乙型肝炎病毒cccDNA培训课件
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乙肝病毒感染知识讲解PPT课件
乙肝病毒感染 知识讲解PPT课
件
目录 引言 什么是乙肝病毒？ 乙肝病毒感染的传播途径 乙肝病毒感染的症状与并发症 乙肝病毒感染的预防与控制 乙肝病毒感染的治疗与护理 结语
引言
引言
乙肝病毒感染知识讲解 乙肝病毒是一种常见的肝炎病 毒
引言
本课件将为您介绍乙肝病毒感染的相关 知识
什么是乙肝病 毒？
乙肝病毒感染 的症状与并发
症
乙肝病毒感染的症状与并 发症
急性感染症状：疲劳、食欲不 振、黄疸等 慢性感染症状：无明显症状或 轻度疲劳等
乙肝病毒感染的症状与并 发症
并发症：肝硬化、肝癌等
乙肝病毒感染 的预防与控制
乙肝病毒感染的预防与控 制
疫苗接种：乙肝疫苗是预防乙 肝的有效手段 避免血液传播：拒绝共用针具 、安全注射等
乙肝病毒感染的预防与控 制
安全性行为：正确使用避孕措施、减少 性伴数等 垂直传播防控：孕前筛查、新生儿疫苗 接种等
乙肝病毒感染 的治疗与护理
乙肝病毒感染的治疗与保持良好生活习惯 、定期复查等
乙肝病毒感染的治疗与护 理
支持性治疗：饮食调理、避免酒精等
什么是乙肝病毒？
乙肝病毒是一种DNA病毒 乙肝病毒主要通过血液和性接 触传播
什么是乙肝病毒？
乙肝病毒感染可导致急性或慢性肝炎
乙肝病毒感染 的传播途径
乙肝病毒感染的传播途径
血液传播：输血、注射毒品、 医疗器械污染等 性传播：不安全性行为、性伴 感染等
乙肝病毒感染的传播途径
垂直传播：感染妇女分娩时传给新生儿 其他途径：共用针具、美容美发器具等
结语
结语
乙肝病毒感染是一种严重的疾 病 通过预防、控制和治疗，我们 可以减少乙肝病毒感染的风险
件
目录 引言 什么是乙肝病毒？ 乙肝病毒感染的传播途径 乙肝病毒感染的症状与并发症 乙肝病毒感染的预防与控制 乙肝病毒感染的治疗与护理 结语
引言
引言
乙肝病毒感染知识讲解 乙肝病毒是一种常见的肝炎病 毒
引言
本课件将为您介绍乙肝病毒感染的相关 知识
什么是乙肝病 毒？
乙肝病毒感染 的症状与并发
症
乙肝病毒感染的症状与并 发症
急性感染症状：疲劳、食欲不 振、黄疸等 慢性感染症状：无明显症状或 轻度疲劳等
乙肝病毒感染的症状与并 发症
并发症：肝硬化、肝癌等
乙肝病毒感染 的预防与控制
乙肝病毒感染的预防与控 制
疫苗接种：乙肝疫苗是预防乙 肝的有效手段 避免血液传播：拒绝共用针具 、安全注射等
乙肝病毒感染的预防与控 制
安全性行为：正确使用避孕措施、减少 性伴数等 垂直传播防控：孕前筛查、新生儿疫苗 接种等
乙肝病毒感染 的治疗与护理
乙肝病毒感染的治疗与保持良好生活习惯 、定期复查等
乙肝病毒感染的治疗与护 理
支持性治疗：饮食调理、避免酒精等
什么是乙肝病毒？
乙肝病毒是一种DNA病毒 乙肝病毒主要通过血液和性接 触传播
什么是乙肝病毒？
乙肝病毒感染可导致急性或慢性肝炎
乙肝病毒感染 的传播途径
乙肝病毒感染的传播途径
血液传播：输血、注射毒品、 医疗器械污染等 性传播：不安全性行为、性伴 感染等
乙肝病毒感染的传播途径
垂直传播：感染妇女分娩时传给新生儿 其他途径：共用针具、美容美发器具等
结语
结语
乙肝病毒感染是一种严重的疾 病 通过预防、控制和治疗，我们 可以减少乙肝病毒感染的风险
最新乙型病毒性肝炎防治(医护人员培训)精品课件
可长期携带病毒而不表现临床症状，隐蔽性强，活动不受 限制，是乙肝最主要的传染源之一 HBV携带者传染性的强弱，一般与HBsAg滴度的高低 以及HBeAg是否阳性有关 HBsAg和HBeAg双阳性母亲所生的新生儿，如不及时 采取特异性免疫预防措施，1年内90%以上将感染HBV 并成为携带者。双阳性孕妇也是乙肝重要的传染源
美国CDC1992~1993年监测，因异性性行为感染占 41%
莫斯科1994-1997年通过性传播的急性乙肝从28.6% 增加到42.3%
日常生活接触传播
有较大比例乙肝患者（约30%）并无明确的HBV 接触史，且乙肝有较明显的家庭聚集性现象
可能通过直接或间接接触带有HBV的血液及分泌 物经破损的皮肤、粘膜感染
我国北方地区主要为C基因型，而南方地区主要 为B基因型
感染C基因型HBV后易发展成慢性乙肝、肝硬化 和肝癌
HBV人群分布
美国CDC-1990年的疾病报告资料显示， 20~29岁年龄组乙肝发病率最高
发病主要集中在高危人群，即
血液透析病人、经注射吸毒者、男性同性恋者、 异性性混乱者、HIV感染者和医务人员等
高
>8
40－95
主要感染地区 中国、南亚、热带非洲等
中
2－7
16－40
中欧、日本、地中海等
低
<2
4－15
西欧、北欧、北美、澳大利亚
60
50
40
30
20
10
0 年份
1990-2003年全国甲肝、乙肝发病率
发病率(1/10万)
1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003
美国CDC1992~1993年监测，因异性性行为感染占 41%
莫斯科1994-1997年通过性传播的急性乙肝从28.6% 增加到42.3%
日常生活接触传播
有较大比例乙肝患者（约30%）并无明确的HBV 接触史，且乙肝有较明显的家庭聚集性现象
可能通过直接或间接接触带有HBV的血液及分泌 物经破损的皮肤、粘膜感染
我国北方地区主要为C基因型，而南方地区主要 为B基因型
感染C基因型HBV后易发展成慢性乙肝、肝硬化 和肝癌
HBV人群分布
美国CDC-1990年的疾病报告资料显示， 20~29岁年龄组乙肝发病率最高
发病主要集中在高危人群，即
血液透析病人、经注射吸毒者、男性同性恋者、 异性性混乱者、HIV感染者和医务人员等
高
>8
40－95
主要感染地区 中国、南亚、热带非洲等
中
2－7
16－40
中欧、日本、地中海等
低
<2
4－15
西欧、北欧、北美、澳大利亚
60
50
40
30
20
10
0 年份
1990-2003年全国甲肝、乙肝发病率
发病率(1/10万)
1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003
《乙型病毒性肝炎》课件
病毒传播途径
血液传播
血液暴露或血液制品的接触，如输血、注射 毒品等。
性传播
性行为中的直接接触传播，包括性交、口交 和肛交。
母婴传播
感染的孕妇将病毒传给胎儿，或通过乳汁、 分娩过程传播。
医疗操作传播
不洁的医疗器械或手术操作引起的传播。
肝炎病毒检测方法
1
病毒基因标志物
2
通过检测病毒的基因标志物来确认是
否感染乙型肝炎病毒。
3
血清学标志物
通过检测血液中的相关标志物来诊断 乙型肝炎病毒感染。
病毒学检测
直接检测体液或组织中的病毒颗粒。
乙型肝炎疫苗
疫苗种类
乙型肝炎疫苗有疫苗接种时间
一般情况下，乙型肝炎疫苗需 要在出生后尽早接种，按照指 定时间和剂量进行接种。
预防和控制乙型肝炎的措施
个人注意事项
• 避免接触感染源 • 保持个人卫生 • 接种疫苗 • 维持健康生活方式
医疗防护措施
公共卫生措施
• 切实做好医疗机构感 染控制
• 使用一次性注射器和手套 • 遵循规范的操作程序
• 加强宣传教育 • 监测流行病学 • 完善疫苗接种制度 • 加强监管和协调
结语
乙型病毒性肝炎对人体健康造成严重威胁，预防和治疗的重要性不可忽视。 只有加强预防意识，做到个人防护、医疗防护和公共卫生控制，才能有效控 制乙型病毒性肝炎的传播。
《乙型病毒性肝炎》PPT 课件
乙型病毒性肝炎是一种常见的病毒性肝炎，本课件将为您介绍乙型病毒性肝 炎的定义、感染途径、病毒传播途径、肝炎病毒检测方法、乙型肝炎疫苗、 治疗方法以及预防和控制乙型肝炎的措施。
什么是乙型病毒性肝炎？
乙型病毒性肝炎指的是由乙型肝炎病毒感染引起的肝脏炎症。这种疾病可以通过血液、母婴、性传播、 医疗操作和日常生活接触传播。其症状表现包括恶心、呕吐、乏力、食欲减退和黄疸等。
乙肝知识培训PPT课件
乙肝知识培训 PPT课件
汇报人：XXX
01
乙肝病毒及传播途径
02
乙肝的症状与诊断
03
乙肝的预防与治疗
04
乙肝对生活的影响
05
乙肝的预防与控制策略
目 录
01
乙肝病毒及传播 途径
乙肝病毒的结构与特性
乙肝病毒结构
乙肝病毒由外壳和内核构成， 外壳上有突起，负责病毒的感
染和复制。
乙肝病毒特性
乙肝病毒具有耐热、耐酸、耐 紫外线等特性，在一定条件下
乙肝患者和易感人群应定期进行乙肝病毒检测，以便早 期发现和治疗。
03 乙肝的隔离与防护
乙肝病毒携带者应采取必要的隔离和防护措施，避免病 毒传播。
谢谢
汇报人：XXX
2
药物治疗
乙肝治疗常用的药物包括干扰素、拉米 夫定、阿德福韦酯等抗病毒药物，以及
抗炎保肝药物和免疫调节药物。
3
注意事项
在治疗乙肝时，应该根据患者的病情和 医生的建议选择合适的治疗方法和药物，
同时注意药物的副作用和不良反应。
04
乙肝对生活的影 响
乙肝对个人生活的影响
就业歧视
乙肝患者可能会在就业时遭受歧视，导致 职业发展受阻。
乙肝症状
乙肝患者可能出现的症状包括疲劳、 食欲不振、黄疸、肝区疼痛等。
02
诊断方法
乙肝的诊断通常通过血液检测来进 行，检测项目包括乙肝病毒标志物 和肝功能。
乙肝的诊断标准与方法
乙肝的症状
乙肝患者可能出现的症状包括疲劳、食欲不振、黄 疸和肝区疼痛等。
诊断方法
诊断乙肝的方法包括肝功能检查、乙肝病毒标志物 检测和肝脏超声等。
社交压力
乙肝患者可能会面临来自家庭和社会的压 力，影响其社交生活。
汇报人：XXX
01
乙肝病毒及传播途径
02
乙肝的症状与诊断
03
乙肝的预防与治疗
04
乙肝对生活的影响
05
乙肝的预防与控制策略
目 录
01
乙肝病毒及传播 途径
乙肝病毒的结构与特性
乙肝病毒结构
乙肝病毒由外壳和内核构成， 外壳上有突起，负责病毒的感
染和复制。
乙肝病毒特性
乙肝病毒具有耐热、耐酸、耐 紫外线等特性，在一定条件下
乙肝患者和易感人群应定期进行乙肝病毒检测，以便早 期发现和治疗。
03 乙肝的隔离与防护
乙肝病毒携带者应采取必要的隔离和防护措施，避免病 毒传播。
谢谢
汇报人：XXX
2
药物治疗
乙肝治疗常用的药物包括干扰素、拉米 夫定、阿德福韦酯等抗病毒药物，以及
抗炎保肝药物和免疫调节药物。
3
注意事项
在治疗乙肝时，应该根据患者的病情和 医生的建议选择合适的治疗方法和药物，
同时注意药物的副作用和不良反应。
04
乙肝对生活的影 响
乙肝对个人生活的影响
就业歧视
乙肝患者可能会在就业时遭受歧视，导致 职业发展受阻。
乙肝症状
乙肝患者可能出现的症状包括疲劳、 食欲不振、黄疸、肝区疼痛等。
02
诊断方法
乙肝的诊断通常通过血液检测来进 行，检测项目包括乙肝病毒标志物 和肝功能。
乙肝的诊断标准与方法
乙肝的症状
乙肝患者可能出现的症状包括疲劳、食欲不振、黄 疸和肝区疼痛等。
诊断方法
诊断乙肝的方法包括肝功能检查、乙肝病毒标志物 检测和肝脏超声等。
社交压力
乙肝患者可能会面临来自家庭和社会的压 力，影响其社交生活。
乙型肝炎培训课件
乙型肝炎根据卫生部重点传染病培训光盘整理一、诊断乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的，以肝脏炎性损伤为主的一种传染病；他在我国广泛流行，危害严重，我国有1.2亿人口是慢性乙型肝炎携带者或者是感染者，相当于我国10个人当中就有一个是慢性乙肝感染者，这其中有1/3的人有可能将来会发生慢性乙型肝炎，极少数可以转变成肝硬化或者肝癌。
乙型肝炎病毒是一个很小的病毒，他属于嗜肝脱氧核糖核酸病毒，也就是DNA病毒；它是由它的表面抗原和病毒的内核组成，病毒的内核包含着有e抗原，核心抗原和病毒的基因DNA，还有DNA聚合酶，由于乙肝病毒的表面抗原最早是在澳大利亚土著人血清中发现的，所以过去人们习惯把它称为澳大利亚抗原，人们经常说澳抗阳性就是由此而来。
乙肝病毒的抗原成分主要有三种：表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）、核心抗原（HBcAg）这三种抗原进入人体后，分别可以刺激机体产生三种抗体，也就是表面抗体（HBsAb）、e抗体（HBeAb）、核心抗体（HBcAb）这样就是三对抗原——抗体。
其中核心抗原用一般方法在血清中是很难查出来的，所以常规不做核心抗原的检查，称为乙肝病毒两对半检查或乙肝五项检查。
大三阳是指：乙肝表面抗原、e抗原、核心抗体共同呈阳性。
往往意味着病毒复制活跃，传染性相对较强。
小三阳是指：乙肝表面抗原、e抗体、核心抗体共同呈阳性。
往往表示乙肝病毒复制比较弱，是乙肝病毒的中立期，只是传染性较弱，病情相对稳定。
乙肝五项指标中抗原是病毒的成分，抗体是机体的免疫系统对抗原产生了一种反应，乙肝表面抗体是由表面抗原刺激而产生的，它是一种中和抗体，能够中和乙肝病毒，对抗乙肝病毒的感染来抵御乙肝病毒的侵入，我们注射乙肝疫苗，也是刺激机体产生表面抗体，用来预防乙型肝炎病毒的感染。
e抗体是由e抗原刺激而产生的，e抗体的存在提示着病毒是处于抑制状态，病毒是不活跃的；核心抗体它是一种比较弱的抗体，它不能够抵御病毒的侵入，也对病毒的复制没有抑制作用。
乙型肝炎病毒教学课件ppt
VS
预防措施
对于HBsAg阳性孕妇，建议在妊娠前或 妊娠早期接种乙型肝炎免疫球蛋白（ HBIG），以降低母婴传播的风险。同时 ，对于HBsAg阳性母亲的新生儿，建议 在出生后24小时内接种第一剂乙型肝炎疫 苗，并在1个月和6个月分别接种第二和第法和 前景
现有的乙型肝炎病毒治疗方法
乙型肝炎病毒的传播方式和 特点
乙型肝炎病毒的传播途径
1 2
血液传播
乙型肝炎病毒可经血液传播，如输血、注射、 针刺、共用剃刀等。
性传播
乙型肝炎病毒可经性接触传播，包括性行为、 接吻等。
3
母婴传播
乙型肝炎病毒可通过胎盘、分娩等母婴途径传 播。
乙型肝炎病毒的感染特点
感染率较高
乙型肝炎病毒在我国感染率较高，约为5%-10% 。
乙型肝炎病毒教学课件ppt
xx年xx月xx日
目 录
• 乙型肝炎病毒的概述 • 乙型肝炎病毒的传播方式和特点 • 乙型肝炎病毒对肝脏的损害 • 乙型肝炎病毒的预防和控制 • 乙型肝炎病毒的治疗方法和前景
01
乙型肝炎病毒的概述
乙型肝炎病毒的定义
乙型肝炎病毒是一种属于黄病毒科的RNA病毒。
它主要存在于肝细胞内，复制过程中会破坏肝细胞，引起肝脏炎症、坏死和纤维 化。
预防措施
避免不洁性行为和共用针头是预防乙型肝炎病毒感染的重要措施。使用避孕套、 避免共用注射器、牙刷等个人物品，可有效降低感染风险。
宣传教育
加强对公众的宣传教育，提高他们的意识和自我保护能力，使他们在面对诱惑和 危险因素时能够做出正确的选择。
妊娠期间乙型肝炎病毒的预防
检查项目
对于妊娠期间乙型肝炎病毒感染的检查项 目，包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、 HBeAb和HBcAb等。
肝炎病毒-医学知识培训培训课件
毒,甲肝戊肝的传播途径
肝炎病毒 医学知识培训
46
各型肝炎病毒的主要特点
型别
HAV
HBV
HCV
HDV
HEV
分类（科） 小RNA病 嗜肝DNA 黄病毒 缺陷病毒 杯状病毒
核酸 ssRNA+ dsDNA ssRNA+ ssRNA- ssRNA+
传播途径 粪-口
血源、 母婴
好发人群 儿童青年 各年龄
流行情况 流行性 散发
携带者 罕见 多见
转慢、肝 罕见 硬化
NS：非结构蛋白基因
传 播 主要经血及血制品传播
途 故要严格筛选献血员 径
1.HCV感染的重要特征是易于慢性化, 多数丙肝患者可不出现症状,发病时 已呈慢性
2.相关疾病：慢性肝炎及肝硬化， 肝癌，肾小球肾炎
3.机制：直接作用、免疫病理损伤 4.HCV感染后不能诱导有效的免疫保护反应 5.微生物学检查:
HBV在 血清中 的三种 形态
（1）大球形颗粒：直径42nm （Dane颗粒）
（2）小球形颗粒：直径22nm 成分为HBsAg
（3）管形颗粒： 直径22nm 长100—500nm 成分为HBsAg
脂质双层 主蛋白(S抗原)
外衣壳
中蛋白
（包膜） 蛋白质 (HBsAg)
(S+PreS2抗原)
内衣壳：HBcAg
（1）乙型肝炎抗原、抗体检测 ——两对半 （2）pre s1抗原和pre s2抗原：
病毒复制指标，检出抗体，预后良好 （3）血清HBV DNA检测
病毒存在和复制的最可靠指标 （4）血清DNA聚合酶检测
病毒复制指标
检查结果的临床分析
HBsAg HBeAg 抗HBs 抗HBe 抗HBc
肝炎病毒 医学知识培训
46
各型肝炎病毒的主要特点
型别
HAV
HBV
HCV
HDV
HEV
分类（科） 小RNA病 嗜肝DNA 黄病毒 缺陷病毒 杯状病毒
核酸 ssRNA+ dsDNA ssRNA+ ssRNA- ssRNA+
传播途径 粪-口
血源、 母婴
好发人群 儿童青年 各年龄
流行情况 流行性 散发
携带者 罕见 多见
转慢、肝 罕见 硬化
NS：非结构蛋白基因
传 播 主要经血及血制品传播
途 故要严格筛选献血员 径
1.HCV感染的重要特征是易于慢性化, 多数丙肝患者可不出现症状,发病时 已呈慢性
2.相关疾病：慢性肝炎及肝硬化， 肝癌，肾小球肾炎
3.机制：直接作用、免疫病理损伤 4.HCV感染后不能诱导有效的免疫保护反应 5.微生物学检查:
HBV在 血清中 的三种 形态
（1）大球形颗粒：直径42nm （Dane颗粒）
（2）小球形颗粒：直径22nm 成分为HBsAg
（3）管形颗粒： 直径22nm 长100—500nm 成分为HBsAg
脂质双层 主蛋白(S抗原)
外衣壳
中蛋白
（包膜） 蛋白质 (HBsAg)
(S+PreS2抗原)
内衣壳：HBcAg
（1）乙型肝炎抗原、抗体检测 ——两对半 （2）pre s1抗原和pre s2抗原：
病毒复制指标，检出抗体，预后良好 （3）血清HBV DNA检测
病毒存在和复制的最可靠指标 （4）血清DNA聚合酶检测
病毒复制指标
检查结果的临床分析
HBsAg HBeAg 抗HBs 抗HBe 抗HBc
乙肝知识培训PPT课件
乙肝病毒可通过母婴传播，感 染母亲可将病毒传给新生儿。
性传播
乙肝病毒也可通过性接触传播。
02
乙肝的预防与控 制
乙肝的预防措施
预防乙肝的疫苗 接种
接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方 法。
避免血液传播
避免与他人共用针头、注射器等可能接触血液 的物品，避免与乙肝患者发生血液接触。
乙肝的检测与诊断
乙肝的危害性
概念介绍
01
乙肝是由乙型肝炎病毒感染引起的肝炎，具有传
染性。
危害性
02
乙肝危害包括但不限于：肝衰竭、肝硬化、肝癌
等。
预防与治疗
03
预防乙肝主要通过接种乙肝疫苗，治疗乙肝则根
据病情采用药物治疗、干扰素治疗等方法。
乙肝的传播途径
血液传播
乙肝病毒可通过血液传播，如 注射、输血等途径。
母婴传播
科学家预计未来乙肝疫苗将更加安全、有 效，并可能针对特定人群进行个性化接种。
乙肝治疗方法的创新和改进
新的治疗策略
正在研究新的治疗策略，如直接 抗病毒药物和免疫疗法，以更有
效地治疗乙肝。
个性化治疗
随着基因组学和精准医学的发展， 将会有更个性化的治疗方法，以
提高乙肝患者的治疗效果。
Байду номын сангаас
预防性疫苗
科学家们正在研究预防性疫苗， 以预防乙肝的感染和传播，从而 在全球范围内控制乙肝的流行。
乙肝知识培训 PPT课件
汇报人：XXX
01
乙肝的概念和危害
02
乙肝的预防与控制
03
乙肝的社会影响
04
乙肝的未来展望
目 录
01
乙肝的概念和危 害
乙肝的定义
性传播
乙肝病毒也可通过性接触传播。
02
乙肝的预防与控 制
乙肝的预防措施
预防乙肝的疫苗 接种
接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方 法。
避免血液传播
避免与他人共用针头、注射器等可能接触血液 的物品，避免与乙肝患者发生血液接触。
乙肝的检测与诊断
乙肝的危害性
概念介绍
01
乙肝是由乙型肝炎病毒感染引起的肝炎，具有传
染性。
危害性
02
乙肝危害包括但不限于：肝衰竭、肝硬化、肝癌
等。
预防与治疗
03
预防乙肝主要通过接种乙肝疫苗，治疗乙肝则根
据病情采用药物治疗、干扰素治疗等方法。
乙肝的传播途径
血液传播
乙肝病毒可通过血液传播，如 注射、输血等途径。
母婴传播
科学家预计未来乙肝疫苗将更加安全、有 效，并可能针对特定人群进行个性化接种。
乙肝治疗方法的创新和改进
新的治疗策略
正在研究新的治疗策略，如直接 抗病毒药物和免疫疗法，以更有
效地治疗乙肝。
个性化治疗
随着基因组学和精准医学的发展， 将会有更个性化的治疗方法，以
提高乙肝患者的治疗效果。
Байду номын сангаас
预防性疫苗
科学家们正在研究预防性疫苗， 以预防乙肝的感染和传播，从而 在全球范围内控制乙肝的流行。
乙肝知识培训 PPT课件
汇报人：XXX
01
乙肝的概念和危害
02
乙肝的预防与控制
03
乙肝的社会影响
04
乙肝的未来展望
目 录
01
乙肝的概念和危 害
乙肝的定义
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特点：一个模板可以重复使用，每“结合—裂解—结 合—裂解”一次为一个循环，每循环一次产生一个荧 光信号，呈线性信号放大
侵入者探针法定量检测cccDNA的优缺点
优点：线性信号放大，特异性比荧光 PCR法强
缺点：灵敏度低：104copy/ml
现有的几种cccDNA检测技术简介
1.选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 2.侵入者分析法（Invader assaay） 嵌合引物荧光PCR法
2.侵入者探针法(Invader assay)
两个体系：
两 种 特 殊 的 探 针 ： invader probe 和 primary probe，后者含与待测模板无关的5’侧翼的碱基片段。
荧光共振能量转移系统：被核酸内切酶Ⅰ (cleavase,裂解酶)特异地切割5’侧翼碱基片段作为第 二个invader，与荧光共振能量转移盒（FRETC）结合 ，裂解酶切割FRETC上含有荧光基团的短臂，发出荧光 信号。
/ml左右 ·分研究机构和学者对检测技术的特异性认
识不足，存在缺陷
建立cccDNA检测技术必须克服的难点
·多种同源的乙肝病毒DNA分子并存(cccDNA、 rcDNA、ssDNA、整合的HBV DNA），必须有 效地分离cccDNA和其他类型的病毒DNA
·如何进一步解决特异性的问题？ ·如何解决灵敏度不高的问题（细胞内cccDNA
含量的较低），血清中含量？ ·如何简化检测步骤？
分离cccDNA和rcDNA的分子基础
cccDNA
rcDNA
核酸一级结构
完整的双链
两条链均不完整
核酸空间结构 闭合环状，超螺旋 松弛环状，非超螺旋
是否与蛋白质结合
不结合
共价结合
对某些核酸酶抗性 强，不容易被降解 弱，容易被降解
分离cccDNA和rcDNA的任何手段均基于上述差异
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
缺陷： ·同样存在PCR产物自身退火引起的rcDNA
非特异性扩增的问题 ·由于灵敏度较普通PCR高，假阳性率比普
通PCR更高
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
质粒标准品107copy/ml 质粒标准品105copy/ml 3.5×108copy/ml携带者血清 105~107copy/ml携带者血清
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
解决方案 特异性抽提分离cccDNA与其它形式的病毒DNA
采用沉淀法或质粒抽提试剂盒抽提法 酶切纯化cccDNA
采用绿豆核酸酶或ATP依赖的plasmid-safe DNA酶
现有的几种cccDNA检测技术简介
1.选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 侵入者探针法（Invader assaay） 3.嵌合引物荧光PCR法
二、HBV cccDNA检测技术
现有的几种cccDNA检测技术简介
1.选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 2.侵入者探针法（Invader assaay） 3.嵌合引物荧光PCR法
现有的几种cccDNA检测技术简介
选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 2.侵入者探针法（Invader assaay） 3.嵌合引物荧光PCR法
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
与定性法比较增加了一个荧光探 针，探针位于扩增片段区（负链缺口 下游），与cccDNA的负链互补。
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
3200(1) 3‘
EcoR I
+
P2
1590 P1
5‘ 5‘ห้องสมุดไป่ตู้
3‘ 1820
rcDNA不能被扩增
无荧光信号
3200（1） EcoR I
+
P2
1590 P1
1820
cccDNA能被扩增 检测到荧光信号
实时荧光定量PCR的原理
实时荧光定量PCR的原理
实时荧光定量PCR的原理
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
结果 ： 标准曲线方程YCt= 42.0827-3.5554logXcopy 相关指数： R2=0.995 灵敏度至少可以达到103copy/ml
乙 型 肝 炎 病 毒 基 因 组 结 构 示 意 图
乙 型 肝 炎 病 毒 的 复 制 过 程
我们为什么要关注HBV cccDNA?
cccDNA存在于细胞核内，成为乙肝病毒的复制“池
”
目前尚没有可以进入细胞核内，并能够清除cccDNA
的药物，这也是现有抗病毒药物治疗效果不佳和治 疗后容易复发的原因之一
“选择性”PCR：并非万无一 Kock等：反应管中rcD失NA含量不能超过105copy
Hepatology 1996;23:405-413
血清HBV rcDNA超过108copy/ml，进行荧光PCR 可能会出现检测结果假阳性
rcDNA被大量扩增，阳性结果不可靠，定量结 果也不可靠
Hepatology Research 2003;15: 234-243（PBMC） World J Gastroenterol 2004;10(1):82-85(血清)
肝脏以外器官组织细胞可能存在cccDNA，成为肝脏
移植术后乙肝复发的来源
还没有稳定、可靠、敏感的cccDNA检测试剂盒问世
为什么没有cccDNA检测试剂盒问世?
·研究和开发该检测技术的时间不长 ·检测技术上的难度较大 ·前期研究主要集中于细胞模型和动物肝脏
模，不能满足临床检验的需求 ·现有技术灵敏度不高，检测低限104 copy
1.选择性PCR
设计一对特殊引物：跨双缺口引物
正义引物P1 ：与负链互补结合，位于正 链缺口上游
反义引物P2 ：与正链互补结合，位于负 链缺口下游
目的：rcDNA不被扩增
选择性PCR：rcDNA不被扩增
选择性PCR：cccDNA能被扩增
“选择性”PCR：并非万无一 失
PCR产物自身退火（self annealing）
乙型肝炎病毒cccDNA
一、几个相关问题简介
什么是HBV cccDNA?
即 共 价 闭 合 环 状 DNA （ covalently closed circular DNA)。乙肝病毒感染宿 主细胞后在细胞内复制并建立感染状态， 病毒松弛环状DNA（rcDNA）进入细胞核， 利用宿主DNA聚合酶和拓扑酶等“修复”形 成的、结构完整的、超螺旋双链DNA分子。
侵入者探针法定量检测cccDNA的优缺点
优点：线性信号放大，特异性比荧光 PCR法强
缺点：灵敏度低：104copy/ml
现有的几种cccDNA检测技术简介
1.选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 2.侵入者分析法（Invader assaay） 嵌合引物荧光PCR法
2.侵入者探针法(Invader assay)
两个体系：
两 种 特 殊 的 探 针 ： invader probe 和 primary probe，后者含与待测模板无关的5’侧翼的碱基片段。
荧光共振能量转移系统：被核酸内切酶Ⅰ (cleavase,裂解酶)特异地切割5’侧翼碱基片段作为第 二个invader，与荧光共振能量转移盒（FRETC）结合 ，裂解酶切割FRETC上含有荧光基团的短臂，发出荧光 信号。
/ml左右 ·分研究机构和学者对检测技术的特异性认
识不足，存在缺陷
建立cccDNA检测技术必须克服的难点
·多种同源的乙肝病毒DNA分子并存(cccDNA、 rcDNA、ssDNA、整合的HBV DNA），必须有 效地分离cccDNA和其他类型的病毒DNA
·如何进一步解决特异性的问题？ ·如何解决灵敏度不高的问题（细胞内cccDNA
含量的较低），血清中含量？ ·如何简化检测步骤？
分离cccDNA和rcDNA的分子基础
cccDNA
rcDNA
核酸一级结构
完整的双链
两条链均不完整
核酸空间结构 闭合环状，超螺旋 松弛环状，非超螺旋
是否与蛋白质结合
不结合
共价结合
对某些核酸酶抗性 强，不容易被降解 弱，容易被降解
分离cccDNA和rcDNA的任何手段均基于上述差异
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
缺陷： ·同样存在PCR产物自身退火引起的rcDNA
非特异性扩增的问题 ·由于灵敏度较普通PCR高，假阳性率比普
通PCR更高
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
质粒标准品107copy/ml 质粒标准品105copy/ml 3.5×108copy/ml携带者血清 105~107copy/ml携带者血清
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
解决方案 特异性抽提分离cccDNA与其它形式的病毒DNA
采用沉淀法或质粒抽提试剂盒抽提法 酶切纯化cccDNA
采用绿豆核酸酶或ATP依赖的plasmid-safe DNA酶
现有的几种cccDNA检测技术简介
1.选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 侵入者探针法（Invader assaay） 3.嵌合引物荧光PCR法
二、HBV cccDNA检测技术
现有的几种cccDNA检测技术简介
1.选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 2.侵入者探针法（Invader assaay） 3.嵌合引物荧光PCR法
现有的几种cccDNA检测技术简介
选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 2.侵入者探针法（Invader assaay） 3.嵌合引物荧光PCR法
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
与定性法比较增加了一个荧光探 针，探针位于扩增片段区（负链缺口 下游），与cccDNA的负链互补。
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
3200(1) 3‘
EcoR I
+
P2
1590 P1
5‘ 5‘ห้องสมุดไป่ตู้
3‘ 1820
rcDNA不能被扩增
无荧光信号
3200（1） EcoR I
+
P2
1590 P1
1820
cccDNA能被扩增 检测到荧光信号
实时荧光定量PCR的原理
实时荧光定量PCR的原理
实时荧光定量PCR的原理
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
结果 ： 标准曲线方程YCt= 42.0827-3.5554logXcopy 相关指数： R2=0.995 灵敏度至少可以达到103copy/ml
乙 型 肝 炎 病 毒 基 因 组 结 构 示 意 图
乙 型 肝 炎 病 毒 的 复 制 过 程
我们为什么要关注HBV cccDNA?
cccDNA存在于细胞核内，成为乙肝病毒的复制“池
”
目前尚没有可以进入细胞核内，并能够清除cccDNA
的药物，这也是现有抗病毒药物治疗效果不佳和治 疗后容易复发的原因之一
“选择性”PCR：并非万无一 Kock等：反应管中rcD失NA含量不能超过105copy
Hepatology 1996;23:405-413
血清HBV rcDNA超过108copy/ml，进行荧光PCR 可能会出现检测结果假阳性
rcDNA被大量扩增，阳性结果不可靠，定量结 果也不可靠
Hepatology Research 2003;15: 234-243（PBMC） World J Gastroenterol 2004;10(1):82-85(血清)
肝脏以外器官组织细胞可能存在cccDNA，成为肝脏
移植术后乙肝复发的来源
还没有稳定、可靠、敏感的cccDNA检测试剂盒问世
为什么没有cccDNA检测试剂盒问世?
·研究和开发该检测技术的时间不长 ·检测技术上的难度较大 ·前期研究主要集中于细胞模型和动物肝脏
模，不能满足临床检验的需求 ·现有技术灵敏度不高，检测低限104 copy
1.选择性PCR
设计一对特殊引物：跨双缺口引物
正义引物P1 ：与负链互补结合，位于正 链缺口上游
反义引物P2 ：与正链互补结合，位于负 链缺口下游
目的：rcDNA不被扩增
选择性PCR：rcDNA不被扩增
选择性PCR：cccDNA能被扩增
“选择性”PCR：并非万无一 失
PCR产物自身退火（self annealing）
乙型肝炎病毒cccDNA
一、几个相关问题简介
什么是HBV cccDNA?
即 共 价 闭 合 环 状 DNA （ covalently closed circular DNA)。乙肝病毒感染宿 主细胞后在细胞内复制并建立感染状态， 病毒松弛环状DNA（rcDNA）进入细胞核， 利用宿主DNA聚合酶和拓扑酶等“修复”形 成的、结构完整的、超螺旋双链DNA分子。