铜绿假单胞菌检验原始记录
铜绿假单胞菌的检验流程
铜绿假单胞菌的检验流程
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的检验流程可以包括以下步骤：
1. 样品采集：从疑似感染源（如伤口、尿液、呼吸道分泌物等）采集样品。
确保采集过程无菌，并采用适当的采样器具和技术。
2. 培养基选择：选择适合于铜绿假单胞菌生长的培养基，如血琼脂、MacConkey琼脂等。
根据需要，还可以选择特殊的培养基，如铜绿假单胞菌选择性培养基。
3. 培养：将采集的样品在选择的培养基上进行斑点接种、刷涂或点菌法接种。
根据不同的培养基和环境条件，培养时间一般为24-48小时。
4. 形态观察：观察培养基上的菌落形态特征。
铜绿假单胞菌的菌落通常呈绿色或蓝绿色，具有金属光泽。
5. 鉴定测试：进行铜绿假单胞菌的鉴定测试，以确认菌株的身份。
常见的鉴定测试包括：
•革兰氏染色：观察菌株的革兰氏染色特征。
•氧化/还原测试：进行氧化/还原测试，如氧化酮酸试验等。
•水解反应：检测菌株的葡萄糖、麦芽糖等的水解反应。
•生化试验：进行生化试验，如氧化酶试验、产芽孢试验等。
6. 进一步确认：根据鉴定测试的结果，可以进行进一步的确认。
例如，可以使用API系统或分子生物学方法（如PCR）进行确认。
请注意，以上是一般的检验流程，具体的步骤和方法可能会因实验室的设备、方法选择和要求而有所不同。
在进行任何检验之前，建议遵循实验室的操作规范和相应的检验标准。
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全自动微生物分析仪对铜绿假单胞菌的鉴定及药敏分析
致病菌之一 ， 由其引起 的感 染 具有 难 治性 、 持续 性等 特 点。Ｐ Ａ 对抗生素 的固有 耐药 性 以 及多 重耐 药 性 的发 展在 临 床上 越来 越引起广泛 的注意 ， 为了合理选 用 抗生 素 ， 有效 控制 感染 ， 们 我 对我 院 ３ ２株 Ｐ ５ Ａ的分离 、 布 及对 常用 抗 生素 的耐 药状 况进 分
收 稿 日期 ：０ ２ ３ ９ 修 订 日期 ：０ ２— ４—２ ２ ０ —０ —１ ； ２０ ０ ５
全 自动 微 生 物 分 析 仪对 铜 绿 假 单胞 菌 的 鉴 定 及 药敏 分 析
陈家 坚 。 温卓 莲
（ 西北海市人 民医院 ， 西 北 海 ５６０ ） 广 广 ３ ０ ０
摘 要 ： 目的 合理 选用抗 生素 ， 效控制感 染。方法 对 常规分 离 的 ３ ２株 铜绿假 单胞 菌（ Ａ） 离、 布及 常用 抗 生 有 ５ Ｐ 分 分 素的耐药状况进行分 析。结果 Ｐ Ａ所 Ｉ 的感 染 中， 起 以呼 吸道感 染 占首 位 ； Ａ 对 多种 不 同性质 的抗 生 素高度 耐 药 ， Ｐ 对 Ｐ Ａ耐 药率较 低 的抗 生素主要有 丁胺卡那 、 克 单、 菌 头孢 吡肟 、 达欣 、 丙沙 星、 大霉 素 、 复 环 庆 亚胺 配 能、 唑 巴坦 、 三 哌拉 西 林、 妥布霉 素。结论 Ｐ Ａ感染 的监 测， 临床 医生选用有 效的抗 生素具 有 十分 重要 的意义。 对 关 键 词 ：绿 脓 菌 素 ； 生 素 类 ； 生物 敏 感 性 试 验 ； 药性 ， 生 物 抗 微 抗 微 中 图分 类 号 ：Ｒ ４ 、 ４６５ 文 献 标 识 码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：１０ ０ １—５ １ （ ０ ２０ ８ ７ ２ ０ ）４—０ ４ —０ ５２ ２ 铜绿 假单 胞菌 （ ．ｅｕ ｉｏａ Ｐ 是 医 院感 染 中最重 要 的 Ｐ ａｒｇｎ ｓ， Ａ） 表 ｌ ３ ２株 Ｐ ５ Ａ在各 临床标本 中的分 布
铜绿假单胞菌检验原始记录
培养
___日___时至___日___时
计数
菌落计数公式: N=P+F(cF/nF）+R（cR/nR）
实验
结果
阴性：
阳性：
CFU/250mL
备注
P： 显兰/绿色的菌落数.
F: 显荧光的菌落数.
R: 显红褐色的菌落数。
nF: 进行产氨测试的荧光的菌落数。
cF: 产氨阳性的荧光的菌落数.
nR： 进行产氨。 氧化酶. 金氏B培养基上显荧光测试的红褐色菌落数.
检验项目
确
证
性
试Байду номын сангаас
验
营养琼脂
要求
36±1℃；20h～24h。
培养
___日___时至___日___时
氧化酶试验
要求：用玻璃棒，将适量的纯种培养物涂布在试纸上.10S内显色
金氏B(King`s B） 培养基
要求
36±1℃;20h～24h.
培养
___日___时至___日___时
乙酰胺肉汤
要求
36±1℃；20h～24h.
铜绿假单胞菌
检验依据：GB/T8538-2008
样品制备：
釆用滤膜法。将250mL水样用孔径为0。45um的滤膜过滤,并将滤膜移至CN琼脂选择性培养基上，于36±1℃培养20-24h。
检验项目
现象
结果
分 离
培 养
假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂
要求
36±1℃；20h~24h。
培养
___日___时至___日___时
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验是用来检测铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的存在和数量的方法。
以下为一般的检验方法标准：
1. 样本采集：从疑似感染物表面或体液样本中采集适量样本。
2. 培养基选择：选择适当的培养基，如铜绿假单胞菌选择性琼脂培养基（Cetrimide agar）。
3. 菌落培养：将样本均匀涂敷于琼脂培养基上，并在适当温度下孵育。
4. 观察和计数：观察培养基上的菌落形态，并对可疑的铜绿假单胞菌菌落进行计数。
5. 形态特征：使用显微镜观察菌落的形态特征，铜绿假单胞菌通常呈圆形或不规则形态，有金属绿色色素产生。
6. 生化试验：进行生化试验以确认菌株是否为铜绿假单胞菌，如利用氧化酶试验、葡萄糖氧化试验等。
7. 分子生物学检测：使用PCR或其他分子生物学方法进行靶向检测，以确认菌株是否为铜绿假单胞菌。
8. 结果判定：根据以上检验结果，判断样本中是否存在铜绿假单胞菌，并确定其数量。
需要注意的是，具体的检验步骤和标准可能会因实验室和应用环境的不同而有所差异，因此应根据实际情况进行相应的调整。
同时，在进行铜绿假单胞菌检验时，要严格遵守无菌操作规范，确保准确可靠的结果。
药品微生物限度检验记录(铜绿甲单胞菌)
氧化酶试验
培养基
名称
营养琼脂培养基
绿
脓
菌
试
验
培养基
名称
PDP琼脂培养基
批号
批号
培养
温度
℃
培养
温度
℃
时间
日时至日时，计小时
时间
日时至日时，计小时
现象：
现象：
结果判定：
结果判定：
检验项目标准规定检验结果
铜绿假单胞菌每1不得过检出□未检出 □检出结论：检验人：复核人：
药品微生物限度检验记录
（铜绿假单胞菌）
检验号REC-QC-057-00
品名
跌打活血散（混合生药粉）
规格
批号
数量
来源
紫外消毒时间
时分至时分
取样日期
报告日期
检验依据
铜绿假单胞菌
增菌培养：取供试液10ml，直接接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养。
培养基
名称
胆盐乳糖培养基
培养
温度
℃
批号
时间
日时至日时，计小时
分离培养：取上述培养物，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基的平板上，培养。
培养基
名称
溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
培养
温度
℃
批号
时间
日时至日时，计小时
现象：
确证试验：从上述分离平板上挑选2〜3个疑似菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18〜24小时。取斜面培养物进行革兰染色、镜检及氧化酶试验。
食品中铜绿假单胞菌检测
自动生化鉴定仪器 生化试剂条（以国标法为参照，二者符 合率99.6％- 参考文献）
操作步骤-水样过滤
在100级的洁净工作台进行过滤操作。 首先用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分， 将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上， 固定好滤器，将250mL水样或稀释液通 过孔径0.45μm的滤膜过滤，然后将过滤 后的滤膜贴在已制备好的CN琼脂平板上， 平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着 气泡。
测试的红褐色菌落数。
– cR是产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光测试 均呈阳性的红褐色菌落数。
• 举例
N=17+16×(2/5)+10×(3/5) – 17：呈蓝/绿色的菌落数； – 16：没有绿脓色素但显荧光的菌落数； – 2：产氨阳性的显荧光菌落数； – 5：进行产氨测试的显荧光菌落数； – 10：呈红褐色的菌落数； – 3：产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光测试均
呈阳性的红褐色菌落数；
– 5：进行产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光测 试的红褐色菌落数。
• 样品稀释 若样品污染严重，建议对样品进行稀
释，如10倍递增稀释：取30ml样液加入 至270ml无菌生理盐水中，混匀，以此类 推，进行系列稀释。
• 报告 结果以 CFU/250ml计。
• 其他确证试验方法
产荧光素实验（金氏B培养基）
化妆品菌落总数检测原始记录
生理盐水、卵磷脂吐温80营养琼脂培养基、0.5%TTC（氯化三苯四氮唑）溶液
样品制备
取g（mL）样品以mL无菌生理盐水稀释为1:10样品稀释液。
实验步骤
1、用灭菌吸管吸取1：10稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀，制成1:100检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000，1:10000，……等，每个稀释度应换1支吸管。
备注：
项目编号
样品名称
检测项目
铜绿假单胞菌
样品性质
收样时间
检测时间
环境条件
温度： ℃ 湿度： %
检测依据及方法
《化妆品安全技术规范》2015版 第五章 微生物检验方法 2 菌落总数检验方法
设备及编号
电热恒温培养箱DHP-9082B（KLM-YQSB-006）、生物安全柜BHC-1300ⅡA2（KLM-YQSB-002）、立式蒸汽灭菌器LDZM-60KCS-Ⅱ（KLM-YQSB-022）、恒温恒湿培养箱HSP-150BE（KLM-YQSB-007）、水浴锅HH-4双列四孔（KLM-YQSB-017）
3、为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
4、菌落计数方法：先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用5倍~10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
2、将融化并冷至45℃~50℃的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿， 置36℃±1℃培养箱内培养48h±2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培养48h±2h，为空白对照。
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，常见于土壤、水体和人体的各种环境中。
铜绿假单胞菌在医院感染中占有重要地位，对多种抗生素具有耐药性，且能产生多种外毒素和酶，致病力强。
因此，对于铜绿假单胞菌的检验方法十分关键。
一、样本采集与保存铜绿假单胞菌的检验样本主要包括病人的分泌物、组织、血液和环境中的物品等。
在采集样本前，应做好手部消毒，并使用无菌的采样器具进行采集。
分泌物样本应用拭子进行擦拭，血液样本应用无菌注射器采集，组织样本应用无菌手术器械进行切取。
采集的样本应放入无菌容器中，并迅速送至实验室进行检验。
如果无法立即送检，应将样本保存在4℃的冰箱中，避免细菌的繁殖。
二、铜绿假单胞菌的培养与鉴定1. 培养条件铜绿假单胞菌在常规的培养基上生长良好，如血琼脂、肉汤琼脂、MacConkey琼脂等。
其中，肉汤琼脂是常用的选择，其成分为牛肉膏和琼脂，可提供足够的营养物质供细菌生长。
在培养前，应先将琼脂烧开，然后冷却至50℃左右，将琼脂倒入培养皿中，使其凝固。
2. 鉴定方法铜绿假单胞菌的鉴定主要包括形态学观察、生理生化试验和分子生物学检测等。
（1）形态学观察：铜绿假单胞菌在琼脂培养基上生长出大片绿色的菌落，有金属光泽，边缘清晰。
菌落直径一般在2-3mm左右，表面光滑，整体呈圆形或不规则形状。
（2）生理生化试验：铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性菌，对氧耐受性强，可在无氧和有氧条件下生长。
其产生的酶包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，可以通过相关的生化试验进行检测。
（3）分子生物学检测：通过PCR方法对铜绿假单胞菌的特异基因进行扩增和检测，可以快速准确地鉴定出铜绿假单胞菌。
三、铜绿假单胞菌的药敏试验铜绿假单胞菌对多种抗生素具有耐药性，因此，进行药敏试验可以指导临床的抗菌治疗。
常用的药敏试验方法有纸片扩散法和肉汤稀释法。
纸片扩散法是将含有不同抗生素的纸片放置在琼脂培养基表面，待细菌生长后，观察菌落周围的抗生素是否产生抑制圈，从而判断细菌对抗生素的敏感性。
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检验依据：GB/T8538-2008
样品制备：
釆用滤膜法。将250mL水样用孔径为的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂选择性培养基上，于36±1℃培养20-24h.
检验项目
现象
结果
分 离
培 养
假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂
要求
36±1℃；20h～24h。
培养
___日___时至___日___时
检验项目
确
证
性
试
验
营养琼脂
要求
36±1℃；20h～24h。
培养
___日___时至___日___时
氧化酶试验
要求：用玻璃棒，将适量的纯种培养物涂布在试纸上。10S内显色
金氏B(King`s B) 培养基
要求
36±1℃；20h～24h。
培养
___日___时至___日___时
乙酰胺肉汤
要求
36±1℃；20h～24h。
培养
___日___时至___日___时
计数
菌落计数公式: N=P+F(cF/nF)+R(cR/nR)
实验
结果
阴性:
阳性:
CFU/250mL
备注
P: 显兰/绿色的菌落数。
F: 显荧光的Hale Waihona Puke 落数。R: 显红褐色的菌落数。
nF: 进行产氨测试的荧光的菌落数。
cF: 产氨阳性的荧光的菌落数。
nR: 进行产氨. 氧化酶. 金氏B培养基上显荧光测试的红褐色菌落数。
Cr: 产氨. 氧化酶. 金氏B培养基上显荧光测试均呈阳性的红褐色菌落数。