无菌操作技术
无菌技术的操作流程
无菌技术的操作流程无菌技术是现代生物实验室中常用的一项技术，它用于在无菌条件下进行微生物的培养和实验操作。
无菌技术操作流程的规范和正确性对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
下面将详细介绍无菌技术的操作流程。
一、准备工作1. 实验前准备：清洗实验台面、操作台和实验仪器，保持干净整洁，并将所需的培养基、试剂和器械准备齐全。
2. 环境准备：确保实验室的环境无尘、无菌，使用紫外线灯照射操作区域，杀灭空气中的微生物。
二、个人防护1. 穿戴实验服、手套和口罩，避免将自身的微生物带入操作区域，减少对实验的污染。
2. 手部消毒：使用75%酒精或其他有效的手部消毒剂对双手进行彻底的消毒，确保双手洁净无菌。
三、无菌技术操作流程1. 开启无菌工作台或无菌柜，并等待5-10分钟，使其内部环境达到无菌状态。
2. 打开培养基瓶盖前，先对其外表面进行消毒，然后将瓶盖旋开一定角度，以避免瓶口受到外界污染。
3. 取出所需培养基，使用酒精灯或Bunsen燃烧器对瓶口进行消毒，避免外界空气中的微生物进入培养基中。
4. 取出需接种的微生物试管或培养皿，在火焰中将试管口或培养皿盖轻轻烧烤一下，杀灭表面的微生物，避免外界污染。
5. 使用灭菌的移液器或接种环，将微生物接种到培养基上，注意避免接触到瓶口或其他可能污染的物体。
6. 接种完成后，立即将瓶盖或培养皿盖盖好，避免外界的污染。
如果是试管，则立即用胶带封口。
7. 在接种完毕后，将移液器或接种环进行高温烧烤，以保证其表面的无菌状态。
8. 实验结束后，关闭无菌工作台或无菌柜，并对操作区域进行清洁消毒，确保下次实验时的无菌环境。
四、注意事项1. 操作要快且准确，以减少外界污染的可能性。
2. 避免与培养基的瓶口或试管口直接接触，以防止微生物的污染。
3. 注意消毒的方法和时间，确保彻底杀灭微生物。
4. 避免操作时产生气流，以防止空气中的微生物进入操作区域。
5. 定期对无菌工作台或无菌柜进行检测和维护，确保其正常工作和无菌状态。
无菌操作基本技术
无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
哪些技术是无菌操作方法
哪些技术是无菌操作方法无菌操作是一种用于处理和制备无菌条件下的实验样品或制造无菌产品的技术方法。
它可以有效地防止微生物的污染和传播，确保实验结果的准确性和产品的安全性。
以下是一些常见的无菌操作技术：1. 灭菌：灭菌是无菌操作的基础。
它是使实验室设备、培养基、介质等无菌的过程。
灭菌的方法包括高温灭菌、化学灭菌和辐射灭菌。
高温灭菌是通过加热到高温杀灭微生物，常用的方法有干热灭菌和湿热灭菌。
化学灭菌可以使用消毒剂如酒精、过氧化氢和醋酸进行杀灭微生物。
辐射灭菌则利用紫外线、X射线或γ射线辐射杀灭微生物。
2. 空气过滤：空气过滤是一种通过过滤器将空气中的微生物去除的无菌操作方法。
常见的过滤器有HEPA过滤器和微生物过滤器。
空气过滤可以应用于实验室环境中，以保持操作区域的洁净无菌，还可以应用于工业生产过程中，用于防止空气中的微生物污染。
3. 无菌技术柜：无菌技术柜是一种密闭且通过高效过滤器供给无菌气流的设备。
它可以提供无菌操作区域，有效阻止微生物的进入和传播。
无菌技术柜常用于微生物学实验室和制药工厂中，用于处理和制备无菌条件下的试样和产品。
4. 手部消毒：手部是微生物最容易滋生和传播的部位，因此手部消毒是无菌操作中非常重要的步骤。
手部消毒一般可以通过洗手液进行常规清洁，再用含酒精的手消毒剂进行消毒。
在无菌操作过程中，操作人员需要经常进行手部消毒，以保持无菌条件。
5. 工作台消毒：无菌操作中的工作台也需要进行定期的消毒。
消毒可以使用含有酒精或其他消毒剂的湿纸巾或棉球进行，以彻底清除表面的微生物污染。
6. 无菌培养：无菌培养是一种在无菌条件下进行细菌培养的技术。
它可以通过提供无菌的培养基和无菌的操作环境，使细菌在无菌状态下生长。
无菌培养常用于微生物学实验室中研究微生物的生长和代谢特性。
7. 无菌包装：无菌操作在制造无菌产品中也起着至关重要的作用。
无菌包装是将产品包装在无菌条件下，以防止微生物污染。
常见的无菌包装方法包括热灭菌包装和接触无菌包装。
无菌操作技术名词解释
无菌操作技术名词解释无菌操作技术指的是：在医疗卫生实践活动中，医务人员的一项基本的操作技术，就是医务人员必须遵守的、保证医疗安全和患者健康的一些规章制度和操作规程。
简单来说就是不能被细菌或其他微生物污染的操作技术。
那么它的意义何在呢？实施无菌操作的必要性： 1。
保证无菌环境是预防院内感染最有效措施之一，避免院内感染的重要环节，可以有效地控制感染源的传入，防止外源性感染的发生，杜绝传染病扩散，对减少病人的痛苦和缩短住院日期，提高抢救成功率具有重要的临床意义。
2。
手术时，人的血液、体液、分泌物和排泄物等都存在于无菌的环境中，如果用手直接拿东西，就会将细菌带到医疗器械上，或者是把无菌区域的皮肤划破，就会使细菌进入到手术创面，因此，手术前后都要认真洗手，并正确地按步骤做好每一个步骤，防止血液、体液、分泌物和排泄物等污染医疗器械，引起感染。
3。
凡是侵入人体组织间隙内的异物，不管是固体还是液体，都必须经过消毒才能进行清除。
4。
医务人员在为病人治疗疾病时，如果手上沾有病人的血迹、粪便、体液、分泌物等，又直接用手去接触病人的伤口、脓肿、溃疡等部位，很容易造成病原菌感染，导致医院感染的发生。
5。
在临床护理工作中，医护人员的手都直接接触各种无菌器械及被血液、体液、分泌物等污染的物品，如果处理不当，也可以引起医院感染。
为什么无菌技术至关重要呢？原因有三： 1、2、为什么要执行严格的无菌技术操作原则呢？因为医院的环境是由许多相对无菌的环境与大量相对有菌的环境所构成的，虽然这两种环境彼此之间是相对隔离的，但在这种无菌环境里仍然有各种细菌生长繁殖着，如果医护人员在治疗过程中不注意无菌技术，这些细菌就可能通过人与人之间、物与物之间的接触而传播到另一个病人身上，这样既影响了治疗的效果，又增加了病人的痛苦。
因此，我们在进行各种医疗操作时，必须按照各种器械、敷料等的清洁灭菌的操作规程，采取严格的无菌技术操作方法。
只有这样才能确保医护人员不被各种细菌感染，保障病人的健康和安全。
六项无菌技术操作法
六项无菌技术操作法
无菌技术是在实验室和医疗领域中非常重要的操作技术，用于防止微生物的污染。
以下是六项无菌技术操作法的详细介绍：
2.消毒操作：在进行无菌操作之前，需要对操作区域和工具进行消毒处理。
常用的消毒方法包括使用酒精、紫外线、高温等。
消毒操作需要按照规定的时间和方法进行，并保持操作区域的干燥。
3.穿戴无菌衣物：进行无菌操作时，操作人员需要穿戴无菌衣物，以防止人体的微生物污染。
无菌衣物包括无菌手套、无菌帽、无菌口罩等，需要在规定的时间内更换，并保持衣物的干燥和整洁。
4.灭菌操作：对于需要使用的器械和培养基等材料，需要进行灭菌操作，以确保其无菌。
常见的灭菌方法包括高温灭菌、压力灭菌、化学灭菌等。
选择合适的灭菌方法需要考虑物品的特性和要求。
5.无菌操作台：无菌操作台是进行无菌操作的重要设备。
操作台通常采用不锈钢材质制成，具有可拆卸的透明遮挡板和风幕，以保持操作区域的无菌环境。
在进行无菌操作时，需要将材料放置在操作台上，并避免与非无菌区域接触。
6.快速无菌技术：在一些需要快速进行无菌操作的场合，可以使用快速无菌技术。
常用的快速无菌技术包括滤膜法、放射法等。
这些技术可以在相对较短的时间内对样品进行无菌处理，并减少了传统方法中的大部分操作步骤。
总结起来，无菌技术操作法主要包括空气净化、消毒操作、穿戴无菌衣物、灭菌操作、无菌操作台和快速无菌技术。
通过正确使用这些技术和
操作法，可以有效地防止微生物的污染，保证实验和医疗工作的可靠性和有效性。
无菌技术操作
<五>铺无菌盘
概念：铺无菌盘是将无菌巾铺在清洁干燥的治疗盘内，形成一无菌区，
放置无菌物品，以供治疗之用，有效时限不超过4小时。
<六>戴无菌手套
戴手套时应注意未戴手套的手不可触及手套的外面，已戴手套的 手不可触及未带手套的手或另一手套的内面。
谢谢！
四、无菌持物钳的使用
（一）种类：临床上常用的无菌持物钳有卵圆钳、长、短镊子三种。 （二）目的：用于取放和传递无菌物品，保持物品的无菌状态。
1、无菌持物钳的存放方法
（1）经压力蒸汽灭菌后浸泡在内盛消毒液的大口有盖容器内，容器 深度与钳长度比例适合消毒液面浸没轴节以上2-3cm或镊子长 度的1/2，每个容器只能放置一把无菌持物钳。
（4）容器每周灭菌一次
开盖 盖盖
<三>取用无菌溶液
1、取用密封瓶装溶液： 检查：（1）外面：瓶签、瓶盖、瓶口 （2）内面：沉淀、浑浊、颜色 2、取用烧瓶装溶液：不可将无菌物品或非无菌物品伸入无菌溶液瓶 内蘸取或直接接触瓶口倒液，以免污染瓶内的溶液。
<四>无菌包使用
1、包扎发：十字形、一字行。 2、开包法：（1）放在清洁处打开 （2）托在手上打开 （3）一次性无菌物品开包法
一、概念
（一）无菌技术：是指在医疗，护理操作中，防止一切微生物侵入人 体和防止无菌物品，无菌区域被污染的操作技术。 （二）无菌物品：是指经过灭菌处理后未被污染的物品。
（三）无菌区域：是指经过灭菌处理后未被污染的区域。
（四）有菌区域：是指未经过灭菌处理或是经过灭菌处理而被污染的 区域。 （五）污染区：是指凡是直接或间接的与致病微生物相接触。
5、戴、脱无菌手套
<一>无菌持物钳的使用
无菌操作技术图文.
(3)第一遍刷完后,用流水冲净；共刷 洗3遍，每遍约3min，共约10min。
(4) 刷洗时应稍用力 ，并特别注意指甲 、 指间、手背、手掌等处。流水冲洗时， 双肘弯曲，手指向上，让水由手指处向 肘部流下，不得返流。
（5）在刷洗过程中，如果怀疑手、臂被 污染，应重新从第一遍开始刷洗。
（6）取消毒毛巾、擦干双手，将毛巾 对折，底口向肘部，用另一手拉对角， 缓缓向左右移动，然后将毛巾对折处 翻转，用毛巾另一面如上法擦干另一 手臂，高度应低于肘部7cm以下。
(2) 用戴着手套的右侧手指、插入左手套的 翻折处脱去左手套至手掌部 ( 勿触及左手 的皮肤 ),再用左手拇指、伸入右手套掌部 之下, 提起右手套的翻折部,将左右手手套 依此脱下。
(3)用流水冲洗掉手上的滑石粉，取消毒巾 擦干手及手臂，重新消毒手及手臂。 (4)如果手套已破裂或在脱手术衣时，手臂 不慎被污染，须重新刷洗、消毒手臂。
（4）末戴手套的手，不得拉衣袖或接触 其他处。
（5）手术进行中、参加手术人员如需互
换位置，须背对背转动。
2.连台手术脱手术衣法
(1)第一台手术结束后，洗净手套上的血迹， 先脱去手术衣，再脱去手套。脱手术衣时， 由他人解开背部带子，将手术衣自背部向 前反折脱下（将衣袖自腕部向手的方向翻 转脱下），使手套自然由腕部翻转于手上。
4.无菌物品-----指经过物理或化学方法 灭菌后, 保持无菌状态的物品。
无菌技术操作原则
操作前准备 保持操作的无菌性 无菌物品管理
（一）操作前准备
1.环境准备 进行无菌操作时，环境要清洁，操 作区要宽敞，安静，严禁人员频繁 走动。
2.操作者准备 (1)要有科学严谨的态度和认真求实的精神.
2. 手臂的消毒
无菌技术六项基本操作
日期、消毒效果
注意事项
无菌持物钳只能用于夹取无菌物品，不能触及非无菌物品。 无菌持物钳不能夹取无菌油纱布，也不能用于换药或消毒皮肤。 到远处夹取无菌物品，应同时搬移无菌持物钳和浸泡溶液，以免无菌持物钳在空气中暴露过久而污染。 使用无菌容器时，不可污染盖的内面、容器边缘及内面。 无菌容器一经打开，使用时间最长不得超过24h。 取用无菌溶液时，不可将无菌敷料、器械直接伸入瓶内蘸取，也不可将无菌敷料接触瓶口倒液。 已倒出的无菌溶液，不可再倒回瓶内。 打开的无菌溶液，如未污染可保存24h。 打开无菌包时，手不可触及包布的内面，操作时手臂勿跨越无菌区。 无菌包过期、潮湿或包内物品被污染时，均须重新灭菌。包布有破损时不能使用。 打开过的无菌包，如包内物品一次未用完，在未污染的情况下，有效期为24h。 治疗台及治疗盘清洁干燥 操作者的手、衣袖及其他非无菌物品不可触及无菌面。 无菌盘有效时限不超过4h。 戴手套时，避免手套外面（无菌面）触及任何有菌物品。 未戴手套的手不可触及手套的外面，已戴手套的手不可触及未戴手套的手或另一手套的内面（非无菌
上物置治疗车上层
弯盘（三个）：一个放治疗车上层方盘外（操作时 放操作台上），另两个放车下层（操作时一个放污 染的手套，一个放其他污物）
连贯动作
铺无菌盘（内放：无菌弯盘、无菌纱布、小 无菌镊）→取无菌碗→取无菌溶液→戴无菌手套
操作流程
仪表→评估环境（擦治疗车→擦操作台） →洗手（六步洗手法） →戴 口罩→准备用物（评估用物是否可用并报告） →摆台→报告开始 →铺无菌盘（查无菌巾包名称、灭菌日期、消毒效果→开治疗巾 包→取治疗巾→包按原痕包好→记录开包时间→包归位→扇形打 开治疗巾→取无菌弯盘→取无菌纱布→取无菌镊→折好无菌巾→ 记录铺盘时间→放好盘） →取无菌碗（查名称、灭菌日期、消毒 效果→开包→手托碗底→置桌面） →取无菌溶液（检查标签、溶 液质量→消毒瓶口和盖→取纱布→开瓶盖→标签对掌心冲瓶口→ 倒液→盖好瓶盖→记录开瓶时间→液归位） →戴无菌手套（查名 称、灭菌日期、消毒效果、手套型号→开包→查手套反折面→扑 粉→手拿反折面取手套→检查是否成对→戴好一手→戴好手套的 手插入反折面里→戴另一只→整理反折面→十指交叉相握→展示） →脱手套（洗手→拈住腕处手套外面→翻转脱下一只→拇指插入 另一只里翻转脱下） →整理手套、袋→报告操作完毕→整理操作 台、用物→打包→放置用物台
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无菌操作技术
使用无菌持物钳的目的:取用或者传递无菌的敷料、器械。
铺无菌盘的目的:将无菌巾铺在清洁干燥的治疗盘内,形成无菌区,放置无菌物品,以供实施治疗时使用。
取用无菌溶液的目的:保持无菌溶液的无菌状态。
无菌容器使用法的目的:保持已经灭菌的物品处于无菌状态。
戴无菌手套的目的:执行无菌操作或者接触无菌物品时戴无菌手套,以保护患者,预防感染。
仪表:仪表端庄,服装整洁;修剪指甲,取下手表,正确应用六部洗手法清洗双手;戴园帽、戴口罩。
评估:1、评估各种无菌物品的名称、灭菌日期及失效期、灭菌效果(灭菌指示胶带是否为均匀一致的黑色)、灭菌包是否完整、包扎紧实、无潮湿;灭菌容器的盖及筛孔是否紧闭;2、评估一次性无菌手套的号码。
评估操作环境是否清洁,宽敞;按照所提供环境评估物品应如何摆放,使其在操作中不互相跨越,在打开无菌包时有足够的空间。
用物准备:无菌镊子筒及持物钳包1套;治疗盘1个;碘伏;无菌棉签1包;无菌治疗巾包1个;无菌溶液1瓶;清洁纱布2块;储槽1个(内置治疗碗数个);弯盘1个;无菌手套袋或一次性无菌手套1副;纱布罐;启瓶器1个;记录卡片及不干胶标签数个;笔!
操作:用治疗车将用物推至操作台旁,擦拭桌面,将物品合理布局于操作台上,
再次检查个人准备情况
(1)、无菌持物钳的使用:
1、再次核对无菌镊子筒及持物钳包的名称、包皮有无破损、潮湿、消毒指示胶带是否变色及有效期期
2、遵循无菌原则打开无菌钳包,解开无菌包系带并缠好放于包皮下面,逐层打开,取出镊子筒置于操作台上,无菌持物钳置于筒内,包皮放于治疗车下层。
3、取不干胶标签记录打开日期及时间、并贴于镊子筒上。
口述:干缸有效期4小时。
(2)、铺无菌盘:
1、取治疗盘放于合适位置,再次查对无菌治疗巾包的名称,包皮有无破损、潮湿、消毒指示胶带是否变色及有效期。
2、选择宽敞的位置,打开无菌包,用无菌持物钳夹取无菌治疗巾一块放入治疗盘内。
取放无菌持物钳时,钳端应闭合,不可触及容器边缘部分,使用持物钳时保持钳端向下,用后立即放回。
3、未用完的无菌巾,应按原折痕包好系带,注明开包日期与时间,口述:有效期24小时。
如已没有治疗巾,则将包皮放于治疗车下层。
4、双手捏住治疗巾上层两角外面,轻轻抖开,双折铺于治疗盘内,上层向远端呈扇形折叠,开口边向外,治疗巾内面为无菌区。
(3)无菌容器:
1检查无菌容器名称及标识,消毒指示胶带是否变色及有效期。
双手持储槽双耳打开储槽盖并放置稳妥,检查容器内灭菌指示卡。
2、用无菌持物钳取出一个治疗碗放于铺好的治疗盘内,检查并打开无菌纱布罐,将盖内面向上平放桌上,夹出纱布数块放于治疗碗内,操作中不要跨越无菌区。
3、将储槽盖严,双耳扣妥,手不可触及储槽内面及边缘,将纱布罐盖双手托起
盖好,手不可触及盖的内面及边缘,注明首次打开储槽及纱布罐的日期及时
间。
口述:有效期24小时。
4、放好无菌物品后,将上层无菌巾盖于物品上,上下层边缘对齐,并将开口处
边缘向上翻折两次,两侧边缘向下翻折一次,注明铺盘时间。
口述:有效期4小时。
(4)取用无菌溶液:1、取无菌溶液,螺旋式擦净瓶口及瓶身。
再次核对药名、
浓度、剂量、失效期,检查瓶盖是否松动,瓶身有无裂缝,溶液有无沉淀、变色、浑浊等。
2、用无菌持物钳取出一个治疗碗,手应托其底部,不能触及容器的内面及边缘,放于操作台上。
3、撬去铝盖,两手拇指于标签侧将瓶塞向上翻起松动,用食指和中指套住瓶塞拉出,手不能触及瓶口及盖的内面
4、手握标签面,先倒出少许溶液于弯盘内旋转冲洗瓶口2/3,再由原处将溶液倒入无菌容器内50-100ml。
如有剩余药液立即盖好瓶塞,由瓶颈到瓶塞常规消毒后翻下, 如打开瓶塞时未污染瓶口,只消毒瓶塞内面即可,注明开瓶日期与时间。
口述:有效期24小时。
将治疗碗双手托起放好。
(5)带无菌手套:
1、选择大小合适的一次性无菌手套,检查包装是否完好及其有效期。
2、打开手套包,按左右手位置放置妥当,一手捏起纸袋开口处,另一手捏住一
只手套翻折部分(手套内面),取出手套对准五指戴好。
未戴手套的手捏起另一开口处,用已戴好手套的手,插入另一手套的翻折内面(手套外面)对准五指戴好。
双手对
合交叉调整手套位置,将手套的翻转处套在工作服衣袖外面,准备进行无菌操作。
口述:操作前擦去手套上的滑石粉,操作完毕,洗净手套上的污物。
3、脱手套时,一手捏住另一手套腕部外面翻转脱下,再以脱下手套的手指插入
另一手套口内,将其翻转脱下。
(6)分类处理用物,洗手,放回保留物品。
使用无菌持物钳的注意事项:
1、无菌持物钳不能夹取未灭菌的物品,也不能夹取油纱布。
2、取远处物品时,应当连同容器一起搬移到物品旁使用。
3、使用无菌钳不能低于腰部。
4、打开包后的干镊子筒、持物钳应当4小时更换一次。
铺无菌盘的注意事项:
1、铺无菌盘区域及治疗盘必须清洁干燥,无菌巾避免潮湿。
2、非无菌物品不可触及无菌面。
3、注明铺无菌盘的日期、时间,无菌盘有效期为4小时
使用无菌容器时的注意事项:
1、使用无菌容器时,不可污染容器盖内面、容器边缘及内面。
2、无菌容器打开后,记录开启的日期、时间、有效使用时间为24小时。
取无
菌溶液时的注意事项:
1、不可以无菌物品或者无菌物品伸入无菌溶液内蘸取或者直接接触瓶口倒取溶液。
2、已倒出的溶液不可再倒回瓶内。
戴无菌手套的注意事项:
1、戴手套时应当注意未戴手套的手不可触及手套的外面,戴手套的手不可触及未戴手套的手或另一手套的里面。
2、戴手套后如发现有破洞、手套破裂或污染时,应当立即更换。
3、脱手套时,应翻转脱下。