Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定
Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定
改变 ＤＮＰＨ 的用量， 结果表明， 当 ＤＮＰＨ 的
用量大于 ０．５ｍＬ 时， 吸光度达到最大且基本稳
定。实验选择 ＤＮＰＨ 浓度为 １．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
２．８ 方法的准确性与精密度
当没有清除剂存在时， 按实验方法， 对于
１．０ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＭＳＯ， ５ 次 测 定 的 吸 光 度 （ Ａ） 为 ：
ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｘ－ ｒａｙ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐｉｎ ｔｒａｐｐｉｎｇ／ＥＰＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ［Ｊ］． Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ ｂｉｏｍｅｄ， ２００４， ３６（９）：１１３４－ １１４３
２．５ ＤＭＳＯ 用量影响 ２
参考文献： ［１］ Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｖ Ｌ． Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ［Ｊ］． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９９３， ６５（１２）：３７４－ ３７７ ［２］ Ｋｅｉｚｏ Ｔ， Ｋａｏｒｉ Ｆ， Ｋａｚｕｎｏｒｉ Ａ， Ｔｏｓｈｉｈｉｋｏ Ｏ． Ｉｎ ｖｉｖｏ
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［ １０］ 沈之菲． 让心理咨询更有效 — ——焦点解决短期心理疗法探究 ． 思想理论教育［Ｊ］． ２００５，６：５７－ ６０． ［ １１］ 王 玲．焦 点 解 决 短 期 心 理 咨 询 法 的 评 介［Ｊ］．中 国 心理卫生杂志， ２００２，１０： ６７５－ ６７６．
［３］Ｃｈａｏ Ｔａｉ， Ｊｉｎ － Ｆｅｎｇ Ｐｅｎｇ， Ｊｉｎｇ － Ｆｕ Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌｓ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｔｒａｐｐｑｉｎｇ ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］． Ａｎａｌ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ， ２００４， ５２７：７３－ ８０
NR光度法测定Fenton试剂所生成的羟基自由基
福建分析测试 Fujian Analysis &Testing 2006,15(3)收稿日期:2006-2-22作者简介:朱琳娜(1981～),女,在读硕士研究生,主要研究方向为水污染控制理论与技术。
E -mail:lina .a manda@NR 光度法测定Fent on 试剂所生成的羟基自由基朱琳娜 何争光 吴超(1、郑州大学环境与水利学院,郑州 450002;2、河南神火集团,永城 476613)摘 要:要提高Fent on 试剂在废水处理中的效率,关键就是要提高羟自由基的生成率和利用率。
本文提出了检测Fent on 试剂反应产生羟自由基的新方法,羟自由基氧化中性红使其褪色,用分光光度法测定其△A 值的变化,可间接测定羟自由基的产生量。
并考查了FeS O 4投加量、H 2O 2投加量、酸度、反应时间等影响羟自由基生成量的主要因素,为Fent on 试剂在废水处理中的应用提供了参数依据。
另外,该法稳定性好,操作简单,测定快速。
关键词:光度法;中性红(NR );羟自由基;Fent on 试剂;废水处理中图分类号:O657.32 文献标识码:A 文章编号:1009-8143(2006)03-0010-03Photom etr i c D eterm i n a ti on of Hydroxyl Free Rad i ca l Produced i n Fen ton ’s Reagen t Reacti on System by Toluylene Red D ecoloura ti onZhu L i n na He Zhengguang W u Chao(1.School of Envir on ment and W ater Conservancy,Zhengzhou University,Zhengzhou,450002,China;2.Shenhuo Gr oup,Henan,Yongcheng,476613,China )Abstract:The key t o enhance the efficiency of Fent on’s reagent in waste water treat m ent is t o enhance the p r oductivity and utilizati on rati o of hydr oxyl radicals in the syste m.I n this paper,for the deter m inati on of the hydr oxyl free radical p r oduced by Fent on reacti on,a ne w phot ometric method based on its oxidati on reacti on with t oluylene red is put f or ward .The col or intensity of t oluylene red will be changed after the oxidati on reacti on,the change of △A is measured phot ometrically,and the a mount of the hydr oxyl free radical can be deter m ined indirectly .The leading fact ors influencing the p r oductivity of the hydr oxyl free radical in the system such as the a mounts of FeS O 4and H 2O 2,reacti on ti m e and reacti on temperature were tested .The useful para meters for Fent on’s reagent in waste water treat m ent were offered .I n additi on,the stability of thismethod is good,its operati on is convenient,and its deter m inati on is fast .Key words:phot ometry;t oluylene red;hydr oxyl free radical;Fent on’s reagent;waste water treat m ent Fent on 试剂在废水处理中的应用主要是利用H 2O 2在Fe 2+的催化作用下所生成的具有强氧化性的・OH 的作用,通过其强氧化性对废水进行预处理以提高废水可生化性,利于其后续处理。
分光光度法测定Fenton反应产生的羟基自由基_颜军
第28卷第2期2009年6月成都大学学报(自然科学版)Journal of Chengdu University(Natural Science Editi on)Vol.28No.2Jun.2009文章编号:1004-5422(2009)02-0091-04分光光度法测定Fent on反应产生的羟基自由基颜 军,苟小军,邹全付,纪小明,崔秀英,兰海蓉,李 雪(成都大学中药化学实验室,四川成都 610106)摘 要:基于水杨酸可以捕获羟基自由基(·OH)生成2,3-二羟基苯甲酸和2,5-二羟基苯甲酸,在波长510 n m处有最大吸收的原理,建立一种用分光光度法检测Fent on反应产生的羟基自由基(·OH)的方法.通过对反应体系影响条件的优化,筛选出最佳反应物配比和最佳实验条件,并对其稳定性进行检测.在此基础上,测定抗氧化剂对羟基自由基(·OH)的清除率.结果表明:该体系反应灵敏、稳定性高,可作为抗氧化剂的筛选方法之一.关键词:Fent on反应;羟基自由基;分光光度法;水杨酸中图分类号:Q503 文献标识码:A0 引 言研究表明,自由基是引起人类衰老和许多疾病的重要因素,例如癌症、多发性硬化症、帕金森疾病、免疫系统疾病等[1].羟基自由基(·OH)是人体内最主要的自由基,其消除率是反映药物抗氧作用的重要指标.由于羟基自由基(·OH)的反应活性大、寿命短(小于10-4 s)、存在浓度低,因此在有关羟基自由基(·OH)的研究中,其分析测试方法就显得特别重要[1,2].目前,检测羟基自由基(·OH)的方法主要有,电子自旋共振法(ES R)、化学发光法、高效液相色谱法(HP LC)等[3-7],这些方法多数为间接测定方法,且仪器特殊,试剂昂贵,使其应用受到一定的限制.在几种常用的羟基自由基(·OH)检测方法中,分光光度法较高效液相色谱法和电子自旋共振法简便、直接,且由于其所需设备简单,可供一般实验室检测使用,而被广泛采用.本实验采用可见分光光度法,以水杨酸作为Fen2 t on试剂反应产生的羟基自由基(·OH)的捕捉剂,使FeS O4、H2O2、水杨酸-乙醇成为一个反应体系,考查水杨酸捕获羟基自由基(·OH)的影响因素,并将确定的Fent on的反应体系用于抗氧化剂的筛选.1 材料与方法1.1 材料与仪器本实验所用仪器包括:紫外可见扫描分光光度计,恒温水浴锅等.本实验所用材料为:银耳多糖(本实验室自行提取),所用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水.1.2 溶液的配制FeS O4溶液(1.8mmol/mL):称取FeS O4晶体0.2736g,用水定容于100mL容量瓶中,使用时稀释9倍.H2O2(0.3%):取30%的过氧化氢溶液1.00 mL,用水定容于100mL容量瓶中.水杨酸-乙醇(1.8mmol/mL):称取水杨酸固体0.2486g,用无水乙醇定容于100mL容量瓶中,使用时稀释9倍.水杨酸-水溶液(1.8mmol/mL):称取水杨酸固体0.2486g,用水定容于100mL容量瓶中,使用时稀释9倍.水杨酸-乙醇-水:水杨酸-乙醇与水的比例为1∶3.1.3 羟基自由基(·OH)的测定向试管中加入1100mL蒸馏水,FeS O4溶液2.00 mL,水杨酸-乙醇1.50mL,最后加H2O2(0.03%) 0.10mL启动反应,振荡混合,在波长510nm处测定其吸光度值.1.4 自由基清除剂清除羟基自由基(·OH)作用向试管中加入一系列不同浓度多糖溶液1.00 mL,FeS O4溶液2.00mL,水杨酸-乙醇1.50mL,最后加H2O2(0.03%)0.10mL启动反应,振荡混合,水收稿日期:2009-05-12.基金项目:四川省中医药管理局科技专项基金资助项目(2008-01).作者简介:颜 军(1971—),男,高级实验师,从事生物活性成分的提取及检测研究1浴37℃,保温30m in,在波长510nm 下测量各自的吸光度值.自由基清除率计算公式为: D =[(A 0-A S )/A 0]×100%式中,A 0为空白管的吸光度,A S 为加入自由基清除剂后的吸光度2 结果与讨论2.1 吸收光谱分别测定水杨酸-水溶液、水杨酸-乙醇-水溶液、水杨酸-乙醇溶液在波长200～700n m 范围内的吸收光谱(见图1).测量结果表明水杨酸在上述3种溶液中的特征吸收没有发生变化.测定如1.3所述反应体系的吸收光谱(见图2),发现此反应体系在490～550n m 波长处有吸收.这说明水杨酸作为捕捉剂可成功捕捉Fent on 试剂产生的羟基自由基(·OH ),产物在490～550n m 波长范围内有特征吸收,最大吸收波长为510nm.图1 水杨酸溶液紫外扫描图图2 1.3反应体系紫外扫描图2.2 FeS O 4用量的影响在1.3所述反应体系的基础上,改变FeS O 4溶液的体积,考查FeS O 4溶液不同的用量对体系吸光度的影响,结果如图3所示.实验结果表明,随着FeS O 4溶液体积的增大,体系的吸光度也随之增大,当体积增大到2.00mL 时,图3 FeS O 4溶液用量对体系吸光度的影响吸光度变化不大甚至开始降低.故本实验所采用的FeS O 4溶液用量确定为2.00mL.2.3 水杨酸-乙醇用量的影响根据2.2实验的结果,确定FeS O 4溶液用量为2mL,改变水杨酸-乙醇的体积,其他反应条件不变,考查水杨酸-乙醇的用量对体系吸光度的影响,结果如图4所示.图4 水杨酸-乙醇用量对体系吸光度的影响实验结果表明,随着水杨酸-乙醇体积的增大,吸光度A 也增大,当水杨酸-乙醇的体积达到1.25mL 后,吸光度A 变化不大.为了实验方便,选用水杨酸-乙醇的体积为1.50mL.2.4 H 2O 2浓度对体系吸光度的影响根据所得的最佳配比,配置不同浓度的H 2O 2,取0.10mL,继续考查H 2O 2的浓度对体系的影响,结果如图5所示.图5 H 2O 2的浓度对体系吸光度的影响·29· 成都大学学报(自然科学版) 第28卷实验结果表明,H 2O 2的浓度为0.3%、0.15%、0.03%时,吸光度A 变化不大,而当浓度低于0.015%时吸光度A 开始下降.为了实验的准确性,选用H 2O 2的浓度为0.03%.2.5 反应温度对体系的影响根据上述实验结果所确定的反应物物质的量的配比,即:FeS O 4溶液2.00mL,水杨酸-乙醇1.50mL,H 2O 2(0.03%)0.10mL,蒸馏水1.00mL.表1为反应体系在不同的温度下测试反应温度对体系吸光度的影响数据.表1 反应温度对体系的影响编 号12345反应温度/℃2732374247A 5100.6450.6390.6370.5520.446 表1的数据表明,体系在27℃、32℃和37℃情况下,温度对吸光度影响不大,由于37℃具有特殊意义,因此反应体系的温度确定为37℃.2.6 稳定性实验根据实验所确定的反应物物质的量的配比,即:FeS O 4溶液2.00mL,水杨酸-乙醇1.50mL,H 2O 2(0.03%)0.10mL,蒸馏水1.00mL,考查在37℃下体系的稳定性,结果见表2.表2 稳定性实验结果反应时间/m in 102030405060A 5100.6450.6480.6490.6480.6490.649 表2的数据表明,确定的体系在60m in 内吸光度值基本不变,可见本方法的稳定性好.2.7 清除剂对羟基自由基(·OH )的清除作用依照实验方法,采用Vc 、银耳多糖对羟自由基(·OH )的清除能力进行了分析,实验结果见图6.图6 抗氧化剂对羟基自由基(·OH )的清除率由实验结果可知,各抗氧化剂对羟基自由基(·OH )的清除能力均与抗氧化剂用量成量效关系,即当抗氧化剂用量增大时,羟基自由基(·OH )清除率也增加.结果表明,本体系的建立对筛选清除羟基自由基(·OH )的天然抗氧化剂,以及研究清除自由基的机理有一定的应用价值.3 结 论通过本实验考察所确定的体系为:1.8mmol/mL 的FeS O 4溶液2.00mL 、1.8mmol/mL 水杨酸-乙醇溶液1.50mL 、0.03%H 2O 20.10mL,蒸馏水(或抗氧化剂)1.00mL,在37℃的反应温度下,反应30m in,然后进行吸光度的测定.本实验证明,水杨酸作为羟基自由基(·OH )的捕捉剂,采用分光光度法可较准确地测定羟基自由基(·OH )的产生.同时,对影响Fent on 反应的因素进行了考察,为Fent on 反应在实际中的应用提供了参数依据.实验表明,该法简便实用,是筛选自由基清除剂的一种有效方法.参考文献:[1]韩鹤友,何治柯,曾云鹗.羟自由基的分析研究进展[J ].分析科学学报,2001,17(1):84-86.[2]王仕良,张 曾,黄干强.羟基自由基的产生与测定[J ].Paper Science and Technol ogy,2003,22(6):45-47.[3]St okes N J,Tabner B J,He witt C N.D eter m ination of hydroxylradical concentration in environm ental cham bers using electron spin resonance [J ].Che mos phere,1994,28(5):999-1008.[4]SteinerM G,Babbs 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research results show that the latency of licking of the hind pa ws is p r ol onged by the extracts.It can reduce the extent of ear s welling induced by di m ethyl benzene in m ice(P<0.01,P<0.05).The findings show that extracts fr om tartary buck2 wheat s p r outs have effects on analgesia and anti2infla mmati on.Key words:extracts fr om tartary buckwheat s p r outs;analgesia;anti2infla mmati on(上接第93页)D eter m i n a ti on of Hydroxyl Rad i ca l Genera ti n g fro mFen ton Reacti on by Spectrophoto m etry Y AN Jun,G OU X iaoj un,ZOU Quanfu,J I X iao m ing,CU I X iuying,LAN Hair ong,L I Xue (Che m istry Laborat ory of Traditi onal Chinese Medicine,Chengdu University,Chengdu610106,China)Abstract:T o p r oduce2,3-dihydr oxy benz oic and2,5-dihydr oxy benz oic,salicylic acid was used t o catch hydr oxyl radical(·OH)by s pectr ophot ometer deter m ining hydr oxyl radical p r oduced by Fen2 t on reacti on.The reactants have an abs or p ti on maxi m u m at510n m.Reacti on syste m was op ti m ized t o screen out the best reactant match and op ti m al ex peri m ental conditi ons and its stability was tested.Based on the above,clearance rate of anti oxidant on hydr oxyl radical was measured.The findings sho w that this syste m has sensitive reacti on,high stability and can be used t o filter anti oxidant.Key words:Fent on reacti on;hydr oxyl radical;s pectr ophot o metry;salicylic acid(上接第97页)Isol a ti on and M olecul ar Character i za ti on of Two Fung i of Ca thaya Argyrophyll a Rh i zosphereZHAO Ying ru1,G OU X iaoj un2,YAN Jun2(1.College of B i ol ogical Sciences and B i otechnol ogy,Beijing Forestry University,Beijing100083,China;2.Chem istry Laborat ory of Traditi onal Chinese Medicine,Chengdu University,Chengdu610106,China)Abstract:T wo fungal strains F-1and F-2which is olated fr om the rhiz os phere of Cathaya argyr o2 phylla were difficult t o distinguish based on their mor phol ogical characteristics.Thus,molecular meth2 od was used t o identify the t w o fungal strains.The r DNA I TS regi ons of the t w o fungi were a mp lified and sequenced.I TS sequences analysis of the t w o fungi and other30fungal strains fr om10different genus showed that F-1strain bel ongs t o the Trichoder ma s pp.and F-2strain bel ongs t o the Mor2 tierella s pp..This study reveals that the molecular method which is fast,accurate,si m p le and high ef2 ficient p lays an i m portant r ole in research of Fungus characterizati on and classificati on.Key words:Fungi;I TS;phyl ogeny;molecular characterizati on·31·第2期 胡一冰,等:苦荞芽提取物的镇痛抗炎作用。
分光光度法测定Fenton体系中产生的羟自由基(精)
Determination of hydroxyl radical in Fenton reaction by spectrophotometryYANG Ming-hui,HE Li-xian,LI Zhen-gui(College of Life Science and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China〔Abstract 〕A new photometric method was proposed for the determination of the hydroxyl free radical produced by Fenton reaction.The color intensity of neutral red (NR was changed before and after the oxidation reaction.The amount of hydroxyl radical produced in the system was indirectly determined through absorbance c hanged at a wavelength of 520nm (ΔA 520by means of spectrophotom-etry.The optimal experimental condition was studied and obtained.Under the selected conditions,good relationship was obtained be-tween the scavenging effects of the hydroxyl free radical and the concentration of mannitol and thiourea.The resistance to hydroxyl radical oxidation of six antioxidants such as ferulic,rutin was evaluated.The method can be applied for the selection of antioxidants and study of mechanism of hydroxyl radical.〔Key words 〕hydroxyl radical;neutral red;fenton reaction;spectrophotometry随着自由基生物学与自由基医学研究的迅速发展,现已证明多种疾病的发生和发展与自由基对组织细胞的损伤关系密切,羟自由基是生物体内危害最大,活性最强的氧自由基〔1〕。
分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率
分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率发布时间：2021-07-06T09:34:10.120Z 来源：《教育学》2021年5月总第249期作者：薛云尹俊泉[导读] 生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。
与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。
甘肃省陇南市武都区莲湖小学746000摘要：邻二氮菲在紫外光区有强烈吸收，加入H2O2产生羟基自由基，茶叶提取液会使其中的羟基自由基减少，此时，溶液的吸光度值也随之减小，据此原理可以计算茶叶提取液对羟基自由基的清除率。
体系最佳实验条件为pH=7.00，缓冲溶液体积用量1.00mL，邻二氮菲浓度3×10-4mol/L，Fe2+浓度5×10-3mol/L，1%H2O2用量1.00mL，茶叶提取液用量20.00mL，按照邻二氮菲-Fe2+-H2O2顺序加入反应4min。
在以上实验条件下，测得羟基自由基的清除率为44.1%。
关键词：分光光度法邻二氮菲羟基自由基茶叶提取液机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程。
对此，学者们有各种解释，如自由基学说、传学说、交联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种。
自由基是一类外层轨道含有未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)、脂自由基(ROO·)等，其中以·OH作用最强。
它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。
·OH还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。
因此，·OH参与的各种研究已成为生物学、生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。
与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。
近年来，国内外文献报道了检测羟自由基的主要方法有：电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、光度法等。
分光光度法测定fenton反应产生的羟基自由基
分光光度法测定fenton反应产生的羟基自由基
实验目的：通过分光光度法测定Fenton反应产生的羟基自由基的浓度。
实验原理：Fenton反应是一种产生羟基自由基的化学反应，其化学方程式为Fe2++H2O2→Fe3++OH-+•OH。
羟基自由基是一种高反应性的自由基，可以与某些有机分子发生反应，因此具有一定的毒性和活性。
分光光度法是一种测定物质浓度的方法，通过吸收光谱来测定物质的浓度。
实验步骤：
1.将一定量的FeSO4和H2O2混合在一起，形成Fenton试剂。
2.取一定量的Fenton试剂加入不同浓度的羟基自由基标准溶液中，形成反应液。
3.使用分光光度计测定反应液的吸光度，并绘制标准曲线。
4.取Fenton试剂加入产生羟基自由基的样品中，形成反应液。
5.使用分光光度计测定反应液的吸光度，并通过标准曲线计算样品中羟基自由基的浓度。
实验结果：通过分光光度法测定，得到不同浓度的羟基自由基标准曲线，计算出样品中羟基自由基的浓度为X mol/L。
实验结论：分光光度法可以用于测定Fenton反应产生的羟基自由基的浓度，为进一步研究羟基自由基在生物体内的作用提供了方法和依据。
敬请批阅。
试卷题目：使用分光光度法测定Fenton反应产生的羟基自由基的浓度，实验步骤有哪些？并简要说明实验原理和结论。
分光光度法测定Fenton体系中产生的羟自由基
大理学院学报
Ｊ ０ＵＲＮｇ ． 年 ４ 叠 ０７ 月
Ｖｏ． № ． ＡＤ ．０ １ ６ ４ ｒ２Ｏ７
分光光度法测定Ｆｎｏ体系中产生的羟 自由基 ｅｔ ｎ
杨 明惠 ， 何丽仙 ， 李珍贵
ｅｒ ． ｅｏ ｔ ｌ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｏ ｄ ｔ ｎ Ｗａ ｔｄ ｅ ｎ ｂ ａｎ ｄ Ｕｎ ｅ ｅ ｓ ｌｃ ｅ ｏ ｄ ｔ ｎ ，ｇ ｏ ｌｔ ｎ ｈ ｐ Ｗａ ｂ ａ ｎ ｄ ｂ — ｔ Ｔ ｐｉ ｐ ｒ ｙｈ ｍａ ｅ ｍｅ ｔｌｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｓｕ ｉｄ ａ ｄ ｏ ｔｉ ｅ ． ｄ ｒｔ ｅ ｅ ｔｄ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｏ ｄ ｒ ａｉ ｓ ｉ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ｉ ｈ ｉ ｅ ｏ ｅ
（ ｅ ｏｄ］ ｙｒ ｙｒ ｉ ； ｅｔｌｅ；ｅｔ ａｔｎ ｓ ｃ ｐｏ ｍ ｔ Ｋ ｙｗ ｒｓ ｈｄ ｘｌ ｄ ａ ｎｕａ ｒ ｆ ｏ ｒ ｃｏ；ｐ ｔ ｈｔ ｅ ｙ ｏ ｃ ａ ｌ ｒ ｄ ｎ ｎｅ ｉ ｅｒ ｏ ｒ ｏ
随着 自由基生物学与 自由基医学研究 的迅速 发展 ， 现已证明多种疾病的发生和发展与 自由基对 组织细胞的损伤关系密切 ， 自由基是生物体内危 羟 害最大 ， 活性最强的氧 自由基 … 。人体在正常的生 命活动中通过新陈代谢 即可产生羟 自由基 ， 它可以 通过电子转移 、 加成以及夺取氢原子和羟基化等反 应， 造成糖类 、 氨基酸 、 白质 、 蛋 核酸和脂类等物质 的氧化性损伤 。因此 ， 对羟 自由基的研究在生命科 学及环境科学等领域 中引起 了人们的广泛兴趣 ， 而
Ｔ ｅｃ］ ｔ ｓｙｏ ｎ ｕ ａ ｄ （ Ｒ） ａ ｈｎｅ ｅ ｒ ｎ ｆｒｔ ｘ ａ ｏ ａｔｎ Ｔ ｅａ ｕ ｔ ｈｄｏｙ ｒｄｃｌ ｒｄ ｃｄ ｈ ｏ ｉ ｅ ｉ ｆ ｅｔ ｌ ｅ Ｎ Ｗ ｃ ａｇｄｂｆ ａｄａｔ ｅｏｉ ｔｎｒ ｃｏ ． ｍｏｎ ｏ ｙｒｘｌ ｉａ ｐｏ ｕｅ ｏ ｒｎ ｎ ｔ ｒ ｒ ｓ ｏ ｅ ｅ ｈ ｄｉ ｅ ｉ ｈ ｆ ａ ｉ ｔｅｓｓ ｍ Ｗ ｄｒｃｙｄｔ ｍｉ ｄｔｒｕｈａｓｒａｃ ｈ ｇｄａ ａ ａｅ ｎｔ ｆ ２ ｍ （ Ａ ｂ ｅｎ ｆ ｐ ｃ ｐ ｏ ｍ ｎ ｌ ｔ ａ ｉ ｉ ｔ ｅｅ ｎ ｏ ｇ ｂｏｂ ｅｃａ ｅ ｔ ｖｌ ｇ ｏ ０ａ △ 瑚） ｙｍ ａｓｏ ｓｅｔ ｈ ｔ — ｌ ｙ ｅ ｓ ｎ ｅ ｌ ｒ ｅ ｈ ｎ ｎ ｗ ｅ ｈ ５ ｏ ｒ ｏ
分光光度法测定中药对羟自由基的清除率
!引言
机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程 . 对此学者们有各种解释，如自由基学说、遗传学说、交 联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种［1］. 自由基是一类外层轨道含有 未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基（·O2 - ）、羟基 自由基（·OH）、脂自由基（ROO·）等，其中以·OH 作用最强 . 它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式 与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死 或突变 .·OH 还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的 重要指标 . 因此，·OH 参与的各种研究已成为生物学、生物化学和生物医学等领域中的重要研究课题 . 与此同时，·OH 测定方法的研究也倍受关注 .
（CV）、CV - Fe2 + 溶液、CV - Fe3 + 溶液、CV - H202 溶液的 最大吸收波长均在 588 nm 附近且吸光度值基本不变，而
CV - Fe2 + - H202 溶液的最大吸收波长也在 588 nm 附 近，但吸光度值较其它溶液体系下降（图 1），说明体系吸
光度值的下降是 Fenton 试剂产生的羟自由基与结晶紫 作用的结果 . 3 . 1 . 2 酸度的影响 测定 CV - Fe2 + - H202 体系在 pH 4 . 5 ~ 7 . 5 范围内不同酸度溶液的 !A，发现在 pH 为 5 . 5 时体 系 !A 有 最 大 值（ 图 2），故 选 择 体 系 的 酸 度 为
表 # 银杏叶水提取液和舒血宁药片清除羟自由基比较
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［ １０］ 沈之菲． 让心理咨询更有效 — ——焦点解决短期心理疗法探究 ． 思想理论教育［Ｊ］． ２００５，６：５７－ ６０． ［ １１］ 王 玲．焦 点 解 决 短 期 心 理 咨 询 法 的 评 介［Ｊ］．中 国 心理卫生杂志， ２００２，１０： ６７５－ ６７６．
２ 结果与讨论
１ 实验部分
１．１ 仪器与试剂 ＴＵ（１８１０ＰＣ 紫外可见分光光度计（ 北京普析 通用仪器公司） ， ｐＨ－ ２Ｃ 型精密酸度计 （ 上海雷 磁仪器厂） 。Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ（ 摩尔比 １：１） ： ０．０３ｍｏｌ／Ｌ； ＤＭＳＯ： ０．０１ｍｏｌ／Ｌ； Ｈ２Ｏ２： ０．１０ｍｏｌ／Ｌ； ｐＨ ５．９ 的 ＫＨ２ＰＯ４ － Ｎａ２ＨＰＯ４ 缓 冲 液 ： ０．０６７ ｍｏｌ／Ｌ； ＫＯＨ： １０％； ２， ４－ 二硝基苯肼： ０．０３ｍｏｌ／Ｌ， 每天新配制； 所用试剂均为分析纯， 水为二次蒸馏水。
１．２ 实验方法 １．２．１ 羟 基 自 由 基 的 产 生 在 １０ｍＬ 的 反 应 溶液中， 含 ｐＨ ５．９ ＫＨ２ＰＯ４－ Ｎａ２ＨＰＯ４（ ０．０６７ｍｏｌ／ Ｌ） ２ｍＬ， ＤＭＳＯ （１．０ｍｍｏｌ／Ｌ），Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ（ ０．９ｍｍｏｌ／ Ｌ） ， Ｈ２Ｏ２（２．０ｍｍｏｌ／Ｌ），混 合 溶 液 于 ３７℃水 浴 反 应 １５ｍｉｎ。 １．２．２ 羟基自由基的测定 在上述溶液中加 入 ０．５ｍＬ ＤＮＰＨ 于 ６０℃水浴反应 ２０ｍｉｎ， 取出后 流 水 冷 却 ， 再 加 入 ２ｍＬＫＯＨ， 溶 液 最 终 ｐＨ 为 １１．８， 摇匀， 于 ３９０ｎｍ 测定吸光值。
（ １．首都师范大学化学系 北京， １０００３７； ２．广州冷机股份有限公司， 广州， ５１０４７０）
摘要： Ｆｅｎｔ ｏｎ 反应产生的羟基自由基氧化二甲亚砜（ ＤＭＳＯ） 生成的甲醛与 ２， ４－ 二硝基苯肼 （ ＤＮＰＨ） 反应在碱性条件下生成稳定的酒红色腙类物质， 其最大吸收波长为 ３９０ｎｍ， 光度法测 定其含量可间接测定·ＯＨ的生成量。拟定的方法测定了数种清除剂的 Ｉ Ｃ５０。该方法简便可靠， 可用于羟基自由基清除剂的筛选． 关键词： 羟基自由基； 清除剂； ２， ４－ 二硝基苯肼； 分光光度法 中图分类号： Ｏ６５７·３２ 文献标识码： Ａ 文章编号： ＣＮ１１－ ５３４０ ／Ｎ（２００７）０１－ ０００１－ ０２
２．５ ＤＭＳＯ 用量ｉｃｋ Ｖ Ｌ． Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ［Ｊ］． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９９３， ６５（１２）：３７４－ ３７７ ［２］ Ｋｅｉｚｏ Ｔ， Ｋａｏｒｉ Ｆ， Ｋａｚｕｎｏｒｉ Ａ， Ｔｏｓｈｉｈｉｋｏ Ｏ． Ｉｎ ｖｉｖｏ
１．８５３， １．８４１， １．８５４， １．８４９， １．８６０， ＲＳＤ 为 ０．３８％ 。
可见， 本法具有良好的准确性与重现性。
２．９ 清除剂对 ＯＨ·的清除作用
清 除 剂 清 除 羟 基 自 由 基 ＩＣ５０ 的 求 算 ： 在 １．２．１ 体系中加入一定量的清除剂， 按 １．２．２ 的方
法测定吸光度 Ａ， 按下式计算： 清除率＝（ Ａ０－ Ａｓ） ／ Ａ０×１００％， Ａ０ 为未加清除剂时的吸光度， Ａｓ 为清 除剂存在时的吸光度， 以清除率对清除剂浓度作
（ 责任编辑 何艳）
（ 上接第 ２ 页）
［４］Ｃｈｏｉｗａｎ Ｌ， Ｊｉａｎｚｈｏｎｇ Ｌ， Ｍａｓａａｋｉ Ｋ． Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｒａｄｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｂａｓｉｃ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］． Ａｎａｌ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ， ２００４， ５０３：２３５－ ２３９
［ ６］ 琚晓燕，刘宣文． 焦点解决短期咨询在学校辅导 中的应用［Ｊ］． 中小学心理健康教育， ２００４，１：３５－ ３７．
［ ７］ 陈 建 波．焦 点 解 决：学 校 心 理 咨 询 新 视 角［Ｊ］． 教 育 导刊，２００５，３：２５－ ２９．
［ ８］ 王玲． 焦点解决短期心理咨询在学校咨询中的应 用． 健康心理学杂志，２００２， ５：３４４－ ３４５．
＊ 收稿日期： ２００７－ ０１－ １８ ＊＊ 作者简介： 宋艳（ １９８１－ ） ， 女， 山东淄博市人， 首都师范大学化学系硕士研究生。
１
北京教育学院学报（ 自然科学版）
图 １ 吸收光谱图 １ ＤＭＳＯ ＋ Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ ＋ Ｈ２Ｏ２ ＋ ＤＮＰＨ； ２ ＤＭＳＯ ＋ Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ ＋Ｈ２Ｏ２＋ＤＮＰＨ ＋ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ； ３ ＤＮＰＨ
ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｘ－ ｒａｙ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐｉｎ ｔｒａｐｐｉｎｇ／ＥＰＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ［Ｊ］． Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ ｂｉｏｍｅｄ， ２００４， ３６（９）：１１３４－ １１４３
［ ３］ 方建移， 刘宣文， 等． 心理咨询新模式：聚焦于问 题解决的短期咨询［Ｊ］． 心理科学， ２００６， ２９（ ２）：４３０－ ４３２．
［ ４］ 杨波， 刘宣文， 等． 焦点解决短期咨询与学校心理 辅导［Ｊ］． 重庆大学学报〔社会科学版）， ２００５， ３：１３６－ １４０．
［ ５］ 黄耀辉译．儿童与青少年焦点解决短期心理咨询 ［ Ｍ］ ．四川：四川大学出版社， ２００５．
（ 下转第 ２５ 页）
申 雯：焦 点 解 决 短 期 心 理 咨 询 概 述
本 理 念 与 比 较 优 势 ［Ｊ］． 承 德 石 油 高 等 专 科 学 校 学 报 ， ２００５，２：６３－ ６５．
［ ２］ 刘宣文，何伟强． 焦点解决短期心理咨询原理与 技术述评［Ｊ］． 心理与行为研究， ２００４，２（２）：４５１－ ４５５．
图， 得到清除剂的 ＩＣ５０， 如表 １ 所示。
表 １： 羟基自由基清除剂的 ＩＣ５０
Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ
ＩＣ５０（ｍｍｏｌ／Ｌ） Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ Ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
Ｍａｎｎｉｔｏｌ Ｔｈｉｏｕｒｅａ Ｌ－ Ａｒｇｉｎｉｎｅ Ｌ－ Ｃｙｓｔｅｉｎ Ｌ－ Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｅ Ｌ－ Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ
２．４ Ｈ２Ｏ２ 用量影响（ 图 ３） Ｆｅｎｔｏｎ 体 系 自 身 可 以 产 生 Ｈ２Ｏ２， 但 额 外 Ｈ２Ｏ２ 的加入可以提高自由基的产生量。实验结 果表明， Ｈ２Ｏ２ 的浓度达到 １ｍｍｏｌ／Ｌ 时， 吸光度最 大且趋于平稳， 实验选择 ２ｍｍｏｌ／Ｌ。
当 ＤＭＳＯ 用量大于 ０．６ｍｍｏｌ／Ｌ 时， 吸光度达
第 ２ 卷第 １ 期 ２００７ 年 ２ 月
北京教育学院学报（ 自然科学版） ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＥＩＪＩＮＧ ＩＮＳＴＴＴＵＴＥ ＯＦ ＥＤＵＣＡＴＩＯＮ（ ＮＡＴＵＲＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ）
Ｖｏｌ．２ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２００７
Fenton 反应产生的羟基自由基及其清除的 分光光度法测定 ＊
宋艳 １＊＊ 邹洪 １ 董瑞 ２
平稳。选择 ｐＨ 为 １１．８。 ２．３ Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ 用量影响（ 图 ２） 改 变 Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ（ １：１） 的 用 量 进 行 测 定 ， 当
Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ 用量大于 ０．３ｍＬ 时， 吸光度最大且基 本稳定， 本实验选择 ０．３ｍＬ， 浓度为 ０．９ｍｍｏｌ／Ｌ。
图 ２ Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ 浓度的影响 ＤＭＳＯ：１ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈ２Ｏ２：２ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＮＰＨ：１．５ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ：１１．８
改变 ＤＮＰＨ 的用量， 结果表明， 当 ＤＮＰＨ 的
用量大于 ０．５ｍＬ 时， 吸光度达到最大且基本稳
定。实验选择 ＤＮＰＨ 浓度为 １．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
２．８ 方法的准确性与精密度
当没有清除剂存在时， 按实验方法， 对于
１．０ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＭＳＯ， ５ 次 测 定 的 吸 光 度 （ Ａ） 为 ：
Ａ Ｓｔｕｄｙ Ｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ－ Ｆｏｃｕｓｅｄ Ｂｒ ｉｅｆ Ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ Ｓｈｅｎ Ｗｅｎ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｈｕｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１００８１， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ：Ｓｏｌｕｔｉｏｎ － ｆｏｃｕｓｅｄ ｂｒｉｅｆ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ ｉｓ ａ ｎｅｗ ｍｏｄｅ， ｇａｉｎｉｎｇ ｉｔｓ ｐｏｐｕｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｒｖｉｃｅｓ ａｃｒｏｓｓ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ａｎｄ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅｓ ｆｏｒ ｉｔｓ ｍａｎｙ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ， ｓｕｃｈ ａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｈｉｎｋｉｎｇ， ｔｉｍｅ － ａｎｄ ｌａｂｏｒ － ｓａｖｉｎｇ． Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓ ｉｔｓ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ， ｅｘｐｌｏｒｅｓ ｉｔｓ ｂａｓｉｃ ｔｈｏｕｇｈｔ， ｐｏｉｎｔｓ ｏｕｔ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｉｅｌｄｓ， ａｎｄ ｇｉｖｅｓ ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｉｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ：Ｓｏｌｕｔｉｏｎ－ ｆｏｃｕｓｅｄ ｂｒｉｅｆ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ； ｂｒｉｅｆ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ； ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ
１６．６７ １．４６ ３．６８ １．０４ １．２１ １．０８
２．９０ ［６］ ０．１９ ［６］ １．２０ ［６］ ０．１６ ［６］ ０．２４ ［６］ ０．１７ ［６］
图 ３ Ｈ２Ｏ２ 浓度的影响 ＤＭＳＯ：１ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｆｅ２＋－ ＥＤＴＡ：０．９ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＮＰＨ：１．５ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ：１１．８