液相色谱柱的清洗(借鉴内容)
液相色谱柱子使用及保养
专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
记 住 ∶ 拿 到 一 根 从 未 用 过 的 色 谱 柱 时 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
色谱柱的保养（一）
样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度
如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止 其在流动相中析出
了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用
硅 胶 的 溶 解 曲 线
填料新的键合技术 - PH范围 2-12
- 稳定性好，使用寿命长
1 2 3 4 5 6 7 8 9 p H
良好的色谱实验习惯
拿到一根新色谱柱时，先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件 定期检测柱效
色谱柱的使用及操作
流动相的转换 特别是GPC柱 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度
色谱柱的保养（二）
流动相方面 除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白检验） 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂
流动相对样品的溶解度
有机溶剂或水的比例
2）如果柱头塌陷较深（小于1cm）可逐渐减低流速至零，
再次拆下柱子，用填料修补直到塌陷填满为止。
色谱柱的存放
存放前的处理 除去杂质、盐等，防止细菌生长 合适的存放溶剂 两端密封保存，避免色谱柱床干枯
液相色谱柱清洗活化再生
1.色谱柱的活化30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。
=9：1冲洗30倍柱体积，再流动相平衡30个柱体积。
100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积，然后转换到流动相平衡。
用于反相色谱时，先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。
50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡30柱体积。
2.色谱柱的清洗保存和再生清洗：如使用缓冲盐，先用高比例水相冲洗30个柱体积，然后再转换到80%有机相冲洗30个柱体积。
再生：用95%水，甲醇，异丙醇，甲醇，95%水分别冲洗30个柱体积，在第一次用95%水时，进样10次100 μL DMSO。
清洗：100%乙醇0.3ml/min 3h，再用正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积并保存。
再生：根据不同类型正相柱选择。
[常规正己烷/异丙醇的柱子，乙醇（0.1%三氟乙酸）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，乙醇（0.1%二乙胺）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积]清洗：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生：先用高浓度盐的缓冲液清洗（浓度可以是5-10倍，不超过1M），然后再用100%水洗，50%乙腈或甲醇保存。
清洗：反相使用时同反相C18色谱柱，如短期不用，可用95%甲醇或乙腈保存;长期不用时需用异丙醇置换，最后用正己烷保存。
再生: NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，先用含1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗30个柱体积，乙腈-水(50:50)冲洗30个柱体积，95%水/5%乙腈冲洗30个柱体积，异丙醇冲洗30个柱体积，95%乙腈/5%水冲洗30个柱体积并保存。
色谱柱冲洗方法
色谱柱冲洗方法（最新版4篇）篇1 目录1.色谱柱冲洗的必要性2.色谱柱冲洗的方法2.1 水冲洗法2.2 有机溶剂冲洗法2.3 缓冲盐冲洗法2.4 反冲法3.色谱柱冲洗的注意事项篇1正文色谱柱是液相色谱系统中的核心部件，它在样品分离过程中起着至关重要的作用。
然而，在色谱柱使用过程中，柱内可能会积累一些脏物或盐析物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
下面我们将介绍几种常见的色谱柱冲洗方法。
首先，水冲洗法是最常用的色谱柱冲洗方法。
此方法操作简便，只需将色谱柱连接到水流系统上，使用纯水进行冲洗。
篇2 目录一、色谱柱冲洗的必要性二、色谱柱冲洗的方法1.水冲洗法2.纯有机相冲洗法3.缓冲盐冲洗法4.反冲法5.专用清洗剂冲洗法三、不同类型色谱柱的冲洗方法1.反相色谱柱2.正相色谱柱3.离子交换色谱柱4.凝胶渗透色谱柱四、色谱柱冲洗的注意事项篇2正文色谱柱是高效液相色谱系统中的核心部件，其在样品分离过程中起到关键作用。
然而，在长时间的使用过程中，色谱柱内部可能会积累一些脏物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
色谱柱冲洗的方法有很多种，下面我们分别进行介绍：1.水冲洗法：这是一种最常用的色谱柱冲洗方法。
使用纯水或含有少量缓冲盐的水进行冲洗，可以有效去除色谱柱内部的脏物。
对于反相色谱柱，可以使用纯水或甲醇/水混合溶液进行冲洗。
2.纯有机相冲洗法：在冲洗色谱柱时，可以使用纯有机溶剂（如乙腈、甲醇等）来代替水相。
这种方法适用于具有疏水性的色谱柱，如 C18、C8 等。
3.缓冲盐冲洗法：在冲洗过程中，可以加入一定浓度的缓冲盐，以保持色谱柱内部的离子强度。
这种方法适用于离子交换色谱柱和凝胶渗透色谱柱。
4.反冲法：这是一种比较彻底的冲洗方法，可以有效去除色谱柱内部的沉淀物。
在反冲过程中，需要将色谱柱的流动相改为反向，并提高流速。
然而，反冲过程可能会对色谱柱造成一定程度的损伤，因此需要谨慎操作。
液相色谱实用技术(二)液相色谱柱的使用及保养
液相色谱实用技术（二）色谱柱的使用及保养色谱柱与仪器的联接❀不同公司的色谱柱接头不同。
处理不当时,会造成：✎色谱峰展宽(死体积)致使柱效下降或渗漏❀解决办法∶✎自制相应的转换接头✎使用“通用”型接头（锥箍及螺母）➠这种锥箍在不锈钢管上是活动的，即stop-depth的长度可调。
因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。
从WatersPhase Separations公司能得到一些PEEK工程塑料的接头,可用在各种类型的色谱柱上。
色谱柱的联接❀各种锥箍和管路接头长度示意图:色谱柱的联接❀Stop_depth长度不合适造成柱前死体积色谱柱的联接❀锥箍锥度不合适造成渗漏:Waters色谱柱的联接❀Waters及Phase Separations锥箍及螺母相同，但锥箍前露出的不锈钢管长度不同✎其长度被称为：“stop-depth”❀Waters除Spherisorb以外的各种品牌的色谱柱用的是“Waters”标准，其stop-depth的长度为0.130英吋❀Spherisorb品牌的色谱柱及Phase Separations 公司的其他品牌色谱柱用的是“Parker-style”标准，其stop-depth为0.090英吋测柱效-良好的色谱实验习惯❀拿到一根新色谱柱时，先测柱效❀保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录色谱测试条件❀定期检测柱效❀定期检测仪器的谱带展宽测柱效的方法❀色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同❀Waters的色谱柱均附有Use and Care说明书,可按说明书所述方法测定❀以下是Waters反相C18柱的测定方法:✎流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min✎样品:50mg Acenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮✎进样量5μl✎检测波长:254nm计算色谱柱的柱效 N理论塔板数计算公式：W σ 方法W tan 16切线法W h 5.54半峰高W 3σ9 3σW 4σ16 4σW 5σ255σ21÷øöçèæ=W V N σ18.70RV =plates8742 20.8018.7016 4N =úûùêëé=σ0.80W =I n j e c tI n j e c t0.68W =16.63RV =plates9569 268.063.16164N =úûùêëé=σ用“切线切线””法计算柱效不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来7018.=R V plates8240 1.0318.7025N 25=úûùêëé= 1.03W =height 4.4%height 4.4%plates3334 N 5=úûùêëé=σ2441631625..6316.=R V 1.44W =Good ColumnI n j e c t I n j e c t 用“5σ”法计算柱效色谱柱的正确使用及操作❀流动相的转换✎特别是GPC柱❀流速(压力)的变化幅度❀温度的变化幅度❀专用色谱柱∶样品及溶剂的要求记住∶拿到一根从未用过的色谱柱时一定要先看其使用说明！正确使用色谱柱（一）❀样品方面✎除去微粒及杂质✎了解样品在流动相中的溶解度➠如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出✎了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用正确使用色谱柱（二）❀流动相方面✎除去微粒✎纯度的要求➠超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低➠缓冲液的pH值，在填料的允许范围内➠缓冲液（盐）的浓度➠溶剂：色谱纯，并与填料相匹配➠溶剂中的杂质含量✎流动相对样品的溶解度➠有机溶剂或水的比例色谱柱的在线保护装置❀给色谱柱提供物理的保护✎除去样品及流动相中的颗粒❀给色谱柱提供化学的保护✎防止分析柱被化学污染❀装置✎在线过滤器✎自装填料保护柱✎预装保护柱在线过滤器❀In-Line Filter，部件号 WAT084560✎防止颗粒在色谱柱头累积✎优点：基本不影响柱效✎在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸分析）❀可更换的消耗品✎更换滤芯，部件号 WAT005139 (5/pkgs)✎更换垫圈，部件号 WAT084567 (10/pkgs)保护柱❀可避免化学污染。
液相色谱柱的清洗和再生
用25℃的20:80的乙腈
水溶液以0.1ml/min的
流速反向冲冼4小时
用25℃的20:80的乙腈
水溶液以0.1ml/min的
流速反向冲冼4小时
钠离子型
用85℃的0.1mol/L 的
NaNO3溶液以0.1ml/min
的流速反向冲冼4—16小
时
用水冲冼至平衡。
正相再生
适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以1ml/min流速冲洗。
用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以流速1ml/min冲洗。
用25℃的20:80的乙腈
水溶液以0.1ml/min的
流速反向冲冼4小时
用65℃的20:80的
ACN:0.01NH2SO4溶液
以0.1ml/min的流速反
向冲冼4小时
钙离子型
用25℃的0.1mol/L pH6.3
的Ca(NO3)2溶液以
0.1ml/min的流速反向冲
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
作者：英国的R.Plumb-Glaxo
强有机溶剂再生
适合于水相分析极性或离子类分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
7 带金属抗衡离子的聚合物填料
基质是带金属抗衡离子的聚合物色谱柱，有三种再生方法，每种方法详细列于下表：
液相色谱柱的清洗
新柱使用前的冲洗
新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告, 了解柱子的性能指标。分析用的流动相往往与柱子 的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的 试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用 的流动相与保存溶剂的相溶性。
1、反相柱如岛津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可
用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流 速应缓慢提高,如开始0.3mL/min,10～15min后可慢 慢加快。
色谱柱常见问题的成因
3、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲 盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进 行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子 中的微环境是高有机相、低水相。这时流动 相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞 ,使柱压升高,柱效下降。 4、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使 色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干, 造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
对色谱柱进行适当清洗的意义
以上提到的部分故障可以通过适时、适当的 清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色 谱柱的使用寿命。 下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗 方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际 情况作适当的选择和调整。当然，不同的用 户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽 相同的处理方法。
色谱柱常见问题的成因
1、硅羟基的死吸附 ：硅胶粒子表面存在硅 羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的 很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效 下降、峰形劣化的现象。有些吸附是可逆的， 可以通过清洗解决。 2、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式 残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容 易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造 成峰形劣化。
反相柱日常清洗
关于纯水的问题：纯水极性很强,ODS等填料的硅烷 键是非极性的,在纯水中各键合基团会因疏水作用而 改变空间构型, 使柱效很快降低。很多公司推出可 以使用100%纯水进行冲洗的柱子,原理是键合基团互 相之间有排斥力,这类柱子一般键合相比较丰富，游 离硅羟基比较少，从而阻止了键合基团性能的改变。 能否用纯水冲洗要参考该色谱柱的说明书。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理 液相色谱操作规程
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
高效液相色谱柱注意事项
高效液相色谱柱注意事项高效液相色谱柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数,在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
高效液相色谱柱注意事项：1、柱效和保护柱拿到一根新柱时，肯定要先看其使说明，然后测柱效，定期检测柱效，保存在新色谱柱上得到的色谱图，并记录条件，定期检测仪器的谱带展宽。
若应用于在线监测，应对色谱柱供应在线的物理保护和化学保护，例如采取安装在线过滤器，自装填料保护柱和预装保护柱等。
在线过滤器的作用是防止颗粒在柱头累计，优点是基本不影响柱效，在需要高柱效的时候常用，常更换的消耗品是滤芯和垫圈保护柱的作用是防止柱子被化学污染。
缺点是多数保护柱影响色谱柱的柱效，特别是在用微柱时，常用的是普通自装填料的保护柱。
近新出的一些保护柱例如Sentry—guard保护柱，它的特点是高质量、高效填料、加添分析柱效、对脏样品载荷本领大，能延长保护柱的寿命，手可拧紧接头，安装时不需要工具，省时省，可换芯式设计，能采用各种不同的填料，重要适用于特别脏特别多而杂的样品本底，例如生化样品，环境样品和食品等，或者不想做太多的圃相萃取，不想降低柱效果等情况。
2、清洗对所做的样品要有充分的了解，用对该样品洗脱本领强的流动相清洗，对于硅胶柱，先用甲醇洗去极性杂质，然后用干燥的二氯甲烷和正庚烷100—20OraL依次活化，对于键和相柱，一般用甲醇一氯仿一甲醇一水依次冲洗，每种色谱柱有特定的清洗方法，肯定要看其使用说明。
3、存放存放前除掉杂质和盐，采用合适的存放溶剂，避开色谱柱床的干枯，避开机械振动，防止细菌生长，注意存放的温度。
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液相色谱柱的清洗
一、液相色谱柱按基体成分的分类
1、硅胶基体：不键合任何化学基团的为硅胶柱，键合的化学基团有C18、C8、C4、氨基、氰基、苯基等。
2、聚合物基体：常见的聚合物基体为聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。
聚合物上再键合化学基团。
根据填料基体的成分不同可以分为：
二、色谱柱常见问题的成因
1、硅羟基的死吸附：硅胶粒子表面存在硅羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效下降、峰形劣化的现象。
有些吸附是可逆的，可以通过清洗解决。
2、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造成峰形劣化。
3、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
4、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
三、对色谱柱进行适当清洗的意义
以上提到的部分故障可以通过适时、适当的清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色谱柱的使用寿命。
下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际情况作适当的选择和调整。
当然，不同的用户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽相同的处理方法。
四、新柱使用前的冲洗
新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告,了解柱子的性能指标。
分析用的流动相往往与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。
要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。
1、反相柱如岛津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。
流速应缓慢提高,如开始0.3mL/min,10～15min后可慢慢加快。
2、正相柱或称极性色谱柱一般保存在正庚烷或正己烷中。
如果分析时的流动相含有极性溶剂,应使用乙醇或异丙醇冲洗,流速0.1～0.3mL/min ,将保存液冲洗干净后,再用流动相平衡。
3、钙柱等糖柱只能用纯水作流动相进行冲洗，有机溶剂会造成色谱柱损坏，尤其要注意。
冲洗后可以记录色谱柱的一些性能指标,如柱效、柱压等,供今后参考。
分析样品前,要用流动相对色谱柱进行平衡,待基线平稳后再进样分析。
一般用流动相平衡的时间为30min,若系统中有盐或水,平衡时间应延长。
五、反相柱日常清洗
色谱柱清洗是日常的重要维护工作。
分析工作结束后,要用适当的溶剂清洗系统中残留的样品。
在反相系统中, 若流动相中无酸、碱、盐类物质, 可用甲醇冲洗30～60min ；若含酸、碱、盐类物质,应先用10 %甲醇,或用与分析用流动相相同比例的不含酸、碱、盐的溶液,冲洗30～60min , 再用甲醇冲洗。
直接用纯甲醇冲洗,会导致缓冲盐沉淀于柱子或检测池中。
关于纯水的问题：纯水极性很强,ODS等填料的硅烷键是非极性的,在纯水中各键合基团会因疏水作用而改变空间构型, 使柱效很快降低。
很多公司推出可以使用100%纯水进行冲洗的柱子,原理是键合基团互相之间有排斥力,这类柱子一般键合相比较丰富，游离硅羟基比较少，从而阻止了键合基团性能的改变。
能否用纯水冲洗要参考该色谱柱的说明书。
关于离子对试剂：常用的离子对试剂有烷基磺酸钠等, 这时通常采用
pH3～5的缓冲盐体系。
对于酸性样品一般使用常用四丁基铵盐，这时采用碱性体系。
容易出问题的是前一种情况。
分析结束后,柱子应先用有机溶剂-水体系冲洗,再用水冲洗,最后用有机溶剂冲洗。
这是因为烷基磺酸钠都是表面活性剂,可以洗掉脂肪油(如烷烃及其衍生物)。
在水的环境下烷基磺酸钠会将键合的烷烃基洗脱下来,造成固定相的流失。
所以应该先用有机溶剂-水体系冲洗柱子,表面活性剂会溶解在有机相中逐渐被冲洗出来,从而减少表面活性剂对键合相的洗脱。
六、反相柱的修洗复清
1、如果柱子污染严重可以使用以下方法清洗：
2、以水、甲醇、乙腈、氯仿依次清洗，再以相反的顺序清洗。
3、氯仿的作用是洗去残留的非极性杂质。
4、在用甲醇冲洗时可以将四氢呋喃作为样品注射，有助于去除强疏水性杂质。
5、四氢呋喃和甲醇的混合溶液可以去除类脂类污染物，也可同时注射二甲亚砜。
6、乙腈、丙酮、三氟乙酸（0.1%）的混合溶液有助于去除蛋白类污染物。
七、正相柱的清洗
1、硅胶柱可以用以下方法清洗：
2、正己烷（正庚烷）、二氯甲烷、甲醇依次清洗，再按照相反顺序冲洗。
3、甲醇的作用是洗去残留的强极性杂质。
4、正己烷可以使硅胶表面重新活化。
5、注意试剂的脱水处理，尤其是甲醇容易与水混溶，所用试剂应现用现开，试剂瓶加盖。