生物化学基本操作
生物化学实验基本操作
生物化学实验基本操作在生物化学研究中，实验操作是非常关键和基础的环节。
正确的实验操作能够确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍生物化学实验的基本操作步骤，以及注意事项和常见错误，旨在帮助读者进行高质量的实验。
1. 实验室准备实验前需要充分准备实验室和实验设备。
确保实验室环境整洁，无杂物和污染物。
检查实验设备的完整性和正常运行状态，如酶标仪、离心机、超低温冰箱等。
检查试剂的标签和耐期，确保试剂无污染、完整密封。
准备所需的试剂和溶液，按照实验要求正确称量和稀释。
2. 安全措施生物化学实验涉及到一些有害物质和有毒试剂，因此必须采取相应的安全措施。
佩戴实验手套、眼镜和口罩，避免直接接触化学物质。
对于具有刺激性和致敏性的试剂，应采取适当的通风和排放措施。
在实验操作过程中，注意实验室的安全出口和紧急出口，以应对突发情况。
3. 实验记录实验过程中的记录是非常重要的部分，确保实验结果的可靠性和重复性。
在实验前，准备好实验记录表格，包括实验步骤、试剂使用量、反应时间和实验结果等。
实验过程中，实验人员应及时、准确地记录各项数据和观察结果，不漏一步、一项。
同时，注意记录实验中的异常情况和发现的问题。
4. 实验步骤生物化学实验的步骤根据具体实验目的和方法而定，但一般包括样品处理、试剂制备、反应或分离、结果检测等。
在进行每一步操作之前，确保实验器材和试剂已经准备好，操作空间整洁无杂质。
按照实验步骤的要求依次进行操作，注意操作的顺序和时间控制。
严格按照实验方法和条件要求操作，避免人为因素对实验结果的影响。
5. 清洁和废弃物处理实验完成后，要及时清洁实验器材和实验台面，避免试剂残留和交叉污染。
使用正规的清洗剂和方法进行清洗，定期对实验室进行无菌处理和消毒。
对于废液和废弃物的处理，要按照实验室的规定和环保要求进行集中收集、处理和处置。
总之，生物化学实验的基本操作包括实验室准备、安全措施、实验记录、实验步骤和清洁处理等环节。
生物化学实验基本操作
2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能 用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心 检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。 （1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上； （2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡 4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗， 再用蒸馏水冲洗，最后干燥。
⑶使用刻度吸量管的注意事项： ①选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积 应等于或略大于所需容积（ml数）。 ②仔细看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括 吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还 是从下而上？ ③拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读 数。
④吸取试剂时应注意三点：一是先吹去吸量管 内可能存在的残留液体，二是将吸量管插入试 剂液面深部(以免吸液过程中因液面降低而吸 入空气产生气泡或管内试剂进入洗耳球)，三 是使用洗耳球(不可直接用口吸)。 ⑤按吸量管上口时应该用食指，不能用拇指。
生物化学实验基本操作
一. 玻璃仪器的洗涤 在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的 重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无 水珠附着在玻壁上。 ㈠ 常用的洗涤方法： 1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合 成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用 少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于 烘箱烤干备用。
3.奥氏吸量管：准确度最高，使用时必需吹出 留在尖端的液体。
㈡ 定量吸(移)液器(微量加样器)：定量吸液器是 吸量管的革新产品。由塑料制成。目前，因产 地厂家不同其质量、价格差异十分悬殊。 1.定量吸液器的优点：使用方便，取、加样迅 速，计量准确，不易破损，能吸取多种样品 （只换吸嘴即可）。
②按“零”点位置来分，有“O”点在吸量管 上端的（即读数从上而下逐渐增大），也有 “O”点在吸量管下端的（读数从下而上逐渐 增大)。两种标示方法，在使用时各有方便之 处。 ③按刻度方法来分，刻度吸量管也有两种，一 种是刻度刻到尖端的，将液体放出时，应吹出 残留在吸量管尖端的少量液体(我实验室的刻 度吸量管全部是这一种)，另一种是刻度不刻 到尖端的。
生物化学实验指导1
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
实验一生化实验基本操作
四、组织与分组
❖ 1．每一实验室推选学生课代表一名，负责下列工 作：
❖ ①实验报告的收集与分发； ❖ ②安排清扫值日名单； ❖ ③反映同学学习情况及对教学工作的意见； ❖ ④其它临时性的工作。
2．一般实验都为每个学生单独进行。有的实验要 两人一组实验前，实验者应根据黑板上公布本实验 使用的仪器种类与数目，检查。
❖ 分发在实验桌上的各种仪器，如有缺损应于清洗前 立即向准备室负责老师补换。实验中如有破损，则 必须登记，按学院规定处理。实验后应将完整仪器 洗涤清洁，点交管理人员。 2．公用仪器（包拈贵重仪器，如光电比色计、电 动离心机等）使用时时间不宜过长，以免妨碍他人 工作。设有使用登记薄的仪器，使用后必须登记， 以示负责。对于不熟悉之仪器，切勿随意乱动应请 教师指导之。
七、玻璃仪器的洗涤
❖ 一般玻璃仪器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满 足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾 去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于 毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪器之洗 涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将 使洗液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反 复使用，直至变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓 硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器，应先用自 来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗 时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时 清洗的效率也高。
八、舍弃物的处理
❖ 舍弃物必须依照其性质作适当之处理。以免 造成实验材料之浪费，损坏水槽及下水管道， 或污染实验环境。 1．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏 的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。 必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。 2．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒 入水槽中，并以大量水冲走。 3．实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提 取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应 放入教师指定的回收器中。
生化实验基本操作
本卷须知：
1．为了防止光电管疲劳，不测定时必须将 比色槽暗箱盖翻开，使光路切断，以延长电 管使用寿命。
2．拿比色杯时，手指只能捏住毛玻璃面、 不能碰比色杯的透光面，以免沾污。装溶液 时，液量为比色杯容积的3/4为宜。
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〔3〕取液：另一左手捏压吸耳球，将吸管 插入所量取的试剂溶液中，用吸耳球下端出 口对准吸管的上口，将液体轻轻吸上至所需 取量刻度上端稍高处，立即用右手食指堵住 管口。
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〔4〕调准刻度：将吸管从溶液中取出，吸 管轻轻刮于试剂瓶口，如液体粘性大，可用 滤纸擦干管尖外壁，然后用食指控制流量， 使液体缓慢下降至所需刻度〔注意液体凹面 与视线和刻度应在同一平面，此时立即压紧 吸管上口，使液体不再流出〕。
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3．注意保持实验室的整洁。实验完毕，须 将药品试剂排列整齐，仪器要放好，将实验 台面抹拭干净。使用后的玻璃仪器要清洗干 净放好。
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4．要保护实验仪器，节约使用各种试剂、 物品。使用仪器时，应小心仔细，防止损坏 仪器。使用贵重精细仪器时，应严格遵守操 作规程，发现故障立即报告教师，不要自己 动手检修。仪器损坏时，应如实向教师报告 。
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(3)其他：盛装具有传染性样品的容器，如 病毒、传染病患者的血清等沾污过的容器， 应先进展高压(或其他方法)消毒后再进展清 洗。盛过各种毒品，特别是剧毒药品和放射 性同位素物质的容器，必须经过专门处理( 略)，确知没有剩余毒物存在方可进展清洗 。
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四、实验室根本操作和常识
4．指弹混匀法 左手持试管上端多用右手 指轻轻弹动试管下部，使管内溶液作旋涡运 动。
第二章生物化学实验基本操作第一节玻璃仪器的规格和使用一、吸管的
第二章生物化学实验基本操作第一节玻璃仪器的规格和使用一、吸管的使用计量仪器的选择应根据量取液体的体积大小而定，同时要考虑量取的准确度(表2-20)。
表2 -1计量仪器的选择标准计量仪器最佳量程准确度滴管30µl至2ml 低量筒5-200Oml 中等容量瓶5-2000ml 高滴定管1-25ml 高吸管/移液枪5µl至10ml 高微量注射器0.5-10ml 高天平任何量度(取决于天平的准确度) 极高锥形瓶/烧杯25-500Oml 极低吸管(吸量管)为精密计量容器，生化实验中经常使用。
（一）吸管的类型1．移液管即单刻度吸管（1）普通单标吸管它的中部有一圆柱状空泡，只能量全量。
当所量取的液体自行流出后，使吸管尖端在受壁上停留3-5秒，所余少量液体不必吹出，因为其固定倾出容量已经检定。
（2）奥氏吸管它具有一相当大的卵形空球及一短小的出口。
当将所量取的液体放出后，必须将遗留在管尖内的少量液体吹入受器内。
某些奥氏吸管带有玻璃塞。
在所有的吸管中以奥氏吸管的准确度最高，常用于定量实验。
2. 吸管即多刻度吸管（1）普通吸管它是直筒状吸管，其上有多个刻度。
北京玻璃厂生产的吸管， 1ml以下(不包括1ml)都必须把尖端遗留的液体吹入受器中，新产品都注明有“吹”字。
1ml以上(包括1ml)则不吹出尖端遗留的液体。
当液体不再流出时，应使该管尖紧靠受器内壁一段时间。
这种吸管又分为慢流速、快流速2种。
按其容量和精密度不同，慢流速吸管又分为A级与B级，快流速吸管只有B级。
使用时，A级最后停留15秒， B级最后停3秒，同时需转动吸管。
（2）莫氏吸管总量刻度在尖端以上，卸放液体时按刻度进行。
（二）刻度吸量管移液操作1. 选取原则：每根吸量管上有许多等分的刻度，在刻度标记有自上而下和自下而上两种，规格为0.1 ml，0.2 ml，0.5ml，1ml，2 ml，5 ml，10 ml等。
在一次完成移液的前提下，应选用容积较小的吸量管，对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管。
生化实验的基本操作
生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。
配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。
不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。
5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。
倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。
手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。
还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。
8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。
一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。
（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。
而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。
滤纸越致密，过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。
沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。
最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。
折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。
放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。
撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。
生物化学实验的基本操作
一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
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一、玻璃仪器的洗涤与清洁
• 一般非计量仪器或粗容量仪器，如：试管、烧杯、 量筒等，可先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干 净后，最后用蒸馏水冲洗2-3次，倒置于清洁处晾 干。
• 比色杯，用毕立即用自来水反复冲洗，然后用自 来水、蒸馏水冲洗干净。切忌用刷子、粗糙的布 或滤纸等擦拭。洗净后，倒置晾干备用。
实验室规则
充分预习,有备而来 认真操作,仔细观察 客观记录,科学分析 实验报告,求实存真 爱护公物,保持整洁 分工协作,团结互助 遵守纪律,注意安全
实验基本操作
一、玻璃仪器的洗涤与清洁 二、滴管的使用 三、吸量管的使用 四、加样枪的使用 五、 混匀法 六、 离心机的使用 七、分光光度计的操作 八、电泳仪的操作
• 洗涤后的玻璃仪器要求清洁透明，玻璃表面不含 有可溶解的物质。水沿器壁自然下流时不挂水珠
二、滴管的使用
三、吸量管的使用
• 左手拿洗耳球,右手持吸管上 端,用拇指和中指夹住管身
• 吸液时,将洗耳球对准吸管上 口,先排出管内空气，再将吸 管下端插入所吸液体中
• 轻轻放松左手,把液体慢慢吸 至所需刻度线稍上
• 右手食指迅速按住吸管上口, 将吸管从液体中抽出
注意以下几点
• 正确选择吸管规格,分清吸管类型
• 操作时刻度线要向着自己,读数时吸管要垂 直,视线与吸管内液面处于同一平面上,弧形 液面与刻度线相切
• 吸管用后要立即冲洗,特别是吸取血液后,若 放置过久,血管内血液干涸就很难清洗干净
四、加样枪的使用
(五)振荡器混匀
六、 离心机的使用
• 将试管放入一对套管中,然后在粗天平上进行平衡, 对较轻的一侧可用滴管在离心管与套管之间加水, 直至两侧重量相等为止。
• 将已平衡的各对套管(连同其内容物)按对角线位 置插入离心机管内。
• 离心完毕, 待离心机自动停稳后，取出离心管。
• 倒去离心套管光光度计的操作
• 见分光光度计的应用章节
八、电泳仪的操作
枪头/枪头盒
加样枪
操作
五、 混匀法
(一) 使试管作圆周运动 右手持试管上端,利用手腕的旋转,使 其作圆周运动。
(二) 指弹混匀 左手持试管上端,试管与地面垂直。左手手指 呈切线方向轻拨试管下部,使管内液体呈漩涡状转动。
(三) 吸量管混匀 用吸量管将溶液反复吹吸数次,使溶液混匀。
(四) 电磁搅拌混匀