野菊花天然活性成分蒙花苷的提取
野菊花的生物活性成分及药理作用研究
*△通讯作者:白现广(1983-),男,河南濮阳人,讲师,硕士研究生,主要从事天然药物化学及抗肿瘤药物开发研究。
Email:***************基金项目:平顶山学院青年科研基金项目(PXYQNJJ2017006);河南省科技厅科技攻关项目(192102310087)。
野菊花的生物活性成分及药理作用研究王瑞雅,王惠平,赵薇,白现广△(平顶山学院医学院,河南平顶山467000)摘要:野菊花为菊科植物野菊的干燥头状花序,提取物中含有黄酮类、挥发油类、多糖、有机酸及微量元素等生物活性成分,具有抑菌、抗病毒、抗氧化、肝保护、降血压、降血脂及抗肿瘤等比较广泛的药理作用。
主要针对野菊花提取物的生物活性成分及药理作用进行归纳分析,为野菊花资源在药品、食品、饮品、保健品、化妆品等领域的进一步开发利用探索方向。
关键词:野菊花;化学成分;药理作用中图分类号:R284.2第36卷第14期2020年7月Vol.36No.14Jul.2020甘肃科技Gansu Science and Technology野菊花是菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥头状花序。
其性凉、辛,味苦,归肺经肝,能清热,疏风,并具有明目,解毒的功效,《神农本草经》中有“菊花味苦、平、主风、头晕、痛肿、目欲泪出、皮肤死肌、恶见湿脾、久服利气血、轻身耐老延年。
”野菊花为多年生草本植物,喜凉爽湿润气候,耐寒,在我国东北、华北、西北、西南、东南等地区分布广泛、资源丰富,但目前尚未对野菊花的生物活性成分、药理作用等方面进行深入系统的研究,野菊花在药品、食品、饮品、保健品、化妆品等领域的潜在价值亟待挖掘。
1生物活性成分野菊花的生物活性成分主要有黄酮类化合物、挥发油类、多糖、有机酸及多种微量元素。
1.1黄酮类化合物黄酮类化合物是野菊花发挥药理作用的最重要活性成分之一,可分为黄酮及其苷、黄酮醇及其苷及二氢黄酮类化合物。
谢占芳等[1]从野菊花提取物中分离得到78种黄酮类化合物,其中黄酮及其苷类化合物71个、黄酮醇及其苷类化合物5个、二氢黄酮类化合物2个。
反相高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量
ｉ ｆｍｅｈ ｎ ｌ ａｅ ｒ ｇｏ ｔａ ｏ —ｗ ｔｒ—ａ ｅｉ ｃｄｇａ ｉｌ ５ ： ４ ｎ ｃ ｔ ａ ｉ ｌｃａ（ ２ ｃ ６： ２） ｎ ｈ ｂ ｏｂ ｎ ｅｗ ｓｍｏ ｉ ｒｄ ａ ３ ｎ Ｒｅｕ ｔ ｈ ａｉｒｔ ｎ ａ ｄ ｔｅａ ｓｒ ａ ｃ ａ ｎｔ ｅ ｔ３ ４ ｍ． ｓ ｌｓＴ ｅｃ ｌ ａｉ ｏ ｂ ｏ
Ｋ ｅ ｏ ｄｓ： ｌｓＣ ｒｓｎｈ ｍｉＩｄｃ ； ｌ ａｉ Ｃ ｎｅ ｔ ｅｅｍｉａｉｎ； ＲＰ ＨＰ Ｃ ｙｗ ｒ Ｆ ｏ ｈｙａ ｔｅ ｎ ｉｉ ｉ ｒ ｎ ｎ； ｏ ｔｎ ｔｒ ｎ ｔ ｄ ｏ — Ｌ
野 菊花 为菊 科 植 物 野 菊 Ｃ ｒｓｎｈｍ ｍ ｉ ｉ ｍ Ｌ ｈｙａｔｅ ｕ ｄｃ ．的 干燥 头 水浴加热 回流 ３ ｉ， ｎ ｕ ０ｍｎ 如法操作 ， 循环 ５次 ， 分别获得样 ～样 ， 状花序 ， 性微寒 、 味苦辛 ， 归肝 、 心经 。功能清热解毒 ， 主治疔疮痈 密塞备用 。 上述实验重复 ４次 。得 ： 样 ～ 样 、 ……、 ．～ 样 共 样 ～， 肿， 目赤肿痛 ， 头痛眩晕 。野菊花主含黄酮类化合物 ， 以蒙花苷 并 ２ Ｏ份试样。各试样微孔滤膜 （ ． ５ｔ 过滤 ， ０ ４ ａ ｍ） 弃去初 滤液 ， 收集 的含量 最高 。在《 中国药典 》 ２ ０ （０ ５年版 ） 订起草 时， 修 笔者 续滤液照 “ ． 样 品测定 ” ２９ 项下方法测定蒙花苷峰的峰面积 。 建立了 Ｒ Ｐ—Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法测 定其 中蒙花 苷含 量的方 法 ， 取得 了满意 各实验 以第 ５份试样 （ 最后 一次取样 ） 的峰面积为 １０ ， ０ ％ 分 的效果。由于现 版药典 《 起草说 明》 未能公 开发行 ， 故而将 有关 别计算第 １至第 ４份试样 的峰面积百分数。见表 １ 。 研究结果报道如下 ， 以供参考 。 取 ４次实验均值 ， 以时 间为横坐标 ， 峰面积百分 数为纵 坐标 １ 器 材 作 曲线 图 。见 图 １ 。 Ｖ ＲＡ Ａ Ｉ Ｎ高效液相 色谱仪 ， ｒ Ｓａ ２ ５泵 ，ｒ Ｓａ ４ ０自动 Ｐｏ ｔ １ ｒ Ｐｏ ｔ １ ｒ 表 １ 回流 提 取 时 间 与 提 取率 进样系统 ，ｒ Ｓ ｒ １ Ｐｏ ｔ ０检测器 ， ａａ ｔ ． ａ３ Ｖ ｒ ｎＳａ ５ ５色谱 工作站 。Ｓ ｉ ｉ ｒ ｈ— ｍ ｄｕ高效 液相 色 谱仪 ，Ｃ １Ａ ａｚ Ｌ 一 Ｄ泵 ， Ｐ 一１Ａ检 测 器 ， 国 ０ ＳＤ ０ 美 Ａ ａＳａ 色谱 工作 站。Ｈａｂ ｎ一 ｌ ｎ ｔｒ ｎ ｏ ７Ｃ ８ 色谱柱 （ ． ｍ×２０ｍ ４ ６ｍ ５ ｍ， ５ ｍ） 江苏汉邦科技有限公 司 ； ｉ ｏｓＴ 色谱柱 （ ． ｍ ： Ｄａ ｎｉ Ｍ Ｃ ｍ ｌ ４ ６ｍ ｘ ５ ｉ， Ｉ 。Ｖ ＲＡ Ａ Ｙ ５ ｒｂ ２０ｍｎ ５ ｘ ｍ） Ａ Ｉ Ｎ Ｃ Ｒ ０ Ｐｏｅ紫外 分光 光度 计 ， Ｃ ｒ ｎｕ ａ Ｗｉ Ｖ色谱 工作 站。ＭＥ Ｆ Ｅ Ｇ １５ Ａ ０ ｙ Ｔ Ｌ ＲＡ ３ 、 Ｂ２４一Ｎ电子天 平 。Ｙ Ｂ—Ｚ真空恒温干燥箱 ： 天津药典标准仪器厂。 流动相用 甲醇 、 乙腈为 色谱 纯 ， 为注射用水 。试 药均为 分 水 析纯 。试液按《 中国药典｝ ０ ０年 版 Ｉ 附录方 法配制 ， ２０ 部 一般 溶 液按常规方法制备。 野菊花 对 照 药 材 （ ９ ５２ ０ ０ 、 花 苷 对 照 品 （ ５ ８— ０ ９ —００ ２） 蒙 １２ ２０ ０ ） 中 国药 品 生 物制 品检 定 所 。 ０ １１ ： 野菊花药材为全 国各地药检所 提供的商 品药材样 品及 中 国 药 品生物制 品检定所标本馆馆 藏标本 。
野菊花天然活性成分蒙花苷的提取
野菊花天然活性成分蒙花苷的提取摘要:选用基质固相萃取技术,采用正交优化设计试验,研究野菊花中天然活性成分蒙花苷提取的最佳工艺｡在四氟芯层析柱中加入硅胶氧化铝野菊花花序粉,用正己烷-乙酸乙酯-丙酮的溶液组合进行极性洗脱,并采用高效液相色谱法测定蒙花苷的含量｡结果表明,野菊花花序中蒙花苷的最佳工艺条件为萃取时间1.5 h,萃取温度为30℃,洗脱剂体积比为1∶2∶3｡关键词:野菊花花序;蒙花苷;正交试验;高效液相色谱法Extracting Linarin, a Natural Active Ingredient from Wild Chrysanthemum Abstract: Orthogonal design was used to optimize the technique of extracting linarin from wild chrysanthemum by matrix solid-phase extraction method. The operation process was adding Silica Gel-Alumina-Pollen into the PTFE core firstly, then polarity eluting with solution combination of hexane-ethyl acetate-acetone, and finally determining the linarin content by High Performance Liquid Chromatography. The results showed that the optimum condition of extracting linarin from chrysanthemum inflorescence was extracting 1.5 h at 30℃with an elution solution ratio of 1∶2∶3.Key words: inflorescences of chrysanthemum; linarin; orthogonal design; HPLC野菊花(Flos Chrysanthemi Indici)具有抗病原微生物､治疗心血管系统疾病､降压､降低血小板聚集的影响､抗炎､免疫､抗氧化等作用[1]｡此外还用于治疗肿瘤､高血压和高血脂等症,对感冒､流行性脑膜炎也有一定预防作用[2,3]｡蒙花苷是众多黄酮类化合物中活性较高的化合物之一,由刺槐素和一个苷元组成,化学结构式见图1｡蒙花苷又称刺槐苷､金合欢因､野菊花黄酮苷､刺槐素-7-O-β-D-芸香糖苷等,以两种异构体形式的化合物α体和β体｡蒙花苷及其衍生物在植物界分布广泛,存在于许多植物的花､叶､果实中,多以苷的形式存在｡其中以野菊花花序中含量最多,是野菊花中重要的药效成分[6,7]｡近年来国内外研究表明,蒙花苷具有非常广泛的生理和药理活性,对预防糖尿病和改善糖尿病有显著的作用,还具有抑制磷酸二酯酶､醛糖还原酶､金黄色葡萄球菌､乙型溶血链球菌､抗菌等作用[4,5],能保护肝脏,并对慢性气管炎有一定疗效[8]｡1材料与方法1.1材料1.1.1野菊花试验用野菊花干燥花序购于浙江中医院中药房｡将其放入研钵中研磨成粉状,装入烧杯并用保鲜膜封好,备用｡1.1.2试剂蒙花苷､正己烷､乙酸乙酯､丙酮､甲醇､冰醋酸､氧化铝､硅胶等｡1.1.3仪器YP202N电子天平,上海精密科学仪器有限公司;四氟芯层析柱,上海立亚太玻璃仪器制造有限公司杭州分公司;Waters AcQuity高效液相色谱仪,美国Waters公司;UV 2501 PC紫外-可见分光光度计,日本导津;烧杯,研钵,漏斗,玻璃棒,移液管,容量瓶,干燥器等｡1.2方法1.2.1蒙花苷的提取精密称取1.2 g野菊花花序粉､2.4 g硅胶和2.4 g氧化铝,加入20 mL去离子水,搅拌均匀后装入已固定在铁架台上的四氟芯层析柱中｡每间隔15 min分别加入正己烷､乙酸乙酯､丙酮进行从小到大的极性洗脱｡将洗脱液进行抽滤得到黄色滤液,用滤纸再次过滤,得到澄清的黄色滤液即为蒙花苷提取液,放置阴暗处备用｡1.2.2单因素试验精密称取1.2 g野菊花花序粉,在不同的萃取时间､萃取温度､洗脱剂体积比(V正己烷∶V乙酸乙酯∶V丙酮)下进行单因素试验｡结束后将洗脱液进行抽滤得到黄色滤液｡将黄色滤液用滤纸再次过滤,得到蒙花苷提取液,去离子水定容至50 mL｡测定蒙花苷在326 nm的吸光度,并计算出相应的蒙花苷的含量｡1.2.3正交优化试验准确称取1.2 g野菊花花序干粉末以不同的萃取时间､萃取温度､洗脱剂体积比为考察因素,根据单因素试验的结果,再选用L9(33)正交表进行正交试验,因素与水平设计见表1,测定蒙花苷含量｡1.2.4高效液相色谱仪的检测[9]色谱柱:Symmetry-C18柱(3.9 mm×150.0 mm,5 μm),流动相∶甲醇-水-冰醋酸(52∶46∶2);流速:1.0 mL/min,检测波长:326 nm;柱温:30℃,进样方式:手动进样;进样量:5 μL｡取蒙花苷标准品1.2 mg溶于甲醇,于50 mL容量瓶中定容,得蒙花苷标准品液｡从中取2 mL移至液相用小烧杯中,为标1｡再从中分别取2 mL于4只试管中,分别稀释成2､3､4､5倍,并移至小烧杯中,为标2､3､4､5｡取定容的提取液各2 mL于50 mL容量瓶中,用30%乙醇稀释至刻度,15 min后以空白标准液作对照,于326 nm处测定吸光度,计算提取液的蒙花苷含量｡2结果与分析2.1高效液相色谱仪的检测2.1.1检测波长的选择取蒙花苷标准品,用甲醇配成溶液进行200~400 nm的光谱扫描｡光谱图显示,其在207､267､326 nm附近均有较大吸收峰｡在326 nm峰面积最大,为减少其他成分对蒙花苷测定的干扰,特选择326 nm作为检测波长｡2.1.2线性关系的考察将标1､标2､标3分别取样5 μL,按1.2.4所述条件进行测定,结果表明,蒙花苷在进样量为0.048~2.130 μL的范围内与峰面积具有良好的线性关系｡以峰面积(y)为纵坐标,蒙花苷浓度(x)为横坐标,绘制标准曲线,得曲线的回归方程=1 980x-7.560,r=0.999 9｡2.1.3精密度试验精密吸取对照品溶液5 μL连续进样6次,蒙花苷峰面积CV为0.78%｡2.1.4重复性测定取样品粉末约2.4 mg,按上述供试品溶液的制备方法和测定条件,制备6份供试液,蒙花苷含量测定结果的CV为1.30%｡2.1.5稳定性试验分别制备对照品溶液和供试品溶液,室温下放置,分别于0､2､4､6､8､12 h进样测定,记录蒙花苷色谱峰峰面积,计算变异系数,结果表明,对照品溶液中蒙花苷色谱峰峰面积CV为0.48%,供试品溶液中蒙花苷色谱峰峰面积CV为0.81%,表明对照品和供试品溶液在12 h内稳定｡2.1.6回收率试验采用加样回收试验,取已知含量的野菊花粉末0.12 g,共6份,精密称定,按对照品加入量与所取供试品含量之比为1∶1的比例加入蒙花苷对照品,制备供试品溶液,分别测定,计算回收率｡结果表明,蒙花苷的平均回收率为97.4%,CV为2.42%｡2.1.7色谱分析通过对图2和图3的比较,以及对照品的光谱,可以看出保留时间约在1.89 min左右,可以断定这就是蒙花苷,即第3个吸收峰为蒙花苷的吸收峰｡2.2单因素试验2.2.1萃取时间对蒙花苷提取量的影响在常温下,在不同的萃取时间下提取蒙花苷,测定提取液中蒙花苷含量,结果见图4｡由图4可知,野菊花中蒙花苷提取量随萃取时间的延长而增大,但萃取1.5 h后,蒙花苷的含量开始降低,故萃取时间为1.5 h 时提取效果最好｡2.2.2萃取温度对蒙花苷提取量的影响在不同温度下,用洗脱试剂体积比1∶1∶1的洗脱试剂提取1.5 h后,测定提取液中蒙花苷含量,结果见图5｡由图5可知,野菊花中蒙花苷含量在提取温度为25 ℃时最高,故提取温度以25 ℃为宜｡2.2.3洗脱剂体积比对蒙花苷提取量的影响以不同洗脱剂体积比,在25 ℃下,提取1.5 h,测定提取液中蒙花苷含量,结果见图6｡由图6可知,在其他条件相同情况下,从经济角度考虑,以洗脱剂体积比1∶2∶3提取为宜｡2.3正交优化试验由表2可以看出,最佳提取工艺为A2B3C3,即萃取时间为1.5 h,萃取温度为30 ℃,洗脱剂体积比为1∶2∶3｡3结论利用新型的基质固相分散萃取技术提取野菊花干燥花序中天然活性成分蒙花苷,通过对样品提取条件进行不同因素及水平比较,以及运用正交试验设计进行多因素综合分析,优选出了萃取时间､萃取温度､洗脱剂体积比3个因素的最优试验方案,建立了实用､简单､方便､易行的基质固相分散萃取蒙花苷的流程｡野菊花花序中蒙花苷的最佳提取工艺条件为:萃取时间 1.5 h,萃取温度为30 ℃,溶液比1∶2∶3｡参考文献:[1] 王丹.药用植物野菊花的研究现状及发展前景[J].现代中药研究与实践,2007,21(4):59-62.[2] 刘国应.野菊花的药理研究及临床应用进展[J].山东中医杂志,1990,9(6):37-39.[3] 华海清.野菊花临床应用研究概况[J].湖南中医药导报,1994,1(10):36-37.。
999感冒灵浓缩过程蒙花苷热降解规律研究
999感冒灵浓缩过程蒙花苷热降解规律研究蒙花苷为999感冒灵颗粒处方中野菊花代表性黄酮类成分，是感冒灵颗粒剂重要的中药有效成分。
蒙花苷属于热敏性化合物，易受热降解，其热稳定性差是影响感冒灵质量控制的难题之一。
该研究以成分保留率为评价指标，考察了溶液浓缩温度、真空度和浓缩时间等因素的影响作用，探讨了浓缩过程蒙花苷受热降解的变化规律。
研究结果表明，蒙花苷的热降解变化符合一级反应特征，浓缩过程只要控制温度和时间，可有效地避免蒙花苷损失。
该研究成果对于感冒灵颗粒剂生产工艺有指导作用，中药水提液的浓缩温度宜控制在85 ℃以下，浓缩时间不超过93 h，以保证蒙花苷损失率不超过10%；如果浓缩温度在85 ℃以上，要控制同样的蒙花苷损失率，浓缩时间则不能超过5 h，以保证浓缩液中蒙花苷损失量小于10%。
标签：蒙花苷；浓缩过程；热稳定；感冒灵[Abstract]Ganmaoling granule，with annual sale of over one billion yuan，is the first brand of domestic cold medicine sales As the only traditonal Chinese medicine（TCM）quality control indicator of Ganmaoling granule，linarin is thermally unstable Its content will be changed significantly during the production process，which would then affect the quality of the finished product In this paper，the law of degradation of linarin was investigated The experimental results showed that degradation reaction of linarin belongs to the first reaction characteristics The effective methods to reduce the loss of linarin would be realized fortunately by strictly controlling the heating temperature or shortening the heating time[Key words]linarin；concentration process；thermal stability；Ganmaoling granulesdoi：10.4268/cjcmm20160803感冒灵是国内感冒药销量第一品牌，年销售额超10亿。
高效液相色谱法测定三花膏中蒙花苷含量
高效液相色谱法测定三花膏中蒙花苷含量邱慧;戴群芳;汪保林【摘要】目的：建立测定三花膏中蒙花苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。
方法以三花膏中野菊花药材中的主要活性成分蒙花苷为对照品，采用Phenomenex Luna C18反相色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5μm )，以甲醇( A )－含10 mmol/L H3PO4的水溶液( B，48：52)为流动相进行等度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为334 nm，柱温为35℃。
结果蒙花苷质量浓度在4.67~46.74 g/L范围内与峰面积线性关系良好（ r=0.9999，n=5），加样回收率为99.75%，RSD为1.80%（ n=6）。
结论该方法简便、准确，专属性强，适用于三花膏中蒙花苷的含量测定。
%Objective To develop an HPLC method for the content determination of linarin in Sanhua Ointments. Methods Linarin, which was the main active ingredient of Flos Chrysanthemi Indici in Sanhua Ointments, was used as the reference standard. The isolation was performed on a Phenomenex Luna C18 reversed phase column ( 250 mm × 4. 6 mm, 5 μm ) with the mobile phase consisting of methanol-water ( containing 10 mmol/L H3PO4 ) ( 48 :52 ) , isocratic elution;the flow rate was 1. 0 mL/min, the detection wavelength was 334 nm and the column temperature was set at 35 ℃. Results The linearity of linarin was good in the range of 4. 67-46. 74 g/L ( r=0. 999 9, n=5 ) , the average recovery rate was 99. 75% and RSD was 1. 80%( n=6). Conclusion This method is simple, accurate, and specific for the content determination of linarin in Sanhua Ointments.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2016(025)019【总页数】3页(P61-63)【关键词】高效液相色谱法;三花膏;蒙花苷;含量测定【作者】邱慧;戴群芳;汪保林【作者单位】江西省南昌市洪都中医院，江西南昌 330000;江西省南昌市食品药品检验所，江西南昌 330038;江西省南昌市食品药品检验所，江西南昌 330038【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0三花膏是南昌市洪都中医院自制制剂（批准文号为赣药制字Z20090089），由木芙蓉花、野菊花、金银花3味药组方。
生药野菊花药用成分作用及提取进展研究
生药野菊花药用成分作用及提取进展研究作者：童淼张楚楚侯学雯汪从雨高玉婷邓同乐来源：《科技资讯》2019年第19期摘 ;要：该文选取近几年来与生药野菊花相关的文献，重点论述野菊花总黄酮和挥发油的药理作用和提取工艺。
得出如下结论：野菊花的临床研究尚需加强，药理作用仍需发掘，有效成分提取工艺仍需优化，因此需要进一步加深研究，开发野菊花的应用也具有一定的前景。
关键词：野菊花 ;药用成分 ;药理功效 ;提取工艺中图分类号：R285.5 ; 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2019）07（a）-0198-031 ;生药野菊花简介野菊花是菊科植物野菊（ Chrysanthemum indicum L.）的干燥头状花序。
性凉，味苦、辛，归肺肝二经，具有疏散风热、消肿解毒的功效。
能治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、头痛眩晕等病症。
《神农本草经》称“菊花味苦、平、主风、头晕、肿痛、目欲泪出、皮肤死肌、恶见湿脾、久服利血气、轻身耐老延年[1-2]”。
2 ;生药野菊花的主要化学活性成分以及药理作用2.1 黄酮类药理作用黄酮类化合物是主要活性成分，与野菊花的药理药效密切相关，其含量高低也是评价其药效的主要标志[3-4]。
野菊花中含有的黄酮类化合物主要有槲皮素、木樨草苷、木樨草素、芹菜素和金合欢素-7-O-β-D葡萄糖苷等[5-6]。
2.1.1 免疫抗炎作用对这方面的药理作用也有不少人研究，如郑璐璐等人采用HPLC分析法[7]，初步确定野菊花中抗炎作用的药效组分。
后续还进一步比较了野菊花的水煎液与五味消毒饮之间的抗炎活性，将野菊花水煎液设置低、中、高3种浓度，共同用于因二甲苯而导致耳廓肿胀小鼠上，发现二者都有消肿能力，水煎液浓度越高抗炎消肿能力越明显。
2.1.2 肝保护作用由生药野菊花中提取得到的野菊花总黄酮（TFC），能对诸多原因引起的肝脏损伤起到很好的修复作用。
能明显降低患有酒精性脂肪性肝大鼠血清中的AST、ALT、TC、TNF-α水平; 降低肝脏中的MDA含量，增强SOD活性，并且还能有效改善大鼠因酒精引起的肝细胞脂肪变性，对大鼠酒精性脂肪性肝具有较好的防治作用[8]。
正交试验优选野菊花膏粉的醇沉工艺
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2019年第6卷第16期2019Vol.6No.16168正交试验优选野菊花膏粉的醇沉工艺赵雪莹，李敏，王佳妮，段芙蓉，兰花，朱立伟（亚宝药业集团股份有限公司，山西芮城 044600）【摘要】目的 优选野菊花膏粉的醇沉工艺。
方法 以蒙花苷为指标成分，通过正交设计实验法优先野菊花膏粉的醇沉工艺。
结果 野菊花膏粉醇沉的最佳工艺为：加4倍量乙醇，醇沉温度40℃，静置时间6 h，加醇速度1 L/min。
结论 该工艺可保证较高的转移率，工艺稳定、可行。
【关键词】野菊花膏粉；蒙花苷；醇沉工艺；正交设计；反相高效液相色谱法【中图分类号】R94 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.16.168.02野菊花，系菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序[1]，具有降压、抑菌与抗病毒、抗肿瘤、抗炎和免疫、抗氧化等药理活性[2]，广泛应用中成药中。
野菊花中的蒙花苷具有抗衰老、抗疲劳、抑制血糖升高等作用，为野菊花的有效成分，但经水提醇沉后，部分有效成分损失，为了减少有效成分的损失，需对野菊花膏粉的醇沉工艺进行研究，本文选择蒙花苷转移率为考察指标[3-6]，采用正交试验设计优化野菊花膏粉的醇沉工艺。
1材料与仪器蒙花苷（批号111528-201509）由中国药品生物制品检定所提供，含量97.5%。
乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher公司），磷酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。
SQP 电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；1260 Infinity高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；TH-250B超声波提取机（北京中兴伟业仪器有限公司）；TD25-WS离心机（沙湘智离心机仪器有限公司）；HH-4水浴锅（常州国华电器有限公司）。
2方法与结果2.1 色谱条件Agilent ZORBAX SB-C18（250*4.6 mm，5 μm）；流速：1.0 ml/min；柱温30℃；检测波长334 nm；流动相比例（乙腈-0.4%磷酸溶液25：75）；理论塔板数不低于6000。
RP—HPLC同时测定野菊花中绿原酸、木犀草苷和蒙花苷的含量
目前 ，有 关 野 菊 花 的定 量 分 析 ，多 是 单 指 标 活 性 成分 或 双指 标 黄酮 类成 分 测定 引。本 文 选 择绿 原 酸 、木 犀 草苷 和 蒙 花苷 为 指 标 成 分 ，采 用 Ｒ — Ｌ ＰＨＰ Ｃ 法 同 时测定 三 者 在 野 菊 花 中 的含 量 ，并 对 商 品药 材
脱） ；流速 为 １０ｍＬ ｍｉ～；检测 波长 为 ３ ４ ａ ． ・ ｎ ３ ｍ；柱 温为 ３ ｑ ０Ｇ。结果 ：绿 原 酸 、木 犀苷 和 蒙花 苷分 别在 ４ ．４— ０４
６ ７ ０ ｇ ｒ ． ９ ） ９５ ３ １９ ｇ ｒ ． ９ ） 和 ２３ ６ ４ ５７ ８ ｇ ｒ ０ ９ ９９ 范 围 内线 性 关 系 良好 ； ４ ．４ｎ （ ＝０９ ９８ 、１． ０— １ ．２ｎ （ ＝０９ ９７ ５ ． ２～ ０ ．２ｎ （ ＝ ．９ ）
色谱纯 ，Ｍ ｒ ；超纯水为实验室 自制；其余试剂均 ｅｋ ｃ 为分 析纯 。 野菊 花药 材 ，２ １ ０ ０年 １ 月 于 产地 收集 ，经 上 海 １
雷允 上药 业有 限公 司 测 试 中心 按 《 国药 典 》 ２ １ 中 ００
版一 部鉴 定 ，均 为 正 品。
２ 方法 与 结果
油 、黄 酮类 、酚酸类 等 化学 成 分 。黄酮 类 化 合 物 引
津 Ｌ － Ａ 高效液相色谱仪 （ Ｐ Ｃ１ Ｔ ０ Ｓ Ｄ检测器 ） ｉｉ ；Ｍｌ— ｌ Ｑ超纯 水 机 （ ｌ—ｏｅ ；Ｃ 一 ５ Ｍｉｉ ｒ ） Ｑ ＂ ０超 声 波 清 洗 器 （ ｌＰ ２ 上 海 新超 超 声 波 仪 器 有 限 公 司 ） Ｂ ２４ ； Ｓ２ Ｓ电 子 天 平
１ 仪 器 与试 药
Ａ ｉ ｎ１０ ｇ ｅｔ２ ０高 效 液 相 色 谱 仪 （ ＭＤ 检 测 器 ） ｌ Ｖ 、
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Abstract： Orthogonal design was used to optimize the technique of extracting linarin from wild chrysanthemum by matrix solid－phase extraction method． The operation process was adding Silica Gel－Alumina－Pollen into the PTFE core firstly ， then polarity eluting with solution combination of hexane－ethyl acetate－acetone ， and finally determining the linarin content by High Performance Liquid Chromatography． The results showed that the optimum condition of extracting linarin from chrysanthemum inflorescence was extracting 1．5 h at 30℃ with an elution solution ratio of 1∶2∶3． Key words： inflorescences of chrysanthemum； linarin； orthogonal design； HPLC
中 图 分 类 号 ：R284．2
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：0439－8114 （2011 ）08－1663-03
Extracting Linarin, a Natural Active Ingredient from Wild Chrysanthemum
CHAI Hong－ling，WU Lin－sen，JIN Xiao－chun （Branch of Environmental Engineering，Lishui Vocational and Technical College，Lishui 323000，Zhejiang，China）
第 50 卷第 8 期 201第1 年8 期4 月
湖北农业科学 Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.8 Apr．，2011
野菊花天然活性成分蒙花苷的提取
柴红玲，吴林森，金晓春 （丽水职业技术学院环境工程分院，浙江 丽水 323000）
摘要：选用基质固相萃取技术，采用正交优化设计试验，研究野菊花中天然活性成分蒙花苷提取的最佳
1.07
1.13
0.18
0.03
0.11
2 结果与分析
2．1 高效液相色谱仪的检测 2．1．1 检测波长的选择 取蒙花苷标准品，用甲醇 配成溶液进行 200～400 nm 的光谱扫描。 光谱图显 示，其在 207、267、326 nm 附近均有较大吸收峰。 在 326 nm 峰面积最大，为减少其他成分对蒙花苷测定 的干扰，特选择 326 nm 作为检测波长。 2．1．2 线性关系的考察 将标 1、标 2、标 3 分别取 样 5 μL，按 1．2．4 所述条 件进行测定 ，结 果 表 明 ，蒙 花 苷 在 进 样 量 为 0．048～2．130 μL 的 范 围 内 与 峰 面 积具有良好的线性关系。 以峰面积（y）为纵坐标，蒙 花 苷 浓 度 （x） 为 横 坐 标 ， 绘 制 标 准 曲 线 ， 得 曲 线 的 回 归方程y赞 ＝1 980x－7．560，r＝0．999 9。 2．1．3 精密度试验 精密吸取对照品溶液 5 μL 连 续进样 6 次，蒙花苷峰面积 CV 为 0．78％。 2．1．4 重复性测定 取样品粉末约 2．4 mg， 按上述 供试品溶液的制备方法和测定条件，制备 6 份供试 液，蒙花苷含量测定结果的 CV 为 1．30％。 2．1．5 稳 定 性 试 验 分 别 制 备 对 照 品 溶 液 和 供 试 品溶液 ，室 温 下 放 置 ，分 别 于 0、2、4、6、8、12 h 进 样 测定，记录蒙花苷色谱峰峰面积，计算变异系数，结 果表明， 对照品溶液中蒙花苷色谱峰峰面积 CV 为 0．48％， 供试品溶液中蒙花 苷色谱峰峰 面积 CV 为 0．81％，表明对照品和供试品溶液在 12 h 内稳定。 2．1．6 回收率试验 采用加样回收试验，取已知含 量的野 菊花粉末 0．12 g，共 6 份，精密称 定 ，按 对 照 品加入量与所取供试品含量之比为 1∶1 的比例加入 蒙花苷对照品，制备供试品溶液，分别测定，计算回 收率。 结果表明，蒙花苷的平均回收率为 97．4％，CV 为 2．42％。 2．1．7 色谱分析 通过对图 2 和图 3 的比较，以及
取蒙花苷标准品 1．2 mg 溶于甲醇，于 50 mL 容 量瓶中定容，得蒙花苷标准品液。 从中取 2 mL 移至 液相用小烧杯中，为标 1。 再从中分别取 2 mL 于 4 只 试 管 中 ，分 别 稀 释 成 2、3、4、5 倍 ，并 移 至 小 烧 杯 中， 为标 2、3、4、5。 取定容的提取液各 2 mL 于 50 mL 容量瓶中，用 30％乙醇稀释至刻度，15 min 后以 空白标准液作对照，于 326 nm 处测定吸光度，计算 提取液的蒙花苷含量。
图 1 蒙花苷的化学结构式
并 对 慢 性 气 管 炎 有 一 定 疗 效 ［8］。
1 材料与方法
1．1 材料 1．1．1 野 菊 花 试 验 用 野 菊 花 干 燥 花 序 购 于 浙 江 中医院中药房。 将其放入研钵中研磨成粉状，装入 烧杯并用保鲜膜封好，备用。 1．1．2 试 剂 蒙 花 苷 、正 己 烷 、乙 酸 乙 酯 、丙 酮 、甲
20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10
9 8 7 6 5
0
1
2
3
4
5
6
时 间 //min
图 3 洗脱剂的高效液相色谱图
2．2 单因素试验 2．2．1 萃 取 时 间 对 蒙 花 苷 提 取 量 的 影 响 在 常 温 下，在不同的萃取时间下提取蒙花苷，测定提取液 中蒙花苷含量，结果见图 4。 由图 4 可知，野菊花中 蒙花苷提取量随萃取时间的延长而增大， 但萃取 1．5 h 后，蒙花苷的含量开始降低，故萃取时间为 1．5 h 时提取效果最好。 2．2．2 萃 取 温 度 对 蒙 花 苷 提 取 量 的 影 响 在 不 同 温度下， 用洗脱试剂体积比 1∶1∶1 的洗脱试剂提取 1．5 h 后，测定提取液中蒙花苷含量，结果见图 5。 由 图 5 可知，野菊花中蒙花苷含量在提取温度为 25 ℃ 时最高，故提取温度以 25 ℃为宜。 2．2．3 洗 脱 剂 体 积 比 对 蒙 花 苷 提 取 量 的 影 响 以 不同洗 脱剂体积比 ，在 25 ℃下 ，提 取 1．5 h，测 定 提 取液中蒙花苷含量，结果见图 6。 由图 6 可知，在其 他条件相同情况下，从经济角度考虑，以洗脱剂体 积比 1∶2∶3 提取为宜。 2．3 正交优化试验
表 1 因素与水平
水平
1 2 3
萃 取 时 间 （A ）//h 1.0 1.5 2.0
因素 萃 取 温 度 （B ）//℃
20 25 30
洗 脱 剂 体 积 比 （C） 1:1:1 1:2:2 1:2:3
1．2．3 正交优化试验 准确称取 1．2 g 野菊花花序 干粉末以不同的萃取时间、萃取温度、洗脱剂体积 比为考察因素，根据单因素试验的结果，再选用 L9（33）正 交 表 进 行 正 交 试 验 ，因 素 与 水 平 设 计 见 表 1，测定蒙花苷含量。 1．2．4 高效液相色谱仪的检测［9］ 色谱柱：Symmetry－ C18 柱 （3．9 mm×150．0 mm，5 μm），流 动 相∶甲 醇－水－ 冰 醋 酸 （52∶46∶2）；流 速 ：1．0 mL ／ min，检 测 波 长 ：326 nm；柱温：30℃，进样方式：手动进样；进样量：5 μL。
收 稿 日 期 ：2010－09－02 作 者 简 介 ：柴 红 玲 （1983－ ），女 ，浙 江 舟 山 人 ，助 教 ，硕 士 ，从 事 林 业 生 态 工 程 教 学 工 作 ，（电 话 ）15157484955 （电 子 信 箱 ）chaihongling021＠126．com 。
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野 菊 花 （Flos Chrysanthemi Indici）具 有 抗 病 原 微生物、治疗心血管系统疾病、降压、降低血小板聚 集的影响、抗炎、免疫、抗氧化等作用［1］。 此外还用于 治疗肿瘤、高血压和高血脂等症，对感冒、流行性脑 膜炎也有一定预防作用 。 ［2，3］
蒙花苷是众多黄酮类化合物中活性较高的化 合物之一，由刺槐素和一个苷元组成，化学结构式 见图 1。 蒙花苷又称刺槐苷、金合欢因、野菊花黄酮 苷 、刺槐素－7－O－β－D－芸香 糖苷等，以 两种异构体 形式的化合物 α 体和 β 体。 蒙花苷及其衍生物在植 物界分布广泛，存在于许多植物的花、叶、果实中， 多以苷的形式存在。 其中以野菊花花序中含量最 多，是野菊花中重要的药效成分 。 ［6，7］ 近年来国内外 研究表明， 蒙花苷具有非常广泛的生理和药理活 性， 对预防糖尿病和改善糖尿病有显著的作用，还 具有抑制磷酸二酯酶、醛糖还原酶、金黄色葡萄球 菌、乙型 溶血链球 菌 、抗 菌 等 作 用 ， ［4，5］ 能 保 护 肝 脏 ，
湖 北 农 业 科学
2011 年
醇、冰醋酸、氧化铝、硅胶等。 1．1．3 仪器 YP202N 电子天平， 上海精密科学仪 器有限公司；四氟芯层析柱，上海立亚太玻璃仪器 制 造有 限 公 司 杭 州 分 公 司 ；Waters AcQuity 高 效 液 相色谱仪，美国 Waters 公司；UV 2501 PC 紫外－可 见分光光度计，日本导津；烧杯，研钵，漏斗，玻璃 棒，移液管，容量瓶，干燥器等。 1．2 方法 1．2．1 蒙花苷的提取 精密称取 1．2 g 野菊花花序 粉、2．4 g 硅胶和 2．4 g 氧化铝， 加入 20 mL 去 离子 水，搅拌均匀后装入已固定在铁架台上的四氟芯层 析柱中。 每间隔 15 min 分别加入正己烷、乙酸乙酯、 丙酮进行从小到大的极性洗脱。 将洗脱液进行抽滤 得到黄色滤液，用滤纸再次过滤，得到澄清的黄色 滤液即为蒙花苷提取液，放置阴暗处备用。 1．2．2 单因素试验 精密称取 1．2 g 野菊花花序粉， 在不同的萃取时间、萃取温度、洗脱剂体积比（V ∶ 正己烷 V 乙酸乙酯∶V 丙酮）下进行单因素试验。 结束后将洗脱液 进行抽滤得到黄色滤液。 将黄色滤液用滤纸再次过 滤，得到蒙花苷提取液，去离子水定容至 50 mL。 测 定蒙花苷在 326 nm 的吸光度，并计算出相应的蒙花 苷的含量。