抗酸染色镜检的操作规程
抗酸染色操作及要点
抗酸染色操作及要点
抗酸染色是玻璃表面处理的一种彩色表面工艺，大多数情况下是用于玻璃幕墙，并提供了色彩持久、可视性好、抗候变性、易于清洗等优点。
抗酸染色工艺要点如下：
1.在抗酸染色前，需要将玻璃表面进行清洁，移除表面的污垢。
2.调节抗酸染色液的酸碱度，保持在中性条件下，使其中的有机颜料发挥最大效果。
3.将抗酸染色液施于玻璃表面，待涂料上膜后，在酸碱性背景条件下进行色彩改变。
4.使用湿润的布擦拭，以保持表面的色彩均匀性，或者进行精细修饰。
5.将表面的抗酸染色涂层用水冲洗干净后，将得到的色彩持久耐候的玻璃表面进行锯齿化处理，使之抗拒水分膜层。
细菌抗酸染色
抗酸染色操作过程
取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 取痰液→ 涂片（略厚） 干燥→ 石炭酸复红加温染色3 石炭酸复红加温染色3～5min后，水洗 后 盐酸酒精脱色约1min 1min～ 用3％盐酸酒精脱色约1min～2min，脱色时 ， 轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止， 轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止，水洗 用碱性美蓝复染1min 1min→ 用碱性美蓝复染1min→水洗 印干 → 镜检
细菌抗酸染色
学习目标
了解细菌抗酸染色的原理 了解细菌抗酸染色的临床意义 掌握细菌抗酸染色的操作方法 掌握正确观察细菌抗酸染色结果
细菌抗酸染色法
原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质， 原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质， 主要是分枝菌酸， 主要是分枝菌酸，要经过加热和延长染色时 间来促使其着色， 间来促使其着色，分枝杆菌中的分枝菌酸与 染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色， 染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故 名抗酸染色 应用： 应用：结核病检测 实验材料：结核病人的痰液标本、石炭酸复 实验材料：结核病人的痰液标本、 红染液、 盐酸酒精、碱性美兰染液、 红染液、3％盐酸酒精、碱性美兰染液、滤 纸片、载玻片、 纸片、载玻
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注意事项
1、无菌操作 、 2、涂片厚度要适中 、 3、固定 、 4、冲洗 、 5、染色时间 、 6、初染加热的温度，勿沸腾 、初染加热的温度，
抗酸染色结果
结核杆菌染成红色，细长、 结核杆菌染成红色，细长、直的或微弯曲 杆菌 标本的其余部分及非抗酸性细菌染成蓝色 必须逐一观察各个视野， 必须逐一观察各个视野，直到整个涂片找 不到结核杆菌时，方可报告“ 不到结核杆菌时，方可报告“未找到结核 杆菌” 杆菌”。
001抗酸染色法
操作人员：经批准人授权的本院专业技术人员
部门主管：彭建宏
质量控制员：唐日升
目的：保证测试结果的准确性。
适用仪器范围：双目显微镜。
该SOP变动程序：
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
应用范围：
抗酸染色法的手工操作。
方法学原理：
目前认为由于抗酸菌含有分枝菌酸，可与石碳酸复红牢固结合，不易被盐酸酒精脱色。
另外，保持菌体表层的完整结构，也是抗酸性的重要条件。
因其不允许被石炭酸复红染上色的类脂外溢，所以抗酸菌虽经脱色仍能保持红色，非抗酸菌被复染为蓝色。
试剂：
石炭酸复红液，5℅盐酸酒精，稀释美蓝液。
标本采集：
按要求留取各种标本及时送检。
操作步骤：
1）将厚涂片经火焰固定后，滴加第一液用火焰微热至出现蒸气约5分钟（亦可采用长方型电热套装置加温），待冷，水洗。
2）加第二液脱色至几无红色为止，但脱色时间不可超过10分钟（以免将抗酸菌的红色脱掉）水洗。
3）加第三液复染30秒钟，水洗，待干镜检。
如为集菌涂片可延长复染时间2–5分钟。
结果：
抗酸菌呈红色，背景及其他细菌呈淡蓝色。
参考文献：
叶应妩，王毓三，申子瑜全国临床检验操作规程，第三版，南京东南大学出版社，2006。
抗酸染色液使用说明
抗酸染色液使用说明抗酸染色液是一种常用于细胞和组织样本染色的试剂，可以用于观察细胞核和染色体的形态与分布。
它通过特殊的染色剂和酸性条件，将细胞核和染色体显色出来，使其能够被显微镜观察和分析。
以下是抗酸染色液的使用说明。
1.准备工作(1)检查抗酸染色液的保存条件和有效期，确保试剂的质量良好。
(2)清洁工作台，并准备好所需的实验器皿和试管。
(3)准备样本，如细胞悬液或固定的组织切片。
2.染色液配制(1)根据试剂的说明书，准备抗酸染色液的工作浓度。
通常情况下，抗酸染色液是浓缩的，需要根据实验的要求进行适当的稀释。
(2)将适量的抗酸染色液加入到一支干净的试管或玻璃瓶中。
3.样本处理(1)如果使用细胞悬液，可以直接将细胞悬液加入到试管中。
如果使用组织切片，需要先将组织切片放置在适量的生理盐水或缓冲液中，洗去固定液和脱水剂，并将其转移到试管中。
(2)确保样本充分润湿，避免气泡和样本堆积。
4.染色过程(1)将试管放置在恒温水浴中，设置适当的温度和时间。
一般来说，使用42°C的水浴，对细胞进行染色12-15分钟，对组织切片进行染色15-20分钟。
(2)在染色过程中，每隔一段时间（如2-3分钟）轻轻摇动试管，以确保样本均匀接触染色液。
5.染色液去除(1)在染色结束后，将试管从水浴中取出，并将液体倒掉。
(2)用生理盐水或缓冲液轻轻冲洗试管中的样本，去除多余的染色液。
(3)重复冲洗2-3次，确保样本的清洁。
6.样本固定(1)根据实验要求，将样本固定在载玻片上。
固定方法可以是使用适当的固定剂，如甲醛或乙醛溶液，将样本浸泡或喷洒在固定剂中，然后将其转移到载玻片上。
(2)对于组织切片，可以使用热解固定的方法，将载玻片和组织切片一起加热。
7.盖片和观察(1)在固定样本上滴加一滴适当的复盖剂。
(2)将一张玻璃盖片轻轻压在载玻片上，使其紧密贴合。
(3)将载玻片放置在显微镜上，通过目镜和物镜观察样本。
注意事项：-在染色过程中，保持试管的温度和时间的一致性，以保证染色效果的稳定性和准确性。
抗酸染色+标片
干燥
固定
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染 脱色 复染
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’
冲洗
美蓝复染1 ’
用玻片夹夹持涂片标本滴加石炭酸复红23滴在火焰高处徐徐加热切勿沸腾出现蒸汽即暂时离开若染液蒸发减少应再加染液以免干涸加热35分钟待标本冷却后用水冲洗
医学微生物学实验
微生物学教研室
2011年12月
实验内容
一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作） 二、标本片观察： （钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）
3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥
油镜观察
三、抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序，
偶呈分枝状生长。
背景及非抗酸性细菌呈兰色。
注意事项：
1、无菌操作 2、菌种管摇匀后取菌 3、涂片均匀 4、初染加热维持3~5分钟，勿沸腾烧干 5、冷却后冲洗 6、油镜下从视野中找色
材料：
标本：卡介苗
染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝
器具：同革兰氏染色
实验方法：
1、细菌涂片标本的制备 涂片 2、染色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
目的要求
掌握抗酸染色技术 掌握钩体，白色念珠菌、曲霉、枯草杆
实验九-抗酸染色教程文件
实验九-抗酸染色教程文件一、实验目的：通过本实验，掌握抗酸染色技术的概念、方法、原理和操作步骤，巩固和提高学生的实验操作和技能，培养学生认真细致的实验态度，增强实验室安全意识。
二、实验原理：抗酸染色技术是现代生物学和医学科学的基础之一，是经典的细胞学染色技术之一。
抗酸染色技术是利用酸及其盐类的特殊作用，使染色剂能与细胞核染色质、特定细胞器和其他细胞成分结合，从而使其在显微镜下形成自然而美观的图像。
抗酸染色技术是病理学诊断中常用的技术之一，用于检测病理细胞变异和细胞形态学及分子生物学研究中。
三、实验材料及方法：1、实验所需试剂：1）透明丙酮（Xylene）；2）96%乙醇；3）50%酸性酒精（HCl in 95% ethanol）；4）1%枚举胶液（Mayer's hematoxylin）；5）1%酸性酒红溶液（0.05% acid fuchsin in distilled water）；8）85%甲醛；1）显微镜；2）蜡刀；3）染色架；4）玻片；5）移液器；6）玻璃棒。
3、实验步骤：1）石蜡切片的脱脂和再脱蜡：a.将石蜡切片放入透明丙酮中，浸泡10~15分钟；b.将切片转移到96%乙醇溶液中，浸泡2~3分钟；d.将切片放入50%酸性酒精中浸泡2~3分钟，用水漂洗3~4次，每次时间30~60秒；2）抗酸染色：b.用水漂洗3~4次，每次时间30~60秒，直至溶液清澈无色；g.将切片置于盛有1:1比例的绝对酒精和85%甲醛中，浸泡5~10分钟，直至细胞没有氧化痕迹，将切片转移到正确的显微镜载玻片上并拍照。
四、实验结果：经过抗酸染色后，在显微镜下，细胞核染色质和细胞质中的特定结构都能显现出来，从而可以形成美观而自然的图像。
通过比较观察和分析不同样本组织的抗酸染色图像，可以了解细胞结构和组分的形态学变化，进而研究细胞功能和病理生理。
五、注意事项：1、操作时应注意安全，化学试剂避免直接接触皮肤和吸入粉尘，切片时应戴手套；2、试剂的浓度和配制方式必须严格按照操作说明书执行，不可随意更改；3、操作中应注意卫生，保持实验室清洁；4、实验结束后应及时处理废弃物，如有需要可循环利用；5、实验室毒性、易燃、易爆等安全标识牌应贴在显眼的地方，以保证实验室安全。
结核杆菌涂片检查标准操作程序
SOP_15-16 结核杆菌涂片检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：结核杆菌涂片检查三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1、原理抗酸染色的基本原理是抗酸菌具有耐受酸性介质脱色的生物性状。
此类细菌在石碳酸（苯酚）的协同作用下，被复红染色剂着色，能够耐受酸性乙醇脱色，显微镜观察时保持紫红色；而其它脱落细胞或标本中的非抗酸菌被酸性乙醇脱色后，可被复染剂亚甲蓝染为蓝色。
2、染色液的配制2.1碳酸复红染液：全省统一配送2.2 5%盐酸乙醇脱色液：35%浓盐酸5mL与95%乙醇混合2.3亚亚甲蓝染色液：全省统一配送3、载玻片的准备：用于AFB检查的载玻片要求：⑴一张载玻只能涂抹一份痰标本。
⑵每张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于AFB涂片检查。
新的载玻片放入95%乙醇中浸泡2小时脱脂，用摄子夹出放干净纱布上阴干，放无尘容器（培养皿）中备用。
4、本的采集、运送及处理4.1初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、晨痰和即时痰）。
如无夜间痰，在留晨痰后2-3小时再留取一份痰标本；或在送痰时，留取两份即时痰。
疗程中或复诊随访病人按期每次送检2份痰（晨痰和夜间痰）。
痰标本性质：干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。
4.2收集标本的容器应采用WHO推荐的标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的可密封塑料盒或蜡纸盒（我省统一采用蜡纸盒）。
★痰容器上就注明与检验单一致的病人姓名、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）、★检查项目和容器序号1、2、3（1为当日即时痰，2为夜间痰。
3为晨痰）。
5、涂片的制备5.1 编号：取经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片，在玻片背面左端1/3处注明实验室序号(56001递增)及标本序号（按1递增）（如使用的载玻片一端无磨砂面，须用玻璃刻刀注明编号；如使用的载玻片一端有磨砂面，可用2B铅笔在磨砂面上直接书写）。
抗酸染色+标本片
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。初染源自脱色复染冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’
3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
白色念珠菌 钩体 枯草杆菌 曲霉
白色念珠菌
钩端螺旋体
类炭疽（枯草杆菌）
炭疽杆菌
曲霉
实验报告
绘制抗酸染色结果镜下图 绘制四张标本片镜下图
抗酸染色+标本片
实验内容
一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作）
二、标本片观察： （钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）
抗酸染色
材料： 标本：卡介苗 染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝 器具：同革兰氏染色
实验方法：
1、细菌涂片标本的制备
涂片
干燥
固定
2、染色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
冲洗
干燥
油镜观察
美蓝复染1 ’
三、抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
注意事项：
1、无菌操作 2、菌种管摇匀后取菌 3、涂片均匀 4、初染加热维持3~5分钟，勿沸腾烧干 5、冷却后冲洗 6、油镜下从视野中找红色抗酸菌
二、标本片观察
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抗酸染色镜检的操作规程
1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.
2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.
3.试剂:
3.1试剂来源:购买珠海贝索
3.2试剂盒组成:
R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100ml
R3:亚甲基蓝溶液1χ100ml
4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.
5.标本采集与处理:
5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.
5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.
5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.
5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.
6.染色方法:
6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.
6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.
6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.
滴1-2滴香柏油,用油镜仔细观察.
8.结果的判断:结核杆菌呈红色,其它细菌呈蓝色.
9.实验完后的处理:
9.1先用擦镜纸将镜头上的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净擦镜纸擦2-3次,向一个方向擦拭。
9.2废弃玻片放入5% 84消毒液中浸泡60分钟,消毒液要每天更换。
9.3痰盒和废弃标本等污染物应弃于有盖的污物桶内,消毒后焚烧。
9.4痰检完成后,操作台面用5% 84消毒剂 液擦拭后,紫外线灭菌灯照射30分钟。
10.注意事项:
10.1脱色时间不易过长,否则影响结果。
10.2为了提高检出率,可增加涂片厚度。
10.3一张玻片只可涂抹一份标本,不得清洗后再次使用。
10.4收到标本后,仔细核对标本和痰标本是否合格,随后按顺序编号,
及时检查和登记。
11.报告方式:
萋纳氏染色镜检结果分析报告标准:
抗酸菌阴性(-):连续观察300个不同视野,未发现抗酸杆菌。
抗酸杆菌阳性(实报抗酸菌数):1-8条抗酸杆菌/300视野。
抗酸杆菌阳性(1+):3-9条抗酸杆菌/100视野。
抗酸杆菌阳性(2+):1-9条抗酸杆菌/10视野。
抗酸杆菌阳性(3+):1-9条抗酸杆菌/每个视野。
抗酸杆菌阳性(4+):≥10条抗酸杆菌/每个视野。
12.临床意义:痰涂片找到抗酸杆菌常见于肺结核病。
(中华人民共和国卫生部医政司)。