第10章 细胞培养技术和培养箱习题
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细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。
2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。
3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。
4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。
5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。
1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。
体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。
2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。
4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。
名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。
细胞培养技术题库
细胞培养技术准备工作常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞培养考试题目
细胞培养考试题目(总3页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-细胞培养特性：分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞）体外培养细胞生长特点：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。
原代培养（原代细胞）：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。
传代培养：细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定浓度之后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。
细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。
有限细胞系：一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。
无限细胞系：传代中极少的后代发生转化，通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。
细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。
克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始，其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体，这种纯化的细胞群称为细胞株，他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。
杂交瘤技术：主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。
杂交瘤：由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。
基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。
筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。
把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。
细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B 淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等.显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。
细胞培养技术方面试题与答案
简答：一、细胞培养目的与用途1. 药物研究与开发(1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究,中药有效成分筛选与鉴定等.(2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.(3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等.(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙,紫杉醇等生物活性成分研究与开发.(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体.基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2, 生物制药(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素,粒细胞生长因子,胸腺肽等 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等二、细胞培养基本条件1,合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境.2,优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清.血清是细胞培养液中最重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分.3,无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件.在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡.因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物. 4,恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度.5,合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳. 细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多,按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类.干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌,液体培养基由专业商家提供,用户可直接使用,非常方便.每种细胞都有其合适的培养基,三、细胞冻存与复苏要点与注意事项1、细胞冻存要点(1)冷冻过程要缓慢.需要冷冻保存的细胞先在4℃冰箱中放置 30-60分钟;然后转入-20℃,放置30分钟;然后再转入-80℃放置16-18小时(或过夜);最后放入液氮中长期保存.有条件的地方,可用程控降温仪,按每分钟-1 到-3℃速度降温,一直到-80℃以下,然后直接放入液氮中长期保存.(2)冻存细胞必须处在对数生长期,活力大于90%,无微生物污染.(3)细胞浓度控制在:1×107-5×107/ml.(4)使用高浓度血清或蛋白保护剂.一般情况下,用于冷冻保存完全细胞生长培养液中血清浓度大于20%.(5)使用合适的细胞冷冻保护剂,以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏.目前,最常用的冷冻保护剂是DMSO(二甲基亚砜),使用终浓度为5-10%.但是,有些细胞系不能用DMSO作为冷冻保护剂,如人白血病细胞系HL-60.因为,DMSO能诱导HL-60细胞分化.在这种情况下,可选用其它冷冻保护剂,如甘油(glycele),羟乙基淀粉等.特别注意:(1)细胞在冷冻过程中在-20℃冰箱内放置时间不可超过1小时,以防止冰晶过大而破坏细胞.也可跳过-20℃这一步骤直接放入-80℃冰箱中,但这样做细胞存活率要低一些.(2)DMSO稀释时会释放大量热量.因此,DMSO不能直接加到细胞液中,必须事先配制.(3)DMSO 必须是细胞培养级别的.新买的DMSO本身处于无菌状态,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管或瓶中,4℃保存.避免反复冻融造成DMSO裂解产生有害物质.并可减少污染机会.如要过滤DMSO,必须选用耐DMSO 的尼龙滤膜. 细胞冷冻保存液主要成分:冷冻保护剂,基础培养液,血清或蛋白.常用细胞冷冻保存液:(1)10%DMSO + 完全细胞生长培养液(20%血清+基础培养液)(2)10%甘油 + 完全细胞生长培养液(20%血清+基础培养液)悬浮细胞冷冻保存操作程序(液氮保存法):(1)取对数生长期细胞培养物,离心200-400g 5分钟.用粘附(贴壁)细胞冷冻保存操作程序(液氮保存法):2、冷冻保存细胞的解冻与复苏要点:(1)快速解冻.冻存细胞从液氮中取出后,应立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟).(2)解冻操作过程动作要轻.由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱,不仅解冻速度要快,而且动作要轻.一般情况下,解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养(1ml 冻存细胞液加入到25-30ml新鲜完全培养液中),24小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液,以去除DMSO.如果,细胞对冷冻保护剂特别敏感,那么,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中.特别注意:(1)解冻时务必注意安全,预防冷冻管爆裂.,要带手套,用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出,放入37℃水浴中.切不可直接用手,以免冻伤.(2)冷冻管在水浴中解冻时,液面不可超过冻存管盖面,否则,易发生污染.解冻冷冻保存细胞的离心方法:(1)从液氮中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴中快速解冻.(2)将1-2ml 冻存细胞液加入到25ml新鲜完全细胞生长培养液中,轻轻混匀.(3)用80g 离心2-3分钟,弃上清液.(4)用完全生长培养液轻轻悬浮细胞团,并计数细胞.(5)接种细胞到培养瓶中,起始密度为3×105/ml.四、细胞传代要点与注意事项1 细胞传代方法贴壁细胞（1）洗掉旧培养液；（2）、用无钙镁PBS洗涤细胞一至二次；（3）、加入适量Trypsin-EDTA溶液方法一：37℃或温室作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆颗粒状时，洗掉消化液，轻敲培养瓶边缘使细胞自瓶壁脱落，然后加入适量的新鲜培养液，与脱落的细胞或细胞团块混合均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养之。
细胞培养技术考题整理
1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
（在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
）2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法？作用：几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
使用方法：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。
配制方法：谷氨酰胺溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
3.如何用台盼兰计数活细胞？正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
（用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在毫升的细胞中加入毫升的％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
）4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。
（一）认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌。
（二）改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌。
（三）操作人员严格遵守无菌操作规程。
（四）培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。
（五）在培养基中加入适量的抗生素。
（六）利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。
（七）利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。
（八）减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。
5.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
细胞培养复习题(含答案)
1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。
）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。
此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。
处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。
细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。
②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。
一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。
③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。
以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。
⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。
此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。
时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。
底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6～24小时。
④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。
细胞培养作业
组织培养技术：是指从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
二、包括：（1）无污染的环境
无毒和无菌培养环境是保证培养细胞生存的首要条件。
（2）适宜温度
人体细胞的适宜温度为36.5℃+0.5℃，偏离时，会影响细胞代谢，甚至死亡
体外培养细胞形态学检查，包括肉眼、普通显微镜、荧光显微镜、电子显微镜等
倒置显微镜观察包括（1）生长状态观察
细胞接种或传代后，每天或间隔1-2天观察细胞的形态、生长、培养液、酸碱度和污染与否等，随时掌握细胞的动态变化，以便做换液或传代处理。
（2）细胞一般形态
一般显微镜下可见，细胞透明度大、轮廓不清，只有用倒置显微镜、相差显微镜观察，才能看清细胞的细微结构。
八.简述贴壁细胞传代培养法的过程
1） 弃去培养瓶中的培养液
2） 加入1-2 ml 0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准）
静置2-10 min（显微镜下动态监测）。
3） 吸去胰蛋白酶液，加入培养液。
4 ）用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。
5） 吸取1/3—1/4细胞悬液，接种于新的培养瓶内。
应用:
软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。
3）脂质体介导转染法
脂质体是由连续的双层复合脂质组成的微型泡囊体。阳性脂质体与DNA上带负电的磷酸基团结合，通过膜融合及胞内吞噬作用进细胞内，将DNA释放入胞质。
4）病毒转导法
逆转录病毒侵入宿主细胞并能整合于细胞染色体。将外源基因DNA插入逆转录病毒载体，通过辅助细胞包装成高感染度的病毒颗粒，感染细胞可获得表达外源基因的细胞。
细胞培养技术题库1-0-8
细胞培养技术题库1-0-8问题：[单选,A1型题]下列关于细胞培养的描述错误的是（）A.冻存细胞的液氮温度约为-196℃B.培养箱的温度一般在36～37℃C.一般使用0.45μm的微孔滤膜除菌D.培养箱内通5%CO，95%空气E.处理活细胞的离心速度一般在1000r／min左右一般使用0.22μm的微孔滤膜除菌。
问题：[单选,A1型题]下列关于细胞冻存及复苏过程的描述错误的是（）A.细胞冻存的原则为快速冻存B.冻存液中含有8%二甲基亚砜C.每只冻存管中以冻存（1～1.5）×10个细胞为宜D.冻存的细胞提前一天换全培养液E.复苏时将冻存细胞从液氮中取出迅速投入42℃温水中速溶冻存细胞时，要注意缓慢逐步降温。
先将细胞悬液加入冻存管，封好口，冰水浴置-20℃冰箱过夜，次日转A-80℃冰箱，24～48小时后再转入液氮罐中。
问题：[单选,A1型题]肾穿刺活检病理诊断免疫病理学检查，通常不包括（）A.IgAB.IgDC.IgGD.C3E.C1q依据导致肾脏疾病的常见免疫复合物成分，免疫病理学常规进行IgA、IgG、IgM的免疫球蛋白及旁路激活的补体C3和经典途径激活的补体C1q、C4和纤维蛋白的检查。
(飞禽走兽金鲨银鲨 https:///)问题：[单选,A1型题]肾穿刺电镜标本的固定液和其浓度是（）A.10%中性缓冲甲醛固定液B.10%甲醛固定液C.2.5%戊二醛固定液D.4%多聚甲醛固定液E.1.25%戊二醛固定液问题：[单选,A1型题]肾穿刺标本应用石蜡切片进行免疫荧光染色时，以下描述不正确的是（）A.IgM不受影响B.纤维蛋白原不受影响C.IgA、IgG强度减弱D.补体不受影响E.HBsAg不受影响石蜡标本进行免疫荧光染色时，IgM、纤维蛋白原和HBsAg不受影响，补体往往消失，IgA、IgG强度减弱。
问题：[单选,A1型题]肾活检石蜡包埋切片常用的固定液有（）A.缓冲甲醛B.80%乙醇C.戊二醛D.多聚甲醛E.无水乙醇问题：[单选,A1型题]肾活检时免疫荧光制片厚度的要求是（）A.2μmB.3～4μmC.5μmD.5～6μmE.10μm问题：[单选,A4型题,A3A4型题]男性，35岁。
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第十章细胞培养技术和培养箱首页习题习题参考答案习题名词解释选择题简答题一、名词解释1. 细胞培养2. 细胞培养传代3. 原代细胞培养4. 无限细胞系5. 细胞融合6. 细胞治疗7. 培养箱8. 缓冲室9．手套操作箱二、选择题【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。
1.体外培养细胞的分类（贴附型或悬浮型）是根据（）A．细胞为上皮样或成纤维细胞样B．能否贴附在支持物上生长C．呈密度抑止特性D．肿瘤细胞E．细胞可多次传代2. 下述细胞传代的概念中，正确的是（）A．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器的过程B．从体内取出细胞接种到培养容器，细胞继续增殖的过程C．培养细胞期间更新培养液的过程D．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器并及时更新培养液使细胞增殖继续的过程E．细胞倍增的过程3. 细胞生长维持液，需添加的血清量的百分比为（）A．1％～2％B．2％～5％C．5％～10％D．10％～20％E．20％～25％4．培养细胞传代时，通常是（）A．根据不同细胞采取不同的方法B．常用二乙烯四乙酸二钠（EDTA）C．EDTA与胰蛋白酶按不同比例混合使用D．悬浮生长的细胞直接添加胰蛋白酶”E．贴壁生长的细胞添加新鲜培养液5. 二氧化碳培养箱结构的核心部分，主要是A．湿度调节装置B．湿润的含水托盘C．温度调节器D．CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置E．气体保护器装置6. 二氧化碳培养箱调节CO2浓度范围为（）A．0％～20％B．20％～40％C．10％～20％D．20％～30％E．30％～40％7. 厌氧培养箱通过自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态，其换气过程是（）A．①气体排空→②净化→③气体排空→④N2净化→⑤气压平衡B．①气体排空→②N2净化→③气压平衡C．①N2净化→②气体排空→③N2净化→④气压平衡D．①N2净化→②气体排空→③N2净化→④气体排空→⑤气压平衡E．①气体排空→②N2净化→③气体排空→④N2净化→⑤气体排空→⑥气压平衡8. 厌氧培养箱内厌氧菌最佳的气体生长条件是（）A．80% N2、5% CO2和15%H2B．80% N2、15% CO2和5% H2C．80% N2、10% CO2和10% H2D．85% N2、5% CO2和10% H2E．85% N2、10% CO2和5% H29. 厌氧培养箱催化除氧系统箱内采用钯催化剂，其作用是（）A．催化箱内氧气与氢气反应生成水后再由干燥剂所吸收B．催化无氧混合气体内的微量氧气与氢气反应，生成水后再由干燥剂所吸收C．除去箱内CO2D．除去箱内充满的氧E．除去箱内H2S10. 维持细胞较快的生长增殖速度，需添加的血清量为（）A．1％～2％B．2％～5％C．5％～10％D．10％～20％E．20％～25％【X型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。
1. 培养细胞的生存条件（）A．培养液B．合适的温度C．一定的湿度D．恰当的气体成分E．一定量的抗生素2. 确定有无支原体污染可做的检测有（）A．相差显微镜检测B．荧光染料染色检测C．用电镜检测D．DNA分子杂交检测或支原体培养E．用FITC荧光染料染色，置荧光显微镜下观察亮绿色小点3. 细胞培养可应用于（）A．细胞融合B．核移植C．组织工程D．图像处理技术E．激光技术4. 电热恒温培养箱适用于（）A．普通的细菌培养和封闭式细胞培养B．厌氧细菌培养C．病毒培养D．衣原体培养E．开放式细胞培养5. 二氧化碳培养箱已广泛应用于（）A．各种组织和细胞的培养、病毒增殖B．细菌培养、遗传工程，C．试管工程和克隆技术D．控制温度的精度E．门加热三、简答题1．细胞培养的生存条件有哪些？2．常见细胞培养箱有哪些类型？3．各种细胞培养箱可应用于哪些方面？4.如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染？5. 如何检测培养细胞的支原体污染?6. 简述气套式CO2培养箱的结构特点。
7．简述厌氧培养系统的保持箱内的厌氧状态工作原理。
8．简述厌氧培养系统的基本构成。
9．如何使用厌氧培养系统？习题参考答案一、名词解释1. 细胞培养：从生物体内取出组织或细胞，在容器内模拟体内生理环境，于无菌、适当温度和一定营养条件下进行孵育培养，使之保持一定的结构和功能，以便于我们观察研究。
2. 细胞培养传代: 当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器，并及时更新培养液，使细胞增殖继续，这一过程叫传代。
3. 原代细胞培养：从体内取出细胞接种培养到第一次传代叫原代细胞培养，原代细胞一经传代后便称为细胞系。
4.无限细胞系：细胞系进入传代期，细胞增殖旺盛，传代后细胞获得永生性即永久增殖的能力，称为无限细胞系（或连续细胞系）。
5. 细胞融合：将来源于不同细胞核的染色体结合到同一个核内，形成一个合核体的杂种细胞称为细胞融合。
6. 细胞治疗：用体外培养的正常细胞，或者是导入外源基因的细胞，也可利用由干细胞诱导分化而来的特定细胞，植入患者病变部位以代偿病变细胞丧失的功能。
7. 培养箱：是细胞培养必需设备，可提供不同细胞与细菌生长所需适宜温度和气体成份的装置。
有普通的电热恒温培养箱、CO2培养箱和厌氧培养箱等类型。
8. 缓冲室：是一个传递舱，具有内外两个门，其后部与一个间歇真空泵相连，缓冲室随时可自动抽气换气造成无氧环境。
9．手套操作箱：厌氧培养箱前面安装的操作者塑料手套，使操作箱与外界隔绝。
操作箱内侧门与缓冲室相通，由操作者用塑料手套控制开启。
当标本、培养基等在缓冲室内变为厌氧状态时，便可打开内门将它们移入工作室。
二、选择题【A型题】1．B 2．D 3．B 4．A 5．D6．A 7．E 8．D 9．B 10．D【X型题】1．ABCD 2． ABCD 3．ABC 4．ABCD 5．ABC三、简答题1．细胞培养的生存条件有哪些？答：培养细胞需要特定的培养基和培养设备，需要特有的环境，包括恒定的温度（37 C）、湿度（95％）和气体（通常为5% CO2成分）。
培养细胞所需营养物质包括糖、氨基酸、维生素、无机离子、微量元素等，尚需加一定量的动物血清（胎牛或小牛血清）。
为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。
2．常见细胞培养箱有哪些类型？答：常用培养箱有电热恒温培养箱、二氧化碳培养箱和厌氧培养箱等。
电热恒温培养箱有隔水式电热恒温培养箱和气套式电热恒温培养箱两种；二氧化碳培养箱种类繁多，根据其工作原理，可以分为气套式CO2培养箱、水套式CO2培养箱、红外CO2培养箱、高温灭菌培养箱、光照低温培养箱、恒温恒湿培养箱等。
3. 各种细胞培养箱可应用于哪些方面？答：电热恒温培养箱适合于普通的细菌培养和封闭式细胞培养，并常用于有关细胞培养的器材和试剂的预温及恒定。
CO2培养箱已广泛应用于各种组织和细胞的培养、病毒增殖、细菌培养、遗传工程，试管工程和克隆技术等，用于研究各种因素对细胞的结构、功能和各种生命活动规律的影响等临床医学和检验医学的工作。
4.如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染？答：一般肉眼可见在培养液中形成白色或浅黄色飘浮物；倒置显微镜下可见于细胞之间悬浮飘荡在培养液中的纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝或卵圆形单细胞真菌，为霉菌污染。
培养液短期内颜色变黄并出现明显混浊现象；倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量细小的圆球状颗粒飘浮，有时在细胞表面和周围有大量细菌存在，为细菌污染。
5. 如何检测培养细胞的支原体污染?答：①相差显微镜检测，将细胞接种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间；②荧光染色法，用荧光染料使支原体DNA着色，置荧光显微镜下观察，可见散在于细胞周围或附于细胞膜表面的亮绿色小点为支原体污染；③电镜检测，用扫描电镜或透射电镜观察支原体；④DNA分子杂交检测或支原体培养等方法。
6. 简述气套式CO2培养箱的结构特点。
答：①直接加热，加热组件环绕所有外夹套，能均匀加热并用玻璃纤维绝缘包绕；②箱体不需注水、排水，无溢出或缺水警报；③CO2取样口处于箱体的前部；④与水套式相比重量较轻；⑤采用过温保护系统，当温度过高可自动切断电源；⑥可选配HEPA过滤系统，箱体内气体每分钟被过滤一次，快速达到100级气体质量，能为细胞提供理想环境。
7.简述厌氧培养系统保持箱内的厌氧状态的工作原理。
答：通过催化除氧系统和自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态。
（1）通过自动化装置自动抽气、换气的自动连续循环换气系统，使箱内最大程度地减少O2含量，产生厌氧状态。
自动换气功能可由按钮控制，培养箱与真空泵相连，当所有要转移的物品被放入缓冲室后，关闭外门，进行自动去除缓冲室中的氧气。
循环换气预设三个气体排空阶段、两个氮气净化阶段和一个缓冲室平衡气压阶段。
其换气过程是：①气体排空；②N2净化；③气体排空；④N2净化；⑤气体排空；⑥气压平衡：平衡缓冲室内的气压与气体成分（作用时间1分31秒，延迟时间4分32秒）。
此时，厌氧状态灯显示为ON，此时即可将内门打开，钯催化剂将除去余下的少量O2。
（2）催化除氧系统箱内采用钯催化剂将除去余下的少量O2，可催化无氧混合气体内的微量氧气与氢气反应，生成水后再由干燥剂所吸收。
催化剂片和干燥剂片分别密封于筛网中组成三层催化剂片。
三层催化剂薄片插入气流系统，有风扇使箱内气体得到连续循环。
8．简述厌氧培养系统的基本结构。
答：为密闭的大型金属箱，由手套操作箱和缓冲室（传递箱）两个部分组成，操作箱内还附有小型恒温培养箱。
缓冲室是一个传递舱，具有内外两个门，在其后部与一个间歇真空泵相连，缓冲室随时可自动抽气换气造成无氧环境，在缓冲室的后部，连接有厌氧气体管。
手套操作箱的前面装有塑料手套，操作者双手经手套伸入箱内操作，使操作箱与外界隔绝。
操作箱内侧门与缓冲室相通，由操作者用塑料手套控制开启。
小型恒温培养箱中细胞培养室的操作温度通常是固定35℃，变化范围是“（室温+4）℃ 70℃”，控制精度为±0.3℃。
当温度超高温时，会发出报警。
9．如何使用厌氧培养系统？答：所有要转移的物品被放入缓冲室后，关闭外门；按下“Cycle Start”钮即可进行自动去除缓冲室中的氧气。
经循环换气的三个气体排空阶段和两个氮气净化阶段，使缓冲室气体达98％的无氧状态，再经缓冲室气压平衡，操作箱与缓冲室平衡，厌氧状态灯显示为ON，此时即可将内门打开，钯催化剂将除去余下的少量O2。
操作者经手套伸入箱内进行标本接种、培养和鉴定等全部工作。