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RP-HPLC测定桑叶中绿原酸的含量
RP-HPLC测定桑叶中绿原酸的含量郭红霞;谢文剑;曹艺;潘清平【期刊名称】《中国当代医药》【年(卷),期】2014(21)4【摘要】目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定桑叶中活性成分绿原酸的方法.方法采用Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-1.0％醋酸水溶液,采用梯度洗脱,检测波长为325 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃,进样体积10μl.结果绿原酸的线性范围为0.3890～7.771 μg(r=0.9994),平均回收率为98.91％.结论 RP-HPLC检测效率高,专属性强,重复性好,可用于桑叶中绿原酸的定量测定,可作为该药材的质量控制方法之一.【总页数】3页(P17-19)【作者】郭红霞;谢文剑;曹艺;潘清平【作者单位】湖南省常德市第一人民医院药剂科,湖南常德415000;湖南中医药大学药学院,长沙410208;湖南中医药大学药学院,长沙410208;湖南省常德市第一人民医院药剂科,湖南常德415000;湖南中医药大学药学院,长沙410208【正文语种】中文【中图分类】R286.0【相关文献】1.RP-HPLC法测定茶叶中绿原酸和没食子酸含量的研究 [J], 黄宏伟;邹佑云;邹盛勤2.RP-HPLC法测定杜仲叶中京尼平苷酸与绿原酸的累积含量 [J], 冯攀;马养民;朱军峰;陈立红3.RP-HPLC测定野菊花及其叶中绿原酸的含量 [J], 何小珍;贺冬秀;周进;郭玉;喻翠云4.RP-HPLC测定杜仲叶中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的含量 [J], 孙彦超;李钦;杜红岩;付建敏;杜兰英5.RP-HPLC法测定甘肃油松针叶中绿原酸含量 [J], 段辉;李广因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC测定不同地区桑椹饮片中七种成分含量
HPLC测定不同地区桑椹饮片中七种成分含量常艳旭; 王涛; 李晋; 何俊; 金华; 马琳; 杨雪晶【期刊名称】《《中国现代中药》》【年(卷),期】2019(021)010【总页数】4页(P1411-1414)【关键词】桑椹; 高效液相色谱法; 含量测定【作者】常艳旭; 王涛; 李晋; 何俊; 金华; 马琳; 杨雪晶【作者单位】天津中医药大学/天津市现代中药重点实验室天津300193; 天津中医药大学中药学院天津300193; 哈尔滨商业大学药学院黑龙江哈尔滨 150076【正文语种】中文【中图分类】R286桑椹为桑科植物桑Morus alba L.的干燥果穗。
现代研究表明，桑椹具有抗氧化、延缓衰老、抗疲劳、增强免疫力、降血脂、降血糖等药理作用[1]。
生物碱、黄酮类和有机酸为桑椹的主要化学成分，如芦丁有祛脂的效果、具有抗氧化能力[2]，绿原酸具有抑菌、抗炎、调节脂质代谢等功效[3-4]。
2015版《中华人民共和国药典》尚未规定桑椹的含量测定项中指标成分，仅对其浸出物、水分、总灰分进行检查[5]。
本研究选择了桑椹饮片中7种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷和槲皮素)为指标性成分，采用高效液相色谱法(HPLC)，建立桑椹饮片中7种成分同时测定方法，并对国内不同地区、不同批次的桑椹饮片进行测定，拟为桑椹饮片质量控制指标选择和质量评价提供参考，为桑椹药用价值进一步开发利用提供质量评价手段。
1 材料与方法1.1 仪器粉碎机(吉首市中诚制药机械厂)；离心机(Sigma)；天平(德国Sartorius公司，BP121S)；Mill-QⅡ型超纯水器(Millipore公司)；XW-80A涡旋混合器(上海沪西分析仪器厂)；SHB-111循环水式多用真空泵(西安太康生物科技有限公司)；Agilent 1260型高效液相色谱仪；SB-1000YDTD超声清洗槽(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
1.2 试药紫云英苷对照品(批号：MUST-13092001)、绿原酸对照品(批号：MUST-14091701)、隐绿原酸对照品(批号：MUST-13013002)、芦丁对照品(批号：MUST-11040302)、槲皮素对照品(批号：MUST-13072505)、异槲皮苷对照品(批号：A0439)和新绿原酸对照品(批号：12031401)均购自成都曼思特生物科技有限公司，其纯度均>98%。
HPLC法测定思日颗粒中绿原酸的含量
摘 要 ： 目 的 建 立 测 定 复 方 思 日颗 粒 中 绿 原 酸 含 量 的 方 法 。 方 法 采 用 Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ Ｓ ｕ ｎ Ｆ ｉ ｒ ｅ ＴＭ Ｃ． （ １ ５ ０ ｍｍ ×４ ． ６ ｍｍ，５／ ￣ ｒ ｎ ） 色谱柱 ， 流 动 相 为 甲醇 （ Ａ） 一 乙腈 （ Ｂ ） 一 ０ ． ４ 磷酸水 溶液 （ Ｃ） ， 梯度洗 脱 （ ０ ～５ ０ ｍｉ ｎ ， ５ ． ５ Ａ一 ６ Ａ， ２ ． ９ Ｂ， ９ １ ． ６ ｃ 一９ １ ． １ ｃ） ， 柱温 ３ Ｏ ℃， 流速 １ ． ０ ｍＩ ／ ａｉ ｒ ｎ ， 检测 波长 ３ ２ ７ ｎ ｉ ｎ， 进样量 １ ５ Ｉ 。 结 果 绿 原 酸 对 照品在 ４ ． ２ ４ ～２ ５ ． ４ ４￣ ｇ ／ ｍＩ 浓 度 范 围 内 与 峰 面 积 的 线 性 关 系 良好 。 加 标 回 收 率 为 ９ ８ ． ７ ３ ９ （ 一９ ） ， Ｒ Ｓ Ｄ 为
Ｂ ａ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｄ ｉ ｇ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ Ｐｌ ａ ｎ ｔ ｓ Ｒｅ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ Ｕ ｔ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｃ ｓ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍＹ ０ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｕ ｒ ｕ ｍｑ ｉ ８ ３ ０ ０ １ １ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ＨＰ Ｌ Ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｏ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ Ｓ ｉ Ｒ ｉ
HPLC(液相色谱)-绿原酸检测方法
HPLC-绿原酸检测方法2020版本药典有效成分测定参考2020版《中国药典》金银花项下绿原酸和木犀草苷测定的方法，采用高效液相色谱法测定其含量。
2.3.4.1 供试品溶液制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4ml，置5ml离心管中，摇匀，即得。
2.3.4.2 绿原酸的高效液相色谱检测方法(1) 标准品溶液的配制取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50µg的溶液，即得对照品溶液10℃以下保存。
(2) 检测条件色谱条件：色谱柱为安捷伦SB-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（13:87）；检测器为安捷伦G1314B可变波长紫外检测器；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；检测波长为327nm；进样量为10µl。
用外标法进行定量。
(3) 标准曲线的绘制分别吸取绿原酸对照品溶液2、4、6、8、10、20µl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标X，色谱峰峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程Y = 830.69X -16.516(R2=1)。
(4) 精密度实验取同一浓度的对照品溶液每次进样10µl，连续进样6次，按上述色谱条件测定绿原酸含量，根据检测结果计算相对标准偏差（RSD）。
(5) 稳定性考察分别取同一浓度的对照品溶液10µl，每隔两小时进样一次，连续进样检测６次，根据结果计算相应的相对标准偏差（RSD），检测10小时之内绿原酸的稳定性。
(6) 重现性实验取同一批次的提取样品，在设定的HPLC条件下连续进样6次，测定绿原酸含量，计算标准偏差（RSD）。
RP—HPLC测定桑叶中绿原酸的含量
RP—HPLC测定桑叶中绿原酸的含量目的建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定桑叶中活性成分绿原酸的方法。
方法采用Kromasil-C18（4.6 mm×250 mm，5 ？滋m）色谱柱；流动相为乙腈-1.0%醋酸水溶液，采用梯度洗脱，检测波长为325 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃，进样体积10 μl。
结果绿原酸的线性范围为0.3890～7.771 ？滋g （r=0.9994），平均回收率为98.91%。
结论RP-HPLC检测效率高，专属性强，重复性好，可用于桑叶中绿原酸的定量测定，可作为该药材的质量控制方法之一。
标签：桑叶；绿原酸；质量控制；反相高效液相色谱法桑叶为桑科植物桑（Morus alba L.）的叶，初露后采收，除去杂质，晒干，具有疏散风热，清肺润燥，清肝明目之功效。
主要用于风热感冒，肺热燥咳，头昏头痛，目赤昏花[1]。
现代药理研究表明桑叶具有降血糖、降血压、降血脂、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等功效[2-4]。
对桑叶的质量控制研究大部分围绕中桑叶中的活性成分芦丁来进行相应的含量测定[5-6]，也有的围绕黄酮类成分进行相应质量控制研究[7]。
目前，国内外市场对桑叶的需求愈来愈大，且本课题组在前期指纹图谱研究中发现绿原酸也是桑叶中的主要活性成分之一[8]，因此为了进一步控制桑叶质量，本研究采用反相高效液相色谱法（reverse phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC）对从全国收集的桑叶药材进行绿原酸含量测定研究，现报道如下。
1 仪器与试剂1.1 仪器KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；BPZ11D型电子分析天平（Sartorius公司）；Waters2695-2996高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器（Waters 公司）。
1.2 试剂甲醇（色谱纯，TEDIA公司），乙腈（色谱纯，TEDIA公司），水为哇哈哈纯净水，冰乙酸（色谱纯，北京化工厂）。
桑枝桑葚高效液相法分析
桑枝桑葚HPLC分析2017.10(绿原酸-.桑橙素-芸香苷-异槲皮苷-紫云英苷-桑色素-木犀草素)桑枝桑葚HPLC分析HPLC谱图（A, 桑枝水提冻干粉；B, 桑葚水提冻干粉. 1.绿原酸; 2.桑橙素; 3,芸香苷; 4.异槲皮苷; 5.紫云英苷; 6,桑色素; 7,木犀草素）检测条件: Waters e2695高效液相色谱,配有安捷伦5 TC-C18色谱柱250 mm×4.6毫米，5μm。
流动相为0.2%水磷酸（A）、0.2%磷酸乙腈（B）（0-9分钟，15% B-20 % B；10-15分钟，20% 25 % B；15-25分钟，25% B-30 % B；25-35分钟，30% B；35-40分钟，30% B-35 % B）。
流速0.6 mL/min,，进样量20μL，检测波长360 nm。
【文献来源】Qian Jiang, Xican Li*, Yage Tian , Qiaoqi Lin , Hong Xie , Wenbiao Lu , Yuguang Chi , Dongfeng Chen*. Lyophilized aqueous extracts of Mori Fructus and Mori Ramulus protect Mesenchymal stem cells from •OH–treated damage: bioassay and antioxidant mechanism.BMC Compl ementary and Alternative Medicine,2017,17:242.【检测条件】检测仪器:Syltech P510 HPLC system, 色谱柱:迪马Diamonsil C18柱,250 mm × 4.6 mm, 5 μm size, 流动相甲醇: 水=1：1. 流速0.5 mL/min, 进样量15 μL, 检测波长360 nm.。
HPLC测定桑叶及其炮制品中绿原酸含量
HPLC测定桑叶及其炮制品中绿原酸含量王龙虎;任玉珍;梁焕;焦聪【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2007(009)010【摘要】目的:建立桑叶及其炮制品中绿原酸的含量测定方法,考察桑叶炮制前后绿原酸的含量变化.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent XDB-C18,流动相为甲醇-0.01ml·L-1磷酸二氢钾(19:81),pH=3.58,检测波长为328nm,流速为1.0mL·min-1,柱温为35℃.结果:绿原酸进样量在0.25～3.0 μg呈良好线性关系,r=0.999 9,平均回收率为97.0%,RSD=3.32%(n=5).桑叶药材与生品中绿原酸含量显著高于蜜炙品,不同地区药材绿原酸含量高低依次为河北＞安徽＞浙江＞江苏＞湖南.结论:本方法简单、准确,能有效用于桑叶及其炮制品的质量控制.【总页数】3页(P16-18)【作者】王龙虎;任玉珍;梁焕;焦聪【作者单位】中国药材集团公司,北京,100055;中国药材集团公司,北京,100055;中国药材集团公司,北京,100055;中国药材集团公司,北京,100055【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.HPLC法测定蒙药连翘四味汤剂中绿原酸含量 [J], 张栓珍;李普泉;白玉华2.HPLC法测定双黄连合剂中连翘苷与绿原酸含量 [J], 李娜;秦松;高海燕3.HPLC法同时测定桑叶药材及其炮制品中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含量 [J], 程聪梅;毛菊华;余乐4.HPLC法测定拳参中绿原酸和没食子酸含量 [J], 钱程;陈玉娥;黄亮;张利萍5.HPLC同时测定桑叶中新绿原酸、绿原酸及咖啡酸的含量 [J], 蔡晓星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
hplc测定不同地区桑椹饮片中七种成分含量
［摘要］目的：建立同时测定桑棋饮片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异榊皮昔、紫云英昔和榊皮素
7种成分含量的高效液相色谱（HPLC）测定方法，为评价中国不同地区桑棋饮片的质量提供技术手段。方法：采用
ODS-C18 （250 mmx4.6mm, 5啊）色谱柱，水（含0.2%甲酸）-乙月青为流动相，梯度洗脱,流速为1 mLm+-1 ,检测
3. SchOOlO2Pharmacy， Haroin UnieereityO2COmmerce， Haroin 150076， China
+ Abstraci] Objective: To establish an HPLC-UV method for simultaneous determination of neochlorogenic acid， chlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， rutin， quercetin， astraaaline and quercetin for quality evaluation of Mori Fructus slice. MetUods: The analysis was carried out on an ODS-2 column"250 mm x4. 6 mm， 5 |jim) column with water" containing 0. 2% formic acid) -acetonifif as the mobile phase by RP-HPLC method. The detection wavelength was 360 nm and flow rate was 1 mL • min -1. ReseUs： Seven components showed respectivei a good linear relationship. The recoveries were 95. 0% 〜 105 %. The contents of seven components in Mori Fructus slice from diferent areas was quite diferent. Conclusion: The simple and accueateHPLC-UVmethod wasestablished and ealidated todeteeminethecontentsoeseeen componentseoequalityeealuation oeMoeiFeuctus.
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HPLC法测定桑椹颗粒中绿原酸的含量
桑椹颗粒滋阴益肾，补血润燥。
桑椹颗粒用于阴亏血燥引起的腰膝酸软，眩晕失眠，目昏耳鸣，肠燥便秘，口干舌燥，须发早白。
桑葚子别名桑实、文武实、黑椹、桑枣、桑果等，为桑科落叶乔木桑树的成熟果实。
桑葚子具有滋阴养血、生津、润肠的功效。
《本草衍义》记载：“桑根白皮条中言：桑之用稍备；然独遗乌椹，桑之精英尽在于此。
”桑葚子含有鞣酸（tannic acid）、苹果酸（malicacid）、维生素（vitamin）B1、油酸（oleic acid）、辛酸（caprylic acid）、肉豆蔻酸（myris-tic acid）、?蕉?醇（geraniol）、芳樟醇（linalool）、a-蒎烯（α-pinene）等。
本文采用高校液相测定了桑椹颗粒中绿原酸的含量。
1 仪器与试药
电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；LU230四元低压梯度液相色谱分析系统（大连依利特分析仪器有限公司）；司）；EasyGuard保护柱（岛津技迩上海商贸有限公司）；BT-V20A/B高精度恒温水槽（上海百典仪器设备有限公司）；PH510台式精密酸度计（安莱立思仪器科技（上海）有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；Globus超声波萃取设备（赛普泰克有限公司（上海比朗仪器制造有限公司）；UV-5500（PC）扫描型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。
绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。
乙腈（河南萨默生物科技有限公司）、乙酸铵（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、醋酸铵（南京化学试剂股份有限公司）、醋酸（河南萨默生物科技有限公司）、磷酸（南
京化学试剂股份有限公司）、三乙胺（南京化学试剂股份有限公司）、磷酸二氢铵（南京化学试剂股份有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下
[1-5]。
色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇
-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相；检测波长为325nm。
理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取桑椹颗粒，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取5分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取桑椹颗粒辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法?y定，结果在绿原酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg?mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。
以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。
试验表明，绿原酸对照品在0.01～3.2mg?mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取绿原酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。
结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批桑椹颗粒样品6份，分别依照2.2项下供试品制0.89%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，0.2，0.，4，0.6、0.8、1.0小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品绿原酸峰面积积分值的RSD为0.86%。
结果表明绿原酸至少在1小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的绿原酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。
6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.88%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定桑椹颗粒三批样品中绿原酸的含量，含量分别为0.18mg/g、0.23mg/g、0.21mg/g。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80），乙腈-0.2%（质量分数）磷酸（体积比25：75），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为6.0），甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70），甲醇-异丙醇-乙腈
（37∶61∶2），0.2%三乙胺溶液（用磷酸调pH至5.3）-乙腈（65∶35），0.045mol.L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH值至6.5），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相。
此方法简便、准确、重现性好，可用于桑椹颗粒中绿原酸的含量测定。
桑椹颗粒中绿原酸的含量应为标示量的95-105%。
希望以上资料对你有所帮助，附励志名言3条：
1、宁可辛苦一阵子，不要苦一辈子。
2、为成功找方法，不为失败找借口。
3、蔚蓝的天空虽然美丽，经常风云莫测的人却是起落无从。
但他往往会成为风云人物，因为他经得起大风大浪的考验。