细胞培养时存在的生物安全问题简析
细胞培养污染拯救及预防方法
细胞培养污染拯救及预防方法概论▪污染是细胞培养的大敌。
预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
▪一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
（一）污染的类型▪细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。
1、细菌污染▪细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。
最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
▪培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
2、真菌污染▪真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
▪培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
▪真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
丝状菌污染3、支原体污染▪支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。
开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。
多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。
▪培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。
但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。
支原体污染阳性阴性4、病毒污染▪组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。
目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。
▪尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。
细胞培养常见问题的原因及对策
细胞培养常见问题的原因及对策细胞培养中的注意事项1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS (calf serum) 则是指小牛血清。
HS (horseserum) 则是指马血清。
6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。
7 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
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细胞培养生物论文2000字_细胞培养生物毕业论文范文模板细胞培养生物论文2000字(一)：探析大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品的运用进展论文摘要：探析大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品的方法进行分析，主要包含空心纤维法、微囊法及微载体法，且结合大规模动物细胞培养技术的应用特点，提出大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品中应用的工艺选择方式，以期能够真正发挥大规模动物细胞培养技术的应用优势，为现代兽用生物制品的运用与发展奠定良好基础。
关键词：大规模动物细胞培养技术；兽用生物制品随着现代医学的快速发展，大规模动物细胞培养技术逐渐在医学研究、生物学研究中得到推广应用，在各类大规模生产中得到推广应用。
当前大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品制作方面应用的价值较高，但是由于受到传统工艺技术的影响，总体的应用效果还会受到较大影响。
动物细胞培养技术在兽用生物制品运用中的应用，能够提升培养的技术水平，优化细胞培养的环境，且有助于转变细胞培养的特性，对现代兽用生物制品产业技术的发展能够产生重要影响。
文章将结合当前兽用生物制品的研究现状进行分析，希望能够对相关研究活动带来一定借鉴价值。
1大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品中应用的方法动物细胞大规模培养技术是建立在贴壁培养与悬浮培养的基础上，将早期流式细胞培养技术融入其中，充分发挥生物技术应用的价值。
纵观当前大规模动物细胞培养技术的应用现状，其技术具体包含空心纤维法、微囊法以及微载体法。
1.1空心纤维法空心纤维法最初所应用的纤维为醋酸纤维素与硝酸纤维素组合而成，作为具有透过性特点的滤膜，其外径约在1/3～3/4mm之间，表面存在诸多海绵孔结构，水分、气体以及营养物质等能够从此经过，且贴附其上进行生长。
培养期间培养系统主要是由3～6层空心纤维构成[1]。
大规模动物细胞培养期间，可以将其种在空心纤维外腔。
在培养一段时间之后，细胞能够达到一定的密度，细胞不会继续增长，但是能够持续进行分泌，保证其蛋白质与各类生物物质的需求。
细胞培养中的污染问题与对策
细胞培养中的污染问题与对策细胞培养是一种常见的实验室技术，用于研究细胞的生长、分化和功能。
然而，在进行细胞培养的过程中，污染是一个不可忽视的问题。
污染源可以来自外部环境、工作环境或实验操作不当。
对于细胞培养的研究结果的准确性和有效性而言，解决污染问题的对策至关重要。
首先，污染问题可能来自实验室环境以及操作者自身。
实验室环境中存在的微生物污染可能会导致细胞培养的受损。
因此，保持实验室环境的清洁是非常重要的。
定期进行实验室卫生和表面消毒是降低微生物污染的有效措施。
此外，操作者在进行细胞培养时需要严格遵守无菌操作规程，以减少自身的污染对细胞的影响。
操作者需要穿戴合适的实验室清洁工作服、手套和口罩，并在操作过程中注意避免直接接触细胞培养物。
其次，细胞培养中使用的培养基和试剂也是潜在的污染源。
为了避免污染，选择高纯度的培养基和试剂是至关重要的。
购买来自可靠供应商的培养基和试剂，严格遵循使用说明书的指导，可以减少产品本身的污染。
此外，在实验进行过程中，避免将培养基和试剂暴露在不洁的环境中，并妥善保存这些试剂，以防止其受到污染。
另外，细胞培养过程中的传代也是容易导致污染的环节。
细胞传代是保持细胞生长的关键步骤，但传代时的细胞污染可能会导致细胞功能和表型的变化。
为了避免细胞污染，应该定期对细胞进行鉴定和检测，特别是使用发展中的分子标识技术。
这些技术可以帮助确定细胞是否保持纯种，以及是否受到污染。
此外，定期保存冻存品库并且用来传代的细胞不要超过特定的传代次数，以保持细胞的良好生长状态。
另一个需要关注的污染问题是培养器具的污染。
培养器具包括培养皿、培养瓶、移液器等。
这些器具在使用之前需要经过高温高压灭菌处理，以确保其无菌状态。
在使用过程中，需要注意避免直接接触器具内外部分，以减少污染的可能性。
同时，定期更换使用的培养器具也是非常重要的，以防止积累污染物。
最后，除了以上提到的对策，培养载体选择也可以在一定程度上减少细胞培养时的污染问题。
细胞培养试剂常见问题及解决方法总结
细胞培养试剂常见问题及解决方法总结细胞培养是生物学和医学研究中的重要技术，但进行细胞培养时可能会遇到一些问题。
以下是细胞培养试剂常见问题及解决方法总结：1. 细胞生长缓慢或不生长：可能原因：营养不足、血清质量不佳、细胞密度过高或过低、温度不适等。
解决方法：调整培养基成分，使用优质血清，控制细胞密度，保持温度恒定。
2. 细胞形态异常：可能原因：培养基中某些成分影响、有毒代谢产物积累、污染等。
解决方法：检查并调整培养基成分，定期更换培养基，检测并处理污染。
3. 细胞死亡：可能原因：血清质量差、有毒代谢物积累、pH值或渗透压失衡等。
解决方法：使用优质血清，定期检测和更换培养基，维持pH和渗透压的稳定。
4. 污染：可能原因：操作过程中未严格遵守无菌原则、培养环境不洁净、未及时处理污染等。
解决方法：加强无菌操作训练，定期清洁和消毒培养环境，发现污染立即处理。
5. 细胞分化：可能原因：长时间传代、某些生长因子刺激等。
解决方法：尽量减少传代次数，避免不必要的生长因子刺激。
6. 细胞融合：可能原因：某些病毒或化学物质诱导、操作不当等。
解决方法：避免使用可能导致融合的物质，严格控制操作条件。
7. 基因表达异常：可能原因：基因突变、染色体重排等。
解决方法：使用基因编辑技术进行修正，或选择适当的细胞系。
8. 染色体异常：可能原因：长时间传代、某些化学物质影响等。
解决方法：尽量减少传代次数，避免不必要的化学物质刺激。
9. 培养基问题：可能原因：某些成分分解、过期、配置错误等。
解决方法：检查并更新培养基，确保其质量和有效期。
10. 试剂质量问题：可能原因：购买的试剂质量不佳、运输或存储条件不当等。
解决方法：选择信誉良好的供应商，确保运输和存储条件符合要求。
11. 设备问题：可能原因：设备故障、老化、校准不当等。
解决方法：定期维护和校准设备，确保其性能和准确性。
12. 操作问题：可能原因：操作不当、未遵循标准化流程等。
解决方法：加强操作培训，建立并遵守标准化操作流程。
如何预防细胞培养污染问题
如何预防细胞培养污染问题细胞培养是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，但细胞培养过程中常常会面临细胞污染问题。
细胞培养污染会严重影响实验结果的准确性，因此需要采取一系列措施来预防细胞培养污染。
本文将介绍几种常见的细胞培养污染问题以及预防措施。
1. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
来自操作人员、试剂、培养器具和工作环境等多方面的细菌污染都可能导致细胞培养中的细菌污染。
预防措施：•穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理，减少操作人员带入的细菌污染。
•使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，保持培养器具的无菌状态。
•经常对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。
2. 真菌污染真菌污染是细胞培养中另一个常见的问题。
真菌往往来自环境中的空气、试剂、培养器具或操作人员。
真菌污染会导致细胞生长异常，细胞死亡或实验结果异常。
预防措施：•定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。
•使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长。
•采取无菌技术操作，减少操作人员带入的真菌污染。
•定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生。
3. Mycoplasma 污染Mycoplasma 污染是细胞培养中常见但容易被忽视的问题。
Mycoplasma 是一类细小的细菌样微生物，常常会导致细胞株的污染。
Mycoplasma 污染会影响细胞生长、代谢以及实验结果的可靠性。
预防措施：•定期检测细胞株的 Mycoplasma 污染情况，可以使用 PCR 或流式细胞术等方法进行检测。
•新购买的细胞株进行隔离培养，并进行 Mycoplasma 检测，确保细胞株的无菌性。
•严格控制培养器具、培养基和操作人员的无菌操作，减少Mycoplasma 污染的可能性。
•定期更换培养基并添加抗生素，可以抑制 Mycoplasma 的生长。
4. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，不同细胞株之间发生的细胞混合现象。
细胞培养中的常见问题解决方法
细胞培养中的常见问题解决方法细胞培养是生物医学研究和药物开发中不可或缺的重要工具。
然而，细胞培养过程中常常会遇到一些问题，例如污染、细胞凋亡、不适当的生长条件等。
本文将介绍细胞培养中的一些常见问题以及相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能是由细菌、真菌、酵母、病毒等微生物引起的。
污染会导致细胞生长受阻、实验结果的不可靠以及其他严重后果。
为了解决这个问题，可以采取以下几种方法：- 严格按照无菌操作操作培养细胞。
使用无菌操作条件，包括在无菌环境下穿戴手套、使用消毒液清洗操作台面和器具、对培养皿和培养物进行灭菌处理等。
- 经常检查细胞培养物的外观。
细胞培养物应呈现透明、均匀的状态。
如果有任何可疑的异常，请及时进行检查和处理。
- 使用含有抗生素的培养基。
对于某些细胞株来说，添加适量的抗生素可以阻止细菌等污染物的生长。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一个重要阶段，但在细胞培养过程中，过量的细胞凋亡会导致细胞数量的减少，对实验结果造成不利影响。
以下是一些常见的细胞凋亡问题及其解决方法：- 减少细胞培养的过度处理。
频繁的细胞移植和传代会导致细胞凋亡增加。
适当延长传代周期，避免过多的细胞移植。
- 提供适当的细胞营养来源。
细胞需要足够的营养物质来维持正常的生长。
不合适的培养基组分或者浓度可能会导致细胞凋亡。
确保培养基中的营养物质符合细胞的需求，并根据细胞株的特点进行相应的调整。
- 坚持细胞培养的无菌操作。
如前所述，细菌或其他微生物的污染会导致细胞凋亡的增加。
通过无菌操作避免细胞污染，继而减少细胞凋亡。
3. pH值失调培养基的pH值是细胞培养中一个重要的生长条件。
pH值的不稳定性会影响细胞的代谢和生长。
以下是一些解决pH值失调的建议：- 定期检测和调整培养基的pH值。
使用pH计或试纸进行测定，及时调整pH值，保持在适宜的范围内。
- 确保培养基的配制正确。
细胞培养基的配制过程中，需要严格按照配方中所指定的浓度和比例添加各种成分。
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法细胞培养技术在生物医学研究领域扮演着重要的角色。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些污染问题，严重影响实验结果的可靠性和重复性。
本文将探讨细胞培养技术中常见污染问题的解决方法。
一、细菌污染在细胞培养过程中，细胞培养器皿、培养基和实验室环境中都可能存在细菌污染的问题。
为了解决这个问题，可以采取一些预防措施。
首先，必须定期清洗和消毒培养器皿，以确保其表面的无菌。
其次，使用高品质和无菌的培养基是防止细菌污染的关键。
培养基应在严格无菌条件下配制，并在每次使用前进行相关的质检。
此外，实验室环境的洁净度也需要保持，经常进行清洁和消毒，减少细菌的滋生和传播。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养中常见的问题之一，尤其在湿度高的环境下更容易发生。
为了避免真菌污染，可以在实验室中合理控制湿度，并保持培养器皿和培养基的干燥。
此外，使用抗真菌剂可以有效地减少真菌感染的风险。
对于一些特定的细胞系，可以对细胞培养器皿进行预处理，如用乙醇或己硝酸等消毒剂进行表面处理，以提高培养器皿的抗真菌能力。
三、交叉污染细胞系的交叉污染是实验室中常见的问题。
它可能是由于不慎携带其他细胞系的污染物，或是在培养中不同细胞系之间的相互感染所致。
为了防止交叉污染，可以采取一些措施。
首先，实验人员在操作细胞系之前必须养成良好的个人卫生习惯，包括洗手、戴手套等。
其次，不同细胞系之间要严格分开培养，避免接触。
此外，可以对新获得的细胞系进行鉴定，使用PCR等方法进行验证，确保其纯度。
四、内源性污染内源性污染是指细胞系自身产生的污染物。
它可能是由细胞自身分泌的代谢产物、去胎氧核糖核酸或细胞死亡引起的。
为了解决这个问题，可以采取以下措施。
首先，要定期更换培养基和培养器皿，及时清除废液和死细胞。
其次，对细胞进行经常性的鉴定，确保其活性和稳定性。
同时，培养温度、培养时间等因素也需要加以调整，以减少内源性污染的发生。
综上所述，细胞培养技术中常见的污染问题是可以通过一系列的控制措施来解决的。
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细胞培养时存在的生物安全问题简析
作者：胡燕玲高习文
来源：《现代畜牧科技》2018年第07期
摘要：动物细胞培养技术在生物技术和生物医药的相关研究领域中的应用非常广泛。
随着动物细胞培养在各个领域应用的内涵逐渐的深入，随之也产生了相应的生物安全问题，也就是生产中常说的生物健康和环境因素之间的风险性问题，而且此问题已经受到相关领域专业人士的广泛关注。
现主要分析动物细胞培养过程中存在的生物安全问题，并且针对具体的问题及其风险进行评估，以及更深入的探讨和研究，以期为生物健康和环保提供更加可靠的理论基础和相关的技术支持。
关键词：动物细胞培养；生物安全；危险评估
中图分类号：R446.11+3
文献标识码：B
文章编号：2095-9737（2018）07-0018-01
1 概述
目前，通常是通过动物细胞进行培养，以作为培养基质提供给病毒疫苗的生产所用，此外，许多生物药品的生产过程中也不能缺少动物细胞的培养。
随着动物细胞培养的不断深入应用，相应的生物安全问题随机出现，愈来愈受到关注。
然而，实际生产中如果想将风险在最大程度上加以控制，就需要采取比较全面的风险评估再进行确定，还要考虑细胞培养操作的类型以及细胞培养潜在的生物危害等情况。
2 动物细胞培养过程中存在的生物安全问题
2.1 细胞培养的特点
实际生产中针对动物细胞培养过程的风险进行评估时，必须考虑的因素就是细胞培养的本质特征，主要体现在物种来源、细胞或组织类型以及培养类型三个不同的方面。
2.2 遗传修饰获得的特征
实际生产中，在实验室遗传修饰获得的重组细胞与其非重组类似物相比较，通常对生物健康和环境破坏的能力要更强一些。
所以在实际评估动物细胞培养风险时，还必须确定重组细胞获得的遗传修饰特征，将其对评估的影响考虑在内。
2.3 致病因子感染获得的特征
病原体故意感染：实际对细胞进行培养的过程中存在着病原体侵染培养细胞的可能性。
所以要确定与被感染细胞培养物潜在的相关危害，就要对传染性病原体本身的特性加以验证。
外来污染因子：实验室进行细胞培养的过程中，外来污染因子是对生物的主要危害来源。
因为存在的外来污染因子会通过某些特殊物种的来源从而对细胞培养产生一定的污染，影响生物健康和环境的安全。
其中主要包括以下几个方面的来源。
①细菌和真菌：通常检测细胞的培养物都会有细菌或真菌污染物存在，主要因其具有超过细胞培养物的生长能力。
此种情况在实际生产中还是相对比较容易加以防治的。
②支原体：在细胞培养过程中，支原体污染的情况相对属于比较严重的，无论是影响范围、检测难度还是防治等方面都存在比较难以处理的情况。
因为在细胞培养的大多阶段不是非常容易能够检测出支原体感染情况的存在，所以就会造成非常多的不可预测的效应出现，所以细胞培养时不能忽视对于支原体的检测工作。
③病毒：细胞培养的过程中还不能忽视病毒污染的情况存在，可能包含着某些具有广泛宿主的病毒侵染动物的情况。
④寄生虫：生产中在处理或者制备各原始细胞培养物的时候很可能会遭受到外来寄生虫造成的侵袭，又或者是来源于已知和疑似被特异寄生虫感染的供体细胞或组织，试验时也不能忽视。
⑤朊病毒：少数培养的细胞系通过继代培养能够显示出促进PrP（ Sc）的稳定和持续复制以及感染的作用，但是大多数的细胞系对朊病毒感染具有抵抗力。
2.4 操作类型
进行细胞培养的时候，除了应该确定生物学风险以外，还有一个比较重要的方面就是操作类型因素的影响。
动物细胞培养操作类型存在的主要问题体现在以下几个方面：可能暴露的环境特征、行为特征、非标准操作三个方面的内容。
2.5 生物安全建议和防护
细胞培养时必须考虑相关的生物学风险，并且进行相应的监测手段，此外操作类型也是需要考虑的事项，将以上因素都确定之后采取适当的防护等级，以保护生物安全以及环境的健康。
实际生产中在建立适当的防护等级时，需要通过实施普通的和特殊的工作实践和防护措施来实现。
在进行动物细胞培养的整个操作过程中都应该通过防护措施的落实而避免污染的情况出现。
这些措施应该在保护操作者和培养物的基毒的侵染，防护措施应与相应传染性病原体的建议础上，进一步降低外来因子污染的风险。
3 结语
动物细胞培养过程中，对于防护等级的准确划分的要求一般不能够适应于特殊的环境，所以在防护等级划分时应该针对具体案例的具体情况加以考虑，同时还要依赖于全面的风险评估内容。
但是在实际生产中因为外来的污染因子很不容易被检测出来，而且又很少能够被验证，
所以可能构成与细胞培养操作相关的主要危害。
技术人员会更加重视并且关注生物安全和风险评估的问题，并且总结出更加有效的防护措施，减少相关的损失。