菠菜色素的提取与分离
实验2-菠菜中色素的提取和分离
实验2■菠菜中色素的提取和分离实验2菠菜中色素的提取和分离扬州大学化学化工学院张磊091301223一.实验目的：1 •了解分离与提纯过程在科学研究和生产生活中的应用；2.掌握分离与提纯实验设计的一般思路和方法;3.掌握菠菜中色素提取的原理，步骤和影响因素；二•实验原理：1.叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂中，所以用石油醚、乙醇等能提取色素。
2.本实验选用的是吸附色谱，氧化铝作为吸附剂（极性），色素提取液为吸附液，色素提取液中各成分极性大小为：叶绿素 b （黄绿色）＞叶绿素a （蓝绿色）＞叶黄素（黄色）＞3■类胡萝卜素（橙色）。
3.柱层析法的分离原理是根据物质在氧化铝上的吸附力不同而使各组分分离。
一般情况下极性较大的物质易被吸附，极性较弱的物质不易被吸附，所以由上到下为：叶绿素 b （黄绿色），叶绿素a （蓝绿色），叶黄素（黄色），伕类胡萝卜素（橙色）。
三、实验材料：仪器：研钵、分液漏斗、层析柱（20 x 10 cm），表面皿，普通漏斗，量筒试剂：石油醚、乙醇（95%）、菠菜叶、丙酮（化学纯）、中性氧化铝，无水硫酸钠四、实验步骤与内容【探究：菠菜（或青菜）的I I处理方式】（1）小组讨论处理菠菜的各种方式，然后按照“手撕”，“划几刀，再手撕”，“剪成丁状”，“剪碎后稍加研磨”，“研磨成浆”共五种方式分为五组进行实验，最后确定控制菠菜叶取25克，加入有机溶剂15mL （9mL石油醚+6mL乙醚），浸泡时间取25min为统一条件；（2）开始分组实验，各自处理好各组的菠菜，放置在烧杯中，加入15mL有机溶剂并盖上表面皿浸泡25min。
（3）在浸泡的时间内开始装柱，首先在滴管下口装上橡皮管并夹上弹簧夹（夹紧），在管的出口处放入一小撮棉花，在棉花上放置已剪好的和滴管内径一般大小的圆形滤纸，然后用普通漏斗往里面装入中性氧化铝，最后在氧化铝上再加上和滴管内径一般大小的圆形滤纸，夹在铁架台上备用。
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇实验报告一：菠菜中提取叶绿素的方法比较1.引言叶绿素是一种重要的植物色素，它在光合作用中承担着捕获光能和转化化学能的重要角色。
菠菜是叶绿素含量较高的植物之一，因此本实验旨在比较不同方法提取菠菜中的叶绿素，探索最有效的提取方式。
2.材料与方法2.1 材料：- 新鲜菠菜叶片- 无水乙醚- 丙酮- 高速离心机- 比色皿2.2 方法：- 方法一：无水乙醚提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中，加入适量的无水乙醚，用摇床震动片刻，使叶绿素溶解于乙醚中，然后离心10分钟收集上层液体。
- 方法二：丙酮提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中，加入适量的丙酮，用摇床震动片刻，使叶绿素溶解于丙酮中，然后离心10分钟收集上层液体。
- 方法三：乙醇提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中，加入适量的乙醇，用摇床震动片刻，使叶绿素溶解于乙醇中，然后离心10分钟收集上层液体。
3.结果在三种提取方法中，通过观察可以发现，方法一和方法二提取的叶绿素溶液呈现绿色，而方法三提取的叶绿素溶液呈现黄绿色。
利用分光光度计测定三个试管中叶绿素溶液的吸光度，发现方法一和方法二提取的叶绿素吸光度较高，而方法三的吸光度较低。
4.讨论方法一使用无水乙醚作为提取溶剂，乙醚能有效溶解叶绿素，并且在离心过程中上层液体的分离效果较好。
方法二使用丙酮作为提取溶剂，丙酮也能有效溶解叶绿素，并且丙酮相对于乙醚来说更易于购买。
方法三使用乙醇作为提取溶剂，乙醇对叶绿素的溶解能力较差，导致提取的叶绿素溶液吸光度较低。
5.结论通过对菠菜中提取叶绿素的实验比较，我们发现使用无水乙醚和丙酮作为提取溶剂的方法能够较好地提取菠菜中的叶绿素，并且吸光度较高。
因此，在菠菜中提取叶绿素的实验中，建议使用无水乙醚或丙酮作为提取溶剂。
实验报告二：叶绿素在光合作用中的作用研究1.引言叶绿素是植物体内最重要的色素之一，它在光合作用中起着关键作用。
本实验旨在研究叶绿素在光合作用中的功能和重要性。
从菠菜中提取叶绿素实验报告(3篇)
从菠菜中提取叶绿素实验报告（3篇）从菠菜中提取叶绿素实验报告（精选3篇）从菠菜中提取叶绿素实验报告篇1【实验目的】1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。
2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
【实验原理】叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素a{C55H77O5N4Mg}和叶绿素b{ C55H70O6N4Mg }；胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。
当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。
【实验仪器】研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。
【实验步骤】1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。
2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。
按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。
3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。
4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。
5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。
6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。
【实验记录】虽然分层现象不是非常明显，但是还是可以看得见分层现象。
【结果与讨论】1、做这个实验的时候，我觉得不应该用纱布挤干，因为个人感觉很多色素都被纱布吸走了，导致后来的实验现象没有很明显，经过对比，没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。
2、有机溶剂往往比较容易挥发，所以加入后要盖上表面皿。
3、此实验浸泡15分钟以后现象就可以很明显，因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的，15分钟足矣。
叶绿体色素的提取和分离实验步骤
叶绿体色素的提取和分离实验步骤一、实验前的准备首先呢，咱们得把材料都准备好。
新鲜的绿叶是必须的啦，像菠菜叶就很不错哦。
还有要准备好研钵、漏斗、滤纸、层析液、无水乙醇这些东西。
这一步看起来很平常，但可千万别小瞧它，要是少了啥东西，实验过程中再去找就麻烦啦！我就有过一次，忘记准备滤纸了，当时那个手忙脚乱所以大家一定要仔细检查材料是否齐全哦！二、叶绿体色素的提取1. 取几片新鲜的绿叶，把它们剪碎放在研钵里。
这里呢，叶子不用太多，适量就好，大概四五片大菠菜叶就差不多了。
然后加入少许的二氧化硅和碳酸钙。
二氧化硅有助于研磨得更充分，碳酸钙呢，可以防止叶绿素被破坏。
这一步很关键哦！我每次都会多检查一遍有没有加这两样东西，真的很重要呢！2. 接着倒入适量的无水乙醇。
无水乙醇的量啊，大概能把叶子都浸湿就可以了。
然后就开始研磨啦。
研磨的时候要用力均匀，慢慢磨，别太着急。
这一步虽然不难，但也需要点耐心。
我通常会在这个环节花多一些时间，确保研磨得足够细。
你看，如果研磨不充分，可能就会影响后面色素的提取量呢，是不是？3. 研磨好之后，咱们就用漏斗和滤纸进行过滤，把研磨液过滤到一个小试管里。
这时候要注意，滤纸要折叠好放在漏斗里，不要有缝隙，不然过滤的时候就会漏得到处都是，那就糟糕了！三、叶绿体色素的分离1. 准备好一个滤纸，把它剪成一个长条形，并且一端要剪去两角。
为啥要剪去两角呢？嘿嘿，这是个小技巧，可以让色素在滤纸上跑得更整齐哦。
然后用铅笔在距离剪去两角那端大概一厘米的地方画一条细线，这条细线就是用来蘸取我们前面提取出来的色素滤液的。
这一步可不能画得太粗啦，不然色素带就会重叠在一起，那就分不清啦。
2. 用毛细吸管吸取少量的色素滤液，轻轻地沿着铅笔线涂抹。
注意哦，不要涂太多，一点点就好。
如果涂多了，色素就会扩散得乱七八糟的。
这一点真的很重要，我通常会再检查一次，真的，确认无误是关键。
3. 把这个滤纸条放进装有层析液的层析装置里。
菠菜叶中叶绿素的提取和分离
1 实验 菠菜叶中叶绿素的提取和分离一 实验目的1．掌握从菠菜叶中提取叶绿素的方法；．掌握从菠菜叶中提取叶绿素的方法；2．了解薄层层析的原理，掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法．了解薄层层析的原理，掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法二 实验原理1．叶绿素提取高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a (C 55H 72O 5N 4Mg)、叶绿素b(C 55H 70O 6N 4Mg)、β—胡萝卜素(C 40H 56)和叶黄素(C 40H 56O 2)等4种。
叶绿素a 和叶绿素b 为吡咯衍生物与金属镁的配合物，胡萝卜素是一种橙色天然色素，属于四萜类，为一长链共轭多烯，有α、β、γ三种异构体，其中，β异构体含量最多。
叶黄素为一种黄色色素，一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体中，与叶绿素同存在于植物体中，与叶绿素同存在于植物体中，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在乙醚中溶解度较小。
根据它们的化学特性，可将它们从植物叶片中提取出来，并通过萃取、沉淀和色谱方法将它们分离开来。
沉淀和色谱方法将它们分离开来。
RR=H ；叶黄素 R= OH2．薄层色谱 薄层层析是快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术，具有设备简单、操作方便而快速的特点。
它是将固定相支持物均匀地铺在玻片上制成薄层板，将样品溶液点加在起点处，置于层析容器中用合适的溶剂展开而达到分离的目的。
用此法分离时几乎不受温度的影响，可采用腐蚀性显色剂，可采用腐蚀性显色剂，而且可在高温下显色，而且可在高温下显色，而且可在高温下显色，特别适用于挥发性小或在较高温特别适用于挥发性小或在较高温度下易发生反应的物质，同时也常用来跟踪有机反应或监测有机反应完成的程度。
度下易发生反应的物质，同时也常用来跟踪有机反应或监测有机反应完成的程度。
薄层层析按分离机制不同可分为吸附层析、薄层层析按分离机制不同可分为吸附层析、分配层析、分配层析、离子交换层析等，离子交换层析等，最常用的为吸最常用的为吸附薄层层析，在此主要讨论。
菠菜色素的提取和分离
菠菜色素的提取和分离【摘要】：本实验用浸泡和抽滤法对菠菜色素进行了提取，介绍了薄层层析和柱层析的原理及通过薄层层析鉴定不同色素和通过柱层析进行叶绿素、胡萝卜素、叶黄素的分离。
【关键词】：菠菜色素；薄层层析；柱层析；石油醚；乙醇前言：菠菜叶中含有叶绿素、胡萝卜素和叶黄素等多种天然色素。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等，添加于胶姆糖中海可消除口臭。
胡萝卜素的三种异构体中β-异构体具有维生素A的生理活性，可代替维生素A使用，也可作为食品工业中的色素使用，最新研究报道，β-胡萝卜素还有防癌功能。
也黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。
由此可见，叶绿素等天然色素有着十分重要的作用，而绿色植物中色素的分离和提取也显得非常重要。
一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2、了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理，掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术；3、学习柱色谱和薄层色谱分离操作，掌握菠菜色素的提取和分离操作技术及化合物R f值的测定方法，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理1、绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。
叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 -胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
在薄层层析时，上述化合物的展开速度不同；在柱层析时，流出速度有差异，可被极性不同的溶剂洗脱。
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇
【实验目的】1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。
2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
【实验原理】叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素a{C55H77O5N4Mg}和叶绿素b{ C55H70O6N4Mg }；胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。
当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。
【实验仪器】研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。
【实验步骤】1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。
2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。
按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。
3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。
4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。
5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。
6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。
【实验记录】虽然分层现象不是非常明显，但是还是可以看得见分层现象。
【结果与讨论】1、做这个实验的时候，我觉得不应该用纱布挤干，因为个人感觉很多色素都被纱布吸走了，导致后来的实验现象没有很明显，经过对比，没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。
2、有机溶剂往往比较容易挥发，所以加入后要盖上表面皿。
3、此实验浸泡15分钟以后现象就可以很明显，因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的，15分钟足矣。
4、若最后颜色没有明显的分层，可以加入几滴丙酮帮助分层。
菠菜色素的提取及分离
菠菜色素的提取和色素分离姓名：学号：指导教师：成绩：摘要：利用石油醚，甲醇为萃取剂萃取叶片中的叶绿素，在薄层层析中时别离在两种不同的展开剂中展开比较展开剂的极性，在柱层析当选用适当的洗脱剂进行层析，当第一个有色成份即将滴出时，取一锥形瓶搜集的橙黄色溶液即胡萝卜素.关键词：菠菜色素、萃取、薄层色谱分析法、柱色谱正文：1.前言菠菜叶中含有叶绿素、胡萝卜素、和叶黄素等多种天然色素. 叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂, 也是食用的绿色色素, 可用于糕点、饮料水等中, 添加于胶姆糖中还可排除口臭. 胡萝卜素的三种异构体中B-异构体具有维生素A 的生理活性, 可代替维生素A 利用, 也可作为食物工业中的色素利用, 最新研究报导, B-胡萝卜素还有防癌功能. 叶黄素是胡萝卜素的羟基衍生物, 在光合作用中能起搜集光能的作用. 由此可见, 叶绿素等天然色素有普遍的用途, 关于色素的提取与分离就显得很重要了。
叶绿体色素提取与分离实验比较复杂, 但又超级重要。
实验用层析法来进行, 依照叶绿体色素各成份在层析液中分派系数的不同, 将不同的叶绿素一一分开, 但在实验中, 常因实验材料中色素含量低提取制备较难, 层析分离后色带清楚度差, 乃至色带种类不全等诸多因素, 最后阻碍了实验结果。
其中叶绿体色素的提取制备、过滤与点样、分离与层析是取得良好的实验结果的关键问题,绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
2.实验部份通过绿色植物菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方式；通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离的原理。
2.2实验原理色谱法是分离色谱法是分离色谱法是分离色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方式。
其分离原理是利用混合物中各个其分离原理是利用混合物中各个成份的物理化学性质的不同，被选择某一个条件使各个成份流过支持剂或吸附剂时，各成份可由于其物理性质的不同而取得分离。
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菠菜色素的提取和色素分离姓名：学号：指导老师：成绩：摘要：利用石油醚，甲醇为萃取剂萃取叶片中的叶绿素，在薄层层析中时分别在两种不同的展开剂中展开比较展开剂的极性，在柱层析中选用适当的洗脱剂进行层析，当第一个有色成分即将滴出时，取一锥形瓶收集的橙黄色溶液即胡萝卜素.关键词：菠菜色素、萃取、薄层色谱分析法、柱色谱正文：1.前言菠菜叶中含有叶绿素、胡萝卜素、和叶黄素等多种天然色素. 叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂, 也是食用的绿色色素, 可用于糕点、饮料水等中, 添加于胶姆糖中还可消除口臭. 胡萝卜素的三种异构体中B-异构体具有维生素A 的生理活性, 可代替维生素A 使用, 也可作为食品工业中的色素使用, 最新研究报道, B-胡萝卜素还有防癌功能. 叶黄素是胡萝卜素的羟基衍生物, 在光合作用中能起收集光能的作用. 由此可见, 叶绿素等天然色素有广泛的用途, 对于色素的提取与分离就显得很重要了。
叶绿体色素提取与分离实验比较复杂, 但又非常重要。
实验用层析法来进行, 根据叶绿体色素各成分在层析液中分配系数的不同, 将不同的叶绿素逐一分开, 但在实验中, 常因实验材料中色素含量低提取制备较难, 层析分离后色带清晰度差, 甚至色带种类不全等诸多因素, 最后影响了实验结果。
其中叶绿体色素的提取制备、过滤与点样、分离与层析是取得良好的实验结果的关键问题,绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
2.实验部分2.1实验目的通过绿色植物菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离的原理。
2.2实验原理色谱法是分离色谱法是分离色谱法是分离色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法。
其分离原理是利用混合物中各个其分离原理是利用混合物中各个成分的物理化学性质的差别，当选择某一个条件使各个成分流过支持剂或吸附剂时，各成分可由于其物理性质的不同而得到分离。
与经典的分离提纯手段不同，色谱法具有微量、快速、简便和高效等优点。
按其操作不同，色谱可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高压液相色谱等。
1. 柱色谱原理液体样品从柱顶加入，流经吸附柱时，即被吸附在柱中固定相（吸附剂）的上端，然后从柱顶加入流动相（洗脱剂）淋洗，由于固定相对各组分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，吸附能力弱的组分随洗脱剂首先流出，吸附能力强的组分后流出，分段接收，以此达到分离、提纯的目的。
2. 薄层色谱原理由于混合物中的各个组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速率，最终得以在固定相薄层上分离。
其应用主要有：跟踪反应进程；鉴定少量有机混合物的组成；分离；寻找柱色谱的最佳分离条件等。
绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即a-,β-和γ-胡萝卜素，其中β-异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β-体受酶催化氧化即形成维生素A。
目前β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
提取制备中加入适量CaCO3( 碳酸钙)在植物叶片的液泡中含有机酸, 研磨提取叶绿体色素时, 加入适量的CaCO3 粉末, 可以防止叶绿体色素被破坏, 从而保持叶片的生理活性。
我们从对比实验中发现, CaCO3 对提取液影响较大, 不加Ca-CO3 的提取液放置一段时间以后容易变黄, 而加Ca-CO3 的提取液则无明显变化, 这说明不加CaCO3 的提取液容易受到外界破坏。
在加CaCO3 时, 用量应掌握在每克绿叶用0. 2~ 0. 4 克CaCO 3 粉末为宜。
2.3试剂与仪器试剂：95％乙醇, 丙酮,硅胶G ，中性氧化铝，甲醇，石油醚（60-90℃），丙酮，乙酸乙酯。
仪器：电子天平、研钵、布氏漏斗 、圆底烧瓶、 电炉、 滴管、显微载玻片、N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3COCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg H 3CCH 3RCH 3H 3CH 3CCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3β-胡萝卜素（R = H ） 叶黄素（R = OH ）叶绿素a （R = CH 3） 叶绿素b （R = CHO ）广口瓶、滤纸、少量脱脂棉、层析柱材料：新鲜菠菜叶片2.4 实验装置2.5实验方法与步骤实验流程图：实验方法：Ⅰ薄层层析法Ⅱ柱层析实验步骤：<1>菠菜色素的提取（提取液可为石油醚-甲醇、丙酮、CCl4、无水乙醇）取20g 新鲜菠菜叶于研钵中拌匀研磨5 分钟，残渣用20mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液进行提取，共提取两次。
把浸取液合并过滤，滤液转移到分液漏斗中，加入等体积的水洗涤后弃去下层的水-乙醇层、石油醚层再用等体积的水洗涤两次，以除去乙醇和其它水溶性物质。
石油醚层用无水Na2SO4进行干燥、浓缩为2 mL。
取一半做柱层析分离，其余留作薄层层析分析。
抽滤装置Ⅰ柱色谱分离（常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭等）（1）色谱柱的装填将10g中性氧化铝与10mml石油醚将拌成糊状，冰凝将其慢慢加入预先加了一定石油醚的色谱柱中，同时打开活塞，让石油醚流入锥形瓶中（以稳定速度装柱，不时敲打色谱柱，是色谱柱装的均匀）。
在装好的柱子上放0.5cm厚的石英砂或一张滤纸，并不时用石油醚洗脱，以使色谱柱流实。
然后放掉过剩的石油醚，直至液面刚刚达到石英砂或滤纸的顶部，关闭活塞。
（2）洗脱将得到的色素滤液用滴管小心夹到色谱柱顶，加完后，打开活塞，让液面下降到柱面以上1mm左右，关闭活塞，加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降，经几次反复，使色素全部进入柱体。
待色素全部进入柱体后，在柱顶小心加约1.5cm高度洗脱剂石油醚-丙酮溶液9:1（体积比）。
打开活塞，让洗脱剂逐滴放出，层析即开始进行，用锥形瓶收集。
（3）分离当第一个有色成分即将滴出时，取另一锥形瓶收集，得橙黄色溶液，它就是胡萝卜素。
用石油醚-丙酮7:3（体积比）作洗脱剂，分出第二个黄色带，它是叶黄素。
再用丁醇-乙醇-水3:1:1（体积比）洗脱叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色）。
（溶剂的洗脱能力按递增次序排列如下：己烷（石油醚）、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水。
）表1 不同洗脱剂对叶黄素的洗脱效果比较Ⅱ薄层色谱的操作方法（1）点样将样品用低沸点的溶剂配成1-5％的溶液，用内径小于1 mm的毛细管点样。
点样前，先用铅笔在薄层板上距一端1 cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径不超过2 mm；如果需要重复点样，则待前次点样的溶剂挥发后，方可重复点样，以防止样点过大，造成拖尾、扩散等现象，影响分离效果。
若在同一板上点两个样，样点之间距离在1-1.5 cm为宜。
待样点干燥后，方可进行展开。
（2）展开和展开剂薄层展开要在密闭的器皿中进行，加入展开剂高度为0.5 cm。
把带有样点的板（样点一端向下）放在展开器中，并与器皿成一定的角度。
盖上盖子，当展开剂上升到离板的顶部约1 cm处时取出，并立即标出展开剂的前沿位置，待展开剂干燥后，观察斑点的位置。
（3）显色若化合物不带色，可用碘薰或喷显色剂后观察，若化合物有荧光，可在紫外灯下观察斑点的位置。
2.6操作要点及注意事项（1）薄层层析时，薄层板的制备要厚薄均匀，表面平整光洁。
（2）点样与展开应按要求进行，点样不能戳破薄层板面。
展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。
否则，无法确定展开剂上升高度。
即无法求得RF值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
2.7物理常量3.实验记录参考文献：[1] 作者：李好样、冯轶雪题目：菠菜色素的提取与分离杂志：太原师范学院学报（自然科学版）2004年9月第三卷第3版（64～66页）[2] 作者；欧阳菲题目：关于5叶绿体色素提取与分离的难点分析及其改进方法杂志：伊利教育学院学报 2001年6月第14卷第2期（39～95页）[3] 罗一鸣、唐瑞仁《有机化学实验指导》（中南大学出版社）195～197页[4] 王兴涌、尹文萱、高宏峰《有机化学实验》（科学出版社）183～185页[5] 王福来《有机化学实验》（武汉大学出版社）111～113页。