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【期末复习】基因工程期末考试重点知识整理
基因工程期末考试重点知识整理基因工程第一章基因工程概述1、基因工程的概念(基因工程基本技术路线PPT)基因工程(Gene Engineering),是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方法将大分子(DNA)提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新的育种技术.2、基因工程的历史基因工程准备阶段:1972，第一个重组DNA分子的构建，构建人:Paul Berg及其同事PPT 基因工程诞生:1973，Cohen & Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化基因工程发展阶段的几个重要事件:一系列新的基因工程操作技术的出现;各种表达克隆载体的成功构建;一系列转基因菌株、转基因植物、转基因动物等的出现3、基因工程的内容(P9)4、基因克隆的通用策略(P12)(基因组文库(鸟枪法)+分子杂交筛选)第二章分子克隆工具酶5、限制性核酸内切酶的概念、特点、命名、分类(问答)概念:一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶，主要存在于细菌体内特点(参加PPT)命名: 依次取宿主属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后加上序号。
如:从Haemophilus influenze Rd中提取到的第三种限制型核酸内切酶被命名为Hind ?，Hin指来源于流感嗜血杆菌，d表示来菌株Rd，?表示序号。
分类:依据酶的亚单位组成、识别序列的种类以及是否需要辅助因子可分为:?型酶、?型(?s型)酶和?型酶。
真核细胞中有4中DNA聚合酶:α，β，γ，线粒体DNA聚合酶原核生物中3中DNA聚合酶:?，?，?6、几个基本概念粘性末端:两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置是交错的，对称地分布在识别序列中心位置两侧，这样形成的DNA片段末端称为~。
基因工程期末复习总结
一、单选1、第一个实现DNA重组的实验:1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。
2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。
3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。
4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。
5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA（噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA，有的以线型存在，有的以环状存在。
6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNA。
7、DNA的分离抽提法：酚-氯仿抽提法（常用、经典）。
8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。
9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。
10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。
11、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的0D260/OD280值应为 1.7~2.0，0D260/OD230值应大于 2.0，如果0D260/OD280小于1.7，可能有蛋白质污染，如果0D260/OD280大于2.0或0D260/OD230小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。
12、工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。
13、14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。
例如：B acillus am ylolique faciens H、H aemophilus in fluenzae dⅠ→Bam H、Hind15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制—修饰系统。
17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。
18、承载外源DNA的大小排序：质粒（<20kb）<噬菌体（20-30kb）<cosmid载体（40-50kb）<人工染色体载体（100-1000kb）。
基因工程知识点总结归纳(更新版)
基因工程绪论1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。
作动词：基因的分离和重组的过程。
2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。
供体、受体和载体是基因工程的三大要素。
3、基因工程诞生的基础三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。
以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。
三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。
2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。
5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。
6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。
7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。
8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。
9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。
10、RNAH降解与DNA杂交的RNA，用于cDNA文库建立时除去RNA以进行第二链的合成。
基因工程重点总结（完整）
基因工程重点总结（完整）基因工程名词解释：基因工程：重组DNA技术或者基因转移技术，在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之渗入到原先没有这类分子的宿主细胞内，而能持续稳定的传递和表达。
报告基因：其编码产物能够被快速测定，常用来判断外源基因是否成功地导入受体细胞（器官或组织）并检测其表达活性的一类特殊用途的基因。
双元载体：由两个分别含有T—DNA和Vir区的相容性突变Ti质粒构成的双质粒载体系统。
受体系统：用于转化的外植体通过组织培养途径或其他非组织培养途径，能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源基因的整合，对转化选择抗生素敏感的再生系统。
正负选择法：哺乳动物细胞转染DNA发生随机整合的几率相当高，而同源重组的频率则相当低。
正是由于这种缘故，给哺乳动物细胞的基因定向插入事件的检测造成了很大困难。
用于富集同源重组事件的特殊试验体系，涉及正选择和负选择两个方面。
基因靶标：通过在转染细胞中发生的外源基因与核基因组目标基因之间的DNA同源重组，使外源基因定点地整合到核基因组的特定位置上，从而达到改变系把你遗传特性的目的。
密码子使用的偏爱性：无论是真核基因还是原核基因，一种特定的氨基酸并不是以同等频率使用所有的同义密码子，而主要使用其中的某一两种。
这种密码子使用的非随机性现象选择标记基因：用于鉴别目标DNA的存在，将成功转化了质粒的宿主挑选出来的基因。
主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因。
HA T选择法：由于选择TK+细胞的培养基含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷，所以称之为。
生殖细胞浸泡法：将供试外植体如种子、胚、胚珠、子房、花粉粒、幼穗悬浮细胞培养物等直接浸泡在外源DNA溶液中，利用渗透作用把外源基因导入受体细胞并稳定地整合、表达和遗传。
胚囊、子房注射法：使用微量注射器把外源DNA溶液注射到子房或胚囊中，由于卵细胞的吸收使外源DNA进入受精的卵细胞中，从而获得转基因的种子。
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思考题第二章分子克隆工具酶1简述基因工程研究用的工具酶的类型和作用特点。
常用的工具酶硝基序列内部进庁切割DrU逵接癖DT⅛A 1 i HaSe将两条以上的纯性HA方子咸序喪傕化昭成磷酸二酣键逢接战一6盘傢DNAJSt 合BBl DNA PDIytoeraSe 1通⅛u≡ιg'掰遥一蝎如械昔≡κ⅛<⅛■补双链小心子上的单俺毅口，WP5* *^,D∖AΛ⅛-βfc i⅛÷ΦfX⅛.Γ*5⅛5*-3*外切a⅞渚性¾κ⅛⅛⅛e一J t'碳6⅛z⅛w子初»1多棱甘IHU⅛的I)NA Polynlerase k i πc∣isc F-DH半螭上r,<3ve rs e t. ran sc ri IH rise咲R∖A或DMt¾Λ⅛樓核合总互⅜b⅛∣DNA f⅛I)MAJK 却fr 移B⅜DhlA terminal DeOXyrLUC ICatidy transferase 44^LM4⅛⅛ 巴加到了进性双K或*ι⅛DNΛ⅛ 子⅛⅛3'- Oll 卓娴减IΛA⅛⅛Y-来姗减性辑酸酶BΛP Or ClP 核酸外⅛^b⅛III CXOnUCICaSe TrTF⅜j⅛⅞ħ⅛Slnucl p^ιse S I核酸酶RHl 31IiuulcastJ Ikil.31Taq DNA M⅛i⅛Iaq DNA p∩IynlCrrLSC核摘核瞋隔Rλcise脱氧4⅛4⅛⅛⅛aifi⅛DvISe去除［Γ⅛ KK九dNTF j⅛⅛5,⅞⅛ι⅛^≡lF^MIΛA3,-0HX⅛⅛的孩昔酸⅛也移解单链加A或R∖A,产生带亍璘酸的单械甘酸或專聚才茫昔百罠，祠时电可切害J J空t⅛棱酸分子的单1⅛ 护琳双ι⅛l)∖A, RKΛ⅛⅛5f及3'末端.高专—性单健核昔酸能在高温(72C ) -F⅛⅛⅛MDλA>⅛⅛板.从3'方向令咸新生的互补谜专一懺降解RMA内切械肢晦.4⅛M4tl⅛或双1⅛DNA2•说明限制性内切核酸酶命名原则(举例)ECORl属毛种类 株系 编号3. 限制内切核酸酶的星活性是指什么？在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列， 这个改变的特殊性称星星活性。
第3章 基因工程 期末复习知识点总结【新教材】人教版高中生物选择性必修三
第3章基因工程1、什么是基因工程：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
2、基因工程的诞生（三个理论和三个技术）：基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科基础上发展起来的，正是这些学科的基础理论和相关技术的发展催生了基因工程，具体有三大理论发现和三个技术突破。
1)理论基础：DNA是遗传物质；DNA分子的双螺旋结构和半保留复制；遗传密码的通用性和遗传信息传递的方式；2)技术基础：限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割；DNA连接酶的发现与DNA片段的连接；基因工程载体的构建与应用●理论上的三大发现⑴、发现了遗传物质——DNA1944年，艾弗里（O.T.Avery）的肺炎双球菌转化实验⑵、揭示了遗传物质的分子机制：DNA分子的双螺旋结构和半保留复制1953年，沃森（J.D.Watson）和克里克（F.Crick）的DNA双螺旋结构模型、半保留复制图，获1958年诺贝尔奖。
⑶、确立了遗传信息的传递方式：以密码形式传递1963年，美国尼伦伯格（M.W.Nirenberg）和马太（H.Matthaei）确立了遗传信息以密码形式传递，破译了编码氨基酸的遗传密码(3个核苷酸=1个密码子=1个aa)。
●技术上的三大突破⑴、世界上第一个重组DNA实验：实现不同来源DNA的体外重组1972年斯坦福大学化学家伯格（P.Berg）借助内切酶和连接酶将猴病毒SV40的DNA 和大肠杆菌λ噬菌体的DNA在试管中连接在了一起，第一次成功地实现了DNA的体外重组。
⑵、第一个基因克隆实验：重组DNA表达实验，是世界上第一个基因工程实验1973年美国斯坦福大学医学院遗传学家科恩（S.Cohen）将体外构建的含有四环素和卡那霉素抗性基因的重组质粒导入大肠杆菌，获得了具有双抗性的大肠杆菌转化子，成功完成了第一个基因克隆实验。
基因工程资料总复习重点总结
基因工程：称基因操作、重组DNA。
基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA 分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA 分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。
穿梭载体：含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主乙。
穿梭质粒：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点以及相应的选择标记基因，因而可在两种不同种属的受体细胞中复制和检测的质粒载体。
同裂酶：不同来源的限制性内切核酸酶具有相同的识别序列，产生完全相同的黏性末端。
重组率：在连接反应结束后，含有外源DNA片段的重组分子数与所投入的载体分子数之比。
cDNA文库：由cDNA法构建的基因文库，只含有某一生物体的所有蛋白质编码序列，一般不含有DNA调控序列。
基因组文库：由鸟枪法构建的基因文库，含有某一生物染色体的所有DNA片段，包括基因编码区和间隔区DNA。
感受态：受体细胞最易接收外源DNA片段而实现转化的一种特殊生理状态。
同尾酶：一些来源不同的限制性核酸内切酶识别的靶序列各不相同，但都产生相同的粘性末端，这类酶称为同尾酶。
接头：是一段含有某种限制性核酸内切酶识别序列的人工合成的寡聚核苷酸，通常是八聚体和十聚体。
转化：将质粒DNA 或以它为载体构建的重组质粒导入细菌中的过程称为转化。
星号活性：Ⅱ类限制性核酸内切酶虽然具有特异性的识别序列和切割的位点，但是当酶解条件发生变化时，酶切反应的专一性可能会降低，导致同种酶识别多种序列，这种现象称为限制性核酸内切酶的星号活性。
动物乳腺生物反应器：能够分泌乳汁的转基因动物生产其他来源的基因产品，并通过乳腺分泌出来。
细菌的限制—修饰系统：细菌中有作用于同一DNA 的两种酶，即分解DNA 的限制酶和改变DNA 碱基结构使其免遭限制酶分解的修饰酶。
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第一章绪论1 •基因工程的定义：在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA）,转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。
2•基因工程理论上的三大发现和技术上的三大发现3 •基因工程的基本步骤（1）目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。
（2）重组体的制备：将冃的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。
（3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞川。
（4）克隆鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。
（5）目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
4 •基因工程的意义（1）基因工程在农业生产中的应用：提高植物的光合作用率；提高豆科植物的固氮效率；转基因植物；转基因动物。
（2）基因工程在工业中的应用：1）纤维素的开发利用：克隆各种参与纤维素降解的酶的基因，导入酿酒酵母，就可能利用廉价的纤维素來生产葡萄糖，发酵成酒。
2）酿酒工业：用外源基因改造酿酒酵母，产生优质的啤酒。
或用酿酒酵母生产蛋白质等。
（3）基因工程在医药上的应用：用微生物生产药物；用转基因植物或动物生产药物；设计高效高特异性的生物制剂-疫苗；制造新型疫苗；基因诊断；法医鉴定；基因治疗。
（4）基因工程在环境保护中的作用：1）检测水污染：用重组细菌或转基因鱼等检测水污染2）生物降解：用带有重组质粒的“超级菌〃分解油（烷怪类）、有机农药污染。
（5）基因工程商业化的发展第二章基因工程主要技术原理1. 质粒和基因组DNA的提取方法与纯化步骤，主要试剂是什么质粒的提取和纯化方法最常用的为碱抽提法：原理：闭合环状的质粒DNA,在变性后不会分离，复性快。
染色体线性DNA和或有缺口的质粒DNA变性后双链分离，难以复性而形成缠绕的结构，与蛋白质-SDS复合物结合在一起, 在离心的时候沉淀下去。
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一、单选1、第一个实现DNA重组的实验：1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。
2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。
3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。
4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。
5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA （噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA利叶绿体DNA,有的以线型存在，有的以环状存在。
6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNAo7、DNA的分离抽提法：酚■氯仿抽提法（常用、经典）。
8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。
9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。
10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。
口、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的OD260/OD280值应为1.7-2.0, OD260/OD230值应大于2.0,如果OD260/OD280小于1.7,可能有蛋白质污染，如果OD260/OD280大于2.0或OD260/OD23O小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。
12、工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。
基因工程屮最常用的工具酶14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指II类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。
例如：Bacillus amylolique faciens H、Haemophilus influenzae d BamH> Hind I o“属种株序”15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制一修饰系统。
16、限制性内切核酸酶的作用机制识别双链DNA中特定的核昔酸17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。
18、承载外源DNA的大小排序:质粒(<20kb) <噬菌体(20-30kb) <cosmid 载体(40-50kb) v人工染色体载体(100-1000kb)。
19、受体细胞的种类:1)原核生物细胞例：大肠杆菌；枯草芽抱杆菌；蓝细菌；2)真核生物细胞包含酵母细胞、植物细胞、动物细胞。
19、常用于分了杂交的探针标记物可分为放射性及非放射性两大类，非放射性探针包括生物素标记探针、地高辛标记探针、荧光素标记探针。
20、根据待测核酸的来源以及将其分子结合到固相支持物上的方法的不同，核酸分子杂交检测法可分为菌落印迹原位杂交、斑点印迹杂交、Southern印迹杂交(DNA)和Nothern印迹杂交(RNA)四类。
(PS:如果只要检测克隆菌株、动植物细胞株或转基因个体、器官、组织提取的总DNA或RNA样品中是否含有日的基因，则可采用斑点印迹杂交(dot blotting)或狭线印迹杂交(slot blotting)进行检测。
菌落(或噬菌斑)原位杂交是直接把菌落或噬菌斑印迹转移到用于杂交的膜上，经溶菌和变性处理后使DNA暴露出来并与滤膜原位结合, 再用DNA探针与其杂交。
)21、重组子筛选的方法：1)遗传表里直接筛选2)依赖于重组子结构特征分析筛选3)核酸分子杂交分析4)免疫化学分析检测5)PCR 筛选法。
22、重组基因导入受体细胞的方法:C評(诱导大肠杆菌)转化法、电激穿孔、基因枪法、显微注射法、病毒转染法二、名词解释1、多克隆位点（MCS）：是包含多个（最多20个）限制性酶切位点的一段人工DNA序列。
2、衔接头：化学合成的寡核昔酸，含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。
其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末XL1J炳。
3、限制性内切核酸酶：识别双链DNA中特定的核昔酸序列（识别序列），并在识别序列上使每条链的一个磷酸二酯键断开的一类酶，简称限制酶。
4、回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。
5、同裂酶：识别相同序列的限制性内切酶称为同裂酶。
它们的切割位点可能不同6、同尾酶：切割不同的DNA片段，但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。
7、星性活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，又称Star活性。
8、克隆载体：一种能携带外源DNA片段进入受体细胞，并在受体细胞中得以维持或表达的DNA分子。
9、（质粒的）不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种亲源关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定地共存的现象。
10、显性质粒（表达型质粒）:指携带除与自身复制和转移相关的基因，还携带一些使宿主细胞呈现新性状基因的质粒。
11＞隐蔽质粒：不能使宿主细胞呈现新性状的质粒。
12、基因组文库：指贮存了某种牛物全部基因信息的一个受体菌群体。
13、cDNA基因文库：某种生物材料的基因转录产物mRNA经反转录形成不同的cDNA片段，与克隆载体重组后贮存在受体菌群体中，这样的群体称为cDNA基因文库。
14、受体细胞：又称为猪主细胞或寄主细胞等，从实验技术上讲，是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从实验目的上讲，是有应用价值和理论研究价值的细胞。
15、感受态细胞：指处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。
16、分子探针：指具有同特异性目标分子产生很强的相互作用并可对其相互作用的产物进行有效检测的DNA分子、RNA分子和蛋白质分了。
三、简答题1、简述聚合酶链式反应的基木原理、步骤和所需物质（反应物）。
原理：模仿细胞内发牛的DNA半保留复制过程，在体外由酶催化合成特异性DNA片段。
步骤：1）变性:冃的双链DNA片段在94°C下解链；2）退火:两种寡核昔酸引物在适当温度（50°C左右）下与模板上的目的序列通过氢键配对；3）延伸：DNA模板一引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。
物质：DNA Taq聚合酶、Buffer、MgCI2、dNTP、上下游引物、模板DNA、ddH20o2、简述琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的区别。
琼脂糖凝胶的凝胶孔径大，适合大分子DNA电泳和需要快速简单分析的DNA电泳，电泳方式一般采用水平潜水电泳•优点是快速简单' 但分辨率不是很高，对于差异较小的DNA片段难以分辨.聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜分离鉴定低分了量蛋白质、小于1Kb的DNA片段和DNA序列分析•其装载的样品量大，灵敏度高分离鉴定6bp-lkb个核昔酸的核酸片段用聚丙烯酰胺电泳,分离鉴定70bp~80kb的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳.3、怎样避免星性活性/引起星性活性的因素？星性活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，又称Star活性。
控制反应条件，避免引起星性活性因素引起星性活性因素：高浓度限制酶高浓度的甘油低离子强度高PH用Mn"取代Mg"4、简述常用的DNA连接酶及其比较和原理。
常用的DNA连接酶有E. coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶。
E. coli DNA连接酶催化片段互补黏性末端之间的连接，以NAD+ 作为辅助因子;T4 DNA连接酶不仅能催化片段互补黏性末端之间的连接，也能催化双链DNA平末端之间的连接，但连接平末端的效率较低，以ATP 作为辅助因子。
原理:借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链5'-PO4与另一DNA链的3*-0H生成磷酸二酯键。
5、按构建克隆载体DNA 的来源分类及按克隆载体的用途分类。
来源分类：① 质粒载体② 噬菌体载体③ 病毒载体④ 质粒与病毒或噬菌体DNA组成的载体⑤ 质粒与染色体DNA 片段组成的载体⑥ 其它克隆载体 6、理想的克隆载体具备的基本条件（特性）。
① 针对受体细胞的可转移性② 自主复制功能③ 多种且单一的限制性内切酶切点④ 容易检测的筛选标记⑤ 载体的分子量适当⑥ 在细胞内稳定性高用途分类： ① cDNA 克隆载体 ② 转录载体 ③ 表达载体 ④ 普通载体7、质粒克隆载体构建的基本策略。
1）能在受体细胞中进行有效的复制，并有较多的拷贝数。
含有能在受体细胞内有效复制的质粒复制起始位点。
2）含有外源DNA片段的克隆位点，且越多越好（可组装一个多克隆位点（MCS）连杆）。
3）含有选择标记基因一一抗性基因，LacZ'基因。
4）载体DNA分子尽可能小（转化率高），＞15kb,转化率降低。
5）根据需要组装各种“元件”，如启动了、终止了等。
8、简述基因组文库构建的基本步骤及基因组文库的大小的计算公式。
基本步骤①制备基因组DNA并片段化②DNA片段与载体重组连接③重组DNA导入受体菌细胞并扩增④筛选鉴定基因组文库计算公式:N=ln （1-P） / In （1-f）N为所需的重组子的数冃；f为单个重组体中插入片段平均大小与基因组DNA总量之比；P为选出某一基因的概率（通常期望为99%） o（PS：基因组DNA总量=3*109）9、简述cDNA基因文库的构建步骤。
1）分离总RNA,并从中分离纯化出mRNA2）以mRNA为模版，合成cDNA笫一链3）合成双链cDNA（将mRNA・DNA杂交分子转变为双链cDN分子）4）将双链cDNA与载体重组，导入大肠杆菌宿主细胞增殖□、简述目的基因的基本分离制备方法。
1）直接分离法（包括限制性核酸内切酶酶切分离法、基因分离的物理化学法、“鸟枪法”）2）构建基因组文库分离法3）构建cDNA基因文库分离法4）聚合酶链式反应技术扩增目的基因5）基因的化学合成12、简述作为基因工程的宿主细胞必须具备的特性。
1）便于重组DNA分子的导入；2）能使重组DNA分子稳定存在于细胞中；3）便于重组体的筛选；4）遗传性稳定高，易于扩大培养或发酵生长；5）安全性高，无致病性，不会对外界环境造成生物污染；6）有利于外源基因蛋白表达产物在细胞内的积累，或促进外源基因的高效分泌表达。
7）在遗传密码的应用上无明显偏倚性；8）具有较好的翻译后加工机制，便于真核目的基因的高效表达；9）在理论研究和生产实践上有较高的应用价值。
13、基因工程的应用及安全伦理性。
医学，农业，国防，能源环境。
可正可反。
四、设计题转基因植物和动物的制备。
A.转基因小鼠的制备(显微注射法):⑴准备假孕母鼠A ：将可育雌鼠与输精管结扎后绝育的雄鼠交配，剌 激雌鼠发生一系列妊娠变化，而得到假孕母鼠，作为受精卵转基因后 的养母；⑵受精卵的准备：可育雌鼠注射促性腺激素(hcg)促使超排卵。