实验十二水中细菌总数和大肠杆菌检测 PPT课件

水中细菌总数测定操作示意图耐热大肠菌群的测定操作示意图总大肠菌群的测定操作示意图

取一环
在伊红美蓝培养基上长出典型菌落,为阳性皿
+10-1
取一环
革兰氏染色为红色，阳性玻片（即阳性管）
+10-1 取一环
+10-1
取一环 +10-1 取一环
+10-2
+10-2
取一环
取一环
+10-2
+10-2
取一环
取一环
37℃ 24h 倒置培养
+10-3
取一环
+10-3
取一环
产气（小导管
顶部有气体）
一、水中细菌总数测定操作示意图：（以稀释 1000 倍为例）
1mL
10ml 无菌水
原水样
无菌水各 1 mL
CK
CK
10-1
1mL 1mL
10-1
10-1水样各 1 mL
10-2
10-2水样各 1 mL
10-1
10-2
10-2
系列稀释 9mL 无菌水/支 10-3
10-3水样
各 1 mL
36℃±1℃ 48h±2h
10-3
10-3
倒置培养
营养琼脂培养基
将凉至 45℃营养琼脂培养基注入平皿约 15mL,并转动平皿，混合均匀
菌落计数及报数
二、耐热大肠菌群的测定操作示意图：（以稀释 1000 倍为例）
1 mL
1 mL
1 mL
系列稀释 9 mL 无菌水/支
水样
10-1 接种 10-1 பைடு நூலகம்样 1 mL/支
产酸（液体黄色）、产气（小导管顶部有气体）的试管为阳性管
+10-1 10-1 +10-1 10-1 +10-1

菌落总数与大肠菌群数测定 PPT

群阳性。
大肠菌群数测定
实验步骤 2.分离培养（1）制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注，15ml （2）选产酸产气的发酵管（3）接种至伊红美蓝平板分区划线法（4）培养： 36℃，48h
分离培养
器材与试剂初发酵结果（4只发酵管）、酒精灯、接种环、伊红美兰平板培养基
分区划线法
第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环
涂片
热固定
初染
媒染
脱色
复染
革兰染色法
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
复发酵
器材与试剂培养24小时后的伊红美兰平板、酒精灯、接种环、复发酵管
大肠菌群数测定
实验步骤 3.复发酵（1）选取鉴定为无芽孢G-杆菌的菌落 1-3个（2）接种至10ml乳糖蛋白胨培养液（3）培养：37℃，24h （4）观察指标：产酸，产气
别接种若干培养管，根据阳性管数估算MPN值
MPN法原理
MPN法（Most Probable Number Method） 1.细菌进入发酵管的概率近似服从泊松分布:
P(x=k)=e-x ×xk/k! x:细菌浓度，k:进入发酵管的细菌数 2.若在n管发酵中，令接种水样量为Vi，阳性管数为 Pi，阴性管数为Qi，则该检验结果发生的概率为：
计算方法：（2）有两个稀释度在30-300之间菌落数之比>2，选较小值菌落数之比<2，取平均值（3）所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者（4）所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者（5）没有任何稀释度在30-300之间选最接近该范围者
结果单位：CFU/ml（g）
大家应该也有点累了，稍作休息
分区划线法

大肠杆菌检测ppt课件

培养？
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15
实验准备（2个样品/组）
培养皿：10套/组无菌水：10支（9毫升/支）乳糖胆盐发酵培养基： 100ml 18支试管、5ml/支伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:
200ml 8-10个平板
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下周实验
实验八化学药剂对微生物生长的影响
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17
2
完整最新1版100课0 件
3
≥24000
10 30
30 70
40 100
40 70 150
70 140 300
150 300 350
360 710 1500
360 370
440 890
470 1500
1200 1300 3800
2100 2300 3800
3800 4400 4700
13000
24000
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大肠菌群最大可能数（MPN)表示。
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3
细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
倾注平板培养 37 ℃ 24小时
样品
大肠菌群
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验（乳糖发酵）
37℃ 24小时
菌落计数（取平均数报告）
第二步------ 平板分离培养（转种鉴别培养基） 37℃ 24小时革兰染色镜检
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8
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培养24h±2h，观察产气情况。

水的细菌学检查 ppt课件

2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水 ①水样稀释 ②吸取稀释后水样加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
• 水样稀释
取1ml水样加入到9ml无菌水的试管，振荡混匀，得稀释度为10－1；
从10－1管中取水样1ml加到第二支9ml无菌水的管中，振荡混匀，得10－2……
－
－＋＋ 18
－
＋－＋ 19
－
＋＋－ 22
六、思考题
• 你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度如何? 通过实验你对保护水源水有何看法？
• 大肠菌群的定义是什么？ • 假如水中有大量的致病菌——霍乱弧菌，用多
管发酵技术检查大肠菌群，能否得到阴性结果？为什么？ • EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？ • 经检查，水样是否合乎饮用标准？
3.菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数。
（2）选择平均菌落数在30～300之间稀释度的平板。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘以稀释倍数，作为该水样的细菌总数进行报告。
（3）若有两个稀释度的平均菌落数均在 30～300之间，则按两个稀释度菌落总数的比值来决定取数。如比值小于2，应取两者的平均数；如比值大于2，则取其中较小的菌落总数进行报告。
• 24h和48h产酸产气的初发酵菌落均需在伊红美蓝琼脂或复红亚硫酸钠培养基上，进行平板划线，分离出阳性菌落。
3．复发酵试验
阳性菌落经涂片染色鉴别为G-，无芽孢杆菌者，再经过乳糖蛋白胨液体培养基进行复发酵试验，经24h培养产酸产气者，可确认为大肠菌群阳性结果。
三．实验用品

水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测

水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（1）录入时间:2010-9-25 11:17:29 来源：生物信息网（一)实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。

(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。

(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。

（二)实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。

各种天然水中常含有一定数量的微生物。

水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。

水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。

水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。

国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。

所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。

它反映的是检样中活菌的数量。

所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。

在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。

这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。

目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。

因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。

菌落总数和大肠菌群数测定PPT讲稿

当前你正在浏览到的事第三十五页PPTT，共四十二页。
液体接种
当前你正在浏览到的事第三十六页PPTT，共四十二页。
复发酵
• 复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产
生
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大肠菌群数测定
• 注意事项：
1.无菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.显微镜保养 5.液体接种
灭菌接种环
分区划线法
• 操作要点
1.划下一个区前必须灭菌接种环 2.划线时接种环同平板呈30-40°角 3.每次划线应该压到上一个区域的2-3条线 4.用接种环的“面”而不是“弧”在平板上
滑动
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大肠菌群数测定
• 实验步骤
2.分离培养：
（5）菌落特征：
• 实验步骤
3.复发酵
（1）选取产气试管
（2）接种至10mlBGLB肉汤中（3）培养：36℃，48h （4）观察指标：若产气则报告大肠菌群阳性。
当前你正在浏览到的事第十九页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 实验步骤
2.分离培养（1）制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注，15ml （2）选产酸产气的发酵管（3）接种至伊红美蓝平板
当前你正在浏览到的事第十一页PPTT，共四十二页。
初发酵
• 器材与试剂
样品、225ml无菌生理盐水、9ml无菌生理盐水、双料LST肉汤，单料 LST肉汤，10ml吸管、1ml吸管、吸球
当前你正在浏览到的事第十二页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 实验步骤：
1.初发酵
当前你正在浏览到的事第十三页PPTT，共四十二页。

实验十二水中细菌总数和大肠杆菌检测共26页文档

实验十二水中细菌总数和大杆菌检测
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只在愚人的字典中找得到。--拿破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突破，不要嫉妒要欣赏，不要托延要积极，不要心动要行动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要素。(注意：传统观念认为勤奋和机会是成功的要素，但是经过统计学和成功人士的分析得出，乐观是成功的第三要素。
39、没有不老的誓言，没有不变的承诺，踏上旅途，义无反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识的人，决不会坚韧勤勉。
谢谢你的阅读
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71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非