水牛角清凉茶中水牛角水解工艺优化研究
水牛角水溶性物质化学成分研究
水牛角水溶性物质化学成分研究作者：程静来源：《科学与财富》2015年第33期摘要：通过研究水牛角中的水溶性物质的化学成分，来建立相应的分析鉴定方法。
以shotgun蛋白质鉴定技术来研究水牛角中的蛋白质类物质，确定为角蛋白、胶原蛋白和桥粒蛋白等结构；以超滤系统和LC-Ms/Ms方法来鉴定水牛角中的肽类物质，确定为角蛋白与胶原蛋白的C末端肽段与非C末端肽段；通过对照，确定水牛角中的次黄嘌呤、尿苷、鸟苷及腺苷等四种核苷类物质。
关键词：水牛角水溶性物质蛋白质肽类鉴定方法《名医别录》记载水牛角性味苦咸，具有清热解毒定惊之功效。
水牛角在现代医学研究中，得出在解热、镇静等方面疗效突出。
作为中医临床中采用药材，水牛角在治疗热病头痛、发斑发疹、出血、高热、小儿惊风及咽喉肿痛等病症中应用较广。
从传统用法来看，水牛角无论是在单用或组方使用中，通常以水煎煮方式来提取，可见其水溶性物质是其功效的物质基础。
现代医疗技术研究表明，在水牛角中含有多种水溶性物质，如蛋白质、氨基酸类、多肽类及核苷类等物质。
当前的研究主要集中在水解氨基酸、无机元素及甾醇类小分子物质的分析，对水溶性大分子的研究还缺乏相应的鉴定方法。
为此，我们从串联质谱技术运用中，结合shotgun技术来对水牛角中水溶性成分进行定性和定量分析，以获取快速鉴定的方法，并从质谱Ms/Ms图谱与数据库进行比对，确定水溶性物质中蛋白质或多肽的来源。
1 材料及设备本例中所选用的水牛角药材来自淮安市某屠宰场，并符合《中国药典》（2010年版）鉴定标准要求；本例中对水牛角水提液的制备上，参照《中国药典》工艺，首先进行去角塞、洗净晾晒后破碎，将浓缩粉进行调制。
本例中所用试剂主要有碳酸氢钠、十二烷基硫酸钠（SDS），二硫苏糖醇（DTT），以及胰蛋白酶（promega质谱测序级）；所用仪器主要有戴安U3000纳升液相系统，Thermo LTQ Orbitrap XL质谱仪，美国Merck Millipore公司的超滤系统，德国Sartorius公司的BP211D电子天平，美国Labconco公司的冷冻干燥机。
水牛角水提取工艺的研究
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9. 517 9. 695 6. 564 9. 686
9. 742 9. 710 10. 088 9. 225
9. 189 9. 043 11. 796 9. 537
0. 051558 0. 096691 4. 745518 0. 036896
0. 553 0. 667 5. 232 0. 461
倍量水提取 6h。结果表明 :最佳工艺浸出物和含氮量均为 9 次正交试验中的最高值 。由此可见 ,该正交试验的设计合 理 ,结果理想 。
(收稿日期 : 2005 - 02 - 04)
主题词 水牛角 /分离和提纯 中药制药工艺
水牛角为牛科动物水牛 (Bubalus bubalis L innaeus) 的 角 。性苦 、寒 ,归心 、肝经 。具有清热解毒 、凉血 、定惊之功 。 主要用于温病高热 ,神昏谵语 ,发斑发疹 ,吐血衄血 ,惊风 ,癫 狂 。临床上水牛角饮片提取时间较长 。本试验以浸膏得率
由表 2中极差 R值大小显示 ,各因素作用主次分别为 C >B >A;方差结果表明 , A、B 因素的影响没有显著性意义 ( P > 0. 05) , C因素的影响具有非常显著性的意义 ( P < 0. 01) ,两 项指标考察结果均以 A2B2 C3 组合为佳 。故最终选择 A2B2 C3
组合为最佳工艺 ,即加水回流提取 3次 ,第 1次加 14倍量水 提取 10h,第 2次加 12倍量水提取 8h,第 3次加 12倍量水提 取 6h。此工艺条件为正试验中的第 5号验证试验 。
表 2 水提工艺正交试验及结果
水牛角的药用——兼答广西宜州市北牙樊茂春及湖南、广东农村读者
乏
本刊顾 问、香港注册 中医学院教授
由 于 非洲 犀 牛 被联 合 国列 为 珍 稀保 护 动 物 ，具 有 清 热 定惊 、凉 血 解 毒 功 效 的犀 角 已 被禁 用 。为 此 ，中医 药 学 界 人 士 提 出 以水 牛 角 代 替 犀 角 。经 过 广泛 临 床 应 用 ，证 明水 牛 角 完 全 可 以 代 替 犀 角 ，用 以治 疗 温 热性 疾 病 。 在 南 方 省 区 广 大 农 村 都 有 水 牛 生 长 。现介 绍 水 牛 角 的应 用 方 法 ，以便 农 村 中 医药 爱 好 者 参 考使 用 。 水 牛 角 具 有清 热 、凉 血 、解 毒 的效 能。可以配合其他 中药治疗热病头 痛 、
潘文昭
克 ，射 干 １ 克 。 如 疼 痛 不 减 ，加 乳 香４ ０ 克 ，没 药 ３ 克 。３ 桃 体 或 咽部 有 脓 点 ． ５ ． 扁 或 脓 性 分 泌 物 者 ，加 生 大 黄 ８ （ 洗 ， 克 酒 后下） ，败 酱 草 １克 ，天 花粉 １克 。 ５ ２ （ ） 治 误 服 解 热 镇 痛 药 后 ，皮 肤 二 起 紫 红 色 皮 疹 ，发 热 ，舌 质 红 ，苔 略 黄 ，脉 弦 数 。 可 用 ：水 牛 角 ３ 克 （ ５ 切 丝） ，生 地 黄 ３ 克 ，赤 芍 １克 ，牡 丹 皮 ０ ５ １ 克 ，紫 草 ｌ 克 ，连 翘 １ 克 ，绿 豆 ４ ２ ５ ２ ５
随症 加减 ：１ 血 者 ，加 白 茅 根 ３ ． 尿 ５ 克 ，茜草１ 克。２大便见血者 ，加槐 花 ５ ． １ 克 ，地 榆 １ 克 。 ３ 热 者 ，加 青 蒿 １ ５ ２ ． 发 ５ 克 （ 下） 后 ，柴 胡 ９ ，黄 芩 Ｉ克 。 克 ２ （ 治 食 硬 壳 软 体 动物 后 ，尿 黄 ， 三） 右 上腹 肝 区疼 痛 。 由于 河 、湖及 海洋 被 污染 ，生 活 在 水底 的硬 壳 软 体 动 物 如海 螺 、蚝 、蚌 、蛤 等 体 内 含有 不少 有 毒 的 重 金属 ，如 铅 、汞 ，如 一 次 进食 大量 水 底硬壳软体动物 ，可导致肝 损害 ，出现
水牛角清凉茶中水牛角水解工艺优化研究
食品科学现代农业科技2015年第1期因素水平酸浓度(A )∥mol/L水解时间(B )∥h加酸量(C )∥倍12610248836106表1L 9(34)正交试验因素水平设计摘要[目的]选优水牛角清凉茶中水牛角的水解工艺。
[方法]以提取物中总氮含量为考察指标,采用正交试验,以酸水浓度、酸水用量及水解时间为因素,优选最佳水解条件,同时对酸碱水解的优选、醇沉浓度及水洗倍数等参数进行了筛选。
[结果]最佳工艺确定为8倍量4mol/L 浓度的硫酸水解10h ,浓缩至相对密度为1.10~1.15(50℃)的浸膏,60%乙醇醇沉,4倍量水水洗,最后配制成均一稳定的水牛角清凉茶。
[结论]优选的水解工艺提取的氨基酸含量较高,工艺稳定可行。
关键词水牛角;正交试验;水解工艺;优化;总氮含量中图分类号R284.1文献标识码A 文章编号1007-5739(2015)01-0290-02水牛角清凉茶中水牛角水解工艺优化研究刘臣(苏州市职业大学,江苏苏州215104)水牛角清凉茶由水牛角、金银花等组成,主要用于缓解热病神昏、咽喉肿痛、烦躁易怒等不适症状。
主药水牛角为牛科动物水牛的双角,富含胆甾醇及丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、亮氨酸、酪氨酸、丝氨酸、缬氨酸等人体必须的氨基酸营养成分[1],具有清热[2]、凉血、解毒、镇静[3]的功效,主治热病头痛、壮热神昏、斑疹、吐衄、小儿惊风、喉痹咽肿等疾病[4],本品咸寒,专入血分,善清心肝胃三经之火而有凉血解毒之功,为治血热毒盛之要药。
其清热凉血解毒之功与犀角相似而药力较缓,可作犀角的代用品。
水牛角中氨基酸总量通常以凯式定氮法测定总氮含量计。
本研究采用正交试验设计法,以总氮得率为指标,优化水牛角的水解工艺条件,并对酸碱水解的优选、醇沉浓度以及水洗倍数等参数进行了筛选,从而确定了水牛角的最佳水解工艺。
1材料与方法1.1药品与仪器试验用水牛角饮片购于哈尔滨市药材公司中药饮片厂。
试验仪器:凯式定氮仪B-324K 型(北京阅微堂科技发展有限公司);AL 型梅特勒电子分析天平(瑞士);YZG 型真空干燥箱(天津隆业轻工机械有限公司)。
正交实验优选水牛角酶解的提取工艺研究
正交实验优选水牛角酶解的提取工艺研究目的:研究水牛角酶解的最佳提取工艺。
方法:以蛋白质含量为指标,通过正交实验筛选水牛角的最佳酶解提取条件。
结果:水牛角最佳酶解工艺为:胃蛋白酶,pH=2,加酶量700 U/g,温度39℃,时间4 h。
结论:正交实验确定的条件可较好地应用于水牛角的酶解提取。
标签：正交实验;水牛角;酶解;提取工艺水牛角始载于《名医别录》,为牛科动物水牛BubalusbubalisLinnaeus的角,为临床常用中药,性寒,味苦,具有清热解毒、凉血、定惊的功效,用于温病高热、神昏谵语、发斑发疹、吐血衄血、惊风、癫狂等症[1]。
文献资料表明对水牛角的活性物质及药理活性研究较少,原药材直接口服,生物利用度低,我们模拟人体胃肠道环境,采用生物酶仿生提取技术,以正交实验筛选水牛角粉的提取工艺,为进一步研究奠定基础。
1 实验材料1.1 仪器与设备电子天平;恒温水浴锅;H198107笔式酸度计;UV-120-02分光光度计;NO1506-017紫外分光光度扫描仪。
1.2 试剂与材料水牛角粉(成都千方中药饮片有限公司,国药准字Z51022471);胃蛋白酶(活性1∶4600,济南亚康力诺生物工程有限公司,批号070323);牛血清白蛋白(Roche公司);考马斯亮蓝G250(上海化学试剂站分装厂,批号061005)。
2 实验方法与结果2.1检测方法的建立2.1.1 考马斯亮蓝试剂的配制精密称取考马斯亮蓝G 250 10 mg于100 ml容量瓶中,加5.00 ml乙醇使溶解,再加85%磷酸溶液10 ml,蒸馏水定容至刻度[2]。
2.1.2标准蛋白质溶液的制备精密称取25 mg牛血清白蛋白置于25 ml的容量瓶中,定容至刻度,配成1 000 μg/ml的标准蛋白质溶液。
2.1.3 样品液的制备称取水牛角粉 1.00 g,加入胃蛋白酶0.55 g,9.00 ml蒸馏水中,浓盐酸调pH=(2.00±0.01),在(37.0±0.1)℃水浴中提取4 h。
一种清开灵原料的水解方法[发明专利]
![一种清开灵原料的水解方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/580213c9dd36a32d727581a3.png)
专利名称：一种清开灵原料的水解方法
专利类型：发明专利
发明人：保冰怡,王家祺,黄孟秋,黄子健,司徒少金申请号：CN201410544038.5
申请日：20141015
公开号：CN104274493A
公开日：
20150114
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种清开灵原料的水解方法。
所述水解方法为把珍珠母及水牛角粉混合后同时进行加热回流水解，水解条件为：采用摩尔浓度为2~8mol/L的硫酸溶液，混合粉末与硫酸溶液的料液比为1g:2~8mL，水解时间3~10小时。
所述的方法，采用合适浓度的硫酸溶液同时对水牛角和珍珠母进行水解，简化了工艺，同时在所述条件下，获得的活性成分氨基酸含量较现有方法高。
申请人：广州白云山明兴制药有限公司
地址：510000 广东省广州市海珠区工业大道北48号
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：冯振宁
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一种清热祛湿凉茶的制备方法[发明专利]
![一种清热祛湿凉茶的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9d9ec6d90912a216157929e4.png)
专利名称：一种清热祛湿凉茶的制备方法专利类型：发明专利
发明人：李建华
申请号：CN201810509684.6
申请日：20180524
公开号：CN108478720A
公开日：
20180904
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种清热祛湿凉茶的制备方法，属于凉茶技术领域。
具体制备过程如下：将水牛角、桂圆、甘草、紫苏、杏仁、陈皮、桔梗、桑葚、玉竹、燕麦、山楂、芡实和覆盆子放于反应器中，用硫酸浸泡；向酸浸后的浸泡液中加入乙酸乙酯，水浴搅拌内回流动态提取，冷却后于分液漏斗中分离出有机相，然后放入旋转蒸发仪中将乙酸乙酯蒸出；将残夜移入蒸发皿，水蒸气浴浓缩后放入冰箱冻干；将冻干粉末、金银花和绿茶茶叶混合后灭菌，封袋包装。
本发明所述制备方法原料易得、各中药组分配比合理，结合双向动态提取工艺，中药中有效组分提取率较高，能够使药效得到很好地保证，药效更佳。
申请人：苏州市李良济健康产业有限公司
地址：215163 江苏省苏州市高新区科灵路78号
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：楼高潮
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水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用研究
水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用研究作者：李宝国黄丽华杜雪曲东平张孝卫来源：《中国当代医药》2009年第13期[摘要] 目的:研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。
方法:通过观察小鼠对戊巴比妥钠催眠作用的反应、对脂多糖引起死亡的抵抗及用药后小鼠凝血时间、自发活动和对抗感染的影响和作用,研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。
结果:与生理盐水(NS)对照组比较,相对分子质量30 kD酶解液有明显的止血作用(P5但5但[关键词] 水牛角;相对分子质量;酶解液;药理作用[中图分类号] R965 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2009)07(a)-016-02水牛角为牛科动物水牛BubalusbubalisLinnaeus的角,具有清热解毒、凉血、定惊的功效,用于温病高热、神昏谵语、发斑发疹、吐血衄血、惊风、癫狂等症,疗效显著[1]。
目前关于水牛角的活性物质及药理活性研究的文献资料较少,我们按照相对分子质量大小把水牛角酶解液分成不同的相对分子质量段,对不同相对分子质量段的酶解液进行了一系列药理实验,发现水牛角不同的相对分子质量酶解液,药理作用不同,为进一步研究奠定基础。
1 实验材料1.1 仪器及设备电子天平;高速离心机。
1.2 药品及试剂戊巴比妥钠;脂多糖;不同相对分子质量的水牛角酶解液:5但30 kD。
1.3 动物及菌株昆明种小鼠18～22 g,许可证号SCXK(鲁)20030004;大肠埃希菌标准菌株(菌种号ATCC25922 )。
2 方法与结果2.1 对戊巴比妥钠催眠作用的影响参照文献[2],各组连续给药4 d,后给予所有受试小鼠注射戊巴比妥钠,以小鼠翻正反射消失作为入睡开始时间,以翻正反射消失至恢复正常的时间为睡眠时间。
水牛角不同相对分子质量的酶解液具有明显的镇静作用(P2.2对脂多糖引起小鼠死亡的抵抗作用参照文献[3],各组连续给药6 d;第3天时给予所有受试小鼠皮下注射脂多糖,然后记录3 d内每组动物的死亡数量。
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水牛 角酸 碱 水 解 条 件 对 比 结 果 见 表 ２ 。 从 表 ２可 以 看 出， 酸 水解 工艺 所得 总 氮含 量明 显比 碱水 解 工艺 高 ， 证 明 用 硫酸 水解 水牛 角比 用碱水 解更 合理 。
了筛 选 ， 从 而确 定了水 牛角 的最佳 水解 工艺 。
１ 材 料 与 方 法
表１ Ｌ （ ３ ） 正 交 试 验 因 素 水 平 设 计
因素水平 酸浓度 （ Ａ ） ／ ／ ｍ ｏ Ｕ Ｌ 水解时间（ Ｂ ） ｆ ｈ 加酸量 （ ｃ ） ∥倍
２份 为 １个平 行样 ， 分别 浓缩 至相 对 密度 为 １ ． ０ ５ 、 １ ． １ ０、 １ ． １ ５ 、 １ ． ２ ０ （ ５ ０℃） 的清膏 ， 冷却 ， 各 加 乙醇至 ６ ０ ％， 静置 ２ ４ ｈ ， 过滤 ，
１ ． １ 药 品 与 仪 ห้องสมุดไป่ตู้
试 验 用 水 牛 角 饮 片 购 于 哈 尔 滨 市 药 材 公 司 中药 饮 片
水牛 角按 优选 工 艺水 解 、 浓缩、 醇沉、 回收 乙 醇 ． 分 别取 ２个 处方 量 的水 解浓 缩膏 平均 分 为 ８份 ， 每 ２份 为 １个平 行 样 ． 混匀 ， 搅 拌 下 分 别 缓缓 加 入 ３ 、 ４ 、 ５ 、 ６倍 量 水 ， 充 分搅 拌 ， 静 置２ ４ｈ ， 滤取 上清液 ， 浓 缩 至相对 密度 为 １ ． １ ０ ～ １ ． １ ５ （ ５ ０℃） 的
清膏 。 分 别测 定 固形物及 总 氮的含 量 。
２ 结果 与分析
厂。 试验 仪器 ： 凯 式定 氮仪 Ｂ 一 ３ ２ ４ Ｋ型 （ 北 京 阅微堂 科技 发 展
有 限公 司 ） ； Ａ Ｌ型 梅特 勒 电子 分析 天平 （ 瑞士 ） ； Ｙ Ｚ Ｇ型 真空 干燥 箱 （ 天 津 隆业 轻工 机械 有限 公 司 ） 。 试 验 用硫 酸 、 氢 氧化
凉 茶。 『 结 论１ 优 选 的 水 解 工 艺提 取 的 氨 基 酸 含 量 较 高 ， 工 艺 稳 定 可行
关键 词 水牛 角； 正 交试验 ； 水解 工 艺 ； 优化； 总 氮含量 中图分 类 号 Ｒ ２ ８ ４ ． １ 文 献标 识码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ７ — ５ ７ ３ ９ （ ２ ０ １ ５） Ｏ １ — ０ ２ ９ ０ — ０ ２
水牛 角清 凉茶 由水 牛 角 、 金银 花等 组成 ， 主要 用 于缓 解 热病 神 昏 、 咽 喉肿 痛 、 烦躁 易 怒 等 不适 症状 。 主药 水牛 角 为 牛科 动 物 水牛 的双 角 ， 富 含 胆 甾醇 及 丙氨 酸 、 精 氨酸 、 天 冬 氨酸 、 胱氨酸 、 亮氨酸 、 酪氨 酸 、 丝氨 酸 、 缬氨 酸 等 人体 必 须 的氨 基酸 营 养成 分【 ｌ 】 ， 具有 清 热闭 、 凉血 、 解毒 、 镇 静阁 的功效 ， 主 治 热病 头 痛 、 壮热神昏 、 斑疹 、 吐衄 、 小 儿惊 风 、 喉痹 咽 肿 等疾 病 ， 本 品咸 寒 ， 专 入血 分 ， 善清 心 肝 胃三 经 之 火而 有凉 血解 毒 之功 。 为治 血热 毒盛 之要 药 。 其 清热凉 血 解毒 之 功 与 犀 角相似 而 药 力较缓 ， 可作 犀角 的代 用 品 。 水牛 角 中氨基 酸 总量 通常 以凯 式定 氮法测 定总 氮含量计 。 本研究 采用正 交试 验设计 法 ， 以总 氮得 率为指标 ， 优化 水牛 角的水 解工 艺条件 ， 并对 酸 碱 水 解 的优 选 、 醇沉 浓 度 以及 水 洗倍 数 等 参 数进 行
钡 等均 为分析 纯 。
１ ． ２ 试 验 方 法
１ ． ２ ． １ 水 牛 角酸 碱 水 解 条件 的对 比 试验 。 一般 动 物 药 的 蛋
２ ． １ 水 牛 角 酸 碱 水 解 条 件 对 比试 验 结 果
白质水 解 多 采 用酶 解 法 或酸 碱 水 解 工艺 。 本试 验 采 用 酸
浓缩 ， 分别 在醇 沉前 后测 定其 总氮 的含量 。
１ ． ２ ． ４ 水 牛角水 解膏醇 沉条件 对比 试验 。 水牛 角按 优选 工艺 条件 水 解 ， 取 ２倍 处方 量 的水 牛 角 水解 液 浓 缩 至 相 对 密度 为１ ． １ ０ — １ ． １ ５ （ ５ ０ ｃ Ｃ） 的清膏 ， 冷却， 平 均分 为 ８份 ， 每 ２份 为
食品 科学
现 代农 业科技
２ ０ １ ５年 第 １ 期
水牛角清凉茶 中水牛角水解工艺优化研究
刘 臣
（ 苏 帅『 市职业大学 ， 江苏苏州 ２ １ ５ １ ０ ４）
摘要 『 目的１ 选优 水 牛 角清凉 茶 中水牛 角的水 解工 艺 。 『 方 法】 以提取 物 中总氮含 量 为考 察指标 ， 采 用 正 交试 验 ， 以酸 水 浓度 、 酸 水 用量 及 水解 时间 为 因素 ， 优 选 最佳 水解 条件 ， 同 时对 酸碱 水 解的优 选 、 醇沉 浓度 及 水洗 倍数 等 参数 进 行 了 筛选 。 『 结 果１ 最佳 工艺 确定 为 ８倍 量 ４ｍｏ ｌ ／ Ｌ浓 度 的硫 酸水 解 １ ０ ｈ， 浓 缩至 相对 密度 为 １ ． １ ０ ～ １ ． １ ５（ ５ ０℃ ） 的浸 膏 ， ６ Ｏ ％ 乙醇 醇沉 ， ４倍 量水 水 洗 ， 最后 配制 成 均一 稳 定的 水 牛 角清
１个平 行样 ， 分别 加 乙醇 至 ５ ０ ％、 ６ ０ ％、 ７ ０ ％、 ８ ０ ％， 静置 ２ ４ｈ ，
过滤 ， 回收 乙醇 至相 对 密度 为 １ ． １ ０ ～ １ ． １ ５ （ ５ ０℃） 的清膏 。 分别
在 醇沉 前后 测其 总氮 含量 。 １ ． ２ ． ５ 水洗 条 件 对 水 牛 角水 解 膏 中 有效 成 分 的 影 响试 验 。