从分心木中分离出乙酸、油酸、二苯基马来酐、乙酸乙酯、抗坏血酸酯、乙酸-1-甲基乙基酯、邻苯二甲酸二丁酯、十六酸、棕榈酸和9,12-十八烷二烯酸等挥发油类物质。
分心木的研究和发现
分心木的研究和发现新疆核桃分心木是胡桃科核桃属植物———核桃的果核内的木质隔膜，其多弯曲、破碎而不整齐；表面呈淡棕色至棕褐色，或棕黑色，略有光泽；质脆，易折断，气微，味微苦。
核桃分心木主要用于治疗肾虚、遗精、滑精、遗尿、尿血、带下、泻痢等症。
抗氧化剂主要是通过终止自由基链反应从而清除自由基，起到保护机体的作用。
因此，寻找适当的外源性抗氧化剂清除体内自由基，对治疗疾病和保护人体健康很有益处。
植物中存在众多消除活性氧自由基的抗氧化剂。
已有文献报道，植物中的黄酮、皂苷等活性物质具有一定的抗氧化活性，但有关核桃分心木总皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性研究在国内外却尚未见相关报道，导致人们对分心木的药用价值没有充分地认识，严重浪费了该药用资源。
为合理利用该植物资源并确定其主要的抗氧化活性成分，本实验通过提取核桃分心木总皂苷及总黄酮成分，研究了其体外抗氧化活性，从而为探索核桃分心木这种维药的药理作用机制提供了基础，并为核桃分心木的综合开发提供了理论依据。
据报道，抗氧化剂能够预防各种由自由基引起的与老化相关的疾病。
例如，动脉硬化、糖尿病、心血管病、老年性痴呆、白内障、关节炎等，这些疾病都被认为与自由基相关。
传统合成的抗氧化剂具有副作用，不易长期使用。
故从植物中寻找天然的抗氧化剂越来越受到研究者的关注。
目前，有关核桃分心木的抗氧化活性方面鲜有报道，因此，对核桃分心木药材的认识不充分，造成了药用资源的浪费。
本实验研究了核桃分心木总皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性。
实验结果表明：总皂苷和总黄酮都具有一定的体外抗氧化活性，均具有较好的ＤＰ－ＰＨ自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力和铁还原能力。
但是，其抗氧化性方面都比ＶＣ弱，可能原因是总黄酮和总皂苷含有一定的杂质，并不是单一的化合物。
本实验对核桃分心木抗氧化活性进行了初步研究，为进一步对核桃分心木分离纯化所得单体的药理活性的研究奠定了基础，亦为开发利用核桃分心木药用资源提供了一定的理论基础。
分心木化学成分及药理作用研究进展
摘要：目的 综述分心木的化学成分、质量研究及药理作用，为进一步研究提供指导。
方法 采用水蒸气蒸馏法提取并运用GC-MS分析了分心木中的挥发油，通过测定分心木中化学成分对分心木药材的质量进行控制。
结果 分心木中抗氧化和抗菌活性较强的组分均为强极性的成分，为研究其改善肾阳虚症状的物质基础奠定了基础。
结论 分心木具有较好的收涩作用，用于治疗肾虚遗精、滑精遗尿等症，本文对分心木进一步研究提供一定的参考。
关键词：分心木；化学成分；药理作用；研究进展中图分类号：R961 文献标识码：A中国人民解放军302医院（100039）郑绯赵庆国凌海慧北京军区总医院（100700）徐娟分心木化学成分及药理作用研究进展附图 从分心木中提取的17中化合物的化学结构文章编号：1005-8257（2014）08-0016-02 1 简介分心木（Juglandis fructus），又称胡桃衣（《本草再新》）、胡桃夹（《现代实用中药》）、胡桃隔（《山西中草药》），主要来源于胡桃科胡桃属植物胡桃Juglans regia L.果核内的木质隔膜，呈薄片状，多弯曲，破碎而不整齐，其表面为淡棕色至棕褐色，或棕黑色，略有光泽，质脆、易折断。
气微，味微苦、涩，性平，归脾、肾经，主要用于治疗遗精滑泻、尿频遗尿、崩漏、带下、泄泻和痢疾等病症[1]。
分心木也是新疆维吾尔族传统药物之一，常用于治疗肾虚遗精，疗效显著[2][3]。
虽然分心木收涩作用较好，但使用并不广泛，因而现在对其有效成分及药理作用研究也不够充分。
本文对分心木的化学成分、质量研究及药理作用研究进行综述，以期对分心木的进一步研究提供指导。
2 现代研究2.1 化学成分 对分心木的化学成分研究是从近几年才刚刚开始。
毕肯•阿不得克里木等采用传统化学反应方法对分心木的化学成分进行了定性分析[4]，结果表明，分心木中含有挥发油、油脂、生物碱、黄酮、皂苷、鞣质、有机酸或酚性成分、糖类、氨基酸、多肽或蛋白质等多种成分，未检出内酯或香豆素、强心苷类、甾体或三萜类等成分。
分心木的研究进展
分心木的研究进展景援朝;赵焕新;白虹【摘要】分心木是胡桃科植物胡桃果核的干燥木质隔膜,具有固肾涩精的功效.本文论述了近年来分心木在化学成分、含量测定及药理活性方面的研究进展,为今后该药材的开发利用提供依据.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2014(033)003【总页数】3页(P167-169)【关键词】分心木;化学成分;含量测定;药理活性【作者】景援朝;赵焕新;白虹【作者单位】山东省医学科学院药物研究所,山东济南250062;济南大学,山东省医学科学院医学与生命科学学院,山东济南250200;山东省医学科学院药物研究所,山东济南250062;山东省医学科学院药物研究所,山东济南250062【正文语种】中文【中图分类】R284分心木（Diaphragma juglandis Fructus），也称作胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔、核桃隔膜、核桃栅，是胡桃科植物胡桃果核的干燥木质隔膜，体轻，质脆，易折断［1～3］。
分心木味苦、涩，性平，入脾、肾经，具有固肾涩精功效，临床上主要用于治疗肾虚遗精、遗尿、淋病、血尿、带下、泻痢以及失眠多梦等多种疾病［4～7］。
近年来，人们从分心木中分离得到黄酮类、醌类、酚酸类等化合物，并对其中的黄酮、鞣质及糖类等成分进行了含量测定。
药理活性研究表明分心木除具有补肾作用外，还具有抑菌、抗氧化等作用。
本文结合相关文献报道，对分心木在化学成分、含量测定及药理活性等方面的研究进行了总结，为今后该植物的深入开发和利用提供参考依据。
王艳梅、毕肯·阿不得克里木、韩艳春等［8～10］曾采用化学反应法对分心木的化学成分进行过定性分析，发现分心木中含有黄酮，有机酸、生物碱、甾类、皂苷等多种成分。
但是，对分心木单体化学成分的研究报道较少，目前，已分离鉴定的单体化合物包括黄酮类、醌类、酚酸类及其他类化合物。
1.1 黄酮类杨明珠等［11］使用硅胶柱色谱、Sephadex LH－20柱色谱从分心木中分离得到3个黄酮类化合物，经光谱学方法鉴定分别为二氢槲皮素（1）、儿茶素（2）和柚皮素（3）。
分心木化学成分及功效调查
分心木化学成分及功效调查分心木（Diaphragma juglandis Fructus）拉丁文名Juglans regia，是胡桃科植物胡桃果核的干燥木质隔膜，始载于《山西中药志》，具有利尿清热，健脾固肾，涩精等功效。
分心木是新疆维吾尔族传统药物之一，加水煮沸后代茶饮治疗肾虚遗精疗效显著。
目前关于分心木单体化学成分分离、结构鉴定及对分心木的药理活性与化学成分研究报道十分有限。
报道中采用传统化学反应方法对分心木的化学成分进行了定性分析，初步推断其中含有氨基酸、蛋白质、糖类、酚类、有机酸、黄酮、生物碱、强心苷、挥发油、甾类、皂苷、蒽醌类、内酯、香豆素等多种成分。
利用色谱方法进行化学成分分离与纯化,分离了17个化合物；通过现代波谱分析及化学方法,分别确定为催吐萝芙木醇、二氢槲皮素、p-谷甾醇、大黄素、齐墩果酸、4,8一二羟基-1-四氢萘醌、2-乙氧基胡桃醌、正十七烷、3-羟基-1-(4-羟基取代苯基-l-丙酮、硬脂酸-l-甘油单酯、柚皮素、没食子酸、儿茶素、没食子酸乙酯、核桃素D、对羟基苯甲酸、香草酸。
微量元素分析结果显示分心木中Ca元素含量较壳与仁中高出许多。
主要单体成分及功效详见下表：表1 单体成分及其生物活性主要功效1、抗炎抗菌活性对分心木提取物的抑菌作用进行了初步研究，通过纸片扩散法和常量肉汤稀释法测定分心木的抗菌活性。
结果表明：分心木各部位提取物具有不同程度的抗菌活性,而通过乙酸乙酯提取后活性最强，其乙酸乙酯提取物的抑菌作用明显强于其它各个提取物，说明乙酸乙酯部位是抗菌的有效部位; 由该部位分离得到的单体成分没食子酸乙酯也显示出很好的抗菌活性与较大抗菌谱，间接证实分心木被用于治疗淋病、血尿带下、泻痢、肾炎等病症具有一定的科学依据。
2、抗氧化活性以ＶＣ作为阳性对照，核桃分心木中总皂苷和总黄酮对超氧阴离子（－Ｏ２）、羟基自由基（－ＯＨ）、ＤＰＰＨ等的清除作用。
并对总皂苷和总黄酮的还原能力进行了测定。
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1． 1 仪器与材料 质谱由 VG Auto Spec-3000 质谱仪测定，电离条
件为 70 eV； 1 H 与13 C NMR 由 Bruker AM-400 核磁共 振波谱仪测定，四甲基硅烷（ TMS） 为内标。柱层析 硅胶材料、薄层层析板硅胶 G 和 GF254 均为青岛海洋 化工厂生产； 葡聚糖凝胶为 Sephadex LH-20 （ Amersham Biosciences，Sweden） ； 氯仿、石油醚、乙酸乙酯、 丙酮、乙醇均为工业纯试剂，正丁醇、氯化钠（ 天津 市风船化学试剂科技有限公司） 均为分析纯试剂； 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（ DPPH，Aldrich Chem Co， USA） ，营养琼脂（ 北京奥博星生物技术有限责任公 司） ，液体沙氏培养基（ 北京奥博星生物技术有限责 任公司） ，琼脂粉（ 天津市大茂化学试剂厂） ，0． 5 麦 氏比浊标准管，滤纸、接种环、微量加样器等。核桃 分心木（ Diaphragma juglandis Fructus） 采于云南省大 理州漾濞县，由大理学院药学院生药学教研室周浓 副教授鉴定。标本（ DLYX-JIANG-2009-10-01） 存放 于大理学院药学院姜北教授研究组。菌种： 所有菌 种均由大理学院基础医学院微生物与免疫实验室提
酸乙酯部位分离鉴定了 11 个化合物，分别为大黄素（ 1） 、齐墩果酸（ 2） 、Isosclerone（ 3） 、正十七烷（ 4） 、3-羟基-1-
（ 4-羟基取代苯基） -1-丙酮（ 5） 、硬脂酸甘油单酯（ 6） 、没食子酸（ 7） 、没食子酸乙酯（ 8） 、核桃素 D（ 9） 、对羟基苯
甲酸（ 10） 、香草酸（ 11） 。运用 DPPH（ 1，1-二苯基苦基苯肼） 法、纸片扩散法、肉汤稀释法对分心木粗提物及各相
收稿日期： 2012-03-12
接受日期： 2012-05-14
基金项目： 云南省中青年学术技术带头人后备人才项目（ 2008PY005） ；
教育部留学回国人员科研启动基金［2009］1001
* 通讯作者 Tel： 86-872-2257316； E-mail： northjiang@ yahoo． com
YANG Ming-zhu，TIAN Xin-yan，XIAO Chao-jiang，HAN Bing-yang，JIANG Bei*
College of Pharmacy，Dali University，Dali 671000，China
Abstract： Based on chromatographic separation and modern spectroscopy analysis techniques，eleven compounds were separated and purified from the ethyl acetate fraction of the 75% ethanol extract of Diaphragma juglandis Fructus． The structures of the eleven compounds were elucidated as emodin （ 1） ，oleanolic acid （ 2） ，isosclerone （ 3） ，heptadecane （ 4） ，3-hydroxy-1-（ 4-hydroxyphenyl） -1-propanone （ 5 ） ，glycerol-1-octadecanoate （ 6 ） ，gallic acid （ 7 ） ，ethyl gallate （ 8） ，juglanin D （ 9） ，p-hydroxybenzoic acid （ 10） and vanillic acid （ 11） ． The antibacterial activities of the fractions extracted from Diaphragma juglandis Fructus were evaluated by disk diffusion method and routine broth dilution method． In addition，the antioxidant activities of the crude ethanol extract of Diaphragma juglandis，as well as some sub-fractions of the crude extract，were tested by using DPPH （ 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ） method． As a result，most samples showed strong antibacterial and antioxidant activities． The antioxidant activity of ethyl acetate fraction was even stronger than the positive control，vitamin C． The study presented in this paper indicated that Diaphragma juglandis Fructus contains various bioactive constituents and possesses potential values for medical purposes and application developments． Key words： Diaphragma juglandis Fructus； chemical constituents； antioxidant activity； antibacterial activity
1708
天然产物研究与开发
Vol. 24
据文献报道，付文焕等曾从鞣质定性分析入手 研究建立分心木药材质量标准的方法［3-4］； 王艳梅、 毕肯·阿不得克里木等采用传统化学反应方法对分 心木的化学成分进行了定性分析，初步推断其中含 有氨基 酸、蛋 白 质、糖 类、酚 类、有 机 酸、黄 酮、生 物 碱、强心苷、挥发油、甾类、皂苷、蒽醌类、内酯、香豆 素、油脂等多种成分［5，6］； 然而，有关分心木中单体 化学成分分离、结构鉴定至今未见报道。本项目对 分心木 75% 乙醇提取物进行了系统的化学成分研 究，由乙酸乙酯部位分离鉴定了 11 个化合物，本文 报道这些化合物的结构鉴定及分心木提取物的抗氧 化、抗菌活性研究结果。
关样品的抗氧化与抗菌活性进行了初步研究。结果显示，分心木提取物及各相关样品普遍具有较好的抗氧化
与抗菌活性。分心木具有多种活性物质，具有一定的药用与开发价值。
关键词： 分心木； 化学成分； 抗氧化活性； 抗菌活性
中图分类号： R284. 2
文献标识码： A
Chemical Constituents and Bioactivity Studies of Diaphragma juglandis Fructus
分心木（ Diaphragma juglandis Fructus） 为胡桃科 植物胡桃（ Juglans regia L． ） 果核内的木质隔膜，又 名胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔、核桃隔膜。中医认为，本 品性味 苦、涩、平，入 脾、肾 经，有 健 脾 固 肾、利 尿 清 热，治淋病尿血、暑热泻痢等功效，适用于治疗遗溺、 崩中下血、耳聋、治遗精、尿频、带下等。用核桃分心 木泡 水 喝，具 有 补 肾 涩 精 的 功 能，对 多 汗、尿 频、遗 尿、肾虚遗精、口腔溃疡、牙龈出血、小便多等也有功 效，且具有一定的抗菌活性［1］。
供，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、铜绿 假单胞菌、痢疾杆菌、H901 伤寒杆菌、白色念珠菌。 1． 2 提取与分离
核桃分心木 10． 0 kg，粉碎后用 75% 乙醇冷浸 提取，浓缩后得到浸膏 1． 1 kg，用水分散后，依次用 乙酸乙酯、正丁醇萃取，得相应提取物。取 200 g 乙 酸乙酯萃取浸膏，进行硅胶柱色谱分离，用氯仿-丙 酮（ 1∶ 0-0∶ 1） 梯度洗脱，得 Fr1 ～ Fr7 七个部分。Fr2 经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯洗脱后得化合物 1、 2 和 4，相应部位再经 Sephadex LH-20 纯化后得 3， 经 RP-18 反相层析得 6。Fr3 经硅胶柱层析，氯仿丙酮、石油醚-丙酮洗脱后，再经 Sephadex LH-20 纯 化得 10； 相应部位经 RP-18 反相层析得 5； 用石油 醚-丙酮系 统 硅 胶 柱 层 析 粗 分，再 经 Sephadex LH20、石油醚-乙酸乙酯硅胶柱层析、重结晶后得 9； 经 氯仿-甲醇系统硅胶柱层析得 8 和 11。Fr4 经硅胶 柱层析氯仿-丙酮、石油醚-丙酮洗脱，再用 Sephadex LH-20 纯化，经重结晶得 7。 1． 3 抗氧化活性测试
Vol. 24
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
杨明珠等： 核桃分心木化学成分与生物活性研究
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贴于平板表面，37 ℃ 培养 18 h，根据药敏纸片周围 显出的抑菌圈大小来判断抗菌作用的强弱，通过此 法初步筛选敏感细菌谱。对照组为生理盐水。 1． 6 肉汤稀释法抗菌活性测试［7］
核桃分心木 75% 乙醇粗提物（ A） ，经 D100 大 孔树脂柱梯度洗脱，得水部分浸膏（ B） 、50% 乙醇部 分浸膏（ C） 、95% 乙醇部分浸膏（ D） ； 50% 乙醇部分 浸膏再用水分散后，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取， 得乙酸乙酯提取物 （ E） 、正丁醇提取物 （ F） 和萃取 剩下的水相 （ G） 。精确称量样品提取物 10 mg 左 右，溶解在 2 mL DMSO 中，之后用 DMSO 按 1 ∶ 3、1 ∶ 1、1∶ 1、1∶ 1 的比例稀释。以 DMSO、维生素 C 分别 作为对照，在 96 孔板上用 50 μL 供试品与 150 μL DPPH（ 400 mmol·L-1 ） 液混合，放入 37 ℃ 的恒温培 养箱中 30 分钟，之后用酶标仪于 515 nm 处测定 OD 值，最后计算出供试品的 IC50 数值。 1． 4 抗菌活性供试样品