无机磷的测定
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼
蓝，即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸
中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫做“钼蓝
”的物质（磷钼黄被还原为磷钼蓝）
(NH4)3[PMo12O40 ]
H3PO4•2Mo2O5 H3PO4•10MoO3•2Mo2O5
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分析步骤
■ 绘制标准曲线 按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml,
4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。
② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。
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-----精含磷洗衣粉、洗涤剂） 食物废渣 人体排泄
■ 工厂和畜牧业废水 化工行业（造纸业、磷肥工业） 生化制药（生物制药企业） 金属表面处理 食品工业 ……
■ 降雪降雨
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影响
■ 水体的富营养化 缓慢流动的湖泊、水库、内海等水域的生物营养成分（如 氮、磷等），因长期不断补给而过多积累，导致水草、藻 类等大量繁殖，引起水质恶化、鱼群死亡的现象。
所需试剂
■ 硫酸溶液 ■ 钼酸铵溶液 ■ 酒石酸锑钾溶液 ■ 混合溶液 ■ 抗坏血酸溶液 ■ 硫酸盐标准储备溶液 ■ 磷酸盐标准使用溶液
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仪器
■ 分光光度计：配5cm测定池 ■ 量筒：容量10，50，100，250，500 ml ■ 量瓶：容量100，1000 ml ■ 带刻度具塞比色管：容量50 ml ■ 刻度吸管：容量1，5，10 ml ■ 自动加液器：容量1 ml ■ 一般实验室常备仪器和设备
③以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横 坐标，绘制标准曲线。
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■ 水样测定 按以下步骤测定样品： ① 量取50 ml经0.45 μm微孔滤膜过滤的水样至带刻度具
塞比色管中，按上一步骤②测定吸光值Aw。 ②同时量取50 ml水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。
■ 磷含量增加，导致红色浮游生物爆发性繁殖而引发的近 海海水出现的“赤潮”和城市水系（湖泊、水库）中出现 水生植物疯长的“水华”现象。
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采样和样品贮存
■ 含磷酸盐的水样，在贮存时由于生物、酶和吸附作用， 使磷酸盐的浓度在采样后1小时内就会发生变化。所以样品 采集后应尽快分析，最好在半小时之内进行，不要超过两小 时。若不能立即分析，采取措施固定。
由于观察到磷为玻璃所吸收，长期贮存不应采用玻璃瓶。
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测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
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磷钼蓝分光光度法
■ 适用范围和应用领域 □ 本法适用于海水中活性磷酸盐的测定 □ 本方法为仲裁方法
■ 方法原理 在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，
用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
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□ 活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7PO43- + 21NH4+ + 12Mo7O246- + 72H+ =7(NH4)3[PMo12O40 ]↓（淡黄色）+ 36H2O
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■ 关于样品的贮存和固定问题，目前无定论，主要有快速冷冻 法和化学保存法两种。若只放几个小时，可冷藏。
□ 冷冻法：水样采集后迅速冷冻到-20C以下，（测溶解无机 磷则要过滤）。这种方法目前大多数人认为可保存几个月，基本 用此法。
□ 化学法：加入HgCl2—100ml水样中加入约3滴HgCl2饱和溶液。 □ 样品贮存：样品采集后可存于玻璃瓶中，待分样及过滤结 束后，一般用塑料瓶贮存样品（聚丙烯或聚四氟乙烯，不可用聚 乙烯-原因：吸附有机物质、磷酸盐、油类）。
无机磷的测定
磷钼蓝分光光度法测定海水 中的活性磷酸盐
09海环1班 张姣 2011-11-6
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无机磷&活性磷酸盐
■ 天然水和废水中含有的磷绝大多数以各种形式的磷酸盐存
在，也有有机磷的化合物。从化学形式上看，水中的磷化合物
可分以下几类。
(1)正磷酸盐，即PO43-、HPO42-、H2PO4-。
■ 记录与计算 据(Aw-Ab)值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度(mg/L)，
或用标准曲线性回归方程计算。将所得数据记入《海洋监测规 范》的附录A中表A3及表A16中。
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注意事项
■ 除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为二 次水或等效纯水。 ■ 水样采集后应马上过滤，立即测定。若不能立即测定， 应置于冰箱中保存，但也应在48 h内测定完毕。 ■ 过滤水样的微孔滤膜，需用0.5 mol/L盐酸浸泡，临 用时用水洗净。 ■ 硫化物含量高于2 mg/L-S时干扰测定。此时，水样用 硫酸酸化，通氮气15 min，将硫化氢驱去，可消除干扰。 ■ 磷钼蓝颜色在4 h内稳定。
无机磷形态
(2)缩合磷酸盐，包括焦磷酸盐、偏磷酸盐、
聚合磷酸盐等，如P2O74-、P3O105-、HP3O92-、（PO3)63-等。 (3)有机磷化合物。
■ 海水中磷以两种化学形式存在，即有机磷和无机磷。每一 种化学形式又分为溶解和颗粒的两种形态。
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■ 在各种无机磷形态中，仅正磷酸盐可通过标准的磷钼蓝方 法定量地测定，而焦磷酸盐和无机磷聚合物均需要首先将其水 解为活性磷酸盐后才能测定。 ■ 一般情况下,活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)， 通常指能被植物直接吸收的。
无机磷测试方法
无机磷的测试
钼锑分光光度法
1、原理
在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵、酒石酸锑钾反应，生成磷钼杂多酸，被还原剂抗坏血酸还原，即变成蓝色络合物，既称磷钼蓝
2、适用范围：
检测量程：0.01mg/L—0.6mg/L
地面水，生活污水及日化、磷肥、农药等工业废水中磷酸盐的测定
3、仪器
（1）分光光度计
( 2 ) 消解仪
( 3 )50ml比色管
4、试剂
1）1+1 硫酸
( 2 ) 10%抗坏血酸：溶解10g抗坏血酸于蒸馏水中，稀释至100ml，贮存在棕色瓶中，需冷藏，如颜色变黄，需弃去重配
( 3 )钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵于100ml蒸馏水中，溶解0.35g酒石酸锑钾于100ml蒸馏水中；在搅拌下将钼酸铵溶液倒入300ml 1+1硫酸中，加入酒石酸锑钾溶液混匀，试剂贮存在棕色瓶中，储存两个月
（4）磷酸盐贮备液：称取早110℃干燥两小时的磷酸二氢钾0.217g溶于水，移入1000ml容量瓶中，加1+1硫酸5ml，用水稀释至标线，此溶液每毫升含50微克磷
( 5 ) 磷酸盐标准使用液：吸取10ml磷酸盐贮备液于250ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，此溶液每毫升含2微克磷
5、实验步骤：
（1）取7支50ml的比色管，分别加入磷酸盐标准使用液.00ml,0.50m,1.00m 3.00m,5.00m.10.00ml，15.00ml，用蒸馏水稀释至50ml
（2）显色：向比色管中加入1ml抗坏血酸，30秒后加入2ml钼酸盐溶液混匀，放置15分钟
（3）测量：用10mm或30mm的比色皿，于波长700nm处以水为参比，测量吸光度
（4）用以上测得的数据，画出标准曲线
（5）水样测得的吸光度在标准曲线上找出对应的值。
无机磷的测定
用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
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□ 活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7PO43- + 21NH4+ + 12Mo7O246- + 72H+ =7(NH4)3[PMo12O40 ]↓（淡黄色）+ 36H2O
■ 记录与计算 据(Aw-Ab)值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度(mg/L)，
或用标准曲线性回归方程计算。将所得数据记入《海洋监测规 范》的附录A中表A3及表A16中。
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注意事项
■ 除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为二 次水或等效纯水。 ■ 水样采集后应马上过滤，立即测定。若不能立即测定， 应置于冰箱中保存，但也应在48 h内测定完毕。 ■ 过滤水样的微孔滤膜，需用0.5 mol/L盐酸浸泡，临 用时用水洗净。 ■ 硫化物含量高于2 mg/L-S时干扰测定。此时，水样用 硫酸酸化，通氮气15 min，将硫化氢驱去，可消除干扰。 ■ 磷钼蓝颜色在4 h内稳定。
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■ 关于样品的贮存和固定问题，目前无定论，主要有快速冷冻 法和化学保存法两种。若只放几个小时，可冷藏。
□ 冷冻法：水样采集后迅速冷冻到-20C以下，（测溶解无机 磷则要过滤）。这种方法目前大多数人认为可保存几个月，基本 用此法。
□ 化学法：加入HgCl2—100ml水样中加入约3滴HgCl2饱和溶液。 □ 样品贮存：样品采集后可存于玻璃瓶中，待分样及过滤结 束后，一般用塑料瓶贮存样品（聚丙烯或聚四氟乙烯，不可用聚 乙烯-原因：吸附有机物质、磷酸盐、油类）。
无机磷的测定钼蓝法原理
无机磷的测定钼蓝法原理
钼蓝法是一种常用于测定无机磷含量的方法，其原理如下：
1. 总磷转化为无机磷：样品中的总磷可以通过一系列化学反应转化为无机磷。
这些化学反应通常包括酸消解、氢氧化钠沉淀、盐酸回溶等步骤。
2. 磷酸与钼酸的反应：转化后的无机磷酸溶液与酸性钼酸反应生成磷酸钼酸盐。
这个反应会导致溶液颜色由无色变为淡黄色。
3. 颜色的测定：钼酸盐与磷酸盐形成的黄色化合物可以通过测定其吸光度来间接测定样品中无机磷的含量。
具体测定方法通常是使用分光光度计测量在700 nm波长处的吸光度。
通过比较待测样品的吸光度与标准曲线上的标准品吸光度的关系，可以确定出待测样品中无机磷的含量。
需要注意的是，钼蓝法是一种相对定性的测定方法，对于磷酸盐的混合物不太适用。
在测定时，需要注意样品的处理方法和反应条件的控制，以保证准确测定无机磷的含量。
无机磷的测定复习课程
■ 水样测定 按以下步骤测定样品： ① 量取50 ml经0.45 μm微孔滤膜过滤的水样至带刻度具
塞比色管中，按上一步骤②测定吸光值Aw。 ②同时量取50 ml水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。
■ 记录与计算 据(Aw-Ab)值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度(mg/L)，
或用标准曲线性回归方程计算。将所得数据记入《海洋监测规 范》的附录A中表A3及表A16中。
用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
□ 活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7PO43- + 21NH4+ + 12Mo7O246- + 72H+ =7(NH4)3[PMo12O40 ]↓（淡黄色）+ 36H2O
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼
蓝，即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸
由于观察到磷为玻璃所吸收，长期贮存不应采用玻璃瓶。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
磷钼蓝分光光度法
■ 适用范围和应用领域 □ 本法适用于海水中活性磷酸盐的测定 □ 本方法为仲裁方法
■ 方法原理 在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，
■ 磷含量增加，导致红色浮游生物爆发性繁殖而引发的 近海海水出现的“赤潮”和城市水系（湖泊、水库）中出 现水生植物疯长的“水华”现象。
采样和样品贮存
■ 含磷酸盐的水样，在贮存时由于生物、酶和吸附作用， 使磷酸盐的浓度在采样后1小时内就会发生变化。所以样品 采集后应尽快分析，最好在半小时之内进行，不要超过两小 时。若不能立即分析，采取措施固定。
4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。
生化检验辅导：血磷的测定方法
血清无机磷的测定方法一般有磷钼酸法、染料法和酶法。
磷钼酸法是血清中无机磷与钼酸盐结合形成磷钼酸化合物，再用还原剂将其还原成钼蓝进行比色测定。
染料法如孔雀绿直接显色测定法。
虽非常敏感，但影响因素多，显色不稳定，重复性也较差，不能用于常规检验。
酶法是一个偶联反应，参与反应的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸变位酶及葡萄糖6-磷酸脱氢酶，反应中使NADP+还原成NADPH，形成NADPH在340nm波长下测定其吸光度，该方法不受有机磷酸酯的干扰。
实验十四血清无机磷的测定
实验十四血清无机磷的测定【原理】用三氯醋酸沉淀血清之蛋白质，于其无蛋白滤液中加入钼酸试剂后，与血清的无机磷结合生成磷钼酸，再用氯化亚锡将磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，其蓝色之深浅与血清无机磷的含量成正比。
与同样处理的磷标准溶液比色后，通过计算即求出血清无机磷的含量。
【试剂】1、10%三氯醋酸。
2、磷标准溶液（每毫升0.8微克）。
3、钼酸试剂。
4、氯化亚锡溶液。
【操作】1、取小三角瓶一个，加入血清0.2ml，10%三氯醋酸9.8ml，混合后，静置5分钟，过2、取三支试管，标明1、2、3号，按前表操作。
3、将各管摇匀后，于室温中静置10分钟，以1号管内溶液作空白，在660nm波长进行比色，记录2、3号管内溶液的吸光度读数分别为A标、A样。
每100毫升血清中无机磷的含量（毫克）正常血清无机磷的含量为3~5毫克/100ml。
在甲状旁腺机能减退、维生素D缺乏病时，血清无机磷的含量可降低。
在肾功能不全时，可以使血清无机磷的含量升高。
故临床上测定血清无机磷含量，有助于有关疾病的诊断。
【试剂配法】1、钼酸试剂：称取5克钼酸铵，溶于10毫升蒸馏水内，再加15毫升浓硫酸，待冷却后，加蒸馏水至100毫升。
2、氯化亚锡溶液：称取2克氯化亚锡溶于5毫升浓盐酸中，保存于棕色瓶内，贮冰箱，此液称为氯化亚锡原液。
在每次实验前，取该溶液0.5毫升，用蒸馏水稀释至100毫升。
该液贮于冰箱，但只能应用2~3天。
3、无机磷标准液：（1毫升=0.8微克）称取2.194克纯KH2PO4溶于已盛有约100毫升蒸馏水的500毫升的量瓶中，加入10毫升5mol/L硫酸，摇匀，再用蒸馏水稀释至刻度，反复倒转几次摇匀。
此液为标准无机磷贮存液，每毫升含磷1毫克。
向标准无机磷贮存液中加入氯仿10毫升，用力振荡，使氯仿在贮存液中饱和，如此可防止因细菌的生长而使标准磷的含量下降，取该贮存液0.8毫升用蒸馏水稀释至1000毫升，即配成每毫升含磷0.8微克的标准应用液。
无机磷的测定方法及其诊断试剂盒[发明专利]
专利名称：无机磷的测定方法及其诊断试剂盒专利类型：发明专利
发明人：王尔中
申请号：CN200410065574.3
申请日：20041123
公开号：CN1778943A
公开日：
20060531
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及测定无机磷的方法及其诊断试剂盒。
利用核苷磷酸酶在血浆、血清等样品中无机磷的存在下与肌苷作用产生次黄嘌呤，次黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶作用产生尿酸盐和过氧化氢，尿酸盐再与尿酶反应又生成一分子的过氧化氢，这样便有两分子的过氧化氢与过氧化物酶发生反应，将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原或者吲嗒胺色原染料，检测反应期间主波长400～600nm吸光度的变化，从而测算出无机磷的含量。
该方法特异性高，不受内、外源物质的污染，测试结果精确、准确性好。
该方法在普通紫外/可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪上便可快速检测，不需要特殊或额外仪器，测试成本低廉，便于行业内推广应用。
申请人：苏州艾杰生物科技有限公司
地址：215021 江苏省苏州市苏州工业园区科技园(机场路328号122B)
国籍：CN
代理机构：南京苏科专利代理有限责任公司
代理人：姚姣阳
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实验七：土壤无机磷的测定
实验七：土壤无机磷的测定一、实验方法及目的采用SMT法测定土壤无机磷；掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。
二、实验原理1）样品的前处理：用1mol/L的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。
2）提取液中正磷酸盐的测定：在酸性条件下，试液中的P（正磷酸盐）与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸（又叫磷钼酸杂聚配合物）。
H3PO4 + 12H2MoO4 = H3P(Mo3O10)4 + 12H2O P多时呈黄色，少时无色在一定酸度下，加入还原剂后，杂多酸中的Mo 被还原，产生特殊兰色（钼兰），其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+，或Mo3+、Mo5+都有。
在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰(660nm或880nm)。
测定时可以根据分光光度计的性能选用。
我国国标采用700nm波长。
三、实验仪器与药品1仪器：多用调速振荡器，离心机，分光光度计。
2试剂：1）1mol•L-1HCl溶液：准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L；2）（1+1）硫酸溶液3）磷标准贮备液（50.0 μg.mL-1）：称取0.2197±0.001g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。
1.00mL此标准溶液含50.0 μg磷。
4）抗坏血酸（10%）：溶解10g抗坏血酸(C6H8O6)于水中，并稀释至100mL。
此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。
如不变色可长时间使用。
5）钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24•4H2O]于100mL水中。
溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbC4H4O7•½H2O]于100mL水中。
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸(1+1)中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。
此溶液贮存于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。
6）过100目筛土样0.2g。
血清无机磷磷钼酸法测定
血清无机磷（Pi）磷钼酸法测定1. 实验原理磷钼酸紫外终点比色法。
钼酸铵+硫酸+磷酸盐磷钼酸络合物；该络合物在340nm有最大光吸收峰。
在340nm的吸光度与标本中无机磷的浓度成正比2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 类型：血清、肝素血浆或尿液。
3. 标本存放：血清/血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。
尿液稳定性：4～25℃在pH<5保存可稳定2天；不可使用已被污染的标本。
收集24h尿液时，应在收集瓶中加入10%（W/V）盐酸10ml，以防止磷酸盐沉淀。
测定前尿液应用蒸馏水作1：20稀释，测定结果乘以21。
4. 标本运输：室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染不能做测定。
6. 实验材料：6.1申能无机磷测定试剂盒（货号：112 5207170 1 试剂：8×70ml）6.1.1 试剂组成硫酸210mmol/L钼酸铵0.4mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含硫酸，如与皮肤及粘膜接触，请仔细地用大量水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
无机磷的测定
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无机磷的测定
磷钼蓝分光光度法测定海水 中的活性磷酸盐
09海环1班 张姣 2011-11-6
无机磷&活性磷酸盐
■ 天然水和废水中含有的磷绝大多数以各种形式的磷酸盐存
在，也有有机磷的化合物。从化学形式上看，水中的磷化合物 可分以下几类。 (1)正磷酸盐，即PO43-、HPO42-、H2PO4-。 无机磷形态 (2)缩合磷酸盐，包括焦磷酸盐、偏磷酸盐、 聚合磷酸盐等，如P2O74-、P3O105-、HP3O92-、（PO3)63-等。 (3)有机磷化合物。
分析步骤
■ 绘制标准曲线
按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml, 4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。 ② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。 ③以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横 坐标，绘制标准曲线。
■ 海水中磷以两种化学形式存在，即有机磷和无机磷。每一
种化学形式又分为溶解和颗粒的两种形态。
■
在各种无机磷形态中，仅正磷酸盐可通过标准的磷钼蓝方 法定量地测定，而焦磷酸盐和无机磷聚合物均需要首先将其水 解为活性磷酸盐后才能测定。
■ 一般情况下,活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)，
通常指能被植物直接吸收的。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）