细胞培养常见问题及其解决
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法：问题1培养液pH值变化太快可能原因(1)CO2张力不对(2)培养瓶盖拧得太紧(3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足(4)培养液中盐浓度不正确(5)细菌、酵母或真菌污染建议解决方法(1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。
(2)松开瓶盖1/4圈。
(3)改用不依赖CO2培养液。
加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。
(4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。
(5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变可能原因(1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来(2)冰冻保存培养液建议解决方法(1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。
(2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化可能原因细菌或真菌污染建议解决方法丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题4：培养细胞不贴壁可能原因(1)胰蛋白酶消化过度(2)支原体污染(3)培养瓶瓶底不干净(4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解)(5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)(7)接种细胞起始浓度太低或太高建议解决方法(1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
(2)分离培养物，检测支原体。
清洁支架和培养箱。
如发现支原体污染，丢弃培养物。
(3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶(4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可)(5)重新配置消化液或培养液启用新的保种细胞(7)调节最佳接种细胞浓度问题5：悬浮细胞成簇可能原因(1)培养液中含钙、镁离子(2)支原体污染(3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释(4)DNA污染建议解决方法(1)用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
细胞培养过程中常见的变异问题分析与解决方法
细胞培养过程中常见的变异问题分析与解决方法细胞培养作为生物学研究中重要的实验手段之一，被广泛应用于细胞生物学、生物医学研究和药物研发等领域。
然而，在细胞培养过程中，常常会遇到各种变异问题，如细胞形态改变、生长速度减慢以及细胞死亡等等。
本文旨在分析这些常见的变异问题，并提供相应的解决方法。
一、细胞形态改变细胞形态的改变是细胞培养过程中较为常见的变异问题之一。
通常，细胞形态的异常变化可能包括细胞变大或变小、细胞伸长或收缩等。
这些变异往往会导致细胞功能和代谢活性的改变，从而影响实验结果的准确性。
解决方法：1. 检查培养条件：首先，应对培养基质及培养液的pH值、温度、含氧量等因素进行仔细的调控与监测，以确保细胞处于适宜的生长状态。
2. 检测浓度：根据细胞系的特性，调整培养基中添加物的浓度，如血清、酶消化液等，以维持适当的细胞形态。
3. 鉴别混杂：定期进行细胞株的鉴别，避免因细胞混杂导致形态异常。
二、生长速度减慢细胞在培养过程中，如果出现生长速度减慢的情况，可能会严重影响实验进展与结果的获取。
细胞生长速度的减慢可能是由多种因素引起的，如细胞老化、细胞密度过高、培养液中营养物质不足等。
解决方法：1. 细胞分离：及时将细胞进行适当的分离，避免细胞在培养中过度堆积，从而影响生长速度。
2. 营养补充：调整培养基中的营养物质浓度，确保细胞处于良好的生长环境中，并加强对细胞的营养补充。
3. 细胞凋亡检测：定期检测和评估细胞凋亡的情况，如有需要，可采取相应的干预措施，以保证细胞群体的健康状态。
三、细胞死亡细胞死亡是细胞培养过程中常见的变异问题之一，其发生率可能由多种因素决定，如感染、细胞凋亡、培养条件不良等。
细胞死亡不仅会影响细胞培养的连续性，也会对实验结果的可重复性产生不良影响。
解决方法：1. 检测感染：对培养基进行微生物污染检测，避免细菌、真菌等微生物的感染，导致细胞死亡。
2. 调整培养条件：对培养条件进行优化，如温度、培养基组分等，保证细胞处于最适宜的生长状态。
如何预防细胞培养污染问题
如何预防细胞培养污染问题细胞培养是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，但细胞培养过程中常常会面临细胞污染问题。
细胞培养污染会严重影响实验结果的准确性，因此需要采取一系列措施来预防细胞培养污染。
本文将介绍几种常见的细胞培养污染问题以及预防措施。
1. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
来自操作人员、试剂、培养器具和工作环境等多方面的细菌污染都可能导致细胞培养中的细菌污染。
预防措施：•穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理，减少操作人员带入的细菌污染。
•使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，保持培养器具的无菌状态。
•经常对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。
2. 真菌污染真菌污染是细胞培养中另一个常见的问题。
真菌往往来自环境中的空气、试剂、培养器具或操作人员。
真菌污染会导致细胞生长异常，细胞死亡或实验结果异常。
预防措施：•定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。
•使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长。
•采取无菌技术操作，减少操作人员带入的真菌污染。
•定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生。
3. Mycoplasma 污染Mycoplasma 污染是细胞培养中常见但容易被忽视的问题。
Mycoplasma 是一类细小的细菌样微生物，常常会导致细胞株的污染。
Mycoplasma 污染会影响细胞生长、代谢以及实验结果的可靠性。
预防措施：•定期检测细胞株的 Mycoplasma 污染情况，可以使用 PCR 或流式细胞术等方法进行检测。
•新购买的细胞株进行隔离培养，并进行 Mycoplasma 检测，确保细胞株的无菌性。
•严格控制培养器具、培养基和操作人员的无菌操作，减少Mycoplasma 污染的可能性。
•定期更换培养基并添加抗生素，可以抑制 Mycoplasma 的生长。
4. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，不同细胞株之间发生的细胞混合现象。
细胞实验中常见问题
细胞实验中常见问题
一、细胞培养问题
1.1 细胞生长缓慢或停止生长：可能原因是营养物质不足、血清质量不佳、培养箱温度不稳定或CO2浓度不正确等。
1.2 细胞形态异常：可能是由于培养基问题、营养不足、感染或污染等原因。
1.3 细胞结块：可能是由于细胞密度过大或血清用量过多等原因。
二、细胞活性检测问题
2.1 实验结果不一致或不准确：可能是由于试剂问题、操作误差或实验条件不稳定等原因。
2.2 假阳性或假阴性结果：可能是由于抗体交叉反应、实验操作不当或细胞状态不佳等原因。
三、细胞转染问题
3.1 转染效率低：可能是由于转染方法不正确、转染试剂选择不当或细胞状态不佳等原因。
3.2 细胞毒性：可能是由于转染试剂用量过多或转染条件不适应等原因。
四、细胞计数与消化问题
4.1 细胞黏附性强，不易消化：可能是由于细胞类型或状态不适应于消化方法等原因
4.2 细胞碎片多，影响计数：可能是由于消化过度或消化不充分等原因。
五、细胞标记与染色问题
5.1 染色不均匀或不显色：可能是由于染色时间过短或过长、抗体浓度不当或细胞状态不佳等原因。
5.2 非特异性染色问题：可能是由于抗体交叉反应或抗体纯度不佳等原因。
六、细胞分型与鉴定问题
6.1 分型结果不准确：可能是由于抗体选择不当、操作误差或细胞状态不稳定等原因。
6.2 鉴别困难：可能是由于细胞分化程度高、抗原表达量低或鉴别方法不敏感等原因。
七、细胞感染与病毒问题
7.1 细菌污染：可能是由于培养基或细胞株本身带菌等原因。
7.2 支原体污染：可能是由于培养环境不洁净、操作过程中污染等原因。
细胞培养中的常见问题解决方法
细胞培养中的常见问题解决方法细胞培养是生物医学研究和药物开发中不可或缺的重要工具。
然而，细胞培养过程中常常会遇到一些问题，例如污染、细胞凋亡、不适当的生长条件等。
本文将介绍细胞培养中的一些常见问题以及相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能是由细菌、真菌、酵母、病毒等微生物引起的。
污染会导致细胞生长受阻、实验结果的不可靠以及其他严重后果。
为了解决这个问题，可以采取以下几种方法：- 严格按照无菌操作操作培养细胞。
使用无菌操作条件，包括在无菌环境下穿戴手套、使用消毒液清洗操作台面和器具、对培养皿和培养物进行灭菌处理等。
- 经常检查细胞培养物的外观。
细胞培养物应呈现透明、均匀的状态。
如果有任何可疑的异常，请及时进行检查和处理。
- 使用含有抗生素的培养基。
对于某些细胞株来说，添加适量的抗生素可以阻止细菌等污染物的生长。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一个重要阶段，但在细胞培养过程中，过量的细胞凋亡会导致细胞数量的减少，对实验结果造成不利影响。
以下是一些常见的细胞凋亡问题及其解决方法：- 减少细胞培养的过度处理。
频繁的细胞移植和传代会导致细胞凋亡增加。
适当延长传代周期，避免过多的细胞移植。
- 提供适当的细胞营养来源。
细胞需要足够的营养物质来维持正常的生长。
不合适的培养基组分或者浓度可能会导致细胞凋亡。
确保培养基中的营养物质符合细胞的需求，并根据细胞株的特点进行相应的调整。
- 坚持细胞培养的无菌操作。
如前所述，细菌或其他微生物的污染会导致细胞凋亡的增加。
通过无菌操作避免细胞污染，继而减少细胞凋亡。
3. pH值失调培养基的pH值是细胞培养中一个重要的生长条件。
pH值的不稳定性会影响细胞的代谢和生长。
以下是一些解决pH值失调的建议：- 定期检测和调整培养基的pH值。
使用pH计或试纸进行测定，及时调整pH值，保持在适宜的范围内。
- 确保培养基的配制正确。
细胞培养基的配制过程中，需要严格按照配方中所指定的浓度和比例添加各种成分。
细胞培养技术中的常见问题解答
细胞培养技术中的常见问题解答细胞培养技术是生物科学领域中重要的研究方法之一，广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物开发等领域。
然而，细胞培养过程中常会遇到各种问题，这些问题的解答对于保证实验结果的可靠性和研究顺利进行至关重要。
本文将就细胞培养技术中的常见问题进行解答，希望对于读者在实验过程中的疑问起到一定的帮助。
Q1：为什么我的细胞无法附着在培养皿上？A：细胞无法附着的原因可能有多种。
首先，确保培养皿表面已经充分涂上了适当的基质，如凝胶体或胶原蛋白等。
其次，检查培养基的配方是否正确，是否缺乏必需的生长因子或氨基酸等。
同时，培养环境的温度、湿度和培养皿表面的处理都会影响细胞附着。
最后，细胞密度和接种时间也会影响细胞的附着能力。
如果问题仍然存在，可以尝试不同的培养条件以找到合适的附着条件。
Q2：为什么我的细胞生长缓慢？A：细胞生长缓慢可能源于多种因素。
一方面，细胞培养基的配方可能导致细胞生长受到限制。
检查培养基中是否缺乏必需的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等，并根据需要进行调整。
另一方面，细胞密度过高或过低也会影响细胞生长速度。
合理调整细胞密度以促进正常的生长。
此外，温度、CO2浓度、培养皿和培养箱的湿度等因素也会对细胞生长产生影响。
对这些条件进行优化，在适当的环境中培养细胞可以加快其生长速度。
Q3：我应该什么时候更换培养基？A：细胞生长到饱和状态之前应避免更换培养基。
通常，在细胞取代率达到80-90%时，即到达细胞生长的最佳时机进行培养基的更换。
更换培养基的目的是为了提供充足的营养物质和清除废弃物，以促进细胞的生长和健康。
然而，过于频繁的培养基更换也会带来损害细胞的风险，因此要根据实验的需要和细胞的生长状态来进行判断。
Q4：细胞是否可以冻存？A：冻存细胞是细胞培养技术中常见的方法之一。
冻存细胞可以长期保存，以备将来的培养和实验使用。
冻存细胞需要使用特定的冻存液来保护细胞，并通过特定的冷冻和解冻过程来确保细胞的完整性和生存率。
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法细胞培养技术在生物医学研究领域扮演着重要的角色。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些污染问题，严重影响实验结果的可靠性和重复性。
本文将探讨细胞培养技术中常见污染问题的解决方法。
一、细菌污染在细胞培养过程中，细胞培养器皿、培养基和实验室环境中都可能存在细菌污染的问题。
为了解决这个问题，可以采取一些预防措施。
首先，必须定期清洗和消毒培养器皿，以确保其表面的无菌。
其次，使用高品质和无菌的培养基是防止细菌污染的关键。
培养基应在严格无菌条件下配制，并在每次使用前进行相关的质检。
此外，实验室环境的洁净度也需要保持，经常进行清洁和消毒，减少细菌的滋生和传播。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养中常见的问题之一，尤其在湿度高的环境下更容易发生。
为了避免真菌污染，可以在实验室中合理控制湿度，并保持培养器皿和培养基的干燥。
此外，使用抗真菌剂可以有效地减少真菌感染的风险。
对于一些特定的细胞系，可以对细胞培养器皿进行预处理，如用乙醇或己硝酸等消毒剂进行表面处理，以提高培养器皿的抗真菌能力。
三、交叉污染细胞系的交叉污染是实验室中常见的问题。
它可能是由于不慎携带其他细胞系的污染物，或是在培养中不同细胞系之间的相互感染所致。
为了防止交叉污染，可以采取一些措施。
首先，实验人员在操作细胞系之前必须养成良好的个人卫生习惯，包括洗手、戴手套等。
其次，不同细胞系之间要严格分开培养，避免接触。
此外，可以对新获得的细胞系进行鉴定，使用PCR等方法进行验证，确保其纯度。
四、内源性污染内源性污染是指细胞系自身产生的污染物。
它可能是由细胞自身分泌的代谢产物、去胎氧核糖核酸或细胞死亡引起的。
为了解决这个问题，可以采取以下措施。
首先，要定期更换培养基和培养器皿，及时清除废液和死细胞。
其次，对细胞进行经常性的鉴定，确保其活性和稳定性。
同时，培养温度、培养时间等因素也需要加以调整，以减少内源性污染的发生。
综上所述，细胞培养技术中常见的污染问题是可以通过一系列的控制措施来解决的。
细胞培养常见问题及其解决
细胞培养常见问题及其解决1、如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。
在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
2、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5、何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS (calf serum) 则是指小牛血清。
HS (horseserum) 则是指马血清。
6、培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。
7、Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。
原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细胞培养常见问题及其解决1. 如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。
在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，其中美国MP Biomedicals公司提供了最全的培养基系列，例如BME DMEM F10/F12 MEM RPMI1640（液态/粉末）。
2. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS (calf serum) 则是指小牛血清。
HS (horseserum) 则是指马血清。
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。
7.Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。
原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。
碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。
Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。
如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles 液，。
如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。
MP Biomedicals 公司具有众多的平衡液，8. 细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。
细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
9. 悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。
分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
10.冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
11. 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
12. 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。
第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低，并可减少污染之机会。
13.欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10 分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。
14. 细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。
注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
15.DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO 等级，必须为Tissue culture grade之DMSO (如MP 021*******)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。
若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。
16.冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C 30分钟) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下，再放入液氮槽长期储存。
-20 °C 不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
17. 细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。
18.培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
19.应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。
主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。
严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
20.如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？原则上：直接灭菌后丢弃之。
当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。
首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。
这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。
下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
2.分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。
在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。
例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3.每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
4.确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。
5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6.重复步骤4。
7.在无抗生素的培养基中培养4～6代，确定污染是否以已被消除。
推荐使用MP公司的双抗或三抗：21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？不能。
除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。
22.支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。
故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。
23. 侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？可以选用MP Biomedicals公司的MRA,在0.5 µg/ml 的工作浓度下通过抑制支原体的DNA螺旋酶来杀死支原体；在0.1µg/ml 的工作浓度下有效预防各种支原体污染；24. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之,必要时加入MP公司的双抗。
25.为何培养基保存于4 °C 冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？培养基保存于4 °C 冰箱中，培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。
而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。
培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。
若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH 值。
26. 各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？不同，可以参考文献选择。
27. 购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。
建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
28.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。
血清使用错误或血清的品质不佳。
解冻过程错误。
冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。
悬浮细胞误认为死细胞。
培养温度使用错误。
细胞置于–80 °C 太久。
29.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。
L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
30.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。
一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。
31.什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中用作PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。