移植性肿瘤动物模型
肿瘤动物模型构建实验技术
肿瘤动物模型得建立可以：（1）评价抗肿瘤免疫治疗得疗效；（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；（3）为肿瘤转移研究提供更好得研究平台；（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好得实验工具。
实验方法：诱发性肿瘤动物模型实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型就是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物得肿瘤等。
实验材料：肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右得封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。
除给普通食物外，饲以致癌物，即用0、25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0、025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0、005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0、06%DBA得饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1、5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量得肝癌诱发成功。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0、03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。
4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0、3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0、1 ml含1 mg）涂在动物得两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
（3）或用2、5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。
胶质瘤动物模型
5、转基因动物(transgenic animals)
转基因动物 通过实验手段把外源基因稳
定地整合至基因组，并能遗传 给后代的动物。 命名 C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg
Thank you for your attention!
Purpose: High-grade gliomas are closely related to the mesenchymal phenotype which might be explained by unorthodox differentiation of glioma cancer stem cells (gCSCs). We reasoned that other non-neural stem cells, especially mesenchymal stem cells (MSCs), might play a role in expresssing mesenchymal phenotype of high-grade gliomas. Thus we hypothesized that cells resembling MSCs exist in glioma specimens.
Bigner 等把浓缩的呼吸道合胞病毒 （Respiratory Syncytial Virus，RSV）注射到 新生犬脑内，经过一段潜伏期后全部发生脑胶 质瘤。
2、移植瘤模型—皮下移植瘤
移植瘤的接种方法
已建系的肿瘤细胞株 腹水瘤移植接种法 实体瘤移植接种法 （1）小块接种法 （2）肿瘤组织浆接种法
Presence of glioma stroma mesenchymal stem Cells in a murine orthotopic glioma model
不同方法建立小鼠肝癌原位移植瘤模型差异性的探讨
不同方法建立小鼠肝癌原位移植瘤模型差异性的探讨潘蕊;喻锟;张海亮;郑永仁;赵笑雨;唐钧泽;吴健铭;程欣【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2024(32)3【摘要】目的比较肿瘤细胞注射和肿瘤组织块移植方法建立小鼠肝癌原位模型的差异,为小鼠肝癌原位模型的建立提供技术参考。
方法取健康雄性KM小鼠,随机分为4组:A组注射小鼠肝癌H22细胞;B组注射腹水型肝癌H22细胞;C组采用小鼠肝癌组织块移植法;D组肝部注射生理盐水作为假手术组。
定期观察各组小鼠活动情况、体重变化。
记录4组小鼠的生存时间。
观察各组小鼠肝部成瘤状况、肿瘤程度、与腹腔脏器粘连程度和转移情况,并进行B超成像,检测血清中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)、异常凝血酶原(des-gamma-carboxyprothrombin, DCP)的浓度及苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化。
结果 A组、B组、C 组小鼠造模操作时间分别为(3.36±0.44)min、(3.30±0.41)min、(5.68±0.65)min。
建模第25天,A组、B组、C组小鼠成瘤率均100.0%,A组腹腔重度粘连率为40.0%,B组腹腔重度粘连率为60.0%,C组与D组均未出现重度腹腔粘连。
A组、B组、C组小鼠腹水出现率分别为40.0%、100.0%、0.0%;腹壁瘤出现率分别为30.0%、60.0%、0.0%。
B组小鼠还存在肝转移情况(40.0%)。
B超成像、血清AFP和DCP水平检测、组织病理学检查结果显示,与D组小鼠相比,A组、B组、C 组小鼠肝边缘均不光滑,回声欠均匀,可见稍低回声包块;保持AFP、DCP高分泌;存在大量炎症细胞与肿瘤细胞。
结论在第25天时,3种方法均可以建立肝癌原位移植模型,其中,相较于肝癌组织块移植,肿瘤细胞注射具有操作简单、肝内存在多个转移结节的特点。
而肝癌组织块移植相较于肿瘤细胞注射,则具有对腹腔等脏器影响较小等特点。
卵巢肿瘤原位移植动物模型的建立
卵巢肿瘤原位移植动物模型的建立刘艺杰;段刚;段萍;卢晓声;梅洁;华莹;吕杰强【摘要】目的:建立能够模拟临床肿瘤发展过程的卵巢癌动物模型.方法:将处于对数生长期的人卵巢癌细胞株SKOV3 (2× 106个/只)、A2780多水平细胞数(2×106个/只、5×106个/只、1×107个/只、1.5×107个/只和2×107个/只)裸鼠皮下注射,A2780(1.5×107个/只)腹腔注射.取SKOV3第3代连续传代皮下瘤组织进行裸鼠右侧卵巢包膜下移植.结果:卵巢癌细胞株SKOV3皮下注射、组织块原位移植成瘤率均100％.原位移植卵巢癌裸鼠6～8周时剖腹探查见局部形成较大包块,与周围组织发生粘连,腹腔暗红色血性积液伴脏器广泛性转移,淋巴结转移.卵巢癌A2780细胞株多水平细胞数皮下注射均未成瘤;腹腔注射8周时剖腹探查见腹腔内生成2～3 mL无色澄清腹水,双侧卵巢增大,脾脏明显增大,未能发现任何腹腔瘤块.结论:成功建立了临床转移模式的SKOV3卵巢癌肿瘤细胞原位移植动物模型；卵巢癌A2780细胞接种未能成瘤,可能是因其对宿主体内非特异性免疫反应较敏感.%Objective:To establish an animal model with ovarian carcinoma to simulate the clinical tumor development. Methods: Human ovarian carcinoma cell lines SKOV3 and multi-level A2780 in exponential phase of growth were inoculated subcutaneously in nude mice,A2780 cells were also inoculated intraperitoneally. The third generation of SK0V3 subcutaneous tumor was transplantated below the capsule of the right ovary. Results:Subcutaneous inoculations of human ovarian carcinoma SKOV3 cells and orthotopic transplantations of SKOV3 subcutaneous tumor both succeeded in all mice. Six to eight weeks after orthotopic transplantations,tumors invasion into surrounding tissues wereobserved,as well as dull red effusion with peritoneal metastasis and lymph node metastasis. The subcutaneous inoculation of multi-level cell linesA2780 all failed in tumor formation. Eight weeks after A2780 cells were injected in intraperitoneal cavity,2-3 mL colorless ascites appeared,o-varian and spleen grew obviously,but tumor was not detected. Conclusions: The SKOV3 orthotopically transplantated animal model was successfully established. The inoculation of A2780 cell lines failed in tumor formation,possibly due to their sensitivities to non-specific immunity in the host.【期刊名称】《国际妇产科学杂志》【年(卷),期】2012(039)004【总页数】4页(P373-375,封3)【关键词】卵巢肿瘤;癌;模型,动物;原位移植;淋巴转移【作者】刘艺杰;段刚;段萍;卢晓声;梅洁;华莹;吕杰强【作者单位】325000 温州医学院附属第二医院妇科;南方医科大学南方医院影像中心;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科【正文语种】中文卵巢癌为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，起病隐匿，但缺少能早期发现的敏感而特异的诊断方法；转移复发率高，且在治疗过程中易对化疗药物产生耐药性，死亡率极高，已跃居妇科恶性肿瘤的首位［1］。
实验方法总结(3)：动物模型部分——【国自然标书写作】
1实验方法总结（3）：动物模型部分1、研究肿瘤细胞增殖 (1)2、研究肿瘤细胞转移 (2)2.1. 体外(浸润模型) (2)2.2. 体内(转移模型) (2)3、研究肿瘤细胞耐药 (4)3.1. 耐药细胞株的建立 (4)3.2. 裸鼠移植瘤耐药模型的建立 (5)从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下：从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析：1、研究肿瘤细胞增殖细胞准备：GeneA 敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。
分为：空白对照实验动物肿瘤模型自发性肿瘤模型 诱发性肿瘤模型移植性肿瘤模型 人体肿癌的异种移植性原位诱发 异位诱发 同种可移植性肿瘤 异种可移植性肿瘤 原位移植 异位移植组、阴性对照组、实验组。
取Balb/c裸鼠，雄性，6周龄，每组10只，适应一周后进行肿瘤细胞注射。
XXX细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用PBS悬浮，在Balb/c裸鼠侧腹部皮下接种。
每只接种2×106个细胞，注射体积为100 μL。
此后，每隔5天测量注射部位肿瘤的体积。
30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一份4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80℃冻存。
2、研究肿瘤细胞转移肿瘤转移的模型包括两大类：体外(浸润模型)和体内(转移模型)。
体外(浸润模型)：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。
体内模型主要研究肿瘤细胞的转移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。
2.1. 体外(浸润模型)例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组10只。
小鼠麻醉后头部正中切口，剥离骨膜后钻孔(坐标是冠状缝后0.5 cm，矢状缝右侧2.5 cm) 。
建立移植型肺癌动物模型的最新方法和进展
胸 腺切 除后 ， 经放射线照射 的小鼠来建模或者给裸 鼠辅 以 ｘ射线照射处理 ， 能够使移植肿瘤 的成功率大大增加 。夏 曙等 的实验 发 现 ，Ｇ ６ ｙ全身 照射 昆 明小 鼠后再 接 种人 肺癌 Ａ４ ５９细胞 ， 移植瘤的成瘤率 可达 ８ ％ ， ０ 移植瘤可以持续存在
１ ． 小鼠 ．１ １
【 文献标识码 】 Ａ
【 收稿 １期 】０７０—４ ３ ２０— ５ １
在众 多的肺癌模 型研 究中 ，尤其是移植型肺癌模型 ， 是 将人肺癌 细胞 移植 到动物体 内传代生长 ， 移植 的肿 瘤细胞 其 形态学特征 ， 染色体 数量 ， 同工酶水平 等仍保持不变 ， 临床 对
龄应该尽可能的年轻 。
Ｎ Ｋ细胞 最能反 映年龄相关性 的变化 ，研 究表明无胸腺 小 鼠的 Ｎ Ｋ细胞水平越 高 ， 人类肿瘤细 胞的转移率越低 。例
如 ３周龄 的小 鼠的 Ｎ Ｋ细胞 活性 就 比 ６ ８ 的低 ， ￣周 此外 给予
环磷 酰胺 、 １ ３雌二醇 或抗 Ｎ Ｋ抗 体抗小 鼠 Ｉ一 Ｌ ２受体 １一链 ３ 特异性单 克隆抗体 （ Ｍ ３１ 和 ａｔ ａｉｏ Ｇ 抗 体等治疗 Ｔ 一１ ） ｎ —ｓ ｌ Ｍ１ ｉ ａ 后， 建立 鼠类 肿瘤的转移模 型容易成 功 ， 且选择接 种 的年 并
维普资讯
重庆 医科大学学报 ２ ０ ０ ７年第 ３ ２卷第 １ ２期 （ｏ ｒａ ｆ ｏ ｇ ｉｇＭｅ ｉ ｌ ｎｖ ｒｉ ０ ７ Ｖ １２ ｏ１ ） Ｊ ｕｎ ｌ ｎ ｑｎ ｄｃ ｉｅｓｔ ２ ０ ． ｏ． Ｎ ．２ ｏ Ｃｈ ａＵ ｙ ３
一
１ 做 ｘ射 线 照 射 可 以提 高 移植 成 功 率 ． ４
常用抗癌 药物 敏感性也 大致相同 ， 以常用来做 疾病 定向性 所
IRM-2小鼠移植性肿瘤模型的生物学特性
ｓ ａｎ ．Ｉ ２ｍｉｅ ｈ ｄ ａ ｈｇ ｅ ｅｇ ｔｉｃｅｓ ｈ ｎ Ｃ ７ Ｌ６ ｍｉｅ（ ＜０．５ ｔ ｉｓ ＲＭ一 ｃ ａ ｉｈ ｒｗ ｉｈ ｎ ｒａｅ ｔａ ５ Ｂ ／ ｃ Ｐ ｒ ０ ）．Ｔ ｅｅ ｗ ｓ ｎ ｉｎｆ ａｔｄｆ ｒｎ ｅ ｉ ｈ ｒ ａ ｏ ｓｇ ｉｃｔ ｈ ｘｌ ｒ ｏｓ ｎ ｅｃ Ｒ ２ ａｄ Ｃ ７ Ｌ６ ｍｏ ｓ ．Ｔ ｅｔｍｏ ｒｗｈ，ｍｏ ｓ ｕｖｖｌｔ ， ｕ ｃ ｔｎ ｏ ｓ ｉｊｃ ｎｏ ｔｅ ａｉａｙ ｆｓａｉ ａｈ Ｉ Ｍ・ ｎ ５ Ｂ ／ ｕｅ ｈ ｕ ｒｇｏ ｔ ｙ ｅ ｌ ｕｅ ｓｒｉａ ｉ ｍｅ
无 明显 差 别 。结 论 ＩＭ ２ 鼠 与 Ｃ ７ Ｌ６小 鼠 Ｌｗｓ 癌 模 型 生 物 学 特 性 基 本 一 致 ， Ｍ ２小 鼠 可 以建 立 稳 定 的 Ｒ 一小 ５Ｂ／ ｅ ｉ肺 Ｉ Ｒ Ｌｗｓ ｅ ｉ肺癌 肿 瘤 模 型 应 用 于 实 验 研 究 。
【 关键词 】 小 鼠， Ｍ ２小 鼠 ，５Ｂ ／；ｅ ｉ肺癌 ； 型 ， Ｉ 一； Ｒ Ｃ ７ Ｌ６ Ｌｗｓ 模 动物 【 中图分类号 】Ｒ３ 一３ 【 文献标识码 】Ａ 【 文章编 号】１７．８６２０ ）２０４ ．３ ６ １ ５ （０８ １— ２０ ７ ０
ｅ Ｌ ｗｉ ｕ ｇ ｃ ｎｃ ｒ Ｍ ｅ ｈ ｄ Ｔｕ ｒ ｃ ｌ ｓ ｓ ｅ ｓｏ ｓ ｍａ ｅ ａ ｏ ｃ ｎｒ ｔ ｎ ｏ × １ ｍＬ． ０． ｍＬ ｃ ｌ ｕ ｐ ｎ ｉｎ ｗａ ｓｌ ｎ ａ ｅ ． ｔｏ ｓ ｍｏ ｅｌ ｕ ｐ ｎ ｉｎ ｗａ ｄ ｔｃ ｎ ｅ ｔａｉ ｆ２ ｏ ０／ ２ ｅｌ ｓ ｅ ｓｏ ｓ ｓ
； 、 ｒ、、； １ 、
ＩＭ一 鼠移 植 性 肿瘤 模 型 的生 物学 特 性 Ｒ ２小
肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立
文献标 识码 ：Ｂ
文 章编 号 ：１ ７ － １ ４ （ ０ １ ７ ０ ０ － ２ ６ １ ８ ２ １ ）０ － ０ ５ ０ ９
Ｅｓａｂ ｉｈｍ ｅ ｆ Ａ ｕｌｉ ｕｇ ｅ ｉｔ ｎｃ ｕｍ ａ ｎｇ ｎｃ ｒ Ａ ５ ９ Ｃｅ ｕｄｅ Ｍ ｉ ｅ Ｘｅ ｔ ｌｓ ｎｔ ｏ Ｍ ｔｄｒ Ｒ ｓｓｇｒ ｆ ａｔ
ｃｌ ｒ ｅｔ ｔ ｉ ｌｔ Ｄ ）ｏｉｄ ｃ ｌｄｕ ｓ ｔｎｅ ＭＴ ｓａ ｓ ｓｄｔ ｅｅｔｈ ｙｏｏ ｉａ ｔ ｉ ｆ ｅ ｓ ｅｔ ａｅ ｗｉ ｃ ｐａｉ ＤＰ ｔ ｕｅｍｕｔ ｒｇｒ ｉａ ｃ． Ｔａｓｙｗａ ｅ ｄｔｃ ｅ ｔｔｘｃ ｃｉ ｔ ｏ ｌ ｗｅ ｒ ｄ ｈ ｓ ｎ（ ｎ ｉ ｅｓ ｕ ｏ ｔ ｃ ｖ ｙ ＤＤＰａ ａ ｓＡ５ ９ａｄＡ５ ９ ｇｉ ｔ ４ ｎ ４ ／ ｎ
Ｔ ＡＯ － ｎ ， Ｌｉ ｙａ ｇ ＬＩＪａｎｙｉｇ２ ｉ － ｎ
ｆ Ｄｅ ｒｍｅ ｔｆＰ ｔｏｏｙ Ｇｕ ｎ ｚ ｏ ｄｃ ｌ ｌ ｇ ， ａ ｇ ｈ ｕ５ ０ ８ ． ｈｎ ， １ ｐａｔ ｎ ａｈ ｌｇ ， ａ ｇ ｈ ｕＭｅ ｉａ ｌ ｅ Ｇｕ ｎ ｚ ｏ １ １ ２ Ｃ ｉａ ｏ Ｃｏ ｅ ＂
异。结 论 成 功建 立 了肺癌 Ａ５ ９ＤＤＰ耐 药细 胞裸 鼠移植 瘤模 型 ，可 为肺 癌耐 药的研 究提 供较理 想 的 动物 模 型。 ４／ 【 键 词】肺 癌 ；Ａ５ ９细胞 ；肿 瘤 多药耐 药 ；裸 鼠移 植瘤 模型 关 ４
中图分 类号 ：Ｒ ３ ． ；Ｒ ６ ． ７ ４２ ９５ １
癌顺铂 耐 药细 胞株 Ａ５ ９ＤＤＰ；ＭＴ ４／ Ｔ细胞 毒 实验 结 果显 示 与 Ａ５ ９细胞 比 较 ，Ａ５ ９ＤＤＰ细 胞对顺 铂 约耐 药 ８倍 ，并且 Ａ５ ９ＤＤＰ耐 药细 ４ ４／ ４／
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移植性肿瘤动物模型
目前临床所使用的抗肿瘤药物，大多数是通过动物移植
性肿瘤实验法筛选而被发现的，移植性肿瘤动物模型是现代
肿瘤研究中应用的最广最有价值的模型。其优点包括：（1）
可使一群动物被同时接种同样量的瘤细胞，生长速率比较一
致，个体差异较小，接种成活率近100%；（2）对宿主的影响
相类似，易于客观判断疗效；（3）可在同种或同品系动物中
连续移植，长期保留供试验用；（4）试验周期一般较短，试
验条件易于控制等。但是这类肿瘤生长速度快、增殖比高、
体积倍增时间短、肿瘤生命性质简单，与人类肿瘤具有明显
不同；特别是与人类的致死性实体恶性肿瘤生命性质、与生
长发生机制差异更大。存在着能够为现代肿瘤基础生命科学
研究模拟人类恶性肿瘤综合生命性质的局限性、片面性。现
在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到
40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小
鼠L1210淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉
瘤180，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，白血病P388，
Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白
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血病，白血病L5170Y，P1534淋巴白血病，P1798淋巴肉瘤，
LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，Gardner淋巴肉瘤，B16或
Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，肉瘤37，P315白血
病，Ｗagner癌肉瘤，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，
Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交
鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分为敏感，中度
敏感，低敏感和不敏感瘤株四类，同样敏感株对抗癌药的疗
效水平也不相同。
（1）
实验动物的选择：移植性肿瘤常用的动物为清洁级小
鼠、大鼠和地鼠等，每批动物都应有一定的微生物及遗
传背景，来源明确，根据瘤株的要求选用近交系、远交
系或杂交第一代（F1）动物，一般雌雄皆可（乳腺癌、
卵巢癌、宫颈癌必须用雌性动物），但每批实验只用一
个性别。
（2）
实验一般要求：需在无菌环境下进行。可在接种罩、层
流工作台或无菌室内操作。动物处死后，新洁尔灭或碘
酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械
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切取；对腹水瘤应灭菌的空针筒抽吸。瘤块污染常是接
种失败的主要原因。在高温季节，应注意瘤源的直接降
温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。
（3）
常用的皮下接种部位为右前肢腋下；肌肉接种常注射于
大腿肌肉部；腹水型接种于腹腔内。
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【肿瘤移植操作步骤】
1. 肿瘤的移植
1） 瘤悬液移植法：
（1）
选择接种后肿瘤生长旺盛且无溃破而且动物健康状
况较好的瘤源动物，颈椎脱臼处死，固定于蜡板上，
用碘酊、酒精消毒操作部位皮肤（消毒面积要尽可能
大一些）。切开皮肤，在无菌条件下取下瘤块。
（2）
将瘤块去除坏死组织，称重，剪成小块，用玻璃匀浆
器或机械匀浆器研磨均匀后放入无菌容器内，按照
1：3 ~ 1：4的比例加入生理盐水，稀释成瘤细胞悬
液，使其细胞数为（1~2）*107个/ml。
（3）
用碘酊、酒精消毒动物的接种部位，用空针筒抽吸
0.2ml细胞悬液，注射于接种部位。每次抽吸前应将
细胞悬液混匀，整个操作应在30min内完成。
2）培养细胞的移植法：
（1）
将单层培养的细胞消化脱壁后稀释为一定浓度的细胞
悬液
（2）
对细胞悬液进行活细胞计数，方法如下： 用新配制的
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0.05％伊红或0.1％台盼蓝生理盐水溶液．将细胞悬
液稀释、混匀后在血球计数盘上计数． 染色者为死
细胞、不染色为活细胞。按照计数结果将细胞悬液稀
释至每毫升（1~2）*107个细胞。
（3）
用碘酊、酒精消毒动物的接种部位，用空针筒抽吸
0.2ml细胞悬液，注射于接种部位。每次抽吸前应将
细胞悬液混匀，整个操作应在30min内完成。
【移植性肿瘤研究法举例】
1. 腋皮下接种实体瘤模型：
【实验原理】以小鼠肉瘤S180为实验模型，接种于同种
宿主的前肢腋皮下，给予一定剂量的有抗癌活性的药物，可
以抑制肿瘤在体内的生长。本方法也适用于LL、B16、Hep
等实体型移植性肿瘤模型，常用于抗肿瘤生长药物的研究。
【操作步骤】 取接种于小鼠约7~10天的S180肿瘤，无
菌条件操作，剔除包膜和坏死部分，选取完好的瘤块，至于
玻璃匀浆器或机械匀浆器内，加入适量的生理盐水，配制成
瘤细胞悬液，细胞数为（1~2）*107/ml，接种于同种异体小
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鼠前肢腋皮下，雄性体重18~22g，雌性体重17~21g，每次
实验均用同一性别，每只小鼠注射0.2ml，一般实验可用10
只动物为一组。实验第0天，接种动物。第一天，将动物称
体重及随机分组并开始给药，包括实验用药，阴性对照（相
应溶剂）及阳性对照药，可用腹腔或灌胃给药，。至第11~14
天，动物称体重，并剖取各组动物的肿瘤，称重，最后统计
各组动物的抑瘤率 。
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2. Lewis肺癌自发肺转移模型
【实验原理】 Lewis肺癌为一株恶性程度较高的自发性
肺内未分化上皮样癌，受体鼠为C57BL/6。移植瘤主要通过
血行散播在肺部形成转移灶。移植于皮下、肌肉或者足趾等
特定部位，移植瘤增殖形成原位瘤，若给予一定剂量的有抗
癌活性的药物，则可抑制肿瘤在体内的生长。随后肿瘤细胞
开始侵袭周围的正常组织和血管，继之癌细胞进入血液循环
转运至靶器官，粘附于血管壁上并穿过血管，癌细胞增殖成
集落，最后形成转移瘤。上述过程基本类似于人类肿瘤从生
长到转移瘤形成所经历的一系列步骤，故称之为癌的自发肺
转移模型。常规接种对药物的敏感性较低，但可向肺自发转
移。如采用其培养细胞或制成的单细胞悬液尾静脉注射接
种，则属于人工肺转移，也可在肺部形成肿瘤集落，它可用
于肿瘤转移机制的探讨和抗肿瘤生长和转移药物的筛选和
研究。
【操作步骤】 取皮下接种10~14d的肿瘤作为瘤源，制
成（1~2）*107/ml单细胞悬液，进行常规腋皮下接种
（2*106~4*106/0.2ml），接种于同种异体小鼠，体重18~24g，
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6~7周龄。或者细胞数为2*106/ml，尾静脉接种，每支小鼠
0.2ml，接种次日开始治疗。腋皮下或肌肉接种的实验，其
处理方法同S180。第21~30天结束实验，称动物体重，并剖
取动物的肿瘤，称重，统计各组动物的抑瘤率；观察肺转移
瘤和小鼠的生命延长效应，数转移瘤集落数，称肺重，计算
自发性转移肺集落的抑制率，还可计算肺平均重量。
肺转移率% = （1- 给药组平均肺集落数/对照组平均肺
集落数）* 100%
【实验说明】
3. B16小鼠黑色素瘤人工肺转移模型
【实验原理】 B16是C57BL/6小鼠耳根部皮肤上发现的
自发性黑色素瘤，以后又在该瘤株中筛选出肺部高转移的集
落株，小鼠静脉内移植后主要形成肺转移瘤，肺外转移极少。
该瘤细胞注入静脉内，在短时间内直接把大量瘤细胞输入血
液循环，不经过癌转移的前几个过程，故称为“人工转移”
模型，以区别于“自发性转移”模型。该模型体现了肿瘤细
胞进入血液循环后癌转移的几个步骤，对于研究肿瘤细胞在
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循环系统中的生成能力，瘤细胞附着、穿越靶器官血管的能
力和探讨癌转移的器官特异性则有其独特的优势。
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【操作步骤】 取体外对数生长期的B16小鼠黑色素瘤细
胞，经胰酶消化，以磷酸缓冲液配置成瘤细胞悬液，浓度为
2.5*105/ml，，相应宿主尾静脉接种0.2ml/只。随机分组进
行实验，3周后以颈椎脱臼法处死小鼠，称小鼠体重，剖取
肺，称肺重，用解剖显微镜计数各肺叶的转移集落数，转移
集落成黑色或灰黑色，相互间不融合。
【结果计算】 计算给药组平均肺集落数与阴性对照组的
平均肺集落数，计算肺转移抑制率。
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