GST测定方法总结
GST(一般车缝时间)方法介绍
9
压前片工字褶明线
10 三线锁前片*1
3-后片(三个工字褶上端压明线)
11 后片工字褶点号18点*1
12 后工字褶烫形连烫拉链衬一块
13 车后片工字褶连走腰围固定线
机器类型 辅助工具 面料
平车
L
中烫
L
手工
点号板
L
平车
L
平车
L
手工
点号板
L
中烫
L
平车
L
平车
定规
L
三线锁边车
L
手工
点号板
L
中烫
L
平车
L
打印日期：2000-11-24
生产中常用动作分解拿取并比对裁片对齐和调整使用工具控制机器放到一边12345双手同时取两块裁片配对pdtsgst代码介绍tmu动素描述左手右手动素描述74伸手抓一片裁片取难伸手去抓一片裁片合难将两块裁片合在一起变下手指姿势抓住两块裁片抓易将两块裁片合并在一起抓易变下手或手指的姿势移一段抓住裁片74333623秒每秒278tmu分析过程实操图工序分析举例序号代码动作描述频率时间tmu1pdxh先后取前中片与前担干并配对22122yzyj将裁片移至压脚下2763hzan电脑车倒针手动2404tz1p调整前担干片2805s18lb车18cm大约停21436hzan电脑车倒针手动2407tj腿脚动作2188bf2s双手摆放前片2841分1667tmu?工序名称
2、工序表的作用
A.供给技术人员试样参考及审核工序 B.供给车间排流程 C.计算效率及直接加工成本的计算
广州弘上服装有限公司
款式工序表
款式工序表
款式编号: 140195
客 户: CUSHOW
订单编号: 27401-140195
小鼠谷胱甘肽转移酶GST酶联免疫分析ELISA
小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织及相关液体样本中谷胱甘肽S转移酶（GST）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）水平。
用纯化的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽S转移酶（GST），再与HRP标记的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽S转移酶（GST）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）浓度。
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：450pg/ml ×1瓶×1瓶2-8℃保存标准品稀释液×1瓶×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
蛋白纯化和GST沉降技术
蛋⽩纯化和GST沉降技术蛋⽩纯化和GST沉降技术【原理】细菌表达的⾕胱⽢肽s－转移酶（GST）融合蛋⽩主要⽤于蛋⽩的亲和纯化，也可以将GST融合蛋⽩作为探针，与溶液中的特异性搭档蛋⽩结合，然后根据⾕胱⽢肽琼脂糖球珠能够沉淀GST融合蛋⽩的能⼒来确定相互作⽤的蛋⽩。
⼀般在得到⽬标蛋⽩的抗体前，或发现抗体⼲扰蛋⽩质－蛋⽩质之间的相互作⽤时，可以启⽤GST沉降技术。
该⽅法只是⽤于确定体外的相互作⽤。
【应⽤】1）确定融合（或探针）蛋⽩与未知（或靶）蛋⽩间的新的相互作⽤2）证实探针蛋⽩与已知蛋⽩质间可疑的相互作⽤【⽅法】⼀、GST融合蛋⽩的纯化1、菌种的活化：按1%的量在螺旋管中活化所需菌种，⼀般50ul的冻存菌接⼊5ml的LB中，37℃ 220rpm培养2、活化的菌种转接1%接种于5mlLB中，37℃ 220rpm培养⾄OD≈0.4~0.6 之间，即到达对数⽣长时期（⼤约3~4⼩时）3、取1ml菌液测定OD值，⾄OD≈0.4~0.6 之间，则取诱导前1ml，其余的按1/1000加⼊诱导剂IPTG ，低温⼩量诱导30℃ 200rpm，诱导过夜（⼩于16hr）4、次⽇取诱导后1ml，诱导前和诱导后各1ml，12000rpm ，离⼼2mins，弃上清，加适量的1*PBS,重悬菌液，再加1* loading buffer，混匀，沸⽔煮10mins, 12000rpm ，离⼼2mins，SDS-PAGE电泳考马⽒亮兰染⾊5、如果考染结果显⽰GST融合蛋⽩（GST-X）诱导出来，则做⼤量诱导6、菌种活化后按1%转接种于100ml LB中，30℃ 200rpm 扩⼤培养⾄OD≈0.4~0.6 之间，即到达对数⽣长时期（⼤约3 ⼩时）7、取1ml菌液测定OD值，⾄OD≈0.4~0.6 之间，按1/10000 加⼊诱导剂IPTG ，低温诱导20℃ 180rpm，制冷系数0.5 ，诱导过夜8、次⽇50ml离⼼管收菌, 4℃ 5000rpm 5mins 离⼼，每瓶100ml重复离⼼收于同⼀离⼼管中，⼤型离⼼机提前预冷9、每100ml 菌液沉淀加⼊10ml A 液重悬10、超声破碎。
谷胱甘肽转移酶抑制剂筛选方法一
谷胱甘肽转移酶（GST）还原型谷胱甘肽占绝大多数。
谷胱甘肽转移酶 (GST) 是广泛分布于哺乳动物、植物、鸟类、昆虫、寄生虫及微生物体内的一组多功能同工酶。
GST是由23-29KDa的不同亚基构成的同源二聚体，每一类GST同工酶中组成的亚基种类有多种，因此编码GST同工酶的基因是一个巨大的超基因家族。
GST主要功能是催化某些内源性或外来有害物质(过氧化物、α, β2不饱和醛酮、烷基或芳香基化合物)的亲电子基团与还原型谷胱甘肽的巯基偶联，增加其疏水性使其易于穿越细胞膜，分解后排出体外，从而达到解毒的目的，有抑制细胞癌变的功能。
通常认为，谷胱甘肽转移酶的作用是催化谷胱甘肽与外来的或内在的有害物质亲电结合排出体外而起到解毒的作用，但是对于治疗癌症药物的研究主要是针对能够抑制谷胱甘肽转移酶（GST）活性的酶抑制剂，而不是GST催化解毒作用。
研究表明，GST的酶活性水平与肿瘤的耐药性密切相关心。
因此，GST可能是治疗耐药肿瘤的潜在药物作用靶点。
与GSTs相关疾病有：人类癌症包括胃癌，结肠癌，胰腺癌和肺癌动脉粥样硬化和冠心病。
近年来对GST抑制剂的研究越来越多，研究报道的GST抑制剂主要有：依他尼酸（EA）及其类似物、TLK199及其类似物、黄酮类化合物、双功能基化合物，还有其他一些抗虐药物如乙嘧啶和奎尼丁等等。
抗肿瘤药物与GSH作用模式图：图中GST-∏是人体内一种Ⅱ相代谢酶，其对肿瘤的耐药作用主要由其解毒功能引起，其作用机制：①催化谷胱苷肽(GSH)与亲电子药物如各种烷化剂结合，增加其水溶性，加速其排泄而使药效减低；②清除葸环类药物等产生的自由基，减轻药物自由基对细胞的损伤；③通过直接与药物结合的形式降低药物活性等。
机理解释：图中是一个肿瘤细胞，当治疗肿瘤的药物顺铂进入细胞时，GST就会催化谷胱甘肽GSH与顺铂结合而将其排出体外，所以为了加强药效，就需要使GST的功能受到抑制，GST 抑制剂占据GST酶活性位点，使GST无法催化GSH与顺铂结合，这样就会降低抗肿瘤药物的耐药性。
酶活性的测定方法
生物样品预处理预冷解剖用具，采用颈后断头的方法将鱼杀死，立即取肝脏、腮、脑，操作均在4℃下进行，用预冷的0.15 mol/L KCl 溶液洗去血丝，用滤纸吸干后称重。
将肝、脑组织放入预冷的Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 mol/L KCl)匀浆（匀浆比（W/V）1:5），腮组织放入组织匀浆（匀浆缓冲液含40mmol/L咪唑，250mmol/L蔗糖，5mmol/L EDTA，pH7.0），匀浆比为1:40，匀浆速率为10000g，以15s为周期，重复3次。
分别取1ml匀浆液放入1.5ml离心管进行离心，4℃下离心(9000g，20min)，取上清液-80℃下保存，待测。
（1）250mL 0.15 mol/L KCl：取2.7956g（2）Tris-HCl缓冲液：125mL 0.1 mol/L Tris（1.5143g）+ 105mL 0.1 mol/L HCl+ KCl（0.15*0.23*74.55=2.5720g）（Na+＋K+）－ATPase活性的测定1、试剂（1）匀浆液（250ml）：40mmol/L咪唑0.6808g+250mmol/L蔗糖21.3931g +5mmol/LEDTA 0.3653g（2）反应缓冲液（250ml）：80mmol/L咪唑 1.3616g+4mmol/LMgCl2 0.2033 g+40mmol/LKCl 0.7455g（3）16mmol/L Na2ATP（10ml）：0.0988g（4）30%三氯乙酸（TCA）9g TCA+21mlH2O（5）定磷试剂（硫酸亚铁-钼酸胺试剂100ml）：10ml 5mol/LH2SO4+1.3556 g钼酸铵+90mlH2O每10ml加入FeS040.5g（FeS04·7H2O 0.0941g），25ml加入FeSO4·7H2 O 0.2353g，临用前配制。
gst亲和层析步骤
gst亲和层析步骤GST（谷胱甘肽S-转移酶）亲和层析是一种常用的蛋白质纯化技术，它基于谷胱甘肽S-转移酶与谷胱甘肽结合的高亲和力，可用于纯化含有GST标签的蛋白质。
第一部分：材料准备在进行GST亲和层析之前，需要准备一些实验材料。
以下是常见的实验材料列表：1. 细菌表达系统：常用的细菌表达系统包括大肠杆菌（E. coli）和酵母菌等。
选择适当的表达系统，并确保表达系统中含有GST融合蛋白的基因。
2. 培养基和抗生素：根据表达系统的需求，准备适当的培养基，并添加相应的抗生素以选择含有GST融合蛋白的菌落。
3. 细胞破碎缓冲液：根据实验需求选择适当的细胞破碎缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）或Tris缓冲液，并添加辅助试剂如EDTA（乙二胺四乙酸）和PMSF （苯甲磺酰氟）等。
4. 融合蛋白纯化缓冲液：准备一系列用于融合蛋白纯化的缓冲液，包括洗脱缓冲液、结合缓冲液、平衡缓冲液等。
常用的缓冲液成分包括PBS、NaCl（氯化钠）、DTT（二硫苏糖醇）和Tween-20等。
5. GST树脂：选择合适的GST亲和树脂，如GST-Sepharose或Glutathione Agarose等。
6. 色谱柱：选择合适的色谱柱，如预装的柱子或自制的柱子，并进行消毒和平衡。
7. 蛋白质测定试剂盒：用于测定蛋白质的浓度，如BCA（双硫苏糖酸）蛋白定量试剂盒。
第二部分：GST融合蛋白的表达和纯化1. 转化细菌：将含有GST融合蛋白基因的质粒DNA转化到表达宿主细胞中，如E. coli。
通过热激冷冻法、电穿孔法或化学法等方法将质粒DNA导入细菌细胞内。
2. 培养细菌：将转化后的细菌菌落接种到含有适当抗生素的培养基中，并在适当的条件下培养细菌，如温度、pH值和搅拌速度等。
3. 蛋白表达诱导：当细菌培养达到适当的生长阶段时，添加适当浓度的诱导剂，如IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷），以诱导GST融合蛋白的表达。
4. 细胞收获：在蛋白表达诱导后一定时间，收集细菌细胞。
GST测定方法
GST
磷酸缓冲液：0.05mol/Lph=6.8磷酸钠缓冲液
配置：0.05M Na2HPO449mL(12H20 17.907 1L)
0.05M NaH2PO451mL(2H20 7.8005g 1L)
GST提取：0.5g叶片加入液氮研磨，加入0.1mol/LPH=6.8 Na2HPO4—NaH2PO4缓冲液
（内含质量分数为0.5%PVPP（聚乙烯吡咯烷酮）；1mmol/L焦亚硫酸钠；PSMF(偏重亚硫酸钠)，分子质量190.1）10mL(0℃)，快速研磨，搅拌均匀后。
将混合液倒入10mL离心管中，于20000g0—4℃，离心20min,上清液为待测酶液。
比色：1.99buffer（PH=6.8）+0.9mL3.0mmolGSH+10uL酶液+0.1mL 30mMCDNB，从加入CDNB 开始计时，在340nm波长下用分光光度计测在90—120s吸光值变化，以无酶提取液的同样反应混合物做空白。
酶活性单位以单位鲜重的植物样品，再37℃下，每min使GSH的改变为总量的0.001时为一个酶活性单位（扣除非酶反应的GSH）。
GST活力单位：U/min.mg protein。
谷胱甘肽S GST
谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）试剂盒
微量法100T/96S 测定意义：
GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。
GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
测定原理：
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
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一、需要准备的试剂
1、提取GST的缓冲液：0.2mol/L Tris-HCl，pH7.8，含1mmol/L EDTA，5mmol/L DTT
2、KOH（1mol/L）——用于调节pH
3、0.1mol/L磷酸钾（KH2PO4）缓冲液，含1mmol/L EDTA，pH6.5（底物为CDNB和
β-4-Nitrophenyl-ethylbromid时用pH6.5的缓冲液）或7.0（底物为cumene hydroperoxide 用pH7.0的缓冲液）——测活性时的反应体系
测酶活时反应体系是3mL，4－7这几个底物必须现配现用，一百个样品只需对应的底物各20ml，所以根据用量来配以节约样品
4、底物1——CDNB（分子量202.55g/mol），CDNB必须用95％的乙醇溶解
需要的终浓度是1.0mmol/L，因此需要配的母液浓度是30mmol/L
5、底物2——cumene hydroperoxide（152.20 g/mol），用95％的乙醇溶解
需要的终浓度是1.5mmol/L，则需要配的母液浓度是45mmol/L
cumene hydroperoxide是液体，密度是1.03g/mL，用时取相应的体积定容即可
6、底物3——β-（4-Nitrophenyl）-ethylbromid（分子量230.07g/mol），用95％的乙醇溶解
终浓度是0.1mmol/L，则需要的母液是3mmol/L
7、底物GSH——用“3”磷酸钾缓冲液来溶解（用对应pH值的缓冲液来配）
CDNB需要的GSH终浓度是1.0mmol/L，需要的母液是30mmol/L；
cumene hydroperoxide和β-（4-Nitrophenyl）-ethylbromid 需要的GSH终浓度是
5.0mmol/L，需要的母液是150mmol/L
二、测定
按照下表加入各试剂
Test（ml）Blank（ml）
磷酸钾缓冲液 2.7 2.8
GSH 0.1 0.1
CDNB或其他0.1 0.1
平衡至25℃,监测吸光度直至恒定
加酶液0.1mL /
立即混合均匀，记录A340的增量，每隔30s或20s读书，约读3－5分钟
计算公式
Units/ml enzyme=（△A340/min Test－△A340/min Blank）（3.0）（df）/（9.6）（0.10）
其中
3.0——Total Volume of assay；df——Dilution factor
9.6——消光系数
0.10——Volume of enzyme used。