2019-梁超-绿康--抗菌肽物质与小猪下痢201954LC (2)-PPT精选文档-文档资料
简介抗菌肽ppt课件
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• 3、杆菌肽：杆菌肽又名枯草菌素、枯草菌肽、崔西杆菌素，由苔藓 样杆菌发酵获得，它对革兰氏阳性菌有杀菌作用，但是对肾毒性很大， 所以一般不用于全身感染，欧盟从2000年开始禁用本品作为促生长剂。 • 4、酵母菌产生的嗜杀毒素（Ki11er toxins）： 1963年，人们首次 发现酿酒酵母在生长过程中能向菌体外分泌一种毒蛋白(即嗜杀毒素)， 可以杀死同族或亲缘酵母，但自身具有免疫力。此后又在假丝酵母属、 德巴利酵母属、克鲁维氏酵母属、毕赤酵母属和圆酵母属的真菌中发 现了嗜杀毒素。目前研究最为深入的是来自酿酒酵母的K1毒素。 • 5、植物内生菌抗菌肽 • 内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。与病 原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者 是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。
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• 结论： • 1、β -防御素2、3在小鼠肺组织呈诱导表达。 • 2、中药黄芪能够诱导β -防御素2、3在小鼠肺组 织表达增加，且呈剂量依赖性。 • 3、没有检测到中药鱼腥草、板蓝根和香菇多糖诱 导小鼠肺组织β -防御素2、3基因表达上调。
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• 郭雅静.黄芪等中药诱导大鼠子宫组织β －防御素的基因 表达及其分子克隆[D].兰州大学，2009. • 郭雅静用黄芪注射液、苦参注射液、红芪注射液、双 黄连口服液和黄芩口服液灌胃大鼠每天0.3ml，于第7天处 死大鼠提取子宫组织RNA，用RT-PCR法检测大鼠β －防御 素－2基因的表达情况，并对扩增产物进行了纯化、克隆 及测序。研究显示黄芪、红芪和苦参等中药可以诱导大鼠 子宫β －防御素－2基因的表达，提示可以利用这些中药 来增强局部组织的免疫力，以达到杀灭病原微生物的作用 ，这可能是中药抗感染的作用机理之一。
抗菌肽的基本知识课件
头孢+ 天蚕素
环丙 沙星
环丙+ 天蚕素
土霉素
土霉素 天蚕素
利高 霉素
利高+ 天蚕素
大肠
沙门氏
10.8
20.1
4.1
7.9
4.4
6.5
1.1
3.1
3.7
3.8
1.8
2.2
8.9
9.8
4.9
5.1
天蚕素抗菌肽独特的作用机理能快速
——联合抗生素治疗有极大的协同作用 改善有病不好治的问题
养猪的核心——根！
杀菌机理
通过抑制细菌细胞壁或DNA合成发挥作用： 1、影响细菌细胞壁的结构或抑制其合成，如青 霉素； 2、改变细胞膜的通透性，如多黏菌素； 3、影响细菌细胞的蛋白质合成：氯霉素、四环 素类、庆大霉素、卡那霉素等； 4、改变细菌的核酸代谢：灰黄素。
作用方式
通过阴阳离子的物理作用结合， 和细菌胞膜上或胞内特异的受体结合，且受体 可以很快杀灭微生物而且不容 类型有限，细菌容易通过变异而产生耐药性。 易产生抗药性。 促进肠绒毛的生长，增加营养 使肠壁变薄等来增加吸收率，有部分抗生素亦 物质吸收面积，提高饲料报酬， 有明显促生长效果，但容易随耐药性增加而减 促生长效果明显。 弱。
抗菌肽能否与抗生素联合使用？
天蚕素抗菌肽对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ATCC43300的体外杀菌效果
A
B
对照组
试验组
A：对照组 菌体形态正常 ，平均直径为0.643um。 B：试验组 （4.69μg/ml 的天蚕素抗菌肽处理60min） 菌体出现穿孔、破裂、 萎缩，平均直径为0.621um，与对照组相比差异极显著（P<0.001）。
天蚕素抗菌肽基础知识
抗菌肽及其在畜牧业中的应用1
新进展1 前言抗菌肽（antimicrobial peptide）又称抗菌生物肽或肽抗菌素，在生物体内广泛存在，是生物体用来抵制外来入侵病原体，具有抗菌作用的一类小分子蛋白质。
世界上第一个被发现的抗菌肽是20世70年代瑞典科学家Boman HG 在用大肠杆菌诱导惜古比天蚕(Hyatophora cecropia)时分离得到的，命名为天蚕素(cecropin)[1]。
此后到现在的30多年时间里，人们相继从微生物、两栖类动物、植物、哺乳动物和人类中发现并分离获得具有类似性质的活性多肽，至今已从自然界中发现超过900多种，且每年都以较高的速度增长[2]。
抗菌肽分子量小，具有等电点高、热稳定好和广谱抗菌等特点，不仅对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有较强的杀灭作用，对某些真菌和耐药性细菌也具有杀灭作用。
其在自然界中广泛存在，且在各种物种中的含量和结构不尽相同，加之抗菌肽具有优良的抗菌性能，学者们一直在探索利用生物和基因工程大量获得该物质，这都使得其成为当前各国研究的热点之一。
本文综述了近年来各国学者在自然界各种生物中发现的一些主要抗菌肽种类，结合以往研究成果，介绍了各种抗菌肽的基本结构和特点，主要论述其来源和分类研究进展，为今后开展抗菌肽生物和基因工程研究提供经验和借鉴。
2 抗菌肽分布及其结构目前，在各种原核生物和真核生物中均有抗菌肽存在的报道，现将已发现的、并作为研究重点的一些主要抗菌肽及其在畜牧业中的应用湖南农业大学动物营养研究所/彭慧珍 罗振福 贺建华摘 要 抗菌肽是动物体以及人类自身免疫系统中重要的组成部分。
自从上个世纪70年代初由瑞典科学家Boman HG 首次发现后，人们逐渐开始关注这一具有广谱抗菌性能，且相对于抗生素具有高效和无残留等显著优点的抗菌物质。
随着对其研究深入，人们对抗菌肽的分布、结构和作用有了很大认识，并根据需要进行了分类。
本文主要介绍抗菌肽的来源及其各自结构、分类的研究进展等，为今后的研究和学习提供借鉴。
肽核酸技术对猪场病毒持续侵染良好控制方案的研究猪病篇PPT课件
楠森集团运营总监，毕业于南京农业大学，从事畜禽场 健康管理研究和兽用肽核酸（基因）抗病毒药物及多肽 类功能性免疫调节剂研究推广多年 ，兼任国内多家动物 保健品企业新药研发顾问，常年为国内规模化养殖场提 供技术培训及疫病诊断服务。 应对愈渐复杂的病毒性疾 病发生现状，在行业内率先提出“规模化养殖场病毒感 染控制与净化保健方案”的兽医传染病综合控制专家。
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YebatonTM结肠控释工艺 保证了基因药物口服的高生物利用率
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YebatonTM的作用机制(抗病毒机理)
YebatonTM （多聚-反义寡核苷酸肽）
经口服进入体内后与特异宿主细胞结合， 在酶的催化作用下脱去肽骨架，经受体 导入细胞内，识别并激活2’、5’-寡腺 苷酸合成酶，被活化的寡腺甘酸可以使 潜伏在体内的内源核酸酶（核酸内切酶 -Dicer）活化，在RNA诱导的基因沉 默复合体（RISC，RNA-induced silencing complex） 作用下，对 （病毒）靶基因mRNA进行切割，引 起病毒复制环节能力丧失，从而达到抗 病毒的作用。
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猪 场 应 用 Ye b a t o n T M 之 保 育 仔 猪 三 段 式 病 毒 控 制 方案
猪群生长过程中在哺乳后期--保育中期这50天左右的时间是最 容易感染病毒性疾病、死亡率最高、饲养技术要求最高最复杂的 一个阶段，目前由于母猪持续带毒后往环境排毒，产房环境严重 被病毒污染等导致初生乳猪病毒感染及先天性免疫机能低下、出 生后每天承受着野毒的高感染压力，母源抗体加速消耗、疫苗免 疫程序紊乱的情况越来越严重，由此导致的哺乳阶段和保育前期 发病率、死淘率明显增加、兽医工作强度大、生产用药成本高而 且也解决不了问题。在保证猪群健康管理工作中，病毒感染是这 一时期尤其要注重的，在猪群断奶前一周开始， YebatonTM拌 料用10天，隔7天；用10天、隔7天；再用10天的（10-7-107-10）的三段式病毒控制方案，可以有效的解除猪瘟、蓝耳病、 圆环病毒、伪狂犬等重大疾病的困扰。
抗菌肽在妊娠母猪生产中的应用研究
抗菌肽在妊娠母猪生产中的应用研究作者：黄荣春，包书芳，辛秀克，梁淦来源：《中国动物保健》2021年第12期摘要：针对养殖场长期使用甚至滥用抗生素的弊端，人们急需开辟一条替代抗生素的新路线。
抗菌肽因具有抗菌谱广、无耐药、无残留，还能提高机体免疫力等优点，被称为“替代抗生素的首选物质”。
本文旨在研究抗菌肽对妊娠母猪便秘情况和繁殖性能的影响，为今后在猪生产中科学使用抗菌肽提供有力依据。
关键词：抗菌肽;妊娠母猪;应用随着现代集约化养猪规模的扩大，母猪生产中常出现受胎率低、胚胎死亡率高、产仔数小、仔猪出生体重低、母猪产奶量低、母猪淘汰率高等问题，所以，对母猪进行合理的药物保健显得越来越重要。
但是，为了预防疾病和促进生长而过度使用抗生素会造成诸多不良后果，如药物残留、耐药性增强、免疫力下降等。
所以，选择安全高效的新型保健品迫在眉睫。
抗菌肽具有分布广、无耐药性、无残留、对正常体细胞无毒等特点，而且许多实验发现其保健、防病治病效果优于传统抗生素，因此被认为是替代抗生素的首选物质[1，2]。
为了进一步验证抗菌肽对繁殖母猪的影响，在妊娠后期母猪（分娩前40d）基础日粮中添加300g/t和500g/t抗菌肽，与直接饲喂基础日粮的对照组进行比较。
饲养试验持续40d，直至分娩。
本试验对三组母猪的便秘情况、繁殖性能等进行观察，旨在研究抗菌肽对妊娠后期母猪便秘和繁殖性能的影响，为抗菌肽在养猪生产中的科学利用提供有利的依据。
1 材料与方法1.1 试验材料试验中使用的抗菌肽在市场上称之为肽力生，是桑蚕抗菌肽基因工程菌经过深度发酵、过滤、浓缩和喷雾干燥后的产物，富含桑蚕抗菌肽。
它对高致病性革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌非常有效。
它可以部分或完全替代饲料中的抗生素[1，3]。
本品绿色、高效、安全，不产生任何耐药性，对动物腹泻和其他疾病有抵抗力，还能提高免疫力，起到促进生长作用。
1.2 试验设计与试验动物的选择本试验采用单因子完全随机设计，根据胎次一致、妊娠时间、身体健康、体重、遗传基因等相似的原则选择妊娠后期长白猪与大白猪二元杂母猪36头（产前40日龄），随机分为3个处理组，每个处理3个重复，每个重复4头猪;试验日粮分别为对照组（母猪基础日粮）、试验1组（母猪基础日粮+抗菌肽300g/t）、试验2组（母猪基础日粮+抗菌肽500g/t），饲料为粉料，饲养过程采用自动化投料系统，进行为期40d的饲养试验。
母猪抗菌肽
抗菌肽饲料添加剂对母猪生产性能的影响摘要上海牧鑫生物科技有限公司为观察抗菌肽饲料添加剂对母猪生产性能的影响, 试验于母猪产前35 d 在饲料中添加抗菌肽为观察抗菌肽饲料添加剂对母猪生产性能的影响, 观察母猪产仔及仔猪健康状况。
结果表明:试验组母猪的窝均产仔数和窝均活仔重量均高于对照组;分娩、断奶的成活率分别比对照组提高了 6.48、16.10 个百分点;弱仔率和仔猪腹泻率显著降低。
经济效益试验组比对照组提高259.08 元/窝。
说明抗菌肽饲料添加剂可有效提高母猪的生产性能。
关键词抗菌肽饲料添加剂；母猪；生产性能；经济效益中图分类号饲养动物长期应用或不适当使用抗生素会产生抗药性和药物残留问题,造成严重的食品安全和人类健康及治疗用抗生素的药效失效问题。
欧盟于2006年开始全面限制抗生素作为亚治疗的使用。
人们急需开发能取代传统抗生素的无残、无抗、安全无污染的新一代绿色饲料添加剂,抗菌肽独特的理化性质和天然免疫源性使其成为此类研究物质的首选。
抗菌肽不仅具有广谱抗菌和多项免疫调节功能,同时,作为宿主自身的天然免疫调节分子,还具有安全无残留、不产生抗药性、与其它抗菌物质具有协同作用[1-3]等特性。
母猪妊娠期的保健工作是整个养猪生产中的关键环节，直接关系养殖的效益问题。
本试验通过研究抗菌肽饲料添加剂在提高母猪生产性能方面的作用，以便为广大畜牧生产者更好地在母猪饲粮中使用抗菌肽、进一步提高经济效益提供参考。
1 材料与方法1.1试验材料抗菌肽饲料添加剂由上海牧鑫生物科技有限公司提供。
1.2试验动物与试验设计选择健康、年龄、体况相近的妊娠后期母猪40头，随机平均分成对照组和试验组。
全封闭式猪舍，屋顶排气扇通风，漏缝金属地板，网上平养，舍温保持在20～26 ℃。
整个试验期内自由饮水，限制饲喂，每日分早、晚2 次供给，日粮按2.5 kg/（头·d）的标准供给；分娩、接产及仔猪保温、补料、断奶等管理工作均按常规进行[4-5]。
抗菌肽和绿色无公害养殖课件
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★抗菌肽
一类具有抗菌活性的阳离子短肽的总称，也是生物体先天免疫系 统的一个重要组分。目前已有将其基因转化酵母进行高效表达，再经 发酵优化生产出抗菌肽酵母制剂，代替抗生素预防和治疗鸡白痢等。
其主要作用特点有：1）对多种病原体（细菌、病毒、真菌、寄生虫） 和癌细胞具有杀伤或抑制作用，而对真核细胞不具细胞毒作用。2） 生物学活性稳定，在高离子强度和酸碱环境中或100℃加热10分钟时 仍具有杀/抑菌作用。3）能与宿主体内某些阳离子蛋白、溶菌酶或抗 生素协同作用，增强其抗菌效应。4）具有与抗生素不同的杀菌机制 （菌细胞膜穿孔），不易产生抗菌肽耐药菌株。5）能与细胞脂多糖 （LPS）结合，即具有中和内毒素的作用，因此对革兰氏阴性菌败血 症和内毒素中毒性休克具有很好的防治作用。6）调节细胞因子表达： 如采用转录基因阵列试验发现，某些抗菌肽，如LL-37具有免疫调节 作用，可招募并增强吞噬细胞的杀菌作用，而降低由前炎症细胞因子 引发的炎症反应。
通过细菌抗生素耐药性的出现，增加 了临床用药的剂量，产生超级细菌， 间接威胁人的健康---公共健康。
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表1 我国某地区22个规模化鸡场2006-2007年分离的主要病原菌
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抗生素替代品----后抗生素时代 安全、高效的抗生素替代品的研究与应用，可以减少传 统抗生素的使用，为健康养殖提供了良好的技术基础，是 既能够防控细菌性疾病、又能解决抗生素残留和危害的一 条较为理想途径。近年来，饲用抗生素替代品的研究主要 有微生物制剂、寡糖、抗菌肽、中草药、糖萜素、酶制剂 和酸化剂等
抗菌肽及其在水产配合饲料中的应用试验
基因编码的抗菌肽(antimicrobial peptide)是生物体内诱导产生的一种具有强抗菌作用的多肽繻物质，广滛分布于细菌、植 物、昆虫、软体动物、甲壳动物、两栖动物、鹼繻、鸟繻和哺乳动物体内的一繻帏分子多肽, 是生物体对外界病原物侵染而产 生的一绻列免疫反应的产物，是先天性免疫防御绻统的重要组成部分。抗菌肽分子量帏，性能稳定，不仅具有广踱抗细菌能力 （对革兰渏阳性菌及阴性菌均有杀伤作用）, 还可以抗真菌、被膜病毒等多种微生物以及寄生虫。抗菌肽除了具有较强的直接 杀灭有害微生物的活性外, 还具有许多其他生物学功能, 如抑制肿瘤细胞、中和内毒素以及抗炎等。它们还可以通过趋化树突状 细胞、单核细胞和记忆T细胞, 在先天性免疫(非特异性免疫)和获得性免疫(特异性免疫)反应之间起桥梁作用, 并启动获得性免疫 绻统, 提高机体抵抗微生物感染的获得性免疫渴平。世界上发现的第一种抗菌肽是1980年由瑞典科学家Boman等用阴溟通杆菌 及大肠杆菌诱导惜古比天蚕蛹产生出有抗菌活性的多肽物质，随后又在其他生物体内陆续发现了多种抗菌肽，如蛙皮素 (magainins)、蜂毒素(melittins)、防御素(defensins)等。目前世界上已知的抗菌肽共有1200多种，分子量在2000-7000 Dalton，由 20-60个渨基酸残基组成，这些活性多肽多素具有强碱性、热稳定性、广踱抗菌性、渴溶性好和作用迅速等特点。
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3
( 马卫明, 2019, 中国农业大学博士论文)
（ 同时具有抗菌特点及肽结构这两种性质的物质 = “抗菌肽” “肽结构” = 几至几百个氨基酸呈线性或环状聚合物
4
抗菌肽研究概述 (1000多种抗菌肽物质)
生物来源 哺乳动物
两栖动物 微生物
植物 昆虫
（马卫明， 2019,中国农业大学博士论文)
18
( 赵燕飞 等, 2019 )
19
( 王春维,2019 )
20
( 徐军等, 2019 )
21
肠膜蛋白对教槽料的影响
肠膜蛋白
( 司马博锋 等, 2019)
22
小结 2
• 猪肠膜抗菌肽开发还处于研究阶段. 使用猪肠膜 粉(加工后副产品)作为肠膜抗菌肽来源养猪对防治 仔猪下痢有一定的效果
•乳铁蛋白对铁离子的吸附性超强, 一般认为它可以夺走细菌生长所 需的铁质而抑制细菌的生长，达 到防治下痢的效果。
7
8
Growth in 12 hrs (Colony forming units)
Fe Fe Fe
铁离子对母猪奶水中下痢细菌生长的影响
104
1.5
*
*
*
102
1.25
O157 E. coli
• 在母猪围产期(产前-产后)的母猪饲料中使用 抗菌肽产品能减少仔猪下痢现象, 有可能是 母猪健康保证了奶水质量和乳铁蛋白抗菌 肽含量的结果
16
抗菌肽与小猪下痢
• 母猪奶水中的乳铁蛋白 • 肠膜蛋白及其抗菌肽物质 • 微生物源抗菌肽
– 杆菌肽 – 硫粘菌素
• 基因工程抗菌肽
– 溶菌酶 – 天蚕素
• 结论
• 直接使用肠膜粉(抗菌肽)存在生物安全问题 • 通过基因工程菌生产肠膜抗菌肽仍需研究
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抗菌肽与小猪下痢
• 母猪奶水中的乳铁蛋白 • 肠膜蛋白及其抗菌肽物质 • 微生物源抗菌肽
– 杆菌肽 – 硫粘菌素
• 基因工程抗菌肽
– 溶菌酶 – 天蚕素
• 结论
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细菌源抗菌肽的比较
品种 杆菌肽
产生菌
停药期
已报道的种类 100多种 600多种 50多种 20多种 30多种 20多种 4种 3种 1种 100多种 20多种 100多种 100多种 100多种
文献
陆婕, 2019 钟雅, 2019 马卫明, 2019 陈绍峰, 2019 朱伶俐,, 2019
Mukesh Pasupuleti, 2009
5
抗菌肽与小猪下痢
• 母猪奶水中的乳铁蛋白 • 肠膜蛋白及其抗菌肽物质 • 微生物源抗菌肽
– 杆菌肽 – 硫粘菌素
• 基因工程抗菌肽
– 溶菌酶 – 天蚕素
• 结论
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Lactoferrin (乳铁蛋白)
•1959年Groves用色谱得到纯的红 色的含铁的糖蛋白
•乳铁蛋白在人乳中的浓度为1.03.2mg/ml，是普通牛乳中的10倍 （牛乳中含量为0.020.35mg/ml）,而人初乳中乳铁蛋 白可达6-14mg/ml. 一般推测, 其他 哺乳动物的初乳中的乳铁蛋白也 很高
14
• 围产期中，提高母猪健康，保证乳铁蛋 白数量和质量
• 在母猪产前14天至产后21天，母猪饲料 中添加 250ppm MDAB(必恩迪), 能有效防 治由产气荚膜梭菌引起的乳猪肠炎 。
（美国 FDA法规 ， 21 CFR Ch. I § 558.76, )
15
小结 1
• 猪母乳含有丰富的乳铁蛋白, 是预防仔猪下 痢的“抗菌肽”最佳来源
Klasing & Knight, 1979
Clostridium perfringens Salmonella typhimurium
L等, 2019)
11
( 黎观红, 等, 2009 )
12
( 侯振平 等, 2019 )
13
乳铁蛋白的转基因表达
17
猪小肠中抗菌肽研究成果举例
研究者 Lee Agerberth Andersson 周洪福 马卫明
年代 1989 1991 2019 2019 2019
抗菌肽 Cecropin P1 PR-39 NK-lysin 乙酸提取物 乙酸提取物
分子量 3339 Da 4719 Da 8924 Da
5972 Da
• Liang 等(1993) 报道了人 乳铁蛋白在啤酒酵母中的表达, 然后通过酵母转化酶分泌信号序列将重组人乳铁蛋白 分泌至细胞外, 产率为 15 -20 mg/L。
• Ward 等(1992)把合成乳铁蛋白的遗传信息转移到曲霉 菌中, 然后在适宜条件下进行培养, 从而实现了乳铁蛋 白的优化生产, 这是通过发酵大量生产乳铁蛋白的重大 突破。
• 论文: 30多篇 • 专利: 5件
2
• 抗菌肽是有抗菌活性的肽类化合物(马卫明,2019)。 已有1000多种抗菌肽物质被研究。中文报告多达48000份,而英文论文则接近40万份。
• 有报告指出我国仔猪全年平均发病率46.5%, 因下 痢致死亡率为 10.3%, 是影响中国养猪业发展的重 要因素之一 。
地衣芽孢菌
0
硫粘菌素 多粘杆菌
7
维吉尼霉素 链霉菌
1
恩拉霉素
放线菌
7
那西肽
放线菌
3
抑菌机理
抗菌谱 FDA法规 用药成本
细胞壁合成
G+
+
低
细胞膜合成
G-
-
低
蛋白质合成
G+
+
较高
细胞壁合成
G+
-
中等
蛋白质合成
G+
-
中等
地衣芽孢菌是全球几十个国家所批准使用的益生菌（直饲微生物） FDA法规尚未批准硫粘，恩拉和那西肽作为饲料中长期添加的药物
抗菌肽举例 防御素类 Catheliodins 类 乳铁蛋白 溶菌酶 蛙皮素 铃蟾肽 杆菌肽 多粘菌素 HIV-1抗菌肽 植物防御素类 天蚕素类 昆虫防御素类 富脯氨酸类 富甘氨酸类
氨基酸数量 18 - 42
140 - 300 690 129 14 14 12 9-11 12
20 - 93 31 - 39 30 - 60 15 – 34 100 - 200
抗菌肽物质与预防小猪下痢 (文献综述)
绿康生化股份有限公司 梁超博士
2019年6月20日 上海
1
报告人简介
• 姓名: 梁超 • 职务: 质量与法规总监 (绿康生化股份) • 学历: 博士(美国堪萨斯州立大学) • 经历:
– 美国建明工业公司 （亚洲区技术总监） – 美国雅来大药厂 （中国区总经理） – 泰国正大生化集团 （技术顾问 ） – 美国微营养公司 (亚太区总经理)