miR_181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达_张群(1)

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医学研究生学报 2012 年 2 月 第 25 卷 第 2 期 J Med Postgra，Vol． 25，No． 2，February，2012
cy，reaching the maximum at 4． 5 d ［（ 2． 60 ± 0． 15） times，P ＜ 0． 01，n = 5］ and beginning to decrease steadily at 5． 5 d． We successfully obtained 5． 19 × 1010 ifu / ml adenovirus of miR-181a． Adenovirus-mediated overexpression of miR-181a in hESCs markedly increased the mRNA expression dPRL by 9 times （ P ＜ 0． 01） and enhanced dPRL promoter （ dPRL / － 332Luc） activity and dPRL secretion （ P ＜ 0． 01） ． Furthermore，the overexpression of miR-181a significantly promoted the induction of PRL mRNA expression and protein secretion by 8Br-cAMP and MPA （ P ＜ 0． 01） ． Conclusion miR-181a is involved in the regulation of the dPRL expression during the decidualization of human endomentiral stromal cells induced by 8Br-cAMP and MPA．
医学研究生学报 2012 年 2 月 第 25 卷 第 2 期 J Med Postgra，Vol． 25，No． 2，February，2012
miR-181a 促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化 催乳素的表达
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论
著
（ 基础研究）
张 群，刘红玉，蒋 玥，王 玢，颜桂军，孙海翔，胡娅莉
［摘要］ 目的 目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子，但微小 RNA（ microRNA，miRNA） 在蜕膜化过
［中图分类号］ Q522
［文献标志码］ A
［文章编号］ 1008-8199（ 2012） 02-0129-06
microRNA miR-181a regulates decidual prolactin expression in human endometrial stromal cells
ZHANG Qun1，2 ，LIU Hong-yu1，2 ，JIANG Yue1，2 ，WANG Bin2 ，YAN Gui-jun2 ，SUN Hai-xiang2 ，HU Ya-li1，2 （ 1． Drum Tower School of Clinical Medicine，Nanjing Medical University，Nanjing 210029，Jiangsu，China； 2． Center of Clinical Reproductive Medicine， Drum Tower Hospital Affiliated to Nanjing University School of Medicine，Nanjing 210008，Jiangsu，China）
（ － 332 / + 65） 启动子的调控作用。 结果 早孕小鼠子宫组织中 miR-181a 的表达高于非妊娠小鼠子宫，且随着妊娠天数的
增加呈逐渐上升的趋势，在小鼠着床“窗口期”即孕 4． 5 d 达到高峰（ 2． 60 ± 0． 15 倍，P ＜ 0． 01，n = 5） ，孕 5． 5 d 子宫 miR-181a 的表达开始平稳下降； 成功获得滴度为 5． 19 × 1010 ifu / ml 的 miR-181a 腺病毒，该腺病毒介导的 miR-181a 过表达显著增加
达的调控作用。 方法 收集怀孕 0 ～ 6． 5 d 孕鼠子宫组织，采用 TRIZOL 法提取总 RNA，通过实时定量 PCR 检测子宫组织中
miR-181a 的表达。制备 Ad-miR-181a 重组腺病毒，并感染 hESC，24 h 后采用 0． 5 mmol / L 8-Br-cAMP 和 1 μmol / L Medroxyproges-
expression of miR-181a in the uterus of pregnant mice after 0 － 6． 5 d of copulation was detected by quantitative real-time PCR． The hESCs were transfected with recombinant adenovirus of Ad-miR-181a and 24 h later cultured by in vitro decidual induction with 0． 5 mmol / L of 8-Br-cAMP and 1 μmol / L of medroxyprogesterone （ MPA） ． The concentration of dPRL in the culture supernatant and the mRNA expression of prolactin （ PRL） in the stromal cells were detected by quantitative real-time PCR，and the role of miR-181a in regulating the
院生殖医学中心（ 张 群、刘红玉、蒋 玥、王 玢、 dPRL（ － 332 / + 65） promoter in the hESCs determined by luciferase
颜桂军、孙海翔、胡娅莉）
Hale Waihona Puke assay． Results The expression of miR-181a was higher in the
通讯作者：胡娅莉，E － mail： yali_hu@ hotmail． com
uterus of the early pregnant mice than in that of the non-pregnant
ones，and exhibited a rising trend with the increased time of pregnan-
mouse uterus during peri-implantation of embryos and the role of miR-181a in regulating the expression of decidual prolactin （ dPRL） in
human endometrial stromal cells （ hESCs ） ． Methods The
miRNA 为真核细胞内非蛋白质编码的内源性 RNA，其通过与靶 mRNA 的 3'端非翻译区（ 3'-UTR） 完全或部分互补结合，导致靶 mRNA 降解或转录后翻 译抑制而调控靶基因的表达［5 －7］。目前已经发现一 些 miRNA 在胚胎种植“窗口期”和子宫内膜异位症患 者内膜组织中存在表达差异 ［8］。其中 miR-181a 在 子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中表达明显降低， 并受雌、孕激素的调节，近期研究发现 miR-181a 通过 调控 p27 mRNA 等靶基因的翻译参与多种细胞分化 的调节 ［9 －11］。但是，miR-181a 对 hESC 的分化及蜕 膜化标志基因 PRL 的表达调控尚不清楚。
为探讨 miR-181a 对人子宫内膜蜕膜化可能的调 节作用，我们制备了高感染效率的 miR-181a 腺病毒 并感染 hESC，通过实时定量 PCR、荧光素酶报告基因 及化学发光免疫法检测 miR-181a 对蜕膜化标志基因 PRL 的调控作用，为研究 miR-181a 在蜕膜化过程中 的作用奠定基础。
［Key words］ miR-181a； Prolactin； Decidualization； Human stromal cell
0引 言
子宫内膜蜕膜化是胚胎植入及维持妊娠所必须 的改变，蜕膜化对胎盘形成及正常功能建立以满足胎 儿生长需要起着至关重要的作用。在月经周期的黄 体期，受卵巢分泌的雌、孕激素的影响，子宫内膜由增 生期向分泌期改变，一旦妊娠，这种分泌期内膜的形 态与功能将进一步变化即蜕膜化，主要表现为成纤维 样子宫内膜间质细胞变大变圆，并分泌蜕膜化标志性 激素———PRL 和胰岛素样生长因子结合蛋白-1（ insulin-like growth factor binding protein-1，IGFBP-1） ［1］。 其中子宫内膜间质细胞分泌的 PRL 通过自分泌和旁 分泌作用调控子宫内膜上皮和间质细胞的分化以及 胚胎滋养层细胞的增殖和胎盘血管的重塑［2］。同时 PRL 还 可 抑 制 IL-6 和 20α-羟 类 固 醇 脱 氢 酶 （ 20α hydroxysteroid dehydrogenase，20α HSD） 等不利于妊娠 维持的相关基因表达［3 － 4］。
terone（ MPA） 联合进行体外蜕膜化诱导培养； 通过化学发光免疫法和实时定量 PCR 分别检测细胞培养液上清中 dPRL 的浓度
与间 质 细 胞 中 催 乳 素 （ prolactin，PRL ） mRNA 的 表 达； 同 时 采 用 荧 光 素 酶 报 告 基 因 检 测 miR-181a 对 hESC 中 dPRL
hESC 蜕膜化标志基因 dPRL mRNA 表达水平，增高超过 8 倍（ P ＜ 0． 01） ； 在 8-Br-cAMP 和 MPA 联合诱导 hESC 体外蜕膜化时，