高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量
柱前衍生化反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中牛磺酸的含量及其药动学研究
柱前衍生化反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中牛磺酸的含量及其药动学研究岳山岚;王维;帅淑平;王静;王吉琳;赵一凡;杨俊毅【摘要】建立一种测定大鼠血浆中牛磺酸含量的柱前衍生化-高效液相色谱法,并将其应用于牛磺酸在大鼠体内的药动学研究.采用柱前衍生化高效液相色谱法,以2,4-二.硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂,以KH2PO3缓冲液(pH 7.0)∶乙腈∶水(70∶15∶15,v/v)为流动相,经C18色谱柱(250 mm×4.6 mm×5 μm)分离,柱温30℃,流速1.0 mL/min,进样量为20 μL,牛磺酸衍生物的紫外检测波长为360 nm,并以DAS2.0计算其药动学参数.大鼠血浆中牛磺酸在1.29～1 287.5 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限1.29 μg/mL,主要药动学参数t1/2为(3.747± 1.430)h,Cmax为(949.573±192.967)μg/mL,Tmax为(1.000±0.000)h,AUC0-t为(2862.168士565.917)(mg/L)/h.该法简单、经济、灵敏,适用于牛磺酸血药浓度测定及药动学研究.【期刊名称】《中国测试》【年(卷),期】2014(040)006【总页数】4页(P56-59)【关键词】牛磺酸;高效液相色谱法;柱前衍生化;药动学【作者】岳山岚;王维;帅淑平;王静;王吉琳;赵一凡;杨俊毅【作者单位】四川大学华西药学院,四川成都610041;四川大学华西药学院,四川成都610041;四川大学华西药学院,四川成都610041;四川大学华西药学院,四川成都610041;四川大学华西药学院,四川成都610041;四川大学华西药学院,四川成都610041;四川大学华西药学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R914;TQ460.7+2;O657.7+2;O623.84牛磺酸（taurine）又名牛胆碱、牛胆素，是存在于人及动物体内的一种非蛋白游离氨基酸[1]。
柱前在线自动衍生-高效液相色谱法快速测定乳粉中牛磺酸
柱前在线自动衍生-高效液相色谱法快速测定乳粉中牛磺酸林玉宙;黄耀铕;丛骁;钟晓冬【摘要】建立以邻苯二甲醛为衍生试剂测定乳粉中牛磺酸含量的高效液相色谱方法.标准品和样品在自动进样器中完成自动衍生反应后直接进入高效液相色谱系统进行分析,方法采用Ultimate AQ-C18 (2.1 mm×100 mm,3μm)为分析色谱柱,以乙腈和10 mmol/L乙酸钠(pH 4.2)作为流动相,柱温40℃,流速0.4 mL/min.结果表明:在5～100 μg/mL范围内牛磺酸线性关系良好,回归方程为y=19.8006x+20.176 4,相关系数为0.999 7.样品加标回收率为97.33％～105.74％.本方法最低检测限(RS/N=3)为0.06 mg/100 g,最低定量限(Rs/N=10)为0.2 mg/100 g.本方法测定乳粉中牛磺酸含量重复性好、灵敏度高,且比国标检测方法操作简单,适用于乳粉中牛磺酸的常规分析检测.【期刊名称】《乳业科学与技术》【年(卷),期】2015(038)005【总页数】4页(P21-24)【关键词】在线自动化柱前衍生;牛磺酸;乳粉;邻苯二甲醛【作者】林玉宙;黄耀铕;丛骁;钟晓冬【作者单位】明一国际营养品集团有限公司,福建福州 350214;黑龙江明翔乳业责任有限公司,黑龙江齐齐哈尔 161200;明一国际营养品集团有限公司,福建福州350214;明一国际营养品集团有限公司,福建福州 350214【正文语种】中文【中图分类】TS207.3牛磺酸又称牛胆酸，化学名称为2-氨基乙磺酸，分子式为C2H7NO3S，其为白色针状结晶，无臭，味微酸，无任何毒副作用［1］。
长期以来牛磺酸一直被认为是机体内含硫氨基酸的无功能代谢产物，直到1975年Hayes等［2］发现因缺乏牛磺酸可使猫的视网膜老化甚至失明，其营养生理功能才受到国内外学者的重视，在此过程中也逐步了解其营养学价值。
HPLC柱前衍生化测定泡腾片中牛磺酸含量
＝ ０ ７９ 。本法精 密度高 ， 现性好 ， ＝ ．４ ％ 重 定量准确 ， 可用于测定泡腾片 中牛磺酸的含量。 关键词 高效液 相色谱法 柱前衍生化 牛磺酸 泡腾片
对于新研制的牛磺酸泡腾片前还没有含aksr一10高效紫外测定牛磺酸含量有到各种方法量控制很有实际意纯度的试剂均为分o收稿日期cogxre溶液的制备色谱条件下得色谱酸钠缓冲溶的测定无干扰1g用水溶解定1015o01m用水溶解o01t0ml制成即为试样溶液
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牛磺 酸是 一种含 硫 的 一氨基 酸 ， 有 多 种生 理 具 和药理作 用 ， 以促 进大脑 细胞 发育 、 可 提高免 疫力 、 缓
器、 料与试剂 、 材
１ １ 仪 器 、 料与试 剂 ． 材
解疲劳 、 调节神 经传 导 ， 有 消炎 、 热 、 还 解 镇痛 、 抗病 毒
高效液相色谱法测定海洋生物中牛磺酸的含量
高效液相色谱法测定海洋生物中牛磺酸的含量作者：柳小英毛丽沙鲍敏洁周瑾金火喜来源：《安徽农业科学》2017年第31期摘要[目的]建立牛磺酸的高效液相色谱分析方法，并通过该方法测定不同海洋生物中牛磺酸的含量。
[方法]应用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生法，研究流动相比例、流速、衍生剂比例、衍生时间等因素对牛磺酸检测的影响。
[结果]当牛磺酸∶OPA=1∶2，衍生时间2 min，流动相乙腈∶水=15∶85，流速为0.5 mL/min，检测波长为360 nm时，牛磺酸浓度为10～400μg/mL时具有良好的线性关系（R2>099），平行样品的相对标准偏差为2.9%～7.4%。
利用该方法检测不同海产品中牛磺酸的含量，所选择的海洋贝类、甲壳类、鱼类中均含有牛磺酸，其中海瓜子中含量最高，达11.2 mg/g。
不同组织比较，鱼肉中牛磺酸含量较高，而鳃中较低。
[结论]该研究结果丰富了海洋生物中牛磺酸含量的数据，为进一步研究牛磺酸在不同组织中的合成机制提供了参考。
关键词海产品；高效液相色谱；牛磺酸中图分类号S-3文献标识码A文章编号0517-6611（2017）31-0001-03Abstract[Objective]The aim was to establish the analytical method of taurine by high performance liquid chromatograph and detect the taurine content in different seafood tissues. [Method]The precolumn derivatization of ophthalaldehyde （OPA） was used to detect the taurine by studying the effects of flow phase ratio， flow rate， ratio of derivatization agent and derivatization time. [Result]The linear range （R2> 0.99） was in the range of 10-400 μg/mL at thetaurine∶OPA=1∶2， derivatization time 2 min， acetonitrile∶water=15∶85， flow rate 0.5mL/min， wavelength 360 nm. The relative standard deviation of the parallel samples was 2.9%-7.4%. The content of taurine in different seafood was tested by using this method. The results showed that taurine was determined in all selected marine shellfish， crustaceans and fish. The highest content of taurine was observed in the baby clam， which was up to 11.2 mg/g. Compared with different tissues of fish， the content of taurine in muscle was the higher， while the lower in gill. [Conclusion]The results of this study enrich the data of taurine content in marine life， and provide reference for the further study of the synthesis mechanism of taurine in different tissues.Key wordsSeafood；High performance liquid chromatography；Taurine牛磺酸，分子式C2H7NO2S，是一种含硫的特殊氨基酸，在体内不参与蛋白质合成，以游离状态存在。
高效液相色柱前衍生化法测定食品中的牛磺酸
分析检 测
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（ 东 省 生 物 药物 研 究 院 ， 南 ２ ０ １ ） 山 济 ５ ０ ４ 杨素珍 王淑 华 于盛茂 刘 燕
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神 经 系 统 的 发 育 极 为 重 要 因 此 牛 磺 酸 作 为 新 型 营 养
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目前 牛 磺 酸 常 用 的 含 量 测 定 法 有 氨 基 酸 自 动 分 析 仪 法 、 层 扫 描 法 、 后 衍 生 离 子 色 谱 法 等 。 氨 基 薄 柱
柱前衍生法测定保健液中牛磺酸含量
柱前衍生法测定保健液中牛磺酸含量摘要：利用邻苯二甲醛(OPA)与牛磺酸定量反应生成邻苯二甲醛牛磺酸衍生物,采用高效液相色谱法分离并测定口服液中牛磺酸的含量,结果衍生化反应迅速,分离条件好,在0~50ng线性关系良好,检测限为20ng,回收率可达到90％以上,该法灵敏度高,迅速,高效。
关键词：柱前衍生法高效液相色谱法牛磺酸含量牛磺酸广泛分布于动物组织细胞内,海生动物含量尤为丰富,哺乳类组织细胞内亦含有较高的牛磺酸,特别是神经、肌肉和腺体内含量更高,是机体内含量最丰富的自由氨基酸。
牛磺酸也是细胞不可缺少的因子,特别是肝脏、心脏、大脑、脾脏等细胞中都特别需要牛磺酸。
牛磺酸是一种非蛋白氨基酸。
牛磺酸不参与蛋白质的合成,与胱氨酸、半胱氨酸的代谢有密切关系,人体合成牛磺酸的能力很低,必须从食物中获得,是人体必需的一种氨基酸。
天然的牛磺酸在脑内的含量丰富、分布广泛,能明显促进神经系统的生长发育和细胞增殖、分化,且呈剂量依赖性,在脑神经细胞发育过程中起重要作用。
如果补充不足,将会使幼儿生长发育缓慢、智力发育迟缓。
牛磺酸与幼儿、胎儿的中枢神经及视网膜等的发育有密切的关。
补充适量牛磺酸不仅可以提高学习记忆速度,而且还可以提高学习记忆的准确性,并且对神经系统的抗衰老也有一定作用。
牛磺酸无共轭双键,在紫外区无吸收,需经衍生后方可产生吸收从而进行含量测定[1],本法采用邻苯二甲醛(OPA)与牛磺酸定量反应生成邻苯二甲醛牛磺酸衍生物,利用其有荧光这一特性,对其进行检测,结果获得了良好的灵敏度与回收率。
1、材料与方法1.1 检测仪器LC20液相色谱仪、荧光检测器（日本岛津公司）,CAPELL PAK C18色谱柱（15cm×0.46 mm,5 μm）（日本资生堂）,ALC-1100 电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.2 试剂试药邻苯二甲醛(OPA,分析纯,国药集团化学试剂有限公司);甲醇(色谱纯,天津康科德科技有限公司);乙硫醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);乙腈(色谱纯,美国天地);0.4mol/L硼酸钠缓冲液(2.48g硼酸和1.41g氢氧化钠,加水溶解并定容至100mL);衍生化试剂(取OPA0.1g,加0.1mL乙硫醇,0.4mol/L磷酸钠缓冲液定容至100mL);牛磺酸(生化试剂)。
高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量
高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量颜京霞;宋秀君;卞小芸;勾凌燕;王仁杰;张亚超【摘要】目的探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值.方法采用2种流动相,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8),流动相B为0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80);色谱柱为necleos ODSΦ4.6 nm×150 nm.Wistar大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析.结果该方法最低检出限为10 μg/ml,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为0.998±0.002,回收率为91.07 %～96.79 %,牛磺酸峰面积变异系数在进样量3μl时为10.75 %,进样量5 μl时为3.12 %.结论高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】1999(020)004【总页数】4页(P216-219)【关键词】牛磺酸/分析;白内障/病因学;色谱法,高压液相/方法;大鼠【作者】颜京霞;宋秀君;卞小芸;勾凌燕;王仁杰;张亚超【作者单位】唐山市工人医院;河北医科大学第三医院眼科,石家庄,050051;河北医科大学第三医院眼科,石家庄,050051;中国人民解放军石家庄医学高等专科学校;中国人民解放军石家庄医学高等专科学校;中国人民解放军石家庄医学高等专科学校【正文语种】中文【中图分类】R4MeSH taurine/anal;cataract/etiol;chromatography,high-performanceliquid/methods; rats近几年来,文献报道〔1,2〕牛磺酸在白内障的发生、发展中起着十分重要的作用,但对牛磺酸含量分析常采用氨基酸自动分析仪〔3〕。
高效液相色谱法测定牛磺酸颗粒中牛磺酸的含量
高效液相色谱法测定牛磺酸颗粒中牛磺酸的含量
陈向明
【期刊名称】《福建分析测试》
【年(卷),期】2012(000)004
【摘要】建立了测定牛磺酸含量的高效液相色谱(HPLC)方法.方法采用2,4-二硝基氟苯对牛磺酸进行衍生,在ul-timate C18柱(250×4.6mm,5μm)色谱柱上,0.5%三乙胺(用磷酸调PH=4.0)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长360nm.牛磺酸在4.68×10-10~8.49×10-5mol/L范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r=0.9998).所建立的方法简单、简单,可用于制剂中牛磺酸含量的测定.
【总页数】2页(P41-42)
【作者】陈向明
【作者单位】滨州医学院药学院,山东烟台264003
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.柱前衍生化-高效液相色谱法测定复方牛磺酸滴眼液中牛磺酸与氨基己酸含量 [J], 汪玲;王莉艳;吴文耀
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河北医科大学学报JOURNAL OF HEBEI MEDICALUNIVERSITY1999年第20卷第4期Vol 20No.41999高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量颜京霞 宋秀君 卞小芸 勾凌燕 王仁杰 张亚超 摘 要 目的 探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。
方法 采用2种流动相,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8),流动相B为0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80);色谱柱为necleos ODSΦ4.6 nm×150 nm。
Wistar大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。
结果 该方法最低检出限为10 μg/ml,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为0.998±0.002,回收率为91.07 %～96.79 %,牛磺酸峰面积变异系数在进样量3μl时为10.75 %,进样量5 μl时为3.12 %。
结论 高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。
主题词 牛磺酸/分析;白内障/病因学;色谱法,高压液相/方法;大鼠 中图号 R493.2;R776.1DETERMINATION OF TAURINE CONTENT BY HIGHPERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHYYan Jingxia Song Xiujun Bian XiaoyunDepartment of Ophthalmology,the Third Hospital of Hebei Medical University(Shijiazhuang 050051)Gou Lingyan Wang Renjie Zhang YachaoShijiazhuang Medical College of PLAABSTRACT Objective To explore the method for determination of taurine in plasma, aqueous and lenses of rate by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods Two mobile phase were used:0.05 mol/L sodium acetate buffer (pH=6.5)-methanolfourhydrofuran(80∶20∶0.8) and 0.05 mol/L sodium citrate butter (pH=6.5)-methanol(20∶80);the analytical column was Φ4.6 nm×150 mm necleos ODS.The Wistar rat's plasma,aqueous and lenses samples were determined after derivation.Results Using this method,the minimum detected limit was 10 μm/ml;the mean related coefficient between concentration of amino acids and reaction valus was 0.998±0.002;the rate of recovery were 97.07 %～96.79 %;the coefficient of variation of taurine's peak area was 10.75 % when the analysed sample was 3 μl and was 3.12 % when the analysed sample was5 μl.Conclusion Using HPLC,taurine in blood plasma,aqueous and lenses can be separated well from amino acids.This method is a good way in the determination of taurine content. MeSH taurine/anal;cataract/etiol;chromatography,high-performance liquid/methods; rats 近几年来,文献报道〔1,2〕牛磺酸在白内障的发生、发展中起着十分重要的作用,但对牛磺酸含量分析常采用氨基酸自动分析仪〔3〕。
本文采用高效液相色谱柱前衍生技术对眼房水、晶状体和血液中的牛磺酸及谷氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、精氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸进行了分析测定,获得了比较满意的结果,现报告如下。
1 材料和方法1.1 仪器:高效液相色谱仪LC-4A(日本岛津),数据处理机C-R2AX(日本岛津),荧光检测器RF-530(日本岛津),色谱柱necleosODS Φ4.6 mm×150 mm。
1.2 试剂:氨基酸标准品由英国BDH公司提供,邻苯二甲醛(OPA)衍生试剂为英国Fluka 公司产品,其它化学试剂均为国产分析纯,所有实验用水均为2次重蒸水。
1.3 标准氨基酸、牛磺酸分离及色谱条件1.3.1 标准溶液的配置:精确称取各种氨基酸30 mg,混匀后用50 %甲醇水溶于25 ml容量瓶中。
用移液管分别量取1,2,3,4和5 ml混合溶液移入5个50 ml的容量瓶中,用50 %甲醇水定容。
1.3.2 衍生1.3.2.1 衍生液的配制:准确称取50 mg OPA溶于1.5 ml甲醇中,加入50 μl巯基乙醇,11 ml 0.4mol/L硼酸缓冲液(pH=9.5),通入氮气,棕色瓶贮存。
使用时,每日补充20 μl巯基乙醇,10 d换1次。
1.3.2.2 衍生操作:取10～25 μl样品,加衍生试剂100 μl,置旋涡振荡器振荡1 min,用乙酸缓冲液将体积补充到200 μl,操作在2 min内完成,取适当量进样。
1.3.2.3 分离测定:采用两种流动相对标准或样品进行梯度洗脱。
流动相A:0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8);流动相B:0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80)。
采用四段线性梯度洗脱,流速0.6 ml/min,衰减0。
荧光检测器: EX 338 nm,EM 425 nm。
1.3.2.4 样品处理 血浆处理:Wistar大鼠断头取血,1 500～2 000 g 离心15 min。
精确吸取血清100 μl于1 ml具塞试管中,加入100 μl甲醇及10 %硫酸锌10 μl,振荡混合10 s,3 000 g离心15 min,取上清液50 μl,常温水浴,氮气吹干。
房水处理:Wistar大鼠断头,残头固定,自角膜缘剪开角膜,采用毛细管吸取房水,精确吸取房水40 μl于1 ml具塞试管中。
加入100 μl甲醇及10 %硫酸锌10 μl,振荡混合10 s,3 000 g离心15 min,取上清液50 μl,常温水浴,氮气吹干。
晶状体处理:Wistar大鼠断头,残头固定后自角膜缘剪开角膜,取晶状体,于滤纸上吸取晶体上残留的玻璃体,称量后立即放入匀浆管,加入Tris-Hcl缓冲液(pH=7.4)(总量为25μl/mg晶状体),0～4 ℃匀浆2 min,8 700 g离心5 min,取上清液,待测定。
2 结果2.1 计算:由System Glod对峰面积积分,再以标准氨基酸浓度对峰面积作校正曲线,计算样品浓度。
2.2 色谱行为:在上述的色谱条件下,标准品及血、房水、晶体中的牛磺酸与谷氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、丙氨酸得到了很好的分离,但精氨酸、甘氨酸、苏氨酸分离效果相比之下稍差。
见混合标品的色谱图(图1),大鼠血、房水、晶状体中氨基酸分离色谱图(图2)。
25 min内,所有氨基酸均全部洗脱,在牛磺酸出峰后,以A液将其余保留时间长的OPA氨基酸衍生物洗脱,使每个样品的分析时间不超过35 min。
图1 标准色谱图Figure 1 Standard chromatograma图2 样品分离色谱图Figure 2 Separate chromatogram of the sample2.3 线性关系和最低检出限:以不同浓度氨基酸标准品进行测量,测得其浓度与峰面积的回归方程:谷氨酸 Y=100.06X-1 110.5,r=0.999谷氨酰胺 Y=150.17X-1 623.9,r=0.998丝氨酸 Y=128.58X-1 406.4,r=0.999精氨酸+甘氨酸+苏氨酸 Y=359.58X-3 910.4,r=0.998丙氨酸 Y=151.38X-2 008.8,r=0.993牛磺酸 Y=158.11X-1 835.3,r=0.998 平均相关系数为0.998±0.002,此方法的最低检出限为10 μg/ml。
2.4 重复性:同一浓度不同进样量时氨基酸面积的变异系数见表1。
表1 同一浓度不同进样量氨基酸峰面积变异系数Table 1 Coefficient of variation on peak area of aminoacids in same concentration and different quantity(%)DoseGlum Glun Ser Arg+Gly+Thr Ala Tau(μl)37.028.127.0010.2014.1010.755 2.30 2.63 2.24 3.72 4.39 3.122.5 回收率:试验中测定各氨基酸回收率,得到的回收率波动范围在91.07%～96.79%之间,见表2。
表2 不同氨基酸回收率平均值Table 2 Mean value of the rate of recovery indifferent amino acids (n=3) Glum Glun Ser Arg+Gly+Thr Ala TauARR(%)93.6091.0791.7696.7994.0092.41ARR:Average recovery rate Glum:Glutamane Glun:Glutanine Ser:Serine Arg:Arginine Gly:Glycine Thr:Threomine Ala:Alanine Tau:Taurine (Figure 1～2,Table 1～2)3 讨论 牛磺酸是机体内1种自由氨基酸,具有很强的渗透压调节作用和抗内源性氧化性损害的作用。