LA_920的凝胶池与凝胶池座
pcr技术
正确选择凝胶浓度 对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液 常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
电泳的合适电压和温度 电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。
DNA样品的纯度和状态 注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐，用酚可以去除蛋白。注意变性的NA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热，用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
1、2 梳板的选用 一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点样孑L容积较大，用于DNA 片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样孑L容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。梳板的选择主要是看上样量的多少而定，一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。另外，每次制胶时都要注意梳齿与底板的距离至少要1 mm，否则，拔梳板时易损坏凝胶孑L底层，导致点样后样品渗漏。当然，点样孑L的破坏还与拔梳板的时间和方法有关，一般凝胶需冷却30 min以上方可拔梳板，应急的情况下可以将成型的凝胶块放4℃ 冰箱中冷却15 min 左右，拔梳板的方法是将制胶槽放置在电泳槽中的电泳缓冲液中，然后垂直向上慢慢用力，因为有液体的润滑作用，梳板易拔出且不易损坏点样孑L。
微柱凝胶免疫检测技术博迅产品操作版_图文
8、新生儿ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶）—新生儿溶血病检 测卡Ⅰ
操作步骤：
1）将准备好的检测卡做好标记；
2）将0.8％待检者红细胞悬液分
别加入1-6管中,各50µl；
待检者0.8% 红细胞悬液
50µl 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl
4+
2+
-
特点和优点
简单：不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，适用于大量标本检测，解决了 Coombs试验因为程序复杂费时等原因未能在临床常规应用问题。
使不完全抗体检测理论“金标准”成为临床的“金标准”。 多份标本一次离心出结果，有利于临床大量标本检测。 另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时间长、易于标准化、 操作 更安全等优点。
灭活后的血清
16 32 64 128 256 512
3）将准备好的HDN母体IgG抗体效价检测卡做好标记，在所有孔中分别加入50µl 父亲（或父亲同型）的0.8%红细胞悬液（ABO血型系统IgG血型抗体）或在所有孔 中分别加入50µl标准O型0.8%红细胞悬液（测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗 体）；
结果：1.A型RhD阳性； 2.B型RhD阳性
3、Rh血型抗原检测卡（单克隆抗体）
操作步骤:
1）将准备好的检测卡做好标记；
2）将待检者0.8%红细胞悬液分别加入1—6管中，各50µl；
待检者0.8% 红细胞悬液
50µl 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl
50µl 50µl
50µl 50µl
AB
O
3）将1~3管分别加入50µl新生儿血浆 ，4~6管分别加入50µl新生儿红细胞
凝胶柱sephadex LH-20 使用
1 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，使用请千万注意，很贵的哟！（当然，老板有钱就另当别论拉）2 先讲Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 再讲Sephadex LH20 洗脱溶剂。
听我讲完第2点后，其实就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 分离的技巧，最后说说我的使用心得：（1）流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。
（2）柱子尽可能长，Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。
所谓集中优势兵力，打击敌人。
（3）馏分一定要接的细，可1／10，或1／20个保留体积接成一馏分。
（4）洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。
凝胶Sephadex LH-20使用方法及注意事项
凝胶使用方法及注意事项1原理Sephadex LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
2.前处理及装柱Sephadex LH-20在使用前必须进行溶胀，溶胀过程中必须避免过分搅拌，否则会破坏球形胶粒。
（1）室温下，将凝胶溶胀于层析液（一般为甲醇）中至少三小时（2）使溶胀胶体积沉淀后占总体积的75%，上层溶剂占25%凝胶悬浮液黏度要适宜A．太稠会在搅拌时产生气泡；太稀会导致装柱时沉降时间长，加凝胶悬浮液的次数增加；B．将凝胶悬浮液静止后所得上清液弃去，保留高于凝胶液面约1 cm的液体即可；C 装柱混悬液的浓度以流动性好，搅拌阻力小为宜。
（3）装柱的要点A 装柱前，先在色谱柱中加入约1/4柱高的液体（溶胀时所用的试剂）；B 装柱时，将下端活塞打开，流速尽量大，但要保证小于凝胶沉降速度，否则会干柱；C将凝胶悬浮液搅拌均匀，以漏斗倒入柱子中即可；3.流动相1.分子筛作用，常用的是甲醇、甲醇+氯仿混合溶剂。
甲醇：氯仿一般为1：1左右，切不可用氯仿做为流动相！氯仿比重大，用单纯的氯仿做流动相，填料将浮起来，严重影响分离效果！！2.反相分配作用，常用的是甲醇/水，比例可以根据实际情况进行调整，也可以是梯度洗脱（先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱）4.样品的处理及洗脱过程（1）.最重要的一点：用尽可能少的溶剂溶解样品，样品可以很浓。
如果溶解体积很大，一定要先进行浓缩，否则基本没有多大的分离效果。
上样体积一般为柱体积的1%~5%。
（2）.很重要的一点：尽可能用起始洗脱溶剂溶解样品（很多情况下样品并不能在起始溶剂中很好地溶解）。
凝胶的种类及性质
凝胶的种类及性质 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。
例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水克，同样G-200克每克千胶吸水20克。
交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。
因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
⑵SephadexLH-20，是─SephadexG-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。
（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。
琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。
一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。
琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。
交联剂越多，孔隙越小。
聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-GelP），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。
（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。
三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。
原位凝胶PPT课件
制备：冷法（4℃） 质评：胶凝温度（目测法，流变学法）
凝胶强度（自制装置） 生物黏附力（体内，体外） 流变学性质（流变图） 体外释放度（有膜，无膜溶出模型） 胶凝时间、膨胀性质、凝胶的形态学、给药部位的组织病理学评价
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进展：研究集中在制备、特性研究、动物实验等 非甾体抗炎药（双氯芬酸钠、布洛芬、酮洛芬） 麻醉药（利多卡因） 甾体抗炎药类（地塞米松磷酸钠） 避孕药（壬苯醇醚） 抗癌药物（5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、紫杉醇）
生胶凝，不需额外添加钙离子
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pH敏感型
1、卡波姆(carbopol) 机制：由于大量羧基基团的存在,可在水中溶解形成低黏度的溶液 在碱性溶液中羧基离子化,负电荷间的排斥作用使分子链膨胀,伸展并相互缠结形成凝胶
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应用 眼用：是制备眼用凝胶的理想辅料，但其酸性较强,不单独用 ＋另一种环境敏感聚合物，如： pH＋温度型聚合物（MC、HPMC、泊洛沙姆）
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常用聚合物及其应用 • 温度敏感型（泊洛沙姆407,纤维素类、聚（N－异丙基）丙烯酸酰胺，木聚糖） • 离子敏感型（海藻酸盐、Gelrite） • pH敏感型（CAP，卡波姆，CS及其衍生物） 温敏型＋离子敏型或pH敏型的联合使用，生物利用度更高
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存在问题及研究热点 问题：刺激性和安全性
的水中,引起聚合物沉降 但由于非水溶剂的毒性,目前这种机制的原位凝胶应用不多
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四、在药剂学中的应用
（一）黏膜给药 1、眼部 特点 • 传统制剂：生物利用度低,经鼻腔被吸收引起不
良反应 • 原位凝胶：生物黏附性及相容性良好；控制药
物释放；便于工业化生产；给药剂量准确，不 易引起不良反应 • 药物：抗细菌类、抗真菌类、抗病毒类、降眼 压类、缩瞳药物、视网膜玻璃体疾病的手术治 疗药物等
凝胶色谱法测定美罗培南中的聚合物
０２、．、． ０８ １ １ ． ０４ ０６、．、． ． ｍＬ置 ２ ０、 ２ ５ｍＬ量 瓶 中 ， 流 动 相 稀 释 用
至 刻度 ， 摇匀 ， 作为 供试 品溶 液 。 照美 岁 培南 含量 测定 项下 方
图 １ 聚 合物 对 照品 溶 液 与 峰 面 积 线 性
照 溶 液 和 供 试 品溶 液 中 聚合 物 峰 的 保 留 时 间 比为 １ ２ 供 ． ， ０ 试 品 中葡 聚糖 于单 体 问分 离度 ≥１５ ． 。均 符 合 系统 适 用性 要 求。
２２溶 液 的 配 制 ．
本身 引起 ， 而是 和药 物 中存 在 的高分 子杂 质有 关 ［］因此 ， 】。 － ２ 控
ｆ 键 词 】美 罗培 南 ； 合 物 ； 胶 色谱 法 ； 定 关 聚 凝 测
『 分类 号】 ２ ６０ 中图 Ｒ ８ ．
［ 标识 码】 文献 Ａ
【 章编 号】 ６ ４ ４ ２ （０ ２ Ｏ （ ）０ ５ — ２ 文 １ ７ — ７ １２ １ ）４ ｂ 一 ０ ５ ０
Ｄ ｅｅ ｍ ｉ ｔｏ ｏ ｇ ｏ ｙ ｅ Ｍ ｅ ｏ ｎｅ ｙ ｇ ｌ ｌｒ ｔｏ ｈｒ ｍ ａ ｏ ｒ ｐｈ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｆ ｈｉ ｈ ｐ ｌ ｍ ｒｉ ｎ ｒ ｐｅ ｍ ｂ ｅ ｔ ａ ｉ ｎ ｃ ｏ ｉ ｆ ｔｇ ａ ｙ
最新葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇--水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。
正相系统以氯仿--甲醇最为常见，先用50%氯仿--甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱(甲醇--水)，样品用最少体积的甲醇--水(尽可能甲醇少一些)溶解，过滤后，湿法上样(一定要滤喔!要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀)。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱(氯仿--甲醇)，样品用最少体积的氯仿--甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
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324 《科技与企业》杂志 2012年8月（下）
科技专论
作者简介
马超，1983年出生，2006年毕业于大庆石油学院，现从事钻井液技术研究。
LA-920的凝胶池与凝胶池座
【摘 要】激光散射粒度分布分析仪LA-920是由日本HORIBA公司生产的，标准版本用于湿法测量，附件有3本，分别为《凝胶池与凝胶池座LA-920》、《蓄水池单元LY-201》和《粉末喷嘴干法进样LY-208》，本篇文章翻译的是《凝胶池与凝胶池座》部分，供参考。
【关键词】激光散射粒度分布分析仪LA-920；凝胶池与凝胶池座；翻译
Paste Cell/Cell Holder For LA-920
Ma Chao Ma Shiqing
（Tuha Drilling Company ,Shanshan 838200,Xinjiang）Abstract:Laser Scattering Particle-Size Distribution Analyzer LA-920 is made by HORIBA in Japan, standard edition is used for wet measurement,and there are three additional files,they are< Paste Cell/Cell Holder For LA-920>,<Reservoir Unit LY-201> and <Powderjet Dry Feeder>,this is the translation of < Paste Cell/Cell Holder For LA-920>, providing reference.
Key words: Laser Scattering Particle-Size Distribution Analyzer LA-920; Paste Celll/Cell Holder; translation
1.前言
本凝胶池座与激光粒度分析仪LA-920一起使用。
当测量溶液样品，或者是分散于高粘度分散体（如高粘度油）的粉末样品时使用。
凝胶池座安装于LA-920的样品箱内。
溶液样品均匀分散于两块玻璃板之间，并且位于LA-920样品箱的激光通道处。
通过计算样品的光分散密度计算得到样品的粒度分布范围。
此凝胶测试法对倾向于测量总数的样品（如磁性粉末样品）是尤其有效，因为高粘度分散阻止了颗粒的运动。
这本手册描述了高粘度硅油中粉末样品的测试程序。
鉴于使用者的需要和想法，此凝胶池座可用于其他的途径。
LA-920的用法细节，参照LA-920的操作说明或程序操作。
2.说明书
凝胶池
凝胶池原料——TEMPAX 牌玻璃
外围尺寸——5.6W*3.5D*75H(mm)*2pcs 凝胶池座
功 能——在3mm的范围内调整样品的厚度。
外形尺寸——36W*70D*85H(mm)（包括测微器）
3.结构名称与作用
测微器：用来调整两块玻璃板之间的距离（样品的厚度）。
测微器固定螺丝：固定测微器。
固定旋钮：将电池固定在底座上。
凝胶池调节器：在CW的说明书中，推动玻璃旋钮转动测微器。
螺丝：将LA-920的样品箱固定在底座上。
定位销：将凝胶池座放在正确的位置上。
表1 原件清单
操作说明书1份底座（带2个螺丝）
玻璃板A 玻璃板B
1张1片1片
确保表1中的配套元件完整。
如下所述安装仪器。
1、打开LA-920的电源开关，预热60分钟。
2、打开LA-920的样品池盖子。
3、移去固定流通池的螺丝，松开固定联通管线的螺母，然后移开流通池座。
4、将底座放在流通池需固定的位置上，拧紧螺丝。
4.测量
在这一节，只描述了凝胶池和凝胶池座，其它说明，请参照LA-920的操作手册。
4.1测量准备
1.将两块玻璃板的内表面相对，放在凝胶池座里。
确保玻璃板A
在玻璃板B的左边。
小心不要将玻璃板倒置。
2.按CW的说明书旋转测微器旋钮1到3次，使玻璃板A、B之间无空隙。
注意不要拧的太紧，会破坏玻璃板或微调器。
确保微调器读数归零。
3.如果微调器的读数没有归零，如下所述固定微调器的位置。
1）、松开微调器固定螺丝。
2）、调节微调器读数归零。
3）、将两块玻璃板的内表面放在一起，然后放在凝胶池座上。
确保玻璃板A在玻璃板B的左边。
小心不要将玻璃板倒置。
4）、使用微调器旋钮轻轻的推动玻璃板，确保之间无空隙。
5）、使用螺丝固定微调器，固定时确保读数归零。
4.2空白试验1、放置约200mg硅油于玻璃板A(或B)内表面的中心位置上。
2、盖上另一块玻璃板，确保内表面对准硅油。
3、将玻璃板放在凝胶池座上，确保玻璃板A在玻璃板B的左边。
小心不要将玻璃板倒置。
4、按CW的说明书旋转测微器旋钮1到3次，保证硅油分散且覆盖于测量区域。
如果硅油没有分散至整个样品区域，增加硅油的量，重新开始。
5、调整微调器至所有读数相同（通常为0.1mm），当所有读数相同时，两块玻璃板是平行的。
6、将凝胶池座放在底座上，在凝胶池座底部与底座的位置上插入定位销。
用固定旋钮将凝胶池座固定在底座上。
7、关闭LA-920的样品池盖。
8、点击LA-920软件显示屏上的“Fine Adj.”按钮，进行调整。
9、点击“Blank”按钮执行空白测量。
10、将凝胶池座从LA-920上移开，取出玻璃板，用纸或酒精擦掉玻璃板上的硅油。
注意：
玻璃板的外表面有涂层防止光的反射，一些有机溶剂和酸能破坏这种涂层，使用纯水或酒精擦拭涂层表面。
4.3样品测量1、使用马达将样品粉末混合于硅油中，直至样品粉末分散均匀。
2、使用树脂铲将混合样品粉末放置在玻璃板A （或B）的内表面中间，分散至样品区域且没有气泡。
3、盖上另一块玻璃板，确保内表面对准硅油。
4、将玻璃板放在凝胶池座上，确保玻璃板A在玻璃板B的左边。
小心不要将玻璃板倒置。
5、按CW的说明书旋转测微器旋钮1到3次，保证硅油分散且覆盖于测量区域。
如果混合样品没有分散至整个样品区域，增加样品的量，重新开始。
6、与空白试验一样，调整微调器至所有读数相同。
7、将凝胶池座放在底座上，插入定位销，使用旋紧按钮将凝胶池座固定在底座上。
8、关闭LA-920的样品池盖子。
9、点击LA-920软件显示器上的“Coarse Adj.”进行调整。
10、 确定显示的透光率值显示良好，如果显示不良好，重新制作混合样品并重新开始。
然而如果样品的浓度有点高，你可以通过减少两块玻璃板之间的距离来调整透光率值。
在这种情况下，微调器的3个数值都应该显示相同，空白试验也要在相同的距离下重新做。
11、点击“Measure”按钮开始样品测试。
12、显示器将显示测试结果。
13、将凝胶池座从LA-920上移开，取出玻璃板，用纸或酒精擦掉玻璃板上的样品。
注意：
玻璃板的外表面有涂层防止光的反射，一些有机溶剂和酸能破坏这种涂层，使用纯水或酒精擦拭涂层表面。
马超 马世清
新疆鄯善吐哈钻井公司 838200。