DNA分子量标准
DNA分子量标准
DNA分子量标准DNA marker简介DNA Marker 是分子量大小不同的DNA片段。
主要用途就是DNA 分子凝胶电泳时，通过其大小可以粗略估算样品DNA分子量的大小。
现在常用的DNA Marker 有两种，一种是质粒、病毒等DNA经过酶切获得的，分子量大小有零有整；另外一种是固定数值的，比如100 bp，200 bp等，它是通过PCR获得的片段混合物。
本公司生产的DNA Marker是由单一条带混合而成的，带型均匀清晰，克服了传统的酶切分子量DNA Marker的缺点，如小片段和大片段摩尔数相同，但在紫外光照射下亮度极其不均匀的现象。
本公司严格按照每条带的DNA含量（一次一条带约为50 ng）来配置DNA Marker，因而亮度均匀，带型清晰，而且可用于DNA定量的参照物，每种DNA Marker中都有一条带更亮（含量约为100 ng），便于电泳后观察。
DNA凝胶电泳的原理琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此移动的速度不同，根据这个原理可将其分开。
电泳缓冲液的pH在6 ~ 9之间，离子强度0.02 ~ 0.05最为合适。
常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。
琼脂糖凝胶约可区分相差100 bp 的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2 ~ 20 kb。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
dna相对分子质量标准品
dna相对分子质量标准品DNA相对分子质量标准品被广泛用于DNA分析实验中，如凝胶电泳、光谱分析、质量控制和定量实验等。
以下是一些常见的DNA 相对分子质量标准品及其主要特性：1. 长度标准品：这些标准品用于估计DNA片段的长度。
它们通常由一系列已知长度的DNA片段组成，如质粒或基因组DNA片段。
这些片段通常在几百到几千个碱基对之间，可以根据其长度进行分离和识别。
2. 纯度标准品：这些标准品用于评估DNA样品的纯度。
它们通常由高纯度的DNA 组成，不含其他杂质，如蛋白质或脂质。
通过比较样品与标准品的吸光度、紫外光谱等参数，可以评估样品的纯度。
3. 完整性标准品：这些标准品用于评估DNA样品的完整性。
它们通常由已知长度的完整基因组DNA片段组成，可以用来检测样品中是否存在完整的DNA片段以及这些片段的长度分布。
4. 构象标准品：这些标准品用于研究DNA的构象变化。
它们通常由具有不同构象状态的DNA片段组成，如双链、单链或超螺旋结构。
通过分析样品与标准品的构象变化，可以了解DNA在特定条件下的构象稳定性。
5. 定量标准品：这些标准品用于定量分析DNA样品中的特定基因或序列。
它们通常由已知拷贝数的基因或序列组成，可以作为内标用于定量PCR、基因表达分析等实验。
6. 序列标准品：这些标准品用于验证DNA序列的准确性。
它们通常由已知序列的DNA片段组成，可以用于序列分析、测序反应等实验中的内部对照。
7. 修饰标准品：这些标准品用于研究DNA中的化学修饰，如甲基化、磷酸化等。
它们通常由经过修饰的DNA片段组成，可以用于检测和分析样品中的修饰类型和程度。
8. 突变标准品：这些标准品用于研究DNA中的突变和变异。
它们通常由已知突变类型的DNA片段组成，如点突变、插入或缺失等。
通过将样品与标准品进行比较，可以检测样品中是否存在相同的突变类型。
9. 结构标准品：这些标准品用于研究DNA的高级结构，如染色体结构、三维构象等。
DNA纯度的判断
低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范围内,说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染,比如酒精未充分挥发我要纠正一下，纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯的RNA应达到2.0，样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。
对于纯的样品，只要读出260nm的A值即可以算出含量。
通常以A值为1相当于50微克/ml双螺旋DNA，或者40微克/ml单链DNA（RNA），或者20微克/ml寡核苷酸计算。
OD260／OD2801.9-2.0 RNA居多纯度已经很高了纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）OD是optical density（光密度）的缩写，OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。
吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关。
只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。
当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。
吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。
吸光度用A表示，A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g•cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ，c为溶液浓度，单位g/L 影响吸光度的因数是b和c。
a是与溶质有关的一个常量，温度通过影响c，而影响A。
一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度,OD230代表其他杂质(多糖等)的吸光度。
DNA纯度的判断
DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范围内,说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染,比如酒精未充分挥发我要纠正一下，纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯的RNA应达到2.0，样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。
对于纯的样品，只要读出260nm的A值即可以算出含量。
通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA，或者40微克/ml单链DNA（RNA），或者20微克/ml寡核苷酸计算。
OD260／OD280 1.9-2.0 RNA居多纯度已经很高了纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）OD是optical density（光密度）的缩写，OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。
吸光度吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关。
只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。
当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。
吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。
吸光度用A表示，A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g•cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ，c为溶液浓度，单位g/L 影响吸光度的因数是b和c。
dna分子量标准ladder h1-k
DNA分子量标准ladder H1-KDNA分子量标准ladder H1-K是科学研究领域中常用的一种分子生物学标准品。
它由一系列不同长度的DNA片段组成，用于测定PCR产物或DNA片段的分子量。
H1-K标准品不仅具有稳定性和重复性好的特点，还能够提供多种分子量的DNA片段，适用于不同实验需求。
下面将从多个方面详细介绍DNA分子量标准ladder H1-K的特点及其在实验中的应用。
1. DNA标准品的基本原理DNA分子量标准品是由一系列已知长度的DNA片段组成的混合物，其分子量范围覆盖了实验所需的大部分范围。
在电泳实验中，将DNA 样品与DNA标准品一起加载到琼脂糖凝胶中，在电场作用下，DNA片段根据其分子量大小在凝胶中移动不同的距离，形成一条带状图案。
通过比较待测样品的DNA移动距离与DNA标准品的移动距禿或者相对移动距离，可以确定待测DNA片段的分子量。
2. DNA标准品的特点DNA分子量标准ladder H1-K是由一系列长度不等的DNA片段组成的混合物。
这些DNA片段的长度范围一般为数百至数千碱基对。
H1-K标准品中通常包括较长的DNA片段，以便在实验中检测较大的DNA片段。
同时也包括较短的DNA片段，可以用于检测较小的DNA 片段。
H1-K标准品具有分辨率高、线性范围广、重复性好等特点，适用于常规的琼脂糖凝胶电泳实验。
3. DNA标准品的应用DNA分子量标准ladder H1-K广泛应用于PCR产物分析、DNA限制性酶切产物分析、DNA片段测序等实验中。
在PCR产物分析中，H1-K标准品可用于测定PCR产物的分子量，评估PCR放大效果。
在DNA限制性酶切产物分析中，H1-K标准品可用于测定酶切产物的分子量，分析酶切效果。
在DNA片段测序中，H1-K标准品可用于测定测序反应产物的分子量，评估测序效果。
4. 总结DNA分子量标准ladder H1-K作为一种优质的DNA标准品，在分子生物学领域中具有重要的应用价值。
dna分子量标准和彗星测定
dna分子量标准和彗星测定
"DNA分子量标准"通常是指一系列已知分子量的DNA片段，用于在电泳等实验中估算待测DNA分子的分子量。
这些标准可以是DNA分子的碱基对数或以碱基对数为单位的分子量。
科学家使用这些标准来创建一个分子量标尺，从而可以通过比较待测DNA迁移的距离或位置来估算其分子量。
"彗星测定"可能是指一种实验技术，其中通过电泳将DNA在凝胶中拉伸形成一条“彗星尾巴”，从而评估DNA损伤。
这种方法通常用于评估DNA的单链和双链断裂，是一种用于检测DNA损伤和细胞毒性的方法。
在彗星测定中，细胞或DNA暴露于碱性条件下，然后通过电泳拉伸成形成彗星状的形状。
受损的DNA形成更长的彗星尾巴，而未受损的DNA则形成较短的彗星尾巴。
通过测量彗星尾巴的长度和形状，可以评估DNA损伤的程度。
DNA分子量标准通常在电泳实验中使用，而彗星测定是一种特殊的电泳技术，用于评估DNA的损伤程度。
两者在某些实验室研究中可能会结合使用，以更全面地了解DNA的特性和状态。
琼脂糖凝胶电泳技术
1、实验目的：学习与掌握DNA电泳的技术方法，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、含量以及分子量，及分离不同大小DNA片段。
2、实验原理：电泳概念及种类*• 电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象电泳基本原理迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，可用下列公式计算：Ｕ=υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/VtＵ为迁移率（cm2·V-1·min-1）；υ为颗粒泳动速度（cm·s-1）；E 为电场强度（V·cm-1）；d 为颗粒泳动的距离（cm）；l为滤纸有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为通电时间（s或min）。
通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。
1迁移率单位= 10-5 cm2·V-1·min-1在确定的条件下，某物质的迁移率为常数，是该物质的化学特征常数颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。
迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。
影响琼脂糖电泳迁移的主要因素*电场强度溶液的pH值溶液的离子强度电渗现象温度的影响支持物的影响电泳的分类按分离原理分类：1.区带电泳2.移界电泳3.等速电泳4.聚焦电泳按有无固体支持物分类影响琼脂糖电泳迁移的主要因素DNA的大小DNA的构象*琼脂糖浓度*缓冲液*不同构像质粒分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度缓冲液TAE：乙酸盐缓冲液TBE：硼酸盐缓冲液TPE：磷酸盐缓冲液实验操作1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住，形成一个胶模并水平放置。
2. 按水平板的长×宽×0.5cm胶厚，量取0.5×TBE，并按0.7％的浓度称取agarose琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔* （清澈透明）。
3. 等凝胶温度降至大约50－60℃以下时，加入1 mg/L溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5ug/mL ；摇匀并轻快地倒入水平板中，除掉气泡，插入梳子*。
核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制
核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制•一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据〔1〕重量换算1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g 〔2〕分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml 〔3〕DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA〔钠盐〕=6.6×105道尔顿1kb 单链DNA〔钠盐〕=3.3×105道尔顿1kb单链RNA〔钠盐〕=3.4×105道尔顿〔4〕蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg 100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿〔5〕蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。
所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基〔如LB培养基〕。
五、常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。
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详细 100bp Ladder 本产品用于凝胶电泳中双链线状 DNA 分子量大小的参照。100bp Ladder 由单 一的 DNA 条带混合而成，条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。 参照片断（bp）：100 、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、 PR3001 1500bp 每条带的量约为 50ng，可用以相对定量。使用方法：直接上样电泳， 每次加样量为 5μl. 100bp DNA MarkerⅡ 条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。参照片断（bp）： PR3101 100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1500,2000,3000,5000bp 50 次 50 次
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DNA Marker 1大小的参照。50bp Ladder 由单 一的 DNA 条带混合而成，条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。 参照片断（bp）：100 、200、300、400、500、600bp 每条带的量约为 50ng， 可用以相对定量。使用方法：直接上样电泳，每次加样量为 5μl。 DNA Marker 2 本产品用于凝胶电泳中双链线状 DNA 分子量大小的参照参照片断 （bp）100 、 ： PR3701 300、500、700、900、1200bp 每条带的量约为 50ng，可用以相对定量。使 用方法：直接上样电泳，每次加样量为 5μl。DNA Marker2 由单一的 DNA 条 带混合而成，条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。
1kb DNA Marker?? 条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。 PR3201 参照片断（bp）：1000，2000，3000，4000，5000，6000，8000，10000bp
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DNA Marker 2000 本产品用于凝胶电泳中双链线状 DNA 分子量大小的参照 DNA Marker4 由单一 PR3301 的 DNA 条带混合而成，条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。 参照片断（bp）：100 、250、500、750、1000、2000bp 每条带的量约为 50ng，可用以相对定量（750bp 条带加大亮度，便于区别)。使用方法：直接 上样电泳，每次加样量为 5μl。?
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DNA Marker 5000? 条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。参照片断（bp）： PR3401 100,250,500,750,1000,2000,3000,5000bp
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DNA Marker 10000?? 条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。参照片断（bp）： PR3501 250,500,750,1000,1500,2000,3000,4000,5000,6000,8000,10000bp
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PR3601
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DNA Marker 3 本产品用于凝胶电泳中双链线状 DNA 分子量大小的参照。DNA Marker3 由单 PR3801 一的 DNA 条带混合而成，条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。 参照片断（bp）：200 、400、600、800、1000、1500bp。每条带的量约为 50ng，可用以相对定量。使用方法：直接上样电泳，每次加样量为 5μl
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